Guia Pratica Laboratorio Micosis

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UNIVERSIDAD NACIONAL FRANCISCO LUIS ESPINOZA PINEDA

DIRECCIÒN DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE MEDICINA
LABORATORIO DE DIAGNÓSTICO DE HONGOS
I. TEMARIO:
➢ Toma de muestras para diagnóstico de hongos en micosis superficiales (revisar las diferentes
técnicas que existen)
➢ Examen microscópico directo con KOH y Azul de lactofenol (revisar las otras tinciones que
existen y su fundamento)
➢ Cultivos de hongos
II. OBJETIVOS:
Al finalizar la actividad el estudiante será capaz de:
1. Aplicar el procedimiento adecuado para la toma de muestra en micosis superficiales.
2. Conocer el fundamento de cada una de las técnicas empleadas en el diagnóstico micológico.
3. Realizar el procedimiento técnico del examen directo con KOH y azul de lactofenol.
4. Identificar las características macroscópicas y microscópicas de los hongos en estudios a partir del
crecimiento en medios de cultivos.
5. Valorar la importancia que tiene el diagnóstico de laboratorio en las infecciones por hongos.
III. INTRODUCCIÒN
En contextos médicos, el diagnóstico de infecciones fúngicas es subutilizado, a pesar de su
importancia en pacientes con sistemas inmunológicos debilitados. Es esencial que los futuros
médicos comprendan los métodos diagnósticos pertinentes.
La recolección adecuada de muestras clínicas y su manipulación son cruciales para el aislamiento e

identificación de hongos. Se deben utilizar recipientes estériles y sellados para muestras líquidas y
húmedas, mientras que otras, como raspados de piel, fragmentos de uña y pelos, requieren métodos
específicos de transporte.
En el laboratorio, se realizan exámenes visuales y extendidos al fresco para un diagnóstico

preliminar. La identificación definitiva se basa en características macro y microscópicas de los
hongos, utilizando medios de cultivo específicos y técnicas de observación.
Para garantizar resultados precisos, es vital cultivar las muestras en medios adecuados e incubadas a
temperaturas específicas. Algunos medios contienen antibióticos para inhibir el crecimiento de
microorganismos no deseados, especialmente en muestras de tejidos profundos.
3.1) Toma de muestras:

• Previo a la toma de muestra, se debe brindar las recomendaciones al paciente (el estudiante
debe revisar cuáles son esas recomendaciones)
3.1.1) En las micosis superficiales y cutáneas:

a) Limpiar con solución salina o alcohol al 70 % el área donde se tomará la muestra (piel, uña,
cuero cabelludo).
b) Con un bisturí o escalpelo, raspar el área afectada (preferiblemente del margen periférico y
eritematoso) para obtener descamación de la piel y colocar la muestra en platos petri, o
portaobjetos.
c) Las muestras de uñas, deben tomarse por debajo de la placa de la uña para obtener material
blando del lecho ungueal, si esto no es posible quitar la superficie de la uña antes de recolectar
raspaduras de porciones más profundas.
d) Cuando la muestra es de cabello, debe colectarse el cabello que se encuentra en áreas
escamosas o de alopecia, sobre todo el cabello que se encuentra quebradizo.
IV. DESARROLLO DE LAS PRÁCTICAS DEL LABORATORIO
Materiales, reactivos y equipos:

• Muestras clínicas, Medios de Cultivos estériles (Sabouraud),
• Hidróxido de Potasio al 10% (KOH ), Azul de Lactofenol
• Frasco con solución salina estéril, Frasco con alcohol al 70%
• Portaobjetos, cubreobjetos
• Platos petri estériles
• Fósforos, Mecheros
• Aplicadores plásticos, varillas de vidrio o de madera
• Tijeras y tape transparente
• Pinzas
• Microscopios
• Mascarilla N-95 o quirúrgica descartable (deberá comprarla cada estudiante para su uso en el
laboratorio)
4.1) Examen directo con KOH:

Principio del examen directo con KOH: El hidróxido de Potasio (KOH) al 10% rompe el tejido que
rodea al micelio de los hongos, para permitir una mejor visualización de la morfología de las hifas.
Procedimiento:
1. Una vez tomada la muestra (raspado de piel, cabello, uña), deposítelo en un portaobjeto.
2. Agregue 1 o 2 gotas de KOH al 10% sobre la muestra, mezcle suavemente y cúbralo con un
cubreobjetos.
3. Pase el portaobjeto 2 o 3 veces sobre la llama del mechero de forma rápida.
4. Deje la muestra en reposo por lo menos 5 minutos y posteriormente observe al microscopio con
objetivo de 40X.
5. Observe y compare las estructuras micóticas encontradas con un atlas o con sus dibujos realizados.
6. Anote y dibuje lo observado.
4.2) Examen directo con azul de Lactofenol:

1. Con el cultivo de hongo suministrado, observe el tipo de colonia, forma, tamaño, coloración,
bordes, altura, etc. Coloque el tubo o plato Petri y aprecie la pigmentación desarrollada en el sitio de
la colonia. Identifique las colonias de tipo levaduriforme y las de tipo micelial.
2. Coloque una gota de azul de lactofenol (azul de algodón) en una lámina portaobjeto, tome el asa
bacteriológica o el aplicador de mandera y remueva un fragmento pequeño de la colonia de uno de
los hongos en estudio, deposite el fragmento sobre la gota de azul de lactofenol y con el asa extienda
el fragmento y cúbralocon una laminilla.
3. Examine la preparación con objetivo 10X y luego con 40X, identifique hifas y esporas, diferencie
las hifas septadas de las cenocíticas.
4. Reconozca levaduras, conidias, macroconidias, artrosporas, clamidosporas, conidióforos. etc.
5. Dibuje y nombre las estructuras observadas.
GALERÍA DE IMÁGENES
Raspado de uña sobre plato petri Raspado de piel sobre plato petri
Examen microscópico con KOH en Examen microscópico con azul de lactofenol en el
el que se observan levaduras que se observan levaduras

Colonias de Penicillium Spp. enAgar Dextrosa Sabouraur
Estructuras observadas al microscopio en Azul deLactofenol
NOTA: Para poder cumplir los objetivos de la guía, el estudiante debe revisar lo siguiente:
1. Morfología microscópica y macroscópica de los hongos.
2. Características de crecimiento de los géneros Aspergillus, Penicilium y Cándida.
3. Medios de cultivos utilizados para los hongos así como su composición y las diferentes
tinciones (blanco de calcoflúor, azul de lactofenol y tinta china).
4. Como parte de autoestudio dibujar e identificar las diferentes estructuras morfológicas de los
hongos a estudiar para auxiliarse al momento de observar al microscopio el fresco con KOH,
tinción de lactofenol.
V. EVALUACIÓN:
La evaluación del laboratorio se realizará de la siguiente manera:
Prueba corta de entrada : 5 puntos
Desarrollo del laboratorio : 5 puntos
Total : 10 puntos
VI. BIBLIOGRAFIA:
Principal:
1) Brooks, Geo F. Carroll, Karen C. Butel, Janet S. Morse, Stephen A. Mietzner, Timothy A.
(2011) Microbiología Médica de Jawetz, Melnick y Adelberg. 25va edición. Mc Graw Hill.
2) Koneman, Elmer W. (2008): ). Diagnóstico Microbiológico: texto y atlas en color. 6ta

edición., México: Editorial Panamericana.
3) Murray P, Rosenthal KS, Pfaller, M.A.(2017). Microbiología Médica. 8va edición. Editorial
MOSBY, Madrid, España.

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3.1) Toma de muestras:

3.1.1) En las micosis superficiales y cutáneas:

Materiales, reactivos y equipos:

4.1) Examen directo con KOH:

4.2) Examen directo con azul de Lactofenol:

Examen microscópico con KOH en Examen microscópico con azul de lactofenol en el

el que se observan levaduras que se observan levaduras

Colonias de Penicillium Spp. enAgar Dextrosa Sabouraur

Estructuras observadas al microscopio en Azul deLactofenol

2) Koneman, Elmer W. (2008): ). Diagnóstico Microbiológico: texto y atlas en color. 6ta

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