UNIDADES TECNOLÓGICAS DE SANTANDER

IDENTIFICACIÓN
UNIDAD ACADÉMICA TECNOLOGIA EN MANEJO DE RECURSOS AMBIENTALES
ASIGNATURA: LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
UNIDAD TEMÁTICA PRINCIPIOS FUNDAMENTALES DE LA MICROBIOLOGIA.
PRACTICA 2 USO DEL MICROSCOPIO Y ESTEREOSCOPIO

COMPETENCIA RESULTADOS DE APRENDIZAJE

Clasifica estructuras y reacciones en  Emplea técnicamente el microscopio durante las prácticas
niveles microbiológicos que influyen en a desarrollar.
la protección y conservación de  Prepara montajes en fresco para la observación de
procesos ambientales. diferentes tipos de muestras
 Realizar recolección de datos a partir de técnicas que
faciliten la caracterización de una realidad determinada.

ACTIVIDADES
INTRODUCCIÓN:

El microscopio es un instrumento que permite observar objetos tan pequeños que no se pueden ver a
simple vista. Además, sirve para hacer mediciones, estimar el tamaño de una población de
microorganismos, estudiar estructuras celulares en general, hacer estudios morfológicos y fisiológicos
de células y tejidos.
Uno de los microscopios más utilizados en biología es el microscopio óptico el cual contiene una o
varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y funciona por Refracción
gracias a los fotones de luz que llegan al objeto y permiten observar sus características. Los
microscopios de este tipo suelen ser más complejos, con varias lentes tanto en el objetivo como en el
ocular.

En la actualidad existen varios tipos de microscopios que permiten observar las imágenes con mayor
detalle, por ejemplo, el microscopio electrónico, el cual basa su poder de aumento en el bombardeo de
electrones sobre el objeto permitiendo observar una imagen muy pequeña en tercera dimensión y con
una mejor precisión, ya que aumenta la imagen hasta 500.000 veces mientras que el microscopio
óptico la aumenta tan solo 1.000.

Partes del Microscopio Óptico y sus Funciones (ver figura 1)

El microscopio óptico está compuesto principalmente por tres partes: el sistema óptico, lumínico y
mecánico.
Y cada uno de estos se compone de otros elementos como son:

1. Sistema óptico: es el conjunto de lentes que se encuentran en el microscopio y que tienen como
función principal ampliar la imagen del objeto observado.

a. Oculares: Están situados en el extremo superior del tubo, cerca del ojo del observador. Tienen
como función multiplicar el aumento logrado por el objetivo, el aumento que se logra con ellos se
representa por un número entero acompañado de una X. Los aumentos pueden ser de 4X, 6X, 8X, 9X,
10X y l2X.

b. Objetivos: Están ubicados en el extremo inferior del tubo en la pieza llamada "revólver" y son los que
están cerca del objeto que se va a observar. Los objetivos pueden ser "secos" o de "inmersión". Los
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secos, se denominan así porque para usarlos no es necesario añadir ninguna sustancia entre ellos y la
preparación, sus aumentos pueden ser de 4X, 10X y 40X. Para los húmedos o de inmersión, es
necesario añadir una gota de aceite de cedro entre la preparación y el objetivo de tal manera que el
objetivo entre en contacto con el aceite ya que este evita que se desvíe la luz y se pierda la refracción,
el aumento suele ser de 100X.

2. Sistema de iluminación: está constituido por las partes del microscopio, cuya función está
relacionada con la entrada de luz a través del aparato que ilumina la preparación. Está compuesto por:

a. Condensador: lente que concentra los rayos luminosos y los dirige hacia la preparación.

b. Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

c. Foco o lámpara: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

3. Sistema mecánico: son las piezas que constituyen el microscopio en las cuales se encuentran
disponibles los lentes y el sistema de iluminación.

a. Tornillo macrométrico: permite realizar movimientos verticales grandes, es decir mueve el tubo de
arriba hacia abajo permitiendo un enfoque rápido, es un tornillo grande.

b. Tornillo micrométrico: permite realizar movimientos cortos, por lo cual sirve para afinar y precisar
el enfoque, el tornillo es pequeño y se encuentra sobre el macrométrico.

c. Revólver: estructura circular giratoria donde van enroscados los objetivos. Permite la colocación en
posición correcta del objetivo que se va a usar.

d. Platina: se utiliza para colocar la preparación u objeto que se va a observar, puede ser fija o
giratoria, tiene un hueco en el centro para dejar pasar los rayos luminosos.

e. Carro: dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparación de derecha a
izquierda y de atrás hacia delante.

f. Pinzas del portaobjeto: sirven para sostener la preparación.

g. Base o pie: es la estructura que se encuentra en la parte inferior del microscopio y que le sirve de
apoyo sobre una superficie.

h. Brazo: es la parte que une la base con la zona de los oculares. De esta parte se coge el microscopio
para su traslado de un lado a otro

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Figura 1. Microscopio óptico y sus partes

PROPIEDADES DEL MICROSCOPIO

Poder separador. También llamado a veces poder de resolución, es una cualidad del microscopio, y
se define como la distancia mínima entre dos puntos próximos que pueden verse separados. El ojo
normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una décima de milímetro.
En el microscopio óptico, el poder separador máximo conseguido es de 0,2 décimas de micra, y en el
microscopio electrónico, el poder separador llega hasta 10 angstrom.
Poder de definición. Se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas, sobre todo respecto a sus
contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la corrección de las aberraciones de las lentes
utilizadas.
Aumento del microscopio. En términos generales se define como la relación entre el diámetro
aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto, o sea:

Aumento (A) = Diámetro / objeto

Esto quiere decir que, si el microscopio aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen que estamos
viendo es 100 veces mayor que el tamaño real del objeto. Para calcular el aumento de un microscopio,
basta multiplicar el aumento del ocular por el aumento del objetivo. Por ejemplo, si estamos utilizando
un ocular de 10X y un objetivo de 45X, el aumento a que estamos viendo la preparación será: 1OX x
45X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada 450 veces.

Campo del Microscopio Se denomina "campo del microscopio" al círculo visible que se observa a
través del microscopio. También podemos definirlo como la porción del plano visible observado a
través del microscopio. Si el aumento es mayor, el campo disminuye, lo cual quiere decir que el campo
es inversamente proporcional al aumento del microscopio. Para medir el diámetro del campo del
microscopio con cualquiera de los objetivos se utiliza el micrómetro, al que se hará referencia en el
siguiente punto.

EL ESTEREOSCÓPIO

El Estereomicroscopio (ver figura 2) también conocido como lupa binocular es una herramienta con
bajo poder de aumento, utilizada en el laboratorio para la observación de objetos pequeños que no
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pueden ser observados a simple vista pero demasiado grandes para ser observados a través del
microscopio. Este instrumento posee dos oculares que forman planos ópticos diferentes permitiendo
observar una imagen tridimensional. No se debe confundir con microscopio binocular, ya que el
microscopio forma la imagen en un objetivo y la proyecta exactamente igual en los dos oculares
generando una imagen plana e invertida.

Oculares
Anillo graduador de Portaoculares
dioptrías
Botón de Magnificación

Objetivos Botón de Enfoque

Lámpara

Botón de encendido
de la lámpara
Base

Placa Platina Pinzas

Figura 2. El estereoscopio y sus partes

Con ayuda de la figura localice en su microscopio estereoscópio las siguientes partes:

a. Base: sostiene el estereoscopio y recibe, en su perforación central, a la placa platina.

b. Placa platina: presenta coloraciones diferentes por cada lado; durante la observación use el
color apropiado para obtener un contraste favorable en relación al objeto de estudio.

c. Pinzas: sostiene la preparación sobre la placa platina.

d. Tornillo de ajuste: facilita en ascenso o descenso de la parte superior.

e. Boton de enfoque: permite desplazar a través de la caja de accionamiento la parte óptica para
lograr el enfoque preciso.

f. Portaoculares: reciben los oculares.

g. Anillo graduador de dioptrías: se usa para compensar defectos ópticos individuales.

h. Oculares: proporcionan aumentos (6.3, 12,5, 25x) que dependen de las lentes que los forman.
El estereoscopio binocular esta provisto de dos oculares y dos objetivos dando como resultado
una imagen tridimensional durante la observación.

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i. Botón de magnificación: permite el cambio rápido de los aumentos seleccionando los objetivos
apropiados cuya posición queda indicada al coincidir el aumento del objetivo con la marca
indicadora.

j. Objetivos: están compuestos por lentes de diferentes aumentos (0.63, 1.0, 1.6, 2.5, 4.0x). Estos
están en el interior y acoplados al botón de magnificación.

k. Lampara. Ilumina la preparación

Precauciones y Normas para el cuidado del microscopio y del observador

- Transporte los microscopios con ambas manos, utilizando una para sujetarlo del brazo y la otra para
sostenerlo desde la base
- Cargue el microscopio siempre de manera vertical para evitar que se caigan los oculares o cualquier
otra pieza.
- Para enfocar un micropreparado comience siempre con el menor aumento
- Mueva los tornillos o cualquier pieza del microscopio delicadamente
- Si utiliza el aceite de inmersión para el objetivo de 100X límpielo al finalizar utilizando papel de arroz.
- Evite tocar las lentes con los dedos.
- El portaobjetos debe estar siempre seco al ponerlo sobre la platina.
- Cuando finalice su trabajo con el microscopio aíslelo del polvo y del calor cubriéndolo con una funda.
- Después de finalizada la observación en el microscopio regrese el revolver hacia el objetivo de menor
aumento
- Recuerde que la iluminación baja permite observar mas detalles del objeto. La creencia de que con
mayor luz se ve mejor es falsa.
- NO OLVIDE DEJARLO LIMPIO, APAGADO Y DESCONECTADO.
- Mantenga ambos ojos abiertos al momento de observar por el microscopio. Si usted usa lentes no se
los quites para la observación.

Materiales que deben traer los estudiantes

 BATA
 Kit de laboratorio con los siguientes implementos: Gasa, bayetilla, alcohol en spray al 70%,
fósforos o encendedor, Guantes, Tapabocas, gafas de laboratorio.
 Fragmento de papel periódico (edictos)
 Papel milimetrado
 Tijeras.
Materiales del laboratorio
 Pipeta Pasteur.
 Probetas.
 Portaobjetos.
 Cubreobjetos.
 Microscopio óptico.
 Microscopio estereoscopio

Reactivos:
 Agua.
 Aceite de inmersión

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METODOLOGÍA A UTILIZAR
USO DEL MISCROSCOPIO

Preparación del material (técnica squach)

Los materiales que se van a observar se colocan sobre una lámina de vidrio o portaobjetos, y
generalmente se cubren con una pequeña y delgada lámina cubreobjetos. Utilice un recorte de papel
periódico o revista de una palabra no mayor de cinco letras. Antes de cubrir la preparación con la lámina
cubreobjetos resulta conveniente adicionar una gota de agua, utilice la pipeta Pasteur y adicione una
gota. Coloque el cubreobjetos sobre el portaobjetos haciendo contacto con la gota de agua formando
ángulo de 45° con éste. Deje caer suavemente el cubreobjetos sobre la preparación de manera que el
agua se distribuya uniformemente. Evite la formación de burbujas desplazándole cubreobjetos o
haciendo leve presión sobre éste. Retire el exceso de agua usando papel absorbente. Coloque la
preparación sobre la platina y fíjela con las pinzas.

Enfoque
 Colocar la preparación sobre la platina de forma que la estructura a observar quede en el orificio
central de la platina.
 Poner el objetivo de menor aumento cuyo amplio campo visual facilita el hallazgo de estructuras
importantes.
 Subir la platina accionando el tornillo macrométrico y mirando la preparación desde fuera hasta
alcanzar el tope superior. En ningún caso tocar la preparación con los objetivos.
 Mirando por los oculares, bajar lentamente la platina con el tornillo macrométrico hasta conseguir
ver el objeto lo más nítido posible.
 Ajustar el enfoque con el tornillo micrométrico hasta verlo claramente.
 Para observar la preparación a mayores aumentos cambiar de objetivo con un simple giro del
revólver (SIN MOVER EN NINGÚN CASO EL TORNILLO MACRO). Las pequeñas variaciones que
observe en el enfoque se producen al cambiar de objetivo y se corrigen con el micro.
 Para observar otros campos, desplazar la preparación moviendo los tornillos de la platina.

Enfoque la preparación y observe en objetivos de menor (4X, 10X) y de mayor aumento (40X).
Describa y realice dibujos de lo observado.
Observa que las imágenes aparecen invertidas. EXPLIQUE LA RAZON DE ESTE FENÓMENO. Mueva
la lámina en varios sentidos mientras observa por el ocular y note el desplazamiento de la imagen en
cada caso.

Para hacer la observación con objetivo de inmersión proceda de la siguiente forma:

 Bajar totalmente la platina.

 Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que
se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
 Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40.
 Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
 Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
 Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de
aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
 Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión
y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy
grande.

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 Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el
objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo,
hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
Para cambiar la preparación:

 Bajar la platina.
 Colocar el objetivo de menor aumento.
 Quitar la preparación y colocar la siguiente

MEDICIONES MICROSCÓPICAS

Para hacer mediciones microscópicas se requiere de un micrómetro; escala conveniente mente

graduada que se inserta en el ocular permitiendo determinar la longitud y la anchura de las muestras
que aparezcan en el campo ocular. Si no se dispone de este instrumento la medición se puede realizar
de manera indirecta calculando el diámetro del campo ocular, para lo cual se procede a enfocar con el
objetivo de menor aumento 1cm2 de papel milimetrado y a calcular de acuerdo con las divisiones que
aparecen en el campo, el diámetro de este, utilice el teorema de Pitágoras ( h 2 = a2 + b2 ) para hacer
este cálculo
Determinado el diámetro con el objetivo de menor aumento, es posible determinarlo con objetivos
mayores; para ello nos basamos en el principio por el cual al pasar a un aumento mayor, la imagen se
amplifica tantas veces más y el campo óptico se reduce, proporcionalmente al aumento empleado; así
por ejemplo:

Si el diámetro del campo óptico a menor aumento (10X) es 1300µm, entonces:

- el Diámetro del campo óptico a 40X = 10/40 (1300 µm).

USO DEL ESTEREOSCOPIO

5.5.1 Preparación de material

Coloque siempre el objeto a observar sobre una lámina de vidrio en caja de petri de manera que el
objeto no haga contacto directo con la platina evitando el deterioro del equipo.

5.5.2 Enfoque
Para una mejor observación seleccione el color apropiado de la placa platina para un mejor contraste.

Para iniciar la observación seleccione los objetivos de menor aumento (¿QUE PARTE DEL EQUIPO
DEBE USAR?) Mirando por fuera y usando el botón de enfoque, haga descender totalmente la parte
óptica. Mirando por los oculares accione el botón de enfoque hasta que en el campo ocular aparezca
la imagen. En este momento usando el anillo graduador de dioptrías, de acuerdo a la descripción que
para su utilización se dio anteriormente, obtenga un enfoque preciso.

Para observaciones más detalladas seleccione, usando el botón de magnificación, objetivos de mayor
aumento y proceda en cada cambio de acuerdo a la descripción para el enfoque dada previamente.

Siguiendo los pasos ya descritos, mire al estereoscopio una o varias palabras impresas en papel.
¿Note que las imágenes no aparecen invertidas, PORQUE, A DIFERENCIA DEL MICROSCOPIO
COMPUESTO, ¿SE PRESENTA ESTO? Mueva la preparación en varios sentidos mientras observa
por los oculares y note el desplazamiento de las imágenes en cada caso. ¿COINCIDE EL
DESPLAZAMIENTO DE LA IMAGEN CON EL MOVIMIENTO DE LA PREPARACIÓN?
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DETERMINE EL DIAMETRO DE CAMPO DEL ESTEREOSCÓPIO.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de
observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la
misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para
evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe
guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con
un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo
con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier
caso, se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a
secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o
xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso
se pueden dañar las lentes y su sujeción.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina,
revólver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación
para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el
tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo
con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al
acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

EVALUACIÓN
1. Compare las características del microscopio compuesto u óptico con las del microscopio
estereoscópio.

2. Según lo aprendido y consultando otras fuentes, mencione que utilidades tiene la microscopia
para su profesión, coloque ejemplos y referencias verificables.

3. Complete el siguiente cuadro:

Características Objetivo Objetivo Objetivo Objetivo

ópticas. 4X 10X 40X 100X
Poder de
aumento.
Diámetro del
campo óptico en
µm.

Distancia de
trabajo

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4. Al desplazar el portaobjetos y observar al mismo tiempo por los oculares, ¿en qué sentido se
mueve la imagen al utilizar los diferentes tornillos?

5. ¿Cuáles son los pasos para lograr un buen enfoque en el microscopio?

BIBLIOGRAFÍA

AQUIAHUATL RAMOS. MARÍA. 2004.Manual Practicas de Laboratorio Microbiología General.

Primera Edición. Casa Abierta al Tiempo. México D.F.
ACEVEDO BARRIOS, R.L.; SEVERICHE SIERRA, C.A. CASTILLO BERTEL, M.E. 2013. Biología y
Microbiología Ambiental. Prácticas de Laboratorio. EUMED.NED, España 2013, 94 p
CERRA HECTOR. FERNANDEZ MARIA CRISTINA. Manual de Microbiología Aplicada. Editorial
Asociación Argentina de Microbiología. Buenos Aires. 2013.
Webgrafia:
https://www.mundomicroscopio.com/microscopio-estereoscopico/

https://www.mundomicroscopio.com/partes-del-microscopio/

https://www.uv.es/instrumental/documents/Tema_06_AV.pdf

https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/35/35697/uso_microscopio_optico.pdf

Preinforme: Microscopia, clasificación de microscópios (óptico, de luz ultravioleta, de fluorescência,

de campo escuro, de luz polarizada, eletrônico de barrido, electrónico)

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