MUESTRAS DE ANATOMÍA PATOLÓGICA Y CITODIAGNÓSTICO .

1. BIOPSIAS
1.1 INTRODUCCIÓN

La biopsia es la extracción y posterior examen microscópico de un tejido o un material que procede de un organismo vivo. Con fines
diagnósticos.

1.2 TIPOS DE BIOPSIAS

• Incisional→ Obtenida a través del uso de un bisturí. Tras usar un anestésico local.
• Punch→ Se usa un instrumento cilíndrico, hueco y cortante, un sacabocado.
• Con aguja cortante (tru-cut) gruesa→ Se obtiene un cilindro del tejido que corresponde al molde interior de la aguja.
Tru cut es un nombre comercial.
• Quirúrgica→Obtenida por cirujano por cirugía
• Por curetaje o raspado→ Si se usa una cureta, por curetaje; si se usa con una legra, es por un raspado legrado. Se aplica en zonas
de canales, por ejemplo, el canal vaginal.
La muestra a obtener debe tener forma de cucharilla, está mezclada con coágulos y material mucoide.
• Excisional→ Con bisturí. En quirófano y con anestesia epidural o general.
Visualizar los vídeos puestos en clase.

1.2.1 BIOPSIA INCISIONAL.

Se corta quirúrgicamente un trozo de tejido/masa/tumor.

Utilización→ Cuando hay tumores blandos localizados en riñón/cerebro/pulmón/hígado.

Consideraciones técnicas→ Cuando tomas la muestra puedes extirpar uno o varios fragmentos específicos de la lesión.

Si son de gran tamaño/difusas/con mal aspecto (malignas o benignas), también se hace esta biopsia, tanto en superficie como en
profundidad.

Uso→ Se realiza con finalidad diagnóstica.

1.2.2 BIOPSIA EXCISIONAL O EXCÉREIS.

Se quita quirúrgicamente toda la lesión y un margen alrededor.

Utilización→ Con lesiones de pequeño tamaño, presumiblemente benignas (superficiales o poco profundas).

Uso→ Para confirmar el diagnóstico y como tratamiento definitivo.

1.2.3 BIOPSIA CON AGUJA CORTANTE O GRUESA.

La aguja que se utiliza es hueca, de calibre 18, se puede obtener de la zona sospechosa cilindros (también llamados cores o núcleos).

Técnica→ Se inserta la aguja entre 3-6 veces. Tiene que ir guiada por ecografía o por rayos X. La guía de imagen a veces no hace falta
usarla cuando se palpa bien la masa.

Como tiene un equipo de captación de imágenes y un ordenador, donde se ven las imágenes, se llama biopsia estereotáctica, ya que
ves por dónde va la aguja y las imágenes. Por ejemplo, se usa para el cáncer de mama.
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2. PIEZAS QUIRÚRGICAS
2.1 CARACTERÍSTICAS.

El tamaño de lo resecado es mayor que una biopsia, puede ser hasta un órgano entero.

Resecar un órgano→ Se usa en la vesícula biliar, apéndice, útero.

Resecar una parte del órgano→ Se usa en lóbulo pulmonar, lóbulo hepático, trozo de colon, etc.

A veces te puedes llevar varios órganos o amputar un miembro: quitar todos los ganglios linfáticos de una zona, llevarte el útero con
las trompas y los ovarios, etc.

Lo realiza el cirujano. Requiere posterior estudio anatomopatológico.

Finalidad→

• Estudio de anatomía patológica.

• Confirmar el diagnostico.
• Ver pronóstico y planificar tratamiento.

2.2 BIOPSIA INTRAOPERATORIA .

Se procesa en el quirófano (en el momento).

Se hace un corte de congelación de tejido fresco que se tiñe con hematoxilina-eosina

Uso→ Sirve para hacer un diagnóstico intraoperatorio, para ver si hay una lesión de naturaleza maligna o no (cáncer maligno o
benigno), ver el grado de malignidad/benignidad, ver si la lesión se extiende en los bordes quirúrgicos o solo está en una zona.
Debemos asegurarnos de que estamos obteniendo un material adecuado que vamos a estudiar después.

3. TÉCNICAS DE PROCESAMIENTO DE LAS

MUESTRAS:
Depende de lo que hagamos:

• PREPARACIÓN HISTOLÓGICA.

Se coge un trozo de tejido (pequeño), se coloca en un portaobjetos para verlo al microscopio, antes de verlo, se introduce en
parafina para homogeneizar y obtener bloques, con un microtomo se hacen cortes finos, se coloca en el portaobjetos, se fija y se
observa al microscopio.

A veces es necesaria hacer una fijación de la muestra en el portaobjetos.

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• EXTENSIÓN CITOLÓGICA.

Se cogen las células procedentes de un tejido, se extienden sobre un porta, formando una capa unicelular y se visualiza al
microscopio.

Son células independientes procedentes de un tejido.

• FROTIS CITOLÓGICO.

Para ver muestras de sangre. Equivalente a una extensión citológica, pero en muestras sanguíneas.

• IMPRONTA CITOLÓGICA.

Tipo de preparación que se hace para los tejidos cuyas células tengan pocos nexos de unión entre sí y tampoco están muy unidas
a las estructuras tisulares que la rodean.

Se usa para órganos hematopoyéticos (bazo, medula ósea…) y ganglios linfáticos.

Consiste en la obtención de la capa unicelular por contacto directo del portaobjetos con la superficie de sección del órgano, no
se realiza ni raspado ni exfoliado.

4. COMO SE PROCESA HISTOLOGICAMENTE

UN TEJIDO.
Procesamiento→ Conjunto de manipulaciones y métodos, que tienen como objetivo la elaboración de preparaciones histológicas.

Pasos→

1. Fijación.
2. Inclusión.
3. Corte.
4. Tinción.

4.1 FIJACIÓN.

Por métodos→
• Físicos.
• Químicos.

4.1.1 MÉTODOS FÍSICOS.

Basados en congelación muy rápida del tejido, por eso las piezas no pueden tener más de 2mm de espesor.

Cuando sea posible hay que mezclar la muestra en anticoagulantes o crioprotectores.

Formas de conseguir una congelación rápida→

• Sumergiendo la muestra en isopentano (-170ºC), que se enfría con nitrógeno líquido.

• Colocando la pieza fría sobre un metal y sumergiéndola parcialmente en nitrógeno líquido (-196ºC).
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• Sobre una mezcla de hielo seco y acetona (-70ºC).

• Sobre una mezcla de hielo líquido y acetona (-268ºC).

La crioprotección no siempre se puede hacer, aunque es recomendable.

Crioprotectores usuales→

• Sacarosa.
• Glicerol.
• Dimetilsulfóxido.

4.1.2 MÉTODOS QUÍMICOS.

Utilizan soluciones acuosas, compuestas por moléculas fijadoras que van a establecer unos puentes con las moléculas del
tejido, mantienen a estas moléculas y no permiten que se degraden.

Por diferentes mecanismos→

• Fijación por deshidratación tisular→ las sustancias que se utilizan son la acetona y el etanol.
• Fijación por cambios en el estado coloidal de las proteínas→ con ácido crómico, ácido acético y tricloroacético.
• Fijación por formación de sales con los tejidos→ con cloruro de mercurio, ácido pícrico, y el dicromato potásico.
• Fijación por reticulación de las proteínas→ como el formol/formaldehido, glutaraldehído y el tetróxido de osmio.

4.2 INCLUSIÓN

La inclusión es el endurecimiento de los tejidos.

Basado en infiltrar la muestra en sustancias líquidas, para que se produzca un proceso de polimerización o enfriamientos
para que se solidifiquen sin que cambien las características de los tejidos.

Los medios más utilizados son→

• Parafina o celoidina→ para ver las muestras al microscopio óptico

• Resina de tipo acrílico o epoxi→ para ver las muestras al microscopio electrónico El endurecimiento permite la
obtención de cortes muy finos, de micrómetros o nanómetros.

Antes de introducirlas en uno de los medios→

1. Se deshidrata la muestras pasándose la muestra por una serie de alcoholes de graduación creciente (etanol 70º-
80º-90º-96º-absoluto).
2. Se pasan por benzoato de metilo, o bien se introducen en xileno
3. Se incluye en uno de los medios de inclusión. Si es en parafina, hacer 3 pases y esperar a que solidifique para que
forme bloques.
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4.3 CORTE

Se utilizan unos aparatos mecánicos, microtomos, que dan cortes de micrómetros.

Hay diferentes tipos de grosores que se pueden obtener de las secciones de las muestras.

• Microtomo→ Para material incluido en parafina, el grosor de las secciones es entre 520µm
• Vibratomo→ Para hacer cortes en material solo fijado, endurecido por algún método, pero no incluido en
parafina u otro tipo de resina. Grosos: 30-100µm. Se observan también al microscopio óptico
• Criostato→ Para muestras congeladas. Grosor: 10-40µm. Para ver la muestra al microscopio óptico
• Ultramicrotomo→ Cuando el material está incluido en resinas. Grosor: 1-decenas ŋm Se ve al microscopio
electrónico de transmisión. Si la muestra es más gruesa de 0,5µm, se puede visualizar al microscopio óptico
• Ultravibratomo→ Para muestras no incluidas. La sección es de nanómetros.

4.5 TINCIONES

DIFERENTES CATEGORÍAS DE TINCIONES→

• Generales.
Usan sustancias coloreadas que por afinidad química se unen a componentes del tejido.

• Histoquímicas.
Se modifica químicamente algunas moléculas del tejido, por ejemplo, encimas. Y así se ponen de manifiesto con colorantes.
Se pueden buscar enzimas (presentes en los tejidos a estudiar).

• Lectinas.
Proteínas capaces de reconocer a los glúcidos que forman parte de moléculas más grandes. Se emplean para determinar el
glúcido que toma parte de las glucoproteínas de las células o de la matriz extracelular de distintos tejidos.

• Inmunocitoquímica.
Basada en la afinidad de la unión de los anticuerpos con los antígenos contra los que se han producido.
Los antígenos pueden ser cualquier molécula tisular del tejido, una vez purificada e inyectada en un animal, es
capaz de desarrollar una reacción inmune.
Estos anticuerpos añadidos a una sección de tejido se van a unir específicamente a dicha molécula.

• Hibridación.
Técnicas basadas en la unión complementaria entre las bases de los ácidos nucleicos, de manera que dos cadenas
complementarias se hibridan, se sintetizan sondas marcadas, cadenas de ADN o de ARN con una secuencia de bases
determinada y que llevan una molécula unida para poder detectarlas.
La secuencia de bases de la sonda va a ser complementaria a otra secuencia que está presente en las células del
tejido a buscar. Normalmente, sondas de ARN mensajero, con estas sondas, se ven las células que expresan un
determinado gen (para el que se creó la sonda).
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4.5.1 COLORANTES QUE SE USAN EN LAS T INCIONES.

Tipos→

• Coloraciones simples.
• Coloraciones combinadas/compuestas.
o Simultáneas→ Las coloraciones se pueden mezclar.
o Sucesivas→ Las coloraciones ocurren una detrás de otra.

 Simples→ Solo usan un colorante para teñir, por ejemplo, para teñir núcleos con tionina.
 Compuesta/combinada→A la muestra se le añaden varios colorantes, para destacar mediante los diferentes colores estructuras
específicas que forman parte de esta muestra.

Se utilizan las dos formas de coloración: simultanea o sucesiva→

o Coloración simultánea→ En una misma tinción se usan varios colorantes.

Se usan, colorantes tricrómicos.
- Van Gieson→ Con una mezcla de ácido pícrico, fucsina ácida y hematoxilina férrica de Weigert
Para diferenciar el colágeno de otros tejidos conectivos
- Mallory→ Para el estudio de tejido conectivo. Compuesto por fucsina ácida, una solución de azul
de anilina, naranja-G y ácido fosfotúngstico. Aparecen las fibras de colágeno de color azul; la glía,
las células cerebrales y las fibras musculares, rojas, y las fibrillas de elastina, de naranja.
- Shorr→ Compuesto por fucsina ácida, el naranja G y azul de anilina.

o Coloraciones sucesivas→ Se colocan sucesivas coloraciones de colorantes a los tejidos, para que se
tiñan algunos de los componentes de estos. La más característica, la de hematoxilina-eosina, 1º núcleos
de hematoxilina y 2º la eosina tiñe al citoplasma.