División de Ciencias Básicas

UNIVERSIDAD DEL NORTE

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA Y BIOLOGÍA
BIOLOGÍA CSV0010
Integrantes: _____________. _____________._____________._____________._____________.

PRÁCTICA 4: MICROSCOPÍA: CONOCIMIENTO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO.

1. Introducción

El microscopio óptico es un instrumento que permite observar e incluso cuantificar objetos y

organismos muy pequeños. Este instrumento ha sido fundamental para el avance de las
investigaciones biológicas y se ha convertido en una herramienta básica para ampliar las fronteras
de la biología. Existen diferentes tipos de microscopios que varían en su poder de aumento y
resolución. La lupa se puede considerar como el microscopio más simple y fue usado inicialmente
para adquirir los primeros conocimientos del mundo microscópico. Luego se perfeccionó y en la
actualidad existe una gran variedad de microscopios, algunos de ellos altamente especializados. Los
rangos aproximados de magnificación de la imagen observada en este tipo de instrumentos se
encuentran entre 4x y 40x (estereoscopio), 40x-1.500x (microscopio óptico compuesto), 10.000x-
16.000x (microscopio electrónico). La x hace referencia al número de veces que se aumenta el
tamaño real del objeto.
El propósito de esta práctica es conocer el microscopio óptico compuesto, así como adquirir
destrezas en su cuidado y manejo.
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Fig.1 Las escalas de la naturaleza. https://socratic.org/questions/why-the-microscope-is-important-to-the-study-of-biology

2. Conceptos importantes

Poder de aumento. El poder de aumento es la capacidad que posee el microscopio para dar
una imagen ampliada de un objeto. Esta capacidad está representada por dos tipos de lentes, cada
una de las cuales participa en el aumento de la imagen. Las lentes se conocen con el nombre de
oculares y objetivos. Por lo tanto, el poder de aumento total de un microscopio se calcula al
multiplicar la capacidad de aumento de la lente ocular por la capacidad de aumento del lente
objetivo. En muchos casos, la lente ocular de los microscopios ópticos compuestos es de 10x.

Finalmente, la conclusión con respecto a los lentes objetivos es que forman una imagen
aumentada de tamaño, invertida y real.

Fig.2 El poder de aumento en el microscopio óptico. Células de tejido epidérmico estratificado en mamíferos, observadas al microscopio
después de realizar una coloración. Se observa la imagen bajo las lentes objetivo 10x, 20x, 40x y 100x para una magnificación total de 100x,
200x, 400x y 1000x respectivamente. El nivel de detalle en la imagen se hace más evidente cuando se alternan las lentes objetivos.
https://socratic.org/questions/why-the-microscope-is-important-to-the-study-of-biology

Poder de resolución (d). Es la capacidad que tiene el sistema óptico de aislar dos puntos que se
encuentran muy próximos entre sí, de manera que se puedan observar individualizados el uno del
otro. La resolución está asociada con la nitidez y calidad del detalle en la imagen que se está
observando.

Límite de resolución (LR). Es la distancia mínima que debe existir entre dos puntos para que
puedan ser discriminados como tales. Es decir, cuanto menor es esa distancia, mayor es el poder de
resolución necesario para apreciar los objetos individualmente. Éste es inversamente proporcional a
la longitud de onda ( λ ¿ que se esté utilizando para hacer las observaciones. A menor λ , mayor
límite de resolución y viceversa. Cabe resaltar que la longitud de onda de un electrón varía en
dependencia de la velocidad a la que esta partícula se desplace; lo cual es completamente diferente
a la λ de un fotón de luz, la cual siempre es constante.
Apertura numérica (AN). Es una medida que indica la capacidad del lente objetivo de poder
capturar los rayos refractados por las estructuras de las cuales está constituido el objeto que se
observa, lo cual está
directamente relacionado
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con la calidad del detalle. Cuanto mayor sea la apertura numérica de un objetivo, mayor será su
capacidad para mostrar los detalles de la imagen.

3. Partes del microscopio óptico compuesto y sus funciones

El microscopio óptico compuesto está formado por tres tipos de elementos: mecánicos,
ópticos y de iluminación.

Tornillos de
desplazamiento
platina

Fig.3 Componentes del microscopio óptico compuesto. En la imagen se señalan las partes mecánicas, ópticas y de iluminación.

3.1 Parte mecánica.

La Base es el punto de apoyo del armazón del microscopio y donde generalmente se inserta la
fuente luminosa.

La Platina es el lugar de ubicación de los portaobjetos. Posee un orificio central que deja pasar la
luz y con su pinza y tornillos del carro permite sujetar y mover el portaobjetos que contiene la
preparación en dos direcciones: hacia delante y hacia atrás y de derecha a izquierda.

El Brazo es la sección del microscopio que utilizamos para el agarre y transporte del instrumento.

El Tornillo macrométrico está ubicado en el brazo y ayuda a acercar y alejar la platina de los
objetivos (movimiento de arriba hacia abajo y viceversa). Con este tornillo se realizan movimientos
más rápidos y evidentes.
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El Tornillo micrométrico está ubicado junto al tornillo macrométrico. Permite un enfoque preciso de
la imagen mediante movimientos suaves, que no son observables.

En el Revólver se enroscan las lentes objetivo en el microscopio. Posee un sistema giratorio que
permite colocar el objetivo requerido en la posición correcta. Al rotarlo y ubicar el objetivo en la
posición adecuada genera un sonido de click.

3.2 Parte óptica y de iluminación.

Fuente de Luz: En los microscopios modernos una bombilla o lámpara insertada dentro de la base
del instrumento emite un haz de luz suficiente para la observación de los objetos de interés.

Diafragma (iris): Está situado por debajo de la platina, de apariencia laminar y acoplado al
condensador, su función es regular la cantidad de luz que debe llegar a la muestra. Puede abrirse o
cerrarse totalmente.

Condensador: es una lente que concentra los rayos de luz hacia la preparación

Objetivos: Son las lentes que construyen la imagen del objeto. Pueden ser secos como los de 4x,
10x y 40x o sea que no necesitan aceite para lograr nitidez y húmedos como el de 100x que necesita
aceite por lo que recibe el nombre de objetivo de inmersión.

Oculares: Son lentes cuya función es aumentar la imagen proveniente del objetivo. Su aumento
depende de las lentes que lo conforman, pueden ser de 10x, 15x o 16x. Hay uno solo en el
microscopio monocular y dos en el binocular.

4. Breve historia del microscopio:

DILIGENCIAR ESTE CUESTIONARIO POR GRUPOS DE TRABAJO.

1. ¿Qué influencia tuvieron las siguientes personas en la evolución del microscopio?

a) ZACCHARIAS JANSSEN b) GALILEO GALILEI

1580-1638 Países Bajos

(Middelburg)
Fabricaba lentes

c) ANTONY VAN LEEUWENHOEK d) ROBERT HOOKE

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1632-1723 Delft, Países Bajo 1635-1703 Reino Unido

  Científico y comerciante Científico

e) ERNEST ABBE f) CARL ZEISS

1840 – 1905. Alemania 1816 –1888 Alemania

Físico Óptico

5. Objetivos

Objetivo general: Conocer el microscopio óptico compuesto, así como adquirir destrezas en su
cuidado y manejo.

Objetivos específicos:
general de la práctica:
 Identificar las partes del microscopio y conocer la función de cada una de ellas.
 Aprender a utilizar el microscopio y enfocar correctamente un preparado.
 Observar muestras en el microscopio, haciendo énfasis en la preparación del material a
observar y en los procesos de ajuste y enfoque correctos.

6. Materiales
 Microscopio óptico compuesto
 Letras impresas en papel
 Muestra de insecto
 Portaobjetos
 Cubreobjetos
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7. Procedimiento
7.1 Disposición y cuidado del microscopio.
 Al transportar el microscopio, tómelo siempre con las dos manos, de tal forma que una
mano lo sostenga por el Brazo y la otra por la Base. Nunca tenga objetos adicionales en
sus manos.
 Al colocar el microscopio sobre la mesa, sitúelo a unos 10 o 15 cm del borde y acomódelo
de manera que los Oculares queden orientados hacia usted.
 Nunca use el Objetivo de inmersión (100x) si no se le ha solicitado hacerlo. Recuerde
que con este objetivo se requiere el uso de aceite, y si no lo hace puede dañar la lente.
 Al terminar de trabajar deje el microscopio en el objetivo de menor aumento; en el caso de
la mayoría de los microscopios, éste corresponde al Objetivo 4x.

7.2 Preparación de la muestra de una hoja de Tradescantia spathacea.

 Tomar un portaobjetos limpio y colocarlo en el mezón (uno por persona). En el centro de
este colocar una gota de agua y sobre ella el trozo de papel con letras impresas.
 Una vez ha realizado el montaje del trozo de papel con letras sobre la gota de agua. Y
cubierto con el cubreobjetos formando un ángulo de 45 grados entre el portaobjetos y el
cubreobjetos. Evitando la formación de burbujas en la lámina.
 Coloque la preparación sobre la Platina de tal manera que quede bien ajustada por las
Pinzas que hay en la platina. Enfoque las letras con el Objetivo de 4X utilizando el
Tornillo macrométrico. Abra el Diafragma hasta que obtenga una buena iluminación de
la muestra.
 Utilice el Tornillo micrométrico para obtener mayor nitidez. Es importante resaltar que
siempre que se haga una observación al microscopio se debe usar en primer lugar el
objetivo de menor aumento.

7.3 Proceso de enfoque en el microscopio óptico compuesto.

 Encienda el botón de la fuente luminosa.
 Utilice el tornillo macrométrico para bajar completamente la platina.
 Deposite el portaobjetos con el preparado en la platina y sujételo con las pinzas.
 Suavemente gire el revólver de tal manera que el objetivo 4x quede ubicado sobre el
preparado. Cuando esto ocurra escuchará un click.
 Coloque sus manos sobre los tornillos macrométricos que se encuentran a lado y lado de
la base.
 Inclínese hacia adelante y acerque sus ojos a los oculares (sin posar ojos sobre el equipo)
 El tornillo macrométrico desplaza la platina en un plano vertical, así que gírelo y comience
a subir la platina lentamente hasta que pueda observar alguna sección de la imagen, así
ésta no sea nítida. Mantenga la platina en esa posición.
 Rote lentamente el tornillo micrométrico hasta darle nitidez a la imagen.
 En el momento en el que vea con nitidez la imagen, ha terminado el proceso de enfoque.

7.3.2 Observación de insecto

 Preparar muestra del insecto sobre el portaobjetos teniendo en cuenta las indicaciones
antes realizadas.
 Realizar procesos de enfoque
 Identificar cuál es el insecto bajo el microscopio
 Observar el insecto en los objetivos 4X, 10X y 40X. Anota los cambios observados de
acuerdo a cada uno de los objetivos.
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8. Bibliografía y material de consulta:

 Raven P., Johnson G. and Mason K. 2020. Biology. 12 th Edition. McGraw Hill education, NY.
 Cooper G. and Hausman R. 2017. La Célula. 7a Edición. Editorial Marbán, México
 En esta página se encuentra información sobre el microscopio y sus usos
https://www.khanacademy.org/science/biology/structure-of-a-cell/introduction-to-cells/a/
microscopy
 Introducción a la estereomicroscopía.
https://www.microscopyu.com/techniques/stereomicroscopy/introduction-to-stereomicroscopy
 Manual de experiencias de Laboratorio para Biología general y celular. Aracelly Casalle Osorio
y José Carlos Gutierrez. 2002.
 Microscopio virtual. En esta página se puede aprender sobre el microscopio óptico compuesto
y su uso. https://www.ncbionetwork.org/iet/microscope/
 Microscopio virtual. En esta página se puede aprender sobre las partes del microscopio óptico
compuesto y su principio de funcionamiento. http://www.udel.edu/Biology/ketcham/microscope/
 Microscopía. En esta página se puede complementar sobre los principios básicos de la
microscopía, tipos de microscopios y microfotografía.
http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/electronmicroscopy/magnify1/index.html
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9. ACTIVIDAD PRÁCTICA SOBRE MICROSCOPÍA

1. Dibuje el insecto observado bajo el lente del microscopio

4X - Objetivo utilizado: 10X - Objetivo utilizado: 40X - Objetivo utilizado:

Poder de aumento: Poder de aumento: Poder de aumento:

1.1 ¿Qué insecto es? ¿Qué características morfológicas, nuevas para usted, identificó a través
de la observación en el microscopio?

1.2. Realizar un cuadro comparativo de las características del insecto que se pueden observar a
través de los diferentes objetivos.

Característica 4X 10X 40X

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2. ¿Cuál es la diferencia entre un microscopio simple y un microscopio compuesto?

3. ¿Cuál es la diferencia entre un microscopio binocular y un microscopio estereoscópico?

4. Consulte sobre un(a) científico(a) que haya ganado un premio nobel en química, fisiología o
medicina donde el uso del microscopio jugó un papel importante para el desarrollo de su
investigación. Incluya un párrafo que hable brevemente de su biografía, describa cómo se
realizó el experimiento, en que momento se utilizó el microscópio y que tipo de instrumento
óptico.