Práctica 12

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PRÁCTICA 12 PROGRAMACIÓN DEL TERMOCICLADOR

FUNDAMENTO
Para entender bien el funcionamiento de la PCR hay que estudiar en profundidad cuatro aspectos:
-la composición de la mezcla de reacción. -la programación del termociclador.
-la preparación de las muestras. -el análisis de los productos amplificados.
En esta práctica nos centraremos en la programación del termociclador.

MATERIALES
-Termociclador Gene Q Thermal Cycler TC-24/h(b).

PROGRAMA

PASO TEMPERATURA TIEMPO


Desnaturalización 95 ºC 10 minutos
95 ºC 30 segundos
Ciclos PCR
64 ºC 30 segundos
Realizar 35 ciclos
72 ºC 45 segundos
Extensión final 72 ºC 10 minutos
Final (Tª de mantenimiento) 4 ó 12 ºC (para no Indefinido hasta que se
sobrecargar el apaga
aparato)
PROCEDIMIENTO

1. Encender el equipo a la corriente eléctrica y presionar el botón de encendido que se encuentra en la


parte posterior.

2. Al encenderlo se oirán dos pitidos y aparecerá en la pantalla Self testing. Este proceso puede durar 2-4
minutos.
3. Coloca los tubos Eppendorf de capacidad 0,2 ml en los pocillos.
4. Si ya tenemos la programación de la PCR guardada en el equipo debemos pulsar File elegir el
programa adecuado y pulsar Run.

5. Si no tenemos el programa guardado vamos a crear uno nuevo siguiendo las siguientes instrucciones:

a) Pulsar File (F1)  New file (F1), aparecerá una pantalla con 6 segmentos como la de la imagen
b) Comenzamos en el primer segmento y elegimos temperatura y tiempo, para ello navegamos con las
flechas y escribimos con los números.

c) Pulsar +Seg (F1) y nos permitirá configurar el segmento siguiente de la misma manera.

d) Seguir añadiendo segmentos hasta finalizar la programación.


e) Una vez terminada la configuración de las fases (segmentos) vamos a indicar cuales se tienen que
repetir que serán aquellos segmentos que correspondan a las tres fases de la PCR, pulsar +Cycle (F2) y
se habilitará en la zona inferior el cursor para poder escribir cuantas repeticiones son necesarias y que
segmentos incluyen estas repeticiones.

f) Para finalizar pulsamos Save/Run (F5) y nos pedirá indicar un usuario (User) y nombre del archivo (File
name), para escribir debemos utilizar el teclado numérico pulsando hasta que salga la letra deseada y
cambiando de espacio con la flecha derecha.
6. Cuando esté en funcionamiento nos indicará en qué fase se encuentra y el tiempo restante (Remaining
time).
ATENCIÓN: este tiempo es aproximado, siempre va a ser mayor que el indicado.
7. Al finalizar el proceso abrir la tapa y extraer lo antes posible los tubos de las muestras, se deberán
mantener en nevera en caso de que no se pueda realizar la electroforesis o el proceso que corresponda
en ese momento.

PREGUNTAS PARA RESPONDER TRAS LA PRÁCTICA

1. ¿Qué función tiene el cambio de temperaturas en el termociclador?

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