PRACTICA # 1. MICROSCOPIO Y SU MANEJO.

TECNICAS DE PREPARACIONES DE
MUESTRAS
Diego Diaz, David Hernández, Jean Durango, Juan Guzmán, Juan Mantilla & Santiago Soto

Universidad de Córdoba – Facultad de Ingeniería – Departamento de Ingeniería Ambiental

Cra.6 No. 77-305, Montería, marzo de 2023

Presentado a: Gabriel Montes Fuentes

Docente Biología General, Celular y Molecular.

RESUMEN.
La biología es una ciencia puramente experimental y evoluciona con la introducción de la tecnología. El éxito
de la investigación depende de muchos factores, entre ellos, la observación, el uso de instrumentos o técnicas
especiales. Las explicaciones teóricas deben estar respaldadas por la práctica de laboratorio. Nuestro
conocimiento sobre la estructura, tamaño, función, etc. De un organismo, se basa casi por completo en el
microscopio, un instrumento utilizado para estudiar los detalles de estructuras y objetos muy pequeños. Los
lentes para el ojo desnudo convenientemente colocados pueden mejorar la visión en 4x, 10x, 40x, 100x o 1000x.
Las mayores dificultades para observar y estudiar estructuras biológicas son su pequeño tamaño y su
transparencia a la luz visible. Estos dos problemas pueden ser superados por los microscopios, por lo que la
aplicación y el conocimiento de los principios y técnicas de los microscopios son fundamentales para el desarrollo
de la investigación científica.

Palabras Clave: Microscopio, Microorganismos, Estructuras biológicas, Ciencia.

1. OBJETIVOS y rayos de luz, que acercan o agrandan la imagen en

escalas convenientes para su examinación y análisis.
 Aprender a utilizar adecuadamente el
microscopio. En el presente informe se pretende dar a conocer todos
 Identificar cada una de las partes del aquellos resultados obtenidos en la práctica de
microscopio y cómo funciona cada una de laboratorio #1 de micro biología. Esta práctica se
ellas. refiere a las partes del microscopio y las que los
compone, se habla sobre el manejo adecuado de un
 Identificar las diferentes estructuras celulares
microscopio y como dar una imagen de forma correcta
que conforman a los elementos de trabajo. y por último se habla de las técnicas que se deben
 Realizar preparaciones microscópicas utilizar para realizar una muestra correctamente.
temporales.

2. INTRODUCCIÓN 3. MARCO TEÓRICO

En el interés de descubrir nuevos hallazgos en la El microscopio es un instrumento que permite observar
naturaleza tanto en el exterior como en el interior, objetos no perceptibles al ojo humano. Esto se logra
el ser humando ha creado instrumentos que lo han mediante un sistema óptico compuesto por lentes que
ayudado a encontrar esos nuevos hallazgos y uno de forman y amplifican la imagen del objeto que se está
esos instrumentos que fueron de gran ayuda en la observando. Este instrumento óptico consta de dos
historia es el microscopio. partes, una mecánica que tiene la finalidad de sostener
la preparación a examinar y soportar todo el sistema
El microscopio es una herramienta que permite óptico del microscopio. Y una parte óptica que
observar elementos que no pueden observarse o son considera los dos sistemas de lentes convergentes
invisibles a simple vista, a través de lentes, visores centrados sobre un eje óptico común, denominado
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ocular y objetivo. También esta parte integra un Parte Mecánica.
sistema de iluminación que facilita la observación
microscópica. El microscopio óptico posee dos
tipos de lentes. Una de las lentes es el ocular que se  Base: Es la pieza que se encuentra en la parte
ubica en el lugar donde el observador aproxima su inferior del microscopio y sobre la cual se
ojo. La otra lente es el objetivo y es la que se montan el resto de elementos.
aproxima al objeto que se va a observar. Cuenta con  Brazo: El brazo constituye el esqueleto del
tres objetivos montados sobre un disco que se microscopio. Es la pieza intermedia del
denomina revólver.
microscopio que conecta todas sus partes.
 Platina: Esta es la superficie donde se coloca
Parte óptica. la muestra que se quiere observar. Su posición
vertical con respecto a las lentes del objetivo
 Objetivo: Las lentes de objetivo son
se puede regular mediante dos tornillos para
responsables de formar la imagen primaria,
generar una imagen enfocada.
determinar la calidad de la imagen generada y
 Pinzas: Las pinzas tienen la función de
controlar tanto la magnificación total como la
resolución general.
mantener fija la preparación una vez esta
 Diafragma: El diafragma es una parte del se ha colocado sobre la platina.
objetivo que limita el rayo de luz que penetra  Tornillo macrométrico: Este tornillo permite
en la cámara. Funciona como el iris del ojo ajustar la posición vertical de la muestra
humano, abriéndose o cerrándose para respecto el objetivo de forma rápida.
permitir que entre más o menos luz según sea  Tornillo micrométrico: El tornillo
necesario. micrométrico se utiliza para conseguir un
 Condensador: El condensador es una pieza enfoque más preciso de la muestra.
básica del sistema óptico y del sistema de  Revolver: El revólver es una pieza giratoria
iluminación de un microscopio. Su función es donde se montan los objetivos. Cada objetivo
concentrar la luz que proviene del foco para tiene proporciona un aumento distinto, el
iluminar la muestra de forma uniforme y con revólver permite seleccionar el más adecuado
las condiciones adecuadas. a cada aplicación.
 Foco: Este es un elemento esencial que  Tubo: El tubo es una pieza estructural unida
genera un haz de luz dirigido hacia la muestra. al brazo del telescopio que conecta el ocular
En algunos casos el haz de luz es primero con los objetivos.
dirigido hacia un espejo que a su vez lo desvía
hacia la muestra. La posición del foco en el Técnicas de observación: Las técnicas de
microscopio depende de si se trata de un observación en un microscopio óptico compuesto
microscopio de luz transmitida o de luz incluyen:
reflejada.
 Ocular: Este es el elemento óptico que  Campo brillante: Esta técnica utiliza una
proporciona la segunda etapa de ampliación fuente de luz brillante y permite visualizar
de imagen. El ocular amplía la imagen que ha detalles finos de la muestra. Se usa con
sido previamente aumentada mediante el muestras transparentes o semitransparentes.
objetivo.  Contraste de fases: Esta técnica utiliza una
fuente de luz monocromática y permite
visualizar muestras sin teñir. Es útil para
visualizar células vivas o células en cultivo.

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 9. Después de haber finalizado las observaciones,
4. MATERIALES Y MÉTODOS se limpian los lentes con papel limpia lente, se
Materiales. coloca el objetivo de menor aumento en posición
de enfoque, se baja la platina, se apaga, se
 Microscopio óptico compuesto.
desconecta y se guarda.
 Pipetas de Pasteur. Este procedimiento se repite con objetivos de 4x, 10x y
 Porta- objetos. 40x
 Cubre- objetos.
 Flores con Polen. 5. DATOS OBTENIDOS
 Polvillo de Ala de Mariposa. Después de realizar el debido procedimiento de
 Hoja de Lirio. observación, se tiene lo siguiente:
 Cinta de enmascarar.
 Papel Absorbente. Polen
 Cuchilla delgada.  Objetivo 4x: Se observó la forma semicircular
 Tijeras. de la de las células del polen y su color
semi amarillo. Aunque un poco opaco.
Método.
En primer lugar, se hacen las preparaciones
microscópicas temporales. Se toma una muestra
de los materiales que se va a observar y se coloca
sobre el porta objetos, para luego ponerle unas
gotas de agua y por último cubrirla con el cubre
objetos. Posteriormente, los pasos para observar
la muestra son los siguientes:
1. Baje completamente la platina del
microscopio.
2. Haciendo uso del mecanismo del revólver,
coloque frente a la preparación el objetivo de
menor aumento (4x). Fig 1. Imagen del polen objetivo 4x.
3. Coloque la preparación microscópica sobre la
platina sujetándola con las pinzas del carro y
centre la preparación haciendo uso de los  Objetivo 10x: Se observó más claramente la
tornillos del carro. forma de las células del polen y los
4. Regule la luz mediante el uso del mecanismo filamentos que tienen en su exterior.
del diafragma.
5. Haciendo uso del tornillo macrométrico suba
al máximo la preparación hasta que encuentre
tope sin observar por los oculares.
6. Observando a través del ocular, accione el
tornillo macrométrico hasta que visualice la
imagen en el campo microscópico.
7. Una vez enfocada la imagen, afine el enfoque
microscópico, haciendo uso del tornillo
micrométrico.
8. Si desea mayor detalle, cambie de aumento
rotando el mecanismo del revolver a un
objetivo que le dé el aumento deseado,
corrigiendo el enfoque de imagen moviendo
el tornillo micrométrico, y graduando la
intensidad de luz con el diafragma. Fig 2. Imagen del polen objetivo 10x.
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  Objetivo 10x: Se pueden apreciar las células
 Objetivo 40x: Se logra apreciar con mayor por las que está compuesto el corcho,
claridad los filamentos que tiene la célula aunque aún no tan claramente.
del polen en su exterior, los cuales parecen
pequeñas agujas.

Fig 5. Imagen corcho objetivo 10x.

Fig 3. Imagen del polen objetivo 40x.

 Objetivo 40x: Se pueden apreciar las células
vegetales por las que está compuesto el corcho
Corcho:
con mucho mayor detalle.
 Objetivo 4x: Se puede apreciar una mancha
oscura de un tono café oscuro en el centro y
de café más claro en los bordes.

Fig 6. Imagen corcho objetivo 40x.

Fig 4. Imagen corcho objetivo 4x. Polvillo de mariposa:

 Objetivo 4x: Se pueden ver muchos gránulos

pequeños, con la forma de un grano de
maíz, pero no se logra apreciar mayor cosa.

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 6. ANÁLISIS DE RESULTADOS
En este laboratorio se llevó a cabo la utilización y
el adecuado manejo del microscopio, utilizando
diferentes materiales como muestra para ser
observados desde el mismo con aumentos de 4x,
10x y 40x. En dichos materiales se observaron
diferentes estructuras:

Polen.
El término polen es el nombre colectivo de los
Fig 7. Imagen de polvillo objetivo 4x. granos, más o menos microscópicos, que producen
las plantas con semilla, cada uno de los cuales
contiene un micro gametófito. El saco polínico es
 Objetivo 10x: Se puede observar más la parte de la antera que contiene los granos de
claramente la forma del polvillo de ala de polen, en los órganos masculinos de la flor, los
mariposa y su coloración amarilla oscura. estambres.
Para el polen se pudo observar desde el aumento de
4x su forma semicircular y su color amarillo. No se
puede apreciar mucho más con este aumento.
Con el aumento de 10x se puede ver más
claramente la forma de los granos de polen y como
en su capa externa se aprecian unas pequeñas
“espinas”. Estas son las que hacen posible que el
polen pueda ser transportado por las abejas, porque
dichas “espinas” se incrustan en las patas de las
Fig 8. Imagen de polvillo objetivo 10x.
abejas para ser llevadas a otra flor y poder realizar
el proceso de polinización.
 Objetivo 40x: Se puede apreciar Por último, con el aumento de 40x se pueden
completamente la forma que tiene el polvillo apreciar más claramente estas espinas y lo finas que
de ala de mariposa y como unos gránulos son son sus puntas. Lo que les facilita adherirse a algo.
mas pequeños o delgados que otros.
Corcho
El corcho es la corteza del alcornoque (Quercus suber)
que lo protege frente a las condiciones extremas del
clima mediterráneo, como son la sequía, las altas
temperaturas estivales y los incendios.
Está constituido por células muertas cuyo interior se
llena de un gas similar al aire. Ese gas constituye casi
el 90% del corcho, de ahí su levísimo peso y su
compresibilidad. Las paredes de esas células, que son
como minúsculos compartimentos estancos, están
Fig 9. Imagen de polvillo objetivo 40x. constituidas fundamentalmente por suberina y cerina,
substancias que lo hacen bastante ignífugo, muy
flexible y prácticamente imputrescible.

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Para el corcho en el aumento 4x solamente se pudo El color de las escamas se origina por dos
observar una estructura de un café oscuro en el mecanismos; el color pigmentario, dado por
centro y algo más transparente en los bordes, donde la acumulación de pigmentos en las cavidades de
el corte era más fino. éstas; y el color estructural, que se produce por
Posteriormente, para el aumento de 10x se puede la difracción de la luz en la microestructura de las
observar con mayor claridad la presencia de células escamas, produciendo coloración iridiscente, que
vegetales muertas que son semitransparentes. cambia según el ángulo de observación.
Como se mencionó anteriormente, esta apariencia Por último, para el aumento 40x estas escamas son
semitransparente es debida a que las células más visibles y se puede ver como cada escama es un
vegetales del corcho están llenas de un gas que es tanto diferente de otra, como unas son más delgadas o
un poco similar al aire. Al estar llenas de este gas, más pequeñas que otras.
el corcho se vuelve un material realmente ligero
elástico, además de ser resistente y un excelente
aislante térmico. 7. PREGUNTAS
Por último, para el aumento de 40x, se pueden COMPLEMENTARIAS
observar claramente las células vegetales y como 1. ¿Las imágenes observadas al microscopio son
cada una de ella tiene un borde oscuro que las reales o virtuales? Explique.
separa de las demás células. Son imágenes virtuales porque el microscopio es
un sistema óptico divergente (las imágenes
Polvillo de ala de mariposa. resultantes no pueden ser proyectadas en un
Las alas de las mariposas y polillas no están plano). El microscopio compuesto consiste en
cubiertas de polvillo o polen, como la gente cree, en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular,
realidad se trata de escamas, estructuras que montados en extremos opuestos de un tubo
corresponden a setas o pelos modificados. De ahí se cerrado. El objetivo está compuesto de varias
origina el nombre "lepidópteros" (alas con
lentes que crean una imagen real aumentada del
escamas), para referirse a estos insectos.
objeto examinado. Las lentes de los
En los lepidópteros primitivos, las escamas son microscopios están dispuestas de forma que el
macizas, mientras que en la mayor parte de las objetivo se encuentre en el punto focal del
especies son huecas. Esto apoyaría la hipótesis de ocular. Cuando se mira a través del ocular se ve
que tales estructuras se desarrollaron una imagen virtual aumentada de la imagen real.
como aislantes térmicos, en insectos con actividad
El aumento total del microscopio depende de las
predominantemente nocturna. En lepidópteros
diurnos, también ayudarían a concentrar o reflejar longitudes focales de los dos sistemas de lentes.
la radiación solar, permitiendo elevar o disminuir la 2. ¿Por qué se realiza una permeabilización delas
temperatura corporal, respectivamente. células en las técnicas empleadas para su
observación? ¿Este paso es siempre
Para el aumento de 4x se pueden apreciar muchos necesario?
gránulos de un color semiamarillo y además que
Esto sí es necesario, puesto que, la permeabilidad
están en una abundante cantidad, pero poco más se
de las células es debido a que están en la
puede apreciar.
membrana plasmática y tienden a tener en su
Luego, para el aumento de 10x se puede apreciar interior cadenas de ácidos grasos de los lípidos,
más claramente la estructura de dichos “gránulos”, y se dice que pueden llegar a ser tener dificultad
que ahora se ven más como escamas, las escamas para que las moléculas crucen con una carga
también determinan la coloración de las alas y del eléctrica neta. Se debe, a que en la capa
cuerpo, por lo que están involucradas en los hidrofóbica es la que impidela libre difusión de
fenómenos de cripsis, mimetismo y aposematismo. las moléculas, y permite que la membrana cree
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 comportamientos intracelulares que tienen
contenidos químicos lo cuales mantienen 5. ¿Es la iluminación más o menos brillante con
separado el medio intracelular del el objetivo de mayor aumento que con el
extracelular, por lo que la permeabilización objetivo de menor aumento? ¿Por qué?
puede ser selectiva. Además, dependen de la Normalmente el objetivo de mayor aumento
composición de cada lípido, por ende, las tiene una iluminación menos brillante que con el
membranas más fluidas son más permeables objetivo de menor aumento en el microscopio,
y la de menos permeabilidad son menos debido a que la apertura numérica de los
fluidas. objetivos de mayor aumento es más alta en
3. Compare las imágenes anteriormente comparación con los de menor, entonces estos
observadas, ¿En qué se asemejan?, ¿En toman menor cantidad de luz , los de mayor
qué se diferencian? necesitan una apertura numérica (capacidad
Las muestras microscópicas, las muestras de medida del objetivo para retomar la luz) mayor
polen, las muestras de corcho y las muestras porque tienen que tomar una mejor precisión de
de comida de mariposas tienen una cosa en
la muestra lo que equivale a una iluminación más
común: son materiales biológicos cuya
estructura y composición se pueden baja, también porque se colocan a una distancia
determinar mediante la observación más corta evitando así afectar la vista de quién
microscópica. Incluye detalles importantes. utiliza el microscopio.
Sin embargo, estas muestras también
muestran diferencias significativas. El polen 6. Mencione que poderes pudo comprobar en
es la microestructura que forman las plantas, cada una de las muestras observadas.
el corcho es el material vegetal en la corteza Explique.
de los árboles y el polvo de mariposa es la
microestructura que forman las mariposas. 4x: para este objetivo el cuál fue el de menor
Además, estas muestras tienen diferentes magnificación la imagen que se logró observar
estructuras y composiciones. para las distintas muestras fue una imagen
año y forma según el tipo de planta. El corcho, general de lo que era la muestra como tal, es
por otro lado, tiene una estructura porosa que decir, no sé específico ningún tipo de detalle
flota en el agua. El polvo de mariposa consiste como estructura o pared, con esto se notó el
en copos. tamaño y forma en general de la muestra
tomada.
10x: en cuanto a esta mayor magnificación se
4. Cuando usted mueva la lámina hacia pudo observar un poco más a fondo los detalles
delante, ¿En qué dirección se mueve la de las muestras, este lente debido a que tiene un
imagen? mayor nivel de precisión se notaron distintas
Al momento de rotar la lámina del estructuras internas como lo fueron las de las
escamas del corcho y las características de la
microscopio hacia adelante o hacia la muestra
célula del polen de la flor.
la imagen siempre se moverá tomando una 40x: en este el cuál es el mayor nivel de
dirección opuesta, esto se debe a qué cuando magnificación del microscopio es el cuál
se mueve la lámina hacia adelante se nota una debería mostrar de forma más detallada las
disminución de distancia entre el objeto y la estructuras de las muestras y sus características
muestra cambiando de esta forma la posición muy específicas, sin embargo, en la anterior
en el plano focal para así mantener un práctica no se logró enfocar de manera correcta
enfoque preciso de la muestra. el equipo por lo que no se pudo identificar los
distintos componentes que se presentaban en
este por falencias al momento de tomar o
colocar la muestra en el vidrio.

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 8. CONCLUSIONES
Se pudo determinar de manera experimental las
7. Explique la diferencia entre un
características y manejo del microscopio óptico
estereoscopio y un microscopio compuesto. En la práctica realizada, se
El microscopio es un material del laboratorio identificaron las partes del microscopio, y por
el cual tiene como funcionamiento examinar u consiguiente sus respectivas funciones; de igual
observar objetos que son demasiado pequeños manera, se resaltan los lentes de objetivos (4x,
para que puedan ser vistos a simple vista, en 10x, 40x) los cuales son necesarios para la
este instrumento óptico se utilizan lentes los amplificación de la imagen de las muestras
cuales magnifican los objetos diminutos cómo trabajadas. Los objetivos son utilizados en
lo son los microorganismos o pequeñas diversas ciencias como la biología, la medicina,
partículas, este aparato funciona con un la acuicultura o el manejo industrial, por lo que
sistema de luces y enfoques para mejorar la saber su enfoque fue crucial para la realización de
visión de quién lo utiliza. Por su lado el esta práctica. No obstante, la manipulación del
estereoscopio proporciona una imagen que microscopio también fue crucial para identificar
puede ser vista en 3 dimensiones por lo que los respectivos organelos celulares presentes en
son objetos tridimensionales, este No las muestras. Se concluye que, el aprendizaje y
magnífica la muestra en gran medida, pero a trabajo de este instrumento tuvo un desenlace
su vez se puede observar una vista ampliada y positivo en la realización de la práctica en el
en 3 dimensiones de la muestra. laboratorio de microbiología.
8. ¿Como es la imagen en el estereoscopio: 9. REFERENCIAS
¿virtual o real, en posición derecha o
invertida? Justifique
Centeno Briceño, S. (2001). Evaluación
Presenta una imagen ampliada, cuando se microbiológica de tapones de corcho para
coloca debajo del estereoscopio del sujeto, vinos. Universidad Autónoma de
las imágenes se superponen parcialmente Barcelona.
entre sí. Como resultado, una parte del
área superpuesta queda oculta a la vita, De Juan, J. (s.f.). PRACTICA N° 1. La técnica
donde las imágenes se ven cruzando los histológica (1): Obtención y fijación del
material. Universidad d´Alacant,
ejes ópticos delos ojos y el par estéreo se
Departamento de Biotecnología.
invierte, es decir, la imagen de la derecha
está a la izquierda y viceversa. El cual,
podemos ayudarnos enfocándonos en un García, L., Rivero, M., & Droppelmann, F.
lápiz colocado frente a las imágenes. (2015). Descripción morfológica y
viabilidad del polen de Nothofagus
9. Escriba el nombre de cada una de las partes nervosa (Nothofagaceae). Bosque
del microscopio. (Valdivia), 36(3), 487–496.

Guerrero, R., Rojas, M. & Fortoul, T.

(2017).Histología y biología celular. (3ra.
ed.--.). McGraw Gill.

Riboulet, J.M. (1982). Contribución al estudio

químico y microbiológico de los gustos a
corcho en los vinos. Tesis de tercer ciclo.
Fig 10. Partes del microscopio. Universidad de Burdeos II, Francia

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