ACTivacion DE UNA - COLUMNA EN HPLC

REPORTE DE INICIO DE OPERACIÓN DE COLUMNA CROMATOGRÁFICA
CÓDIGO VERSIÓN REVISIÓN FECHA DE INICIO O ACTUALIZACIÓN FECHA DE REVISIÓN PAGINA

RCC-0667 I 1 0 11-22 11-25 1/2
1. Evidencia Fotográfica
2. Equipo utilizado: HPLC 9
3. Especificaciones:
 Marca: YCM
 Empaque: YCM-Pack NH2/S-5um / 12nm
 Longitud: 250 mm
 Diámetro interno: 4,6 mm
 Tamaño de partícula: 5µm
 No. Serie: 120CB30122
 No. Lote: 20004
 Almacenamiento: ACETONITRILO/AGUA 75/25
 Código interno: CL-138
4. Activación:
Para realizar la activación de la columna en el equipo de HPLC se realiza el siguiente
procedimiento:
4.1. Preparación de los componentes de la fase móvil por separado y la solución de lavado
filtradas por 0.22 µm y desgasificadas en el ultrasonido.
4.2. Purga de todo el equipo con solución de lavado.
4.3. Paso de fase móvil con un flujo de 1mL/min por el sistema, sin conectar la columna, por 10
minutos aproximadamente.
4.4. Con el flujo en 0 mL/min, conexión de la columna asegurando su correcto ajuste.
4.5. Definición del método de activación de la columna con las siguientes condiciones. Ver tabla 1:
Tabla 1. Flujo y tiempo de acondicionamiento de la columna

RCC-0667 I 1 0 11-22 11-25 2/2
Tiempo Flujo Solvente Agua

0 0,000 Fase móvil 100% 0
5 0,05 Fase móvil 100% 0
10 0,1 Fase móvil 100% 0
15 0,2 Fase móvil 100% 0
20 0,3 Fase móvil 100% 0
25 0,4 Fase móvil 100% 0
30 0,5 Fase móvil 100% 0
35 0,6 Fase móvil 100% 0
40 0,7 Fase móvil 100% 0
45 0,8 Fase móvil 100% 0
50 0,9 Fase móvil 100% 0
5. Preparación de la solución de desempeño:
6. Corrida del método de activación monitoreando la presión del sistema y verificando que
no existan fugas.
7. Prueba de eficiencia:
De acuerdo con las instrucciones del fabricante, descritas en el PERFORMANCE SUMMARY
(Anexo I), se realiza la prueba de eficiencia de la columna posterior a su activación utilizando las
siguientes condiciones:
 Fase móvil: Acetonitrilo / agua (75/25)

 Temperatura del detector: 30°C
 Temperatura muestra: ambiente
 Flujo: 1,0
 Volumen de inyección: 3 µl
Una vez equilibrada la columna se procede a realizar la aptitud del sistema, cual es preparada
como se indica en el numeral 6, y de la cual se obtiene el cromatograma del anexo II. Los
resultados obtenidos se tabulan a continuación:
8. Comparación de Resultados:
Los resultados del análisis indican que el tiempo de retención para el pico de Agua, como
muestra, es de 3,452 minutos, y para la Fructosa es de 9,447 minutos ( ver anexo 2), el tiempo de
retención reportado en el certificado es de 3,43 min para el agua y 11,22 min para la fructosa
(con una temperatura de 25°C en el detector. En el estudio se usó el detector a 30°C ya que es
la mínima temperatura que permite el equipo), dando una diferencia en el agua de 0,022 min por
debajo del tiempo reportado en el certificado del fabricante, y con una diferencia para la fructosa
de 1,773 minutos por debajo del tiempo establecido en el certificado del fabricante. Los demás
resultados del estudio, los platos teóricos y las eficiencias se encuentran en la tabla 2.
Tabla 2. Resultados de la eficiencia

RCC-0667 I 1 0 11-22 11-25 3/2
Principio Platos Platos Eficiencia Factor Taling Factor Taling Eficiencia

Activo Declarados Obtenidos % Declarado Obtenido %
AGUA 2706 2794,80 103,281 1.79 1,51 84,357
FRUCTOSA 11957 10411,36 87,073 1.18 1,20 101,694
Reactivos Utilizados:
Reactivo Lote Fecha de Vencimiento

Agua tipo 1 290124INY 30-01-24
Acetonitrilo 0056-0017 01-12-27
9. Estándar:
Nombre Lote Fecha de Vencimiento

Fructosa 0131-SA-0002 N/A
10. Almacenamiento de columna:

Posterior a su uso, la columna se deja lavando media hora con la fase móvil de proporción
75/25 acetonitrilo:agua (de acuerdo a la recomendación del fabricante), en la cual, es
almacenada.
11. Conclusiones:
La eficiencia de la columna es de 103,281% en el análisis del agua y del 87,073% para el

análisis de la fructosa, al tener una eficiencia mayor del 80%, se concluye que es apta para su
uso en análisis de cromatografías que requieran alta exactitud y precisión.
12. Observaciones:
NA
_____________________________ ______________________________
Nombre: Nombre:
REALIZO VERIFICO

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2. Equipo utilizado: HPLC 9

4.2. Purga de todo el equipo con solución de lavado.

4.4. Con el flujo en 0 mL/min, conexión de la columna asegurando su correcto ajuste.

Tabla 1. Flujo y tiempo de acondicionamiento de la columna

Tiempo Flujo Solvente Agua

5. Preparación de la solución de desempeño:

 Fase móvil: Acetonitrilo / agua (75/25)

Tabla 2. Resultados de la eficiencia

Principio Platos Platos Eficiencia Factor Taling Factor Taling Eficiencia

Reactivo Lote Fecha de Vencimiento

Nombre Lote Fecha de Vencimiento

10. Almacenamiento de columna:

La eficiencia de la columna es de 103,281% en el análisis del agua y del 87,073% para el

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