Todo Parcial 2
Todo Parcial 2
Todo Parcial 2
transcripcional de la expresió n
gé nica
En los capı́tulos anteriores hemos visto que las expresió n gé nica, el control de la iniciació n y la
propiedades y funciones de cada tipo de cé lula está n elongació n de la transcripció n, los primeros dos pasos,
determinadas por las proteı́- nas que contienen. En este son los mecanismos má s importantes para de- terminar
capı́tulo y el siguiente consideraremos có mo se regulan si la mayorı́a de los genes son expresados y cuá ntos de los
las clases y cantidades de diversas proteı́nas produ- cidas mRNA codificados y, en consecuencia, de las proteı́nas, se
por un tipo de cé lula particular en un organismo producen. Los mecanismos moleculares que regulan la
multicelular. Esta regulació n de la expresió n gé nica es el iniciació n y la elongació n de la transcripció n son crı́ticos
proceso fundamental que controla el desarrollo de un para numerosos fenó menos bioló gicos, incluido el
organismo multicelular como nosotros mismos a partir desarrollo de un organismo multicelular a partir de un
de una cé lula huevo fecundada en miles de tipos de cé - ú ni- co ó vulo fecundado como se mencionó antes, las
lulas de las que está n formados. Cuando la expresió n respuestas inmunita- rias que nos protegen de los
gé nica se trunca, se alteran las propiedades celulares, un microorganismos pató genos y los procesos neuroló gicos
proceso que con demasiada fre- cuencia lleva al como el aprendizaje y la memoria. Cuando estos meca-
desarrollo de cá ncer. Como se analizará en el Capı́tulo 25, nismos que controlan la funció n transcripcional trabajan
los genes que codifican proteı́nas que moderan el de manera incorrecta, se producen los procesos
crecimiento celu- lar se encuentran anormalmente patoló gicos. Por ejemplo, la actividad reducida del gen
reprimidos en las cé lulas cancerosas, mientras que los Pax6 causa aniridia, una anomalı́a en el desarrollo del iris
genes que codifican proteı́nas que estimulan el creci- (Fig. 7-1a). El Pax6 es un factor de transcripció n que
miento celular y la replicació n son activados de manera normal- mente regula la transcripció n de los genes
inadecuada en las cé lulas cancerosas. Las anomalı́as en la involucrados en el desarrollo del ojo. En otros
expresió n gé nica dan como resultado defectos del organismos, las mutaciones en los factores de trans-
desarrollo como el paladar hendido, la tetralogı́a de Fallot cripció n causan un par extra de alas que se desarrollan en
(un defecto grave del desarrollo del corazó n que puede Drosophila (Fig. 7-1b), alteran las estructuras de las flores
tra- tarse quirú rgicamente) y muchos otros. La regulació n en las plantas (Fig. 7-1c) y son responsables de muchas
de la expresió n gé nica tambié n cumple un papel vital en otras anomalı́as del desarrollo.
las bacterias y otros microorganismos unicelulares,
donde permite que las cé lulas ajusten su ma- quinaria
enzimá tica y los componentes estructurales en respuesta
a sus cambios nutricionales y ambiente fı́sico. En
consecuencia, para com- prender có mo responden los
microorganismos a su ambiente y có mo se desarrollan
normalmente los organismos multicelulares, y tambié n
có mo se producen las anomalı́as patoló gicas de la
expresió n gé nica, es esencial comprender las
interacciones moleculares que controlan la producció n de
proteı́nas.
• La secuencia nucleotı́dica de un promotor determina su 7.2 Panorama general del control gé nico
fuerza, es decir, cuá n frecuentemente se unen diferentes en eucariontes
molé culas de RNA poli- merasas e inician la transcripció n
por minuto.
En las bacterias, el control gé nico sirve principalmente Los elementos reguladores en el DNA
para permitir que una ú nica cé lula se ajuste a los cambios
eucarionte se pueden encontrar junto a los
en su ambiente, de manera tal que se optimice su
crecimiento y divisió n. En los organismos mul- sitios de inicio de la transcripció n o a muchas
ticelulares, los cambios ambientales tambié n inducen kilobases de distancia
cambios en la expresió n gé nica. Un ejemplo es la
respuesta al bajo oxı́geno (hipoxia) en la cual un grupo
Las mediciones directas de las tasas de transcripció n de
especı́fico de genes es inducido rá pidamente para ayudar
mú ltiples genes en diferentes tipos celulares demuestran
a la cé lula a sobrevivir bajo condiciones de hipoxia. Estas
que la regulació n de la trans- cripció n, ya sea en el paso
inclu- yen las proteı́nas angiogé nicas secretadas que
de iniciació n o durante la elongació n al ale- jarse del sitio
estimulan el crecimiento y la penetració n de capilares
de inicio de la transcripció n, es la forma má s comú n de
nuevos dentro del tejido circundante. Sin embargo, el
control gé nico en eucariontes, como tambié n lo es en
propó sito má s caracterı́stico y de mayor alcance bioló gico
bacterias. En los eucariontes, como en las bacterias, una
del control gé nico en los organismos multicelulares es la
secuencia de DNA que especifi- ca dó nde se une la RNA
ejecució n del programa gené tico que subyace al
polimerasa e inicia la transcripció n de un gen se
desarrollo embrioló gico. La genera- ció n de muchos tipos
denomina un promotor. La transcripció n a partir de un
celulares diferentes que en forma colectiva for- man un
promotor particular está controlada por las proteı́nas de
organismo multicelular depende de que los genes
unió n al DNA que son funcionalmente equivalentes a los
adecuados se activen en las cé lulas correctas en el
represores y activadores bacterianos. Estudios recientes
momento oportuno durante el perı́odo de desarrollo.
sugieren que la capacidad intrı́nseca de la secuen- cia de
DNA de una regió n promotora para asociarse con
En la mayorı́a de los casos, una vez que una cé lula ha dado octá meros de histonas tambié n influye en la
un paso en el desarrollo, no retrocede. Por lo tanto, las transcripció n. Puesto que las proteı́nas reguladoras de la
decisiones son funda- mentalmente diferentes de la transcripció n pueden funcionar como activadores o
activació n y la represió n reversible de los genes represores de la transcripció n, segú n su asociació n con
bacterianos en respuesta a las condiciones ambientales. otras proteı́nas, suelen denominarse en forma má s
En la ejecució n de sus programas gené ticos, muchas general como factores de transcrip- ció n. Los elementos
cé lulas diferenciadas (p. ej., las cé lulas cutá neas, los de control de la transcripció n en los genomas eu-
eritrocitos y las cé lulas productoras de anticuerpos) cariontes que unen factores de transcripció n suelen estar
siguen un destino que las lleva a la muerte celular, sin de- localizados mucho má s lejos del promotor que ellos
jar descendencia. Los patrones fijos del control gé nico regulan que en el caso de los genomas procariontes. En
que conducen a la diferenciació n sirven a las necesidades algunos casos, los factores de transcripció n que regulan la
de todo el organismo y no a la supervivencia de una cé lula expresió n de genes que codifican proteı́nas en los eu-
individual. A pesar de las diferencias en los propó sitos del cariontes superiores se unen a sitios reguladores decenas
control gé nico en bacterias y eucariontes, dos caracterı́s- de miles de pares de bases ya sea corriente arriba
ticas clave del control transcripcional primero (opuesta a la direcció n de la transcripció n) o corriente
descubiertas en las bac- terias y descriptas en la secció n abajo (en la misma direcció n de la trans- cripció n) a partir
anterior tambié n se aplican a las cé lulas eucariontes. del promotor. Como resultado de esta disposició n, la
Primero, las secuencias de DNA reguladoras de unió n a transcripció n de un ú nico gen puede estar regulada por la
proteı́nas, o los elementos de control, está n asociadas con unió n de mú ltiples factores de transcripció n a elementos
genes. Segun- do, las proteı́nas especı́ficas que se unen a de control alternativos, dirigiendo la expresió n del mismo
una secuencia reguladora de un gen determinan dó nde gen en diferentes tipos de cé lulas y en diferentes
comenzará la transcripció n y activará o re- primirá su momentos durante el desarrollo.
transcripció n. Una diferencia fundamental entre el
control transcripcional en las bacterias y los eucariontes
Por ejemplo, diversas secuencias de DNA de control de la
es una consecuencia de la asociació n de DNA
transcrip- ció n separadas regulan la expresió n del gen de
cromosó mico eucarionte con octá meros de histonas,
mamı́feros que codifica el factor de la transcripció n Pax6.
formando nucleosomas que se asocian con las fibras de
Como se mencionó anteriormente, la proteı́na Pax6 es
cromatina que ademá s se asocian a la cromatina variando
necesaria para el desarrollo del ojo. Pax6 tambié n es
los grados de condensació n (Figs. 6-29, 6-30, 6-32 y 6-
33). Las cé lulas eucariontes explotan la estructura de la
cromatina para regular la transcripció n, un mecanismo necesaria para el desarrollo de ciertas regiones del
de control de la transcripció n que no está disponible en cerebro y la mé dula espinal y las cé lulas en el pá ncreas
las bacterias. Como se representa en la Figura 7-2, en los que secretan hormonas como la in- sulina. Como tambié n
eucariontes mul- ticelulares, muchos genes inactivos se mencionó anteriormente, los seres humanos
está n ensamblados en la cromatina condensada, que heterocigotos con solo un gen Pax6 funcional nacen con
inhibe la unió n de las RNA polimerasas y los factores de aniridia, una falta de iris en los ojos (Fig. 7-1a). El gen
transcripció n general requeridos para la iniciació n de la Pax6 se expresa a partir de los ú ltimos tres promotores
transcrip- ció n. Las proteı́nas activadoras se unen a los alternativos que funcionan en diferentes tipos de cé lulas
elementos de control cerca del sitio de inicio de la y en diferentes momentos durante la embriogé nesis (Fig.
transcripció n de un gen ası́ como a kilobases alejadas y 7-7a).
promueve la descondensació n de la cromatina, la unió n
de la RNA polimerasa al promotor y la elongació n de la
Los investigadores a menudo analizan las regiones de
transcripció n por medio de la cromatina. Las proteı́nas
control gé - nico mediante preparació n de molé culas de
represoras se unen a elementos de control alternativos y
DNA recombinantes que pueden contener un fragmento
causan la condensació n de la cromatina y la inhibició n de
de DNA para ser probado con la regió n codificante para
la unió n de la polimerasa o la elongació n. En esta secció n
un gen indicador (informador) que es fá cil de analizar.
se analizará n los principios generales del control gé nico
Los genes indicadores tı́picos son luciferasa, que genera
eucarionte y se señ alan algunas similitudes y diferencias
luz que puede ser evaluada con mayor sensibilidad y por
entre los sistemas eucariontes y bacterianos. Las
muchos ó rdenes de magni- tud de intensidad usando un
secciones subsiguientes de este capı́tulo conducirá n a
luminó metro. Otros genes indicadores usados con
aspectos especı́ficos de la transcripció n eucarionte en
frecuencia codifican una proteı́na verde fluorescente
mayor detalle.
(vé ase Figs. 9-8d y 9-15) y la â-galactosidasa de E. coli,
que genera un precipi- tado azul intenso cuando es
incubada con X-gal, el aná logo a la lactosa, insoluble e
incoloro. Cuando se preparan ratones transgé nicos
(vé ase Fig. 5-43) que contienen un gen indicador â-
galactosidasa fusionado a 8 kb de DNA corriente arriba
del exó n 0 de Pax6, la â-galactosidasa se observa en los
cristalinos, las có rneas y el pá ncreas en desarrollo del
embrió n a mitad de té rmino de la gestació n (Fig. 7-7b). El
aná lisis de los ratones transgé nicos con fragmentos de
DNA má s pequeñ os a par- tir de esta regió n permitió el
mapeo de las regiones de control de la transcripció n
separadas que regulan la transcripció n en el pá ncreas y
en los cristalinos y la có rnea. Los ratones transgé nicos
con otras cons- trucciones de genes indicadores revelan
regiones de control de la trans- cripció n adicionales (Fig. FIGURA 7-7 Aná lisis de las regiones de control de la transcripció n
7-7a). Ei stas controlan la transcripció n en la retina en del
desarrollo y en diferentes regiones del cerebro en
desarrollo (encé falo). Algunas de estas regiones de
gen murino Pax6 en ratones transgé nicos. (a) Tres promotores de
control de la transcripció n está n en intrones entre los Pax6 alternativos se utilizan en distintos momentos durante la
exones 4 y 5 y entre los exones 7 y 8. Por ejemplo, un gen embriogé nesis
informador bajo control de la regió n marcada retina en la en diferentes tejidos especı́ficos del embrió n en desarrollo. Las
Figura 7-7a entre los exones 4 y 5 lleva a la expresió n del regiones de control de la transcripció n que regulan la expresió n
gen in- formador especı́ficamente en la retina (Fig. 7-7c). de Pax6 en diferentes tejidos se indican mediante rectá ngulos
coloreados. La regió n de control especı́fica del telencé falo en el
intró n 1 entre los exones 0 y 1 no se ha mapeado a alta resolució n.
Las regiones de control para muchos genes se encuentran Las otras regiones de control mostradas tienen ≈ 200-500 pares
a va- rios cientos de kilobases de distancia de los exones de bases de longitud. (b) La â-galactosidasa expresada en los
codificantes del gen. Un mé todo para identificar tales tejidos de un embrió n murino con un transgen â-galactosidasa
regiones de control distantes es comparar las secuencias informador 10,5 dı́as despué s de la fecundació n. El genoma del
embrió n murino que contiene un transgen con 8 kb de DNA
de organismos lejanamente relacionados. Las regiones de
corriente arriba del exó n 0 se fusionó a la regió n codificante de la
control de la transcripció n para un gen conservado â-galactosidasa. Fosita del cristalino (lens pit, LP) es el tejido que
tambié n suele estar conservadas y pueden ser se desarrollará en las lentes del ojo. La expresió n tambié n se
reconocidas en la base de una secuencia no funcional que observó en tejidos que se desarrollará n en el pá ncreas (P). (c) La
divergió durante la evolució n. Por ejemplo, existe una expresió n de la â-galactosidasa en un embrió n de 13,5 dı́as con
secuencia de DNA humano ≈500 kilobases corriente un gen informador â-galactosidasa bajo control de la secuencia
abajo del gen SALL1 que está altamente conservada en ra- en la parte (a) entre los exones 4 y 5 marcados como Retina. Las
tones, ranas, pollos y peces (Fig. 7-8a). SALL1 codifica un flechas apuntan hacia las regiones nasal y temporal del desarrollo
de la retina. Las regiones de control de la transcrip- ció n de Pax6
represor de la transcripció n necesario para el desarrollo
tambié n se encontraron 17 kb corriente abajo desde el exó n
normal del intestino delgado, los riñ ones, los miembros y
los oı́dos. Cuando se generaron ratones transgé nicos que
contenı́an esta secuencia de DNA conserva- da unida a un 3 ́ en un intró n del gen vecino.
gen indicador â-galactosidasa (Fig. 7-8b), los embrio- nes
transgé nicos expresaron una alta concentració n del gen
Tres RNA polimerasas eucariontes catalizan
indicador â-galactosidasa especı́ficamente en los
esbozos de los miembros en desarrollo (Fig. 7-8c). Los la formació n de diferentes RNA
pacientes humanos con deleciones en esta regió n del
genoma se desarrollan con anomalı́as en los miembros. El nú cleo de todas las cé lulas eucariontes analizadas
Estos resultados indican que esta regió n conservada hasta el momento (p. ej., vertebrados, Drosophila,
dirige la trans- cripció n del gen SALL1 en el desarrollo de levaduras y cé lulas vegetales) contienen tres RNA
los miembros. Presumi- blemente, otros potenciadores polimerasas diferentes, designadas I, II y III. Estas
controlan la expresió n de este gen en otros tipos de enzimas eluyen a diferentes concentraciones salinas
cé lulas, donde funcionan en el desarrollo normal de oı́dos, durante la cromatografı́a de intercambio ió nico, lo que
intestino delgado y riñ ones. Despué s de analizar las refleja las diversas cargas netas de las po- limerasas. Las
proteı́ nas que llevan a cabo la transcripció n en las cé lulas tres polimerasas tambié n difieren en su sensibilidad a á-
eucariontes y los promotores eucariontes, regresaremos amanitina, un octapé ptido cı́clico venenoso producido
a un aná lisis de có mo se cree que funcionan tales regiones por algunos hongos (Fig. 7-9). La RNA polimerasa I es
de control de la transcripció n, llamadas potenciadores. insensible a la á-amanitina, pero la RNA polimerasa II es
muy sensible −el fá rmaco se une cerca del sitio activo de
la enzima e inhibe la traslocació n de é sta a lo largo del
DNA molde−. La RNA polimerasa III tiene una
sensibilidad intermedia.
CONCEPTOS CLAVE de la Secció n 7.2
FIGURA 7-12 El dominio abrazadera de RPBI. Las estructuras de
la RNA polimerasa II (a) libre y (b) transcribiendo difieren
principalmente en la posició n Panorama general del control gé nico
eucarionte
de un dominio abrazadera en RPB1 (anaranjado), que se balancea
sobre la hendidura entre las fauces de la polimerasa durante la • El principal propó sito del control gé nico en los
formació n del complejo de transcripció n, y atrapa la hebra molde
organismos multice- lulares es la ejecució n de decisiones
de DNA y el transcripto. La unió n del dominio abrazadera al
hı́brido de DNA de 8-9 pares de bases puede ayudar al cierre del precisas del desarrollo de manera tal que los genes
par de abrazaderas en el que participa RNA, y estabiliza el adecuados se expresen en las cé lulas correctas durante el
complejo de elongació n. En este modelo de un complejo de desarrollo embrioló gico y la diferenciació n celular.
elongació n, el RNA se muestra en rojo, la hebra de DNA molde en
azul oscuro y la hebra de DNA no molde corriente abajo en
turquesa. (c) La abrazadera se cierra sobre el DNA entrante • El control de la transcripció n es el principal medio de
corriente abajo. Este modelo se muestra con porciones de RBP2 regulació n de la expresió n gé nica, tanto en los
que forman un lado de la hendidura eliminada, de manera tal que eucariontes como en las bacterias.
los á cidos nucleicos se puedan visualizar mejor. El ion Mg2+ que
participa en la catá lisis de la formació n del enlace fosfodié ster se
muestra en verde. Pared es el dominio de RPB2 que fuerza al DNA • En los genomas eucariontes, los elementos de control de
molde a entrar a las fauces de la polimerasa para curvarlo antes la transcrip- ció n del DNA se pueden localizar a muchas
de que abandone la polimerasa. El puente de hé lice á que se kilobases de distancia del promotor que ellos regulan.
muestra en verde se extiende a travé s de la hendidura en la Diferentes regiones de control pueden controlar la
polimerasa (vé ase Fig. 7-10b) y se postula que se dobla y se estira transcripció n del mismo gen en diferentes tipos de
a medida que la polimerasa se traslada una base hacia abajo de la
cé lulas.
hebra molde. Se piensa que la hebra no molde forma una regió n
simple hebra flexible por encima de la hendidura (no se muestra)
que se extiende a partir de tres bases corriente abajo del aparea- • Los eucariontes contienen tres tipos de RNA
miento de bases molde hasta la base 3 ́ del RNA en crecimiento y
polimerasas nucleares. Las tres contienen dos
extiende la hebra molde a medida que sale de la polimerasa,
donde se hibrida con la hebra molde para generar la burbuja de subunidades centrales grandes y tres má s peque- ñ as con
transcripció n. [Adaptado de A. L. Gnatt y cols., 2001, Science 292:1876.] homologı́a a las subunidades â ́, â, á y ù de la RNA polime-
rasa de E. coli, ası́ como de diversas subunidades
adicionales pequeñ as (vé ase la Fig. 7-11).
• La RNA polimerasa I sintetiza solo pre-rRNA. La RNA transcripció n. El aná lisis de secuencias reveló que, para
polimerasa II sintetiza los mRNA, algunos de los RNA un gen dado, la secuencia en el extremo 5 ́ de los
pequeñ os nucleares que par- ticipan en el proceso de transcriptos de RNA producidos in vitro es la misma que
corte y empalme del mRNA, los micro-RNA (miRNA) que en el extremo 5 ́de los mRNA aislados a partir de las
regulan la traducció n de los mRNA complementarios, y cé lulas, lo que confirma que los nucleó tidos con caperuza
los RNA de interferencia pequeñ os (siRNA) que regulan la de los mRNA eucariontes coinciden con el sitio de inicio
estabilidad de los mRNA complementarios. La RNA de la transcripció n. En la actualidad, el sitio de inicio de la
polimerasa III sintetiza los tRNA, los rRNA 5S y varios transcripció n para un mRNA recientemente caracteriza-
otros RNA estables, relativamente cortos (vé ase el do en general se determina simplemente mediante la
Cuadro 7-2). identificació n de la secuencia de DNA que codifica los
nucleó tidos con caperuza 5 ́ del mRNA codificado.
• El dominio carboxilo terminal (CTD) en la subunidad
má s grande de la RNA polimerasa II se fosforila durante La caja TATA, los iniciadores y las islas CpG
la iniciació n de la trans- cripció n y permanece fosforilada
funcionan como promotores en el DNA
a medida que la enzima transcribe el molde.
eucarionte
7.3 Promotores y factores de Diversas secuencias de DNA diferentes pueden funcionar
transcripció n generales de la RNA como pro- motores para la RNA polimerasa II y dirigen la
polimerasa II polimerasa hacia donde debe iniciar la transcripció n de
un RNA complementario a la hebra molde de un DNA
doble hebra. Ei stas incluyen cajas TATA, iniciadores e islas
Los mecanismos que regulan la iniciació n y la elongació n CpG.
de la trans- cripció n por parte de la RNA polimerasa II se
han estudiado extensa- mente, debido a que é sta es la
polimerasa que transcribe los mRNA. La iniciació n y la Cajas TATA Los primeros genes en ser secuenciados y
elongació n de la transcripció n mediante la RNA estudiados por medio de sistemas de transcripció n in
polimerasa II son los procesos bioquı́micos iniciales vitro fueron los genes virales y los genes celulares que
necesarios para la expresió n de los genes que codifican codifican proteı́na que son muy activos desde el punto de
proteı́nas y son los pasos de la expresió n gé nica que se vista transcripcional, ya sea en momentos particulares
regulan con má s frecuencia para determinar cuá ndo y en del ciclo celular o en tipos celulares diferenciados
cuá les cé lulas se sintetizan proteı́nas especı́ficas. Como se especı́ficos. En todos estos genes con alta tasa de
mencionó en la secció n anterior, la expresió n de genes transcripció n, una secuencia conservada llamada caja
que codifi- can proteı́nas eucariontes está regulada por TATA se encontró a ≈ 26-31 pares de bases corriente
mú ltiples secuencias de DNA que unen proteı́nas, las arriba del sitio de inicio de la transcripció n (Fig. 7-14).
cuales gené ricamente se conocen como regiones de Los estudios de mutagé nesis demostraron que el cambio
control de la transcripció n. Ei stas incluyen promotores, de una sola base en esta secuencia nucleotı́dica disminuye
que determinan dó nde comienza la transcripció n del drá sticamente la transcripció n in vitro por parte de la
molde de DNA, y otros tipos de elementos de control RNA polimerasa II de los genes adyacentes a una caja
localizados cerca de los sitios de inicio de la transcripció n TATA. Si se elimina el apareamiento de bases entre la caja
ası́ como secuencias localizadas lejos de los genes que TATA y el sitio de inicio de la transcripció n normal, la
regulan, que controlan el tipo de cé lula en la cual el gen se transcripció n del molde alterado, acortado comienza en
transcribe y con qué frecuencia se transcribe. En esta un sitio nuevo ≈ 25 pares de bases corriente abajo de la
secció n, daremos un vistazo a las propiedades de varios caja TATA. En consecuencia, la caja TATA actú a de modo
elementos de control que se encuentran en los genes que similar a un promotor de E. coli en lo que se refiere a
codifican proteı́na y en algunas té cnicas usadas para posicionar la RNA polimerasa II para la iniciació n de la
identificarlos. transcripció n (vé ase la Fig. 4-12).
FIGURA 7-19 Modelos para los complejos cerrado y abierto
del DNA promotor que forman complejo con TBP, TFIIB y Pol
II sobre la base de la cristalografía de rayos X. Pol II se muestra
en color tostado, TBP en pú rpura, TFIIB en rojo, la hebra de DNA
molde en azul y la hebra
de DNA no molde en turquesa. La base que codifica el sitio de
inicio de la transcripció n (+1) se muestra como modelo espacial.
La regió n conectora B de TFIIB interactú a con DNA en el complejo
cerrado (a), donde las hebras son separadas inicialmente (punto
de apertura del DNA). El ion Mg2+ en el sitio activo se muestra
como una esfera verde. La hebra no molde de la burbujade
transcripció n en el complejo abierto (b) no se visualiza en las
estructurasde cristal de los modelos del complejo abierto debido
a sus conformaciones alternativas en diferentes complejos
7.4 Secuencias reguladoras en los genes FIGURA EXPERIMENTAL 7-21 Las mutaciones rastreadores
de ligadores (linker scanning mutations) identifican los
que codifican proteínas y las proteínas elementos de control de la transcripción. (a) Una regió n del
mediante las cuales funcionan DNA eucarionte (tostado) que sustenta un alto nivel de expresió n
de un gen informador (violeta) se clona en un vector plasmı́dico
como se representa en la parte superior. Desde un extremo de la
Como se describió en la secció n anterior, la expresió n de regió n bajo aná lisis al otro, se introducen las mutaciones
los genes eucariontes que codifican proteı́nas está rastreadoras de ligadores (RL) que se solapan (con rayas). Estas
regulada por las secuencias de DNA de unió n a las mutaciones son el resultado de la mezcla de secuencias
nucleotı́dicas en un segmento corto de DNA. Despué s de
proteı́nas, denominadas gené ricamente como regiones de transfectar los plá smidos mutantes por separado a cé lulas
control de la transcripció n. Ei stas incluyen promotores y cultivadas, se analiza la actividad del producto gen-informador.
otros tipos de elementos de control localizados cerca de En el ejemplo que se muestra aquı́, la secuencia desde −120 hasta
los sitios de transcripció n, ası́ como secuencias +1 del gen timidina cinasa del virus de herpes simple, las
localizadas lejos de los genes que re- gulan. En esta mutaciones RL 1, 4, 6, 7 y 9 tienen poco o ningú n efecto
secció n examinaremos en forma má s minuciosa las pro- en la expresió n del gen informador, lo cual indica que las regiones
alteradas en estos mutantes no contienen elementos de control.
piedades de varios elementos de control que se
La expresió n del gen informador se reduce significativamente en
encuentran en los genes eucariontes que codifican los mutantes 2, 3, 5 y 8, lo cual indica que los elementos de control
proteı́na y las proteı́nas que se unen a ellos. (marró n) se encuentran en los intervalos que se muestran en la
parte inferior. (b) El aná lisis de estas mutaciones RL identificó una
caja TATA y dos elementos proximales al promotor (PE-1 y PE-2).
Los elementos proximales del promotor [Parte (b), vé ase S. L. McKnight y R. Kingsbury, 1982, Science 217:316.]
ayudan a regular los genes eucariontes
Por ejemplo, la huella gené tica del promotor fuerte tardı́o Los activadores estimulan la transcripción y
del ade- novirus muestra una regió n protegida sobre la están compuestos por distintos dominios
caja TATA cuando se añ ade TBP al DNA marcado antes de funcionales
la digestió n con DNasa I (Fig. 7-23b). La DNasa I no
digiere todos los enlaces fosfodié ster en un DNA dú plex a Los estudios con un activador de la transcripció n de
igual velocidad. En consecuencia, en ausencia de proteı́na levadura llama- do GAL4 proporcionan evidencia inicial
añ adida (lı́neas 1, 6 y 9), se observa un patró n de bandas de la estructura del dominio de los factores de
particular que transcripció n. El gen que codifica la proteı́na GAL4, que
estimula la expresió n de enzimas necesarias para
depende de la secuencia de DNA y es el resultado de la metabolizar la galactosa, fue identificado por aná lisis de
escisió n de algu- nos enlaces fosfodié ster y no de otros. complementació n de los mu- tantes gal4 que no pueden
Sin embargo, cuando se incuban cantidades crecientes de formar colonias en un medio con agar en el cual la
TBP con el DNA marcado en el extremo antes de la galactosa es la ú nica fuente de carbono y energı́a (Cap. 5).
digestió n con DNasa I, la TBP se une a la caja TATA y Los estudios de mutagé nesis dirigida como los analizados
protege la regió n entre ≈−35 y −20 de la digestió n cuando anteriormente identificaron las UAS para los genes
se añ ade suficiente TBP a todas las molé culas de DNA activados por GAL4. Cada una de estas UAS se encontró
marcadas. Por el contrario, cantidades crecientes de que contiene una o má s copias de una secuencia de 17 pb
TFIID (lı́neas 7 y 8) protegen tanto la regió n de la caja relacionada llamada UASGAL. Los ensayos de huella
TATA de la digestió n con la DNasa I, como tambié n gené tica con DNasa I con la proteı́na GAL4 recombinante
regiones cercanas a −7, +1 a +5, +10 a +15 y +20, producida en E. coli a partir del gen GAL4 de levadura,
produciendo una “huella gené tica” diferente de la TBP. demostraron que la proteı́na GAL4 se une a las secuencias
Los resultados tales como é ste nos dicen que otras UASGAL. Cuando una copia de UASGAL se clonó corriente
subunidades de TFIID (los factores asociados con TBP o arriba de una caja TATA seguida por el gen informador de
la â-galactosidasa, la expresió n de la â-galactosidasa se
activó en el medio con galactosa en las cé lulas de tipo
silvestre pero no en los mutantes gal4. Estos resultados
muestran que UASGAL es un elemento de con- trol de la
transcripció n activado por la proteı́na GAL4 en medio con
galactosa.
activadoras.
FIGURA 7-33 Modelo del potencisoma que se forma en el
potenciador del interferón â. Dos factores heterodimé ricos,
Jun/ATF-2 y p50/RelA (NF-KB), y dos copias de cada uno de los
factores de transcripció n monomé ricos IRF-3 e IRF-7 se unen a los
seis sitios de unió n superpuestos en este potenciador. [Adaptado de D.
Penne, T. Manniatis y S. Harrison, 2007, Cell 129:1111.
Complejos multiproteicos se forman sobre los Secuencias reguladoras en los genes que
potenciadores codifican proteínas y las proteínas mediante las
cuales funcionan
Como se mencionó anteriormente, los potenciadores
suelen tener una longitud que varı́a entre 50 y 200 pares
de bases e incluyen sitios de unió n para diversos factores • La expresió n de los genes que codifican las proteı́nas
de transcripció n. El aná lisis de los poten- ciadores de eucariontes en general es regulada por medio de
mú ltiples regiones de control de unió n a proteı́na que se
≈ 50 pb que regulan la transcripció n del interferó n â, una
localizan cerca o lejos del sitio de inicio de la
proteı́na importante en defensa contra infecciones virales
transcripció n (Fig. 7-22).
en los ver- tebrados, proporciona un buen ejemplo de uno
de los pocos hasta el momento de la estructura de los
dominios de unió n al DNA que se unen a los diversos • Los promotores dirigen la unió n de la RNA polimerasa
sitios de unió n a factores de transcripció n que com- II al DNA, determinan el sitio de iniciació n de la
prenden un potenciador (Fig. 7-33). El té rmino transcripció n e influyen en la velocidad de transcripció n.
potencisoma se acuñ ó para describir esos grandes
complejo proteı́na-DNA que se ensamblan a partir de los
• Se han identificado tres tipos principales de secuencias
factores de transcripció n a medida que é stos se unen en
promotoras en el DNA eucarionte. La caja TATA prevalece
sus mú ltiples sitios de unió n en un potenciador.
en los genes con alta tasa de transcripció n. Los
promotores iniciadores se encuentran en algunos genes y
Debido a la presencia de regiones flexibles que conectan las islas CpG, los promotores para el 60-70% de los genes
los domi- nios de unió n al DNA y los dominios de que codifican proteı́nas en los vertebrados, son
activació n y represió n en los factores de transcripció n caracterı́sticas de los genes con bajas tasas de
(vé ase la Fig. 7-27) y a la capacidad de las pro- teı́nas que transcripció n.
interactú an de unirse a sitios distantes para producir
vueltas en el DNA entre sus sitios de unió n (Fig. 7-4), es
• Los elementos proximales al promotor se producen
admisible una con- siderable libertad de acció n en el
espaciado entre los elementos regu- ladores en las dentro de las ≈ 200 pares de bases de un sitio de inicio.
regiones de control de la transcripció n. Esta tolerancia Varios de tales elementos, que contienen ≈ 6-10 pares de
para el espaciado entre los sitios de unió n para los bases, pueden ayudar a regular un gen particular.
factores de transcrip- ció n regulados y para los sitios de
unió n a promotores de los factores de transcripció n
• Los potenciadores, que contienen varios elementos de
control cortos, pueden ubicarse entre 200 y 10 000 pares
de bases corriente arriba o corriente abajo de un
promotor, dentro de un intró n, o corriente abajo del exó n
final del gen.
7.5 Mecanismos moleculares de represión digestió n por DNasa I que el DNA de los genes transcritos
(vé ase la Fig. 6-32).
y activación de la transcripción
El estudio de las regiones del DNA en S. cerevisiae que se
Los represores y activadores que se unen a sitios
comportan como la heterocromatina de los eucariontes
especı́ficos en el DNA y regulan la transcripció n de los
superiores proporciona una visió n temprana en la
genes que codifican proteı́nas asociadas lo hacen
represión mediada por la cromatina de la transcripció n.
mediante tres mecanismos generales. Primero, estas
Esta levadura puede crecer ya sea como cé lulas haploides
proteı́nas reguladoras actú an en concierto con otras
o diploides. Las cé lulas haploides presentan uno de los
proteı́nas que modulan la estructura de la cromatina,
dos tipos de apareamiento posibles, llamados a y a. Las
inhibiendo o estimulando la capacidad de los factores de
cé lulas de los diferentes tipos de apareamiento pueden
transcripció n generales para unirse a los promotores.
“aparearse”, o fusionarse, para generar una cé lula
Recordar del Capı́tulo 6 que el DNA en las cé lulas
diploide. Cuando una cé lula haploide se divide por
eucariontes no está libre sino que está asociado con una
gemació n, la cé lula “madre” má s grande alterna su tipo de
masa de proteı́nas casi igual en forma de cromatina. La
apareamiento. Los aná lisis gené ticos y moleculares
unidad estructural bá sica de la cromatina es el
revelaron que los tres loci gené ticos en el cromosoma III
nucleosoma, compuesto por ≈ 147 pares de bases de
de la levadura controlan el tipo de apareamiento de las
DNA enrolladas fuertemente alrededor de un centro con
cé lulas de levadura (Fig. 7-34). Solo el locus de tipo de
forma de disco de proteı́nas histonas. Los residuos
apareamiento central, llamado MAT, se transcribe en
dentro de la regió n N-terminal de cada histona y las
forma activa y expresa factores de transcripció n, (a1, o á1
regiones C-terminales de las histonas H2A y H2B,
llamadas colas de histonas, se extienden desde la y á2) que regulan los genes que controlan el tipo de
superficie del nucleosoma y pueden mo- dificarse apareamiento. En una cé lula dada, una secuencia de DNA
reversiblemente (vé ase la Fig. 6-31b). Tales ya sea a o s se localiza en el MAT. Los dos loci adicionales,
modificaciones influyen en la condensació n relativa de la llamados HML y HMR, cerca del teló mero izquierdo y
cromatina y por lo tanto en su accesibilidad para las derecho, respectivamente, contienen copias “silenciosas”
proteı́nas necesarias para la iniciació n de la trans- (que no se transcriben) de los genes ya sea a o á. Estas
cripció n. Ademá s de su funció n en dicho control de la secuencias se transfieren de manera alternativa a partir
transcripció n mediante la cromatina, los activadores y los de HMLdo HMLa al loci MAT por un tipo de recombinació n
represores interactú an con un complejo multiproteı́na no recı́proca entre cromá tidas hermanas durante la
grande llamado el mediador del complejo de transcripción, divisió n celular. Cuando el locus MAT contiene la
o simplemente mediador. Este complejo a su vez se une secuencia de DNA del HMLd, las cé lulas se comportan
a la Pol II y directamente regula el ensamblaje de los como cé lulas alpha. Cuando el locus MAT contiene la
complejos de preiniciació n de la transcripció n. Ademá s, secuencia de DNA del HMRa, las cé lulas se comportan
algunos dominios de activació n interactú an con las como cé lulas a.
subunidades TFIID-TAF u otros componentes del
complejo de preiniciació n, las interacciones que Nuestro interé s aquı́ es có mo se reprime la transcripció n
contribuyen al ensamblado del complejo de preiniciació n. de los loci del tipo de apareamiento silencioso en HML y
Finalmente, los dominios de activació n tambié n pueden HMR. Si los genes en los loci se expresan, como en los
interactuar con el factor de elongació n P-TEFb (CDK9- mutantes de levadura con defectos en el mecanismo de
ciclina T) y otros factores hasta el momento desconocidos represió n, se expresan tanto las proteı́nas a como a,
para estimular la elongació n de la Pol II lejos de la regió n causando que las cé lulas se comporten como cé lulas
promotora. diploides, que no se pueden aparear. Los promotores y las
UAS que controlan la transcripció n de los genes a y a se
En esta secció n, revisaremos el conocimiento actual de encuentran cerca del centro de la secuencia de DNA que
có mo los represores y activadores controlan la estructura es transferido y son idé nticas si las secuencias se encuen-
de la cromatina y el ensamblado del complejo de tran en el locus MAT o en uno de los loci silenciosos. Esto
preiniciació n. En la siguiente secció n del capı́tulo indica que la funció n de los factores de transcripció n que
analizaremos có mo las concentraciones y las actividades interactú an con estas secuencias debe de alguna manera
de los activadores y represores son controladas por ellos ser bloqueada en HML y HMR pero no en el loci MAT. Esta
mismos, de manera tal que la expresió n gé nica esté en represió n de los loci silenciosos depende de las
sintonı́a de manera precisa con las necesidades de la secuencias silenciadoras localizadas cerca de la regió n
cé lula y del organismo. al DNA transferido a HML y HMR (Fig. 7-34). Si se elimina
el silenciador, el locus adyacente se transcribe.
Notablemente, cualquier gen colocado cerca de la
Formación de genes de silenciamiento de la secuencia silenciadora del tipo de apareamiento de la
heterocromatina levadura mediante té cnicas de DNA recombinante es
reprimido, o “silenciado”, incluso un gen tRNA tanscrito
Durante muchos añ os, ha quedado claro que los genes por la RNA polimerasa III, que usa un conjunto diferente
inactivos en las cé lulas eucariontes suelen estar asociadas de factores de transcripció n generales de los que usa la
con la heterocromatina, las regiones de la cromatina que RNA polimerasa II, como se analiza despué s.
está n má s altamente condensadas y se tiñ en má s oscuro
con colorantes de DNA que la eucromatina, donde se Varias lı́neas de evidencia indican que la represió n de los
localiza la mayorı́a de los genes (vé ase la Fig. 6-33a). Las loci HML y HMR es el resultado de la estructura
regiones de los cromosomas cerca de los centró meros y condensada de la cromatina que bloquea desde el punto
los teló meros y las regiones adicionales especı́ficas que de vista esté rico a los factores de transcripció n y evita que
varı́an en los diferentes tipos de cé lulas se organizan en la interactú en con el DNA. En un experimento revelador, el
heterocromatina. El DNA en la heterocromatina es me- gen que codifica una enzima de E. coli que metila los
nos accesible a las proteı́nas añ adidas externamente que residuos de adenina en las secuencias GATC se introdujo
el DNA en la eucromatina y, en consecuencia, suele en las cé lulas de levadura bajo el control de un promotor
referirse como cromatina “cerrada”. Por ejemplo, en un de levadura de manera tal que la enzima se expresó . Los
experimento descripto en el Capı́tulo 6, se en- contró que investigadores encontraron que las secuencias GATC
el DNA de los genes inactivos es má s resistente a la dentro del locus MAT y la mayorı́a de otras regiones del
genoma en estas cé lu- las estaban metiladas, pero no y la glicina, sin cadena lateral, tambié n imita la ausencia
aquellas dentro de los loci HML y HMR. Estos resultados de una lisina cargada positivamente. La represió n en los
indican que el DNA de los loci silenciosos se encuentra teló meros y en los loci del tipo de apareamiento fue
inaccesible a la metilasa de E. coli y presumiblemente a las defectuosa en los mutantes con sustituciones de
proteı́nas en general, incluidos los factores de glutamina y glicina pero no en mutantes con sustituciones
transcripció n y la RNA polimerasa. De manera similar, los de arginina. Ademá s, la acetilació n de las lisinas de H3 y
experimentos realizados con varios mutantes de histona H4 interfiere con la unió n por parte de SIR3 y SIR4 y, por
de levaduras indicaron que las interacciones especı́ficas consiguiente, evita la represió n en los loci de
invo- lucran las colas de histonas de H3 y H4 son silenciamiento y los teló meros. Finalmente, los
necesarias para la formació n de una estructura de experimentos de inmunoprecipitació n de la cromatina
cromatina completamente reprimida. Otros estudios han (Fig. 7-16a) usando anticuerpos especı́ficos para las
demostrado que los teló meros de cada cromosoma de lisinas acetiladas en posiciones particulares en las colas
levadura tambié n se comporta como las secuencias N-terminal de histona (Fig. 6-31a) confirmaron que las
silenciadoras. Por ejemplo, cuando un gen se coloca a his- tonas en las regiones reprimidas cerca de los
unas pocas kilobases de cualquier teló mero de levadura, teló meros y en los loci de apareamiento silencioso está n
se reprime su expresió n. Ademá s, esta represió n es hipoacetiladas, pero se tornan hi- peracetiladas en los
aliviada por las mismas mutaciones en las colas de mutantes sir cuando los genes en estas regiones no está n
histonas H3 y H4 que interfieren con represiones en los reprimidos.
loci del tipo de apareamiento silencioso.
contribuyen a activar o a reprimir la cromosoma en una regió n de heterocromatina. (a) Cuando un vector de expresió n para el represor lac se transfectó
a estas cé lulas, los represores lac unidos a los sitios operadores
se podı́an visualizar en una regió n de la cromatina condensada usando un anticuerpo contra el represor lac (rojo).
transcripción El DNA se visualizó mediante tinció n con DAPI (azul), revelando el nú cleo. (b) Cuando un vector de expresió n para
el represor lac fusionado a un dominio de activació n fue transfectado a estas cé lulas, la tinció n como en (a) reveló
que el dominio de activació n causa que esta regió n de la cromatina se descondense y se forme una fibra de
cromatina má s delgada que ocupa un volumen mucho má s grande del nú cleo.
FIGURA 7-39 Modelo de varios activadores unidos al DNA que interactúan con un único complejo mediador.
La capacidad de diferentes subunidades del mediador para interactuar con dominios de activació n especı́ficos
puede contribuir a la integració n de señ ales de diversos activadores en un ú nico promotor. Para má s detalles vé ase
el texto.
FIGURA 7-38 Estructura de los complejos mediadores humanos y de levadura. (a) Imagen reconstruida del
mediador de S. cerevisiae unida a Pol II. Mú ltiples imá genes de microscopia electró nica se alinearon y se procesaron
por computadora para producir esta imagen promedio en la cual la estructura tridimensional de Pol II (anaranjado
claro) se muestra asociada con el complejo mediador de levadura (azul). (b) Representació n en diagrama de las
subunidades mediadoras de S. cerevisiae. Las subunidades que se muestran del mismo color se cree que forman un
mó dulo. Las mutaciones en una subunidad de un mó dulo pueden inhibir la asociació n de otras subunidades en el
mismo mó dulo con el resto del complejo. (c) Representació n de las subunidades mediadoras humanas.
mediante unió n directa a la polimerasa y a los dominios
de activació n. Mediante la unió n a diferentes activadores
simultá neamente, el mediador probablemente
contribuya a integrar los efectos de mú ltiples activadores
sobre un promotor ú nico (vé ase la Fig. 7-39).
cortos cuelgan en el extremo 3 ́ de cada hebra. Paso ( ): una de las dos hebras de ≈22 nucleó tidos generadas es unida por
la subunidad Ago1 de un complejo RITS. Como los mú ltiples siRNA asociados con el complejo RITS son generados
a partir de cada transcripto Pol II, esto produce una retroalimentació n positiva que concentra los complejos RITS
en la regió n del centró mero. Paso ( ): el complejo RITS tambié n se asocia con una histona H3 lisina 9
metiltransferasa (H3K9), que metila la histona H3 en la regió n centromé rica. Esto genera un sitio de unió n para las
proteı́nas HP1 de S. pombe, ası́ como la subunidad Chp1 del complejo RITS. La unió n de HP1 condensa la regió n en
Los centró meros (Fig. 6-45c) de la levadura heterocromatina como se esquematiza en la Figura 6-35a. [Adaptado de D. Moazed, 2009, Nature, 457:413.]
mamı́feros. Un elemento central que abarca el sitio de electró nica de los complejos de RNA de proteı́na transcritos a partir de genes repetidos de rRNA. En la parte del
medio se esquematiza una unidad de transcripció n de la Pol I. Los potenciadores que estimulan la transcripció n de
inicio de la transcripció n desde −40 hasta +5 es esencial la Pol I desde un ú nico sitio de inicio de la transcripció n se representan por rectá ngulos azules. Los sitios de
terminació n de la transcripció n de Pol I (T0, T1-T10) unidos por el factor de terminació n especı́fico de Pol I TTF-1
para la transcripció n de Pol I. Un elemento de control se muestran como rectá ngulos rojos. pRNA indica la transcripció n del pRNA no codificante necesario para el
silenciamiento transcripcional. Las regiones del DNA mostradas en azul está n contenidas en el transcrito primario,
corriente arriba adicional que se extienden pero se eliminan y se degradan durante el procesamiento del rRNA. El elemento del promotor central y los
elementos de control corriente arriba se esquematizan abajo con la localizació n de la Pol I y se representan sus
aproximadamente −155 a −60 estimula 10 veces má s la factores de transcripció n generales UBF, SL1 y TIF-1A, ası́ como otras proteı́nas necesarias para la elongació n y el
control por parte de Pol I.
transcripció n in vitro por parte de Pol I. En los seres
humanos, el ensamblaje del complejo de preiniciació n de
Pol I (Fig. 7-52) se inicia por la unió n cooperativa de UBF Iniciación por Pol III A diferencia de los genes que
(factor de unió n corriente arriba) y SL1 (factor de codifican proteı́nas y los genes de pre-rRNA, las regiones
selectividad), un factor multisubunidad que contiene TBP promotoras de los tRNA y los genes rRNA 5S se
y cuatro factores asociados con TBP especı́ficos de Pol I encuentran completamente dentro de la secuencia
(TAFIs), a la regió n promotora de Pol I. Las subunidades transcripta (Fig. 7-53a, b). Dos de tales elementos
de TAFI interactú an directamente con subunidades promotores internos, llamados la caja A y la caja B, está n
especı́ficas de Pol I, dirigiendo su RNA polimerasa nuclear presentes en todos los genes tRNA. Estas secuencias
especı́fica al sitio de inicio de la transcripció n. TIF-1A, el altamente conservadas no solo funcionan como pro-
homó logo de mamı́fero de S. cerevisiae RRN3, es otro motores sino que tambié n codifican dos proteı́nas
factor necesario, ası́ como la proteı́na-cinasa nuclear invariantes de los tRNA eucariontes que son necesarias
abundante CK2 (caseı́na-cinasa 2), la actina nuclear, la para la sı́ntesis proteica. En los genes rRNA 5S, una ú nica
miosina nuclear, la proteı́na desacetilasa SIRT7 y la regió n de control interna, la caja C, actú a como un
topoisomersa I, que evita la formació n de promotor.
superenrollamientos de DNA (Fig. 4-8) durante la
transcripció n rá pida de Pol I de la unidad de transcripció n Tres factores de transcripció n generales son necesarios
de ≈ 14 kb. para que la Pol III inicie la transcripció n de los genes de
tRNA y rRNA 5S in vitro. Dos factores multimé ricos,
TFIIIC y TFIIIB, participan en la iniciació n tanto de los
La transcripció n del precursor de 14 kb de los rRNA 18S,
promotores de tRNA como de rRNA 5S; un tercer factor,
5,8S y 28S (vé ase el Cap. 8) está altamente regulada para
TFIIIA, es necesario para la iniciació n en los promotores
coordinar la sı́ntesis de ribosoma con el crecimiento y la
de rRNA 5S.
divisió n celular. Esto se logra por la regulació n de las
actividades de los factores de iniciació n de Pol I mediante
las modificaciones postraduccionales que incluyen la FIGURA 7-53 Elementos de control de la transcripción en genes transcriptos por la RNA polimerasa III. Tanto
los genes de tRNA (a) como de rRNA 5S (b) contienen elementos promotores internos (amarillo) localizados
fosforilació n y la acetilació n en sitios especı́ficos, el corriente abajo del sitio de inicio de la transcripció n y llamados cajas A, B y C, como se indica. El ensamblaje de
complejos de iniciació n de
control de la velocidad de la elongació n de Pol I y el la transcripció n de estos genes comienza con la unió n de los factores de transcripció n generales especı́ficos de Pol
III, TFIIIA, TFIIIB y TFIIIC a estos elementos de control. Las flechas verdes indican interacciones fuertes DNA-
proteı́na especı́fica de secuencia. Las flechas pú rpuras indican interacciones entre los factores de transcripció n
control de ≈ 300 genes rRNA humano que está n generales y Pol III. (c) La transcripció n del gen U6 snRNA en los mamı́feros está controlada por un promotor
corriente arriba con una caja TATA unida a la subunidad TBP de una forma especializada de TFIIIB con una
transcripcionalmente activos mediante mecanismos subunidad BRF alternativa y un elemento regulador corriente arriba llamado el PSE unido por un factor
multisubunidad llamado SNAPC. (De L. Schramm y N. Hernandez, 2002, Genes Dev. 16:2593.)
epigené ticos que ensamblan copias inactivas dentro de la
heterocromatina. El cambio entre las copias silenciosas
de la heterocromatina de los genes de rRNA y las activas
se logra por un complejo multisubunidad de
MAF1 es un inhibidor de la transcripció n de Pol III que
funciona mediante la interacció n con la subunidad BRF de
TFIIIB y Pol III. Su funció n es regulada por el control de su
importació n desde el citoplasma el interior del nú cleo
mediante fosforilaciones en sitios especı́ficos en
respuesta a cascadas de proteı́na-cinasa de traducció n de
señ ales que responden al estré s celular y a la falta de
nutrientes (vé anse los Caps. 16 y 24). En los mamı́feros, la
transcripció n de Pol III tambié n está reprimida por los
supresores de tumores cruciales p53 y la familia de retin-
oblastoma (RB). En los seres humanos existen dos genes
que codifican la subunidad RPC32. Uno de estos se
expresa especı́ficamente en las cé lulas que está n
replicando, y su expresió n forzada puede contribuir a la
transformació n oncogé nica de fibroblastos humanos
cultivados.
Control génico postraduccional
En los capı́tulos anteriores hemos visto que la mayorı́a de celulares de muchos (si no todos) los mRNA son
los genes se regulan en el primer paso de la expresió n reguladas de modo tal que las proteı́nas recié n
gé nica, la transcripció n, al controlar el ensamblaje del sintetizadas se concentren en donde son necesarias.
complejo de preiniciació n de la transcripció n en una Ejemplos particularmente sorprendentes acerca de esto
secuencia de DNA promotora, ası́ como mediante la se producen en el sistema nervioso de los animales
regulació n del alargamiento de la transcripció n en la multicelulares. Algunas neuronas en el cerebro humano
regió n proximal al promotor. Una vez que se ha iniciado generan má s de 1 000 sinapsis separadas con otras
la transcripció n, la sı́ntesis del RNA codificado requiere neuronas. Durante el proceso de aprendizaje, las sinapsis
que la RNA polimerasa transcriba el gen completo y no que se encienden con má s frecuencia que otras aumentan
termine en forma prematura. Má s aú n, los transcritos en tamañ o muchas veces, mientras que otras sinapsis
primarios iniciales producidos a partir de los genes hechas por la misma neurona no lo hacen. Esto puede
eucariontes deben atravesar diversas reacciones de suceder debido a que los mRNA que codifican proteı́nas
procesamiento para generar los RNA funcionales cruciales para el alargamiento de la sinapsis se almacenan
correspondientes. Para los mRNA, se debe añ adir la en todas las sinapsis, pero la traducció n de estos mRNA
estructura 5 ́ cap necesaria para la traducció n (vé ase la localizados y almacenados está regulada en cada sinapsis
Fig. 4-14), los intrones se deben cortar y eliminar de los de manera independiente mediante la frecuencia a la cual
pre-mRNA (Cua- dro 8-1) y se debe poliadenilar el se inicia el desencadenamiento. De esta forma, la sı́ntesis
extremo 3 ́ (vé ase la Fig. 4-15). Una vez formados los de las proteı́nas asociadas con la sinapsis se puede
mRNA en el nú cleo, ya maduros y funcionales, estos son regular independientemente en cada una de las muchas
exportados al citoplasma como componentes de las sinapsis hechas por la misma neurona.
ribonucleoproteı́nas. Tanto el procesamiento como la
exportació n desde el nú cleo ofrecen la posibilidad de
Otro tipo de regulació n gé nica que recientemente ha
regulació n adicional de la expresió n gé nica despué s de la
salido a la luz involucra a los micro-RNA (miRNA), los
iniciació n de la transcripció n.
cuales regulan la estabilidad y la traducció n de los mRNA
diana especı́ficos en los animales multicelulares y en las
Recientemente, la gran cantidad de informació n de plantas. Los aná lisis de estos miRNA cortos en los
secuencia acerca de los mRNA humanos expresados en diversos tejidos humanos indican que existen ∼ 500
diferentes tejidos y en diversos momentos durante la miRNA expresados en los mú ltiples tipos de cé lulas
embriogé nesis y la diferenciació n celular, ha revelado que humanas. Aunque de manera reciente se ha descubierto
el ∼ 95% de los genes humanos surgen mediante el corte que algunos funcionan a travé s de la inhibició n de la
y empalme alternativo de los mRNA. Estos mRNA expresió n del gen diana en el tejido adecuado y en el
procesados de modo alternante codifican proteı́nas momento apropiado del desarrollo, se desconocen las
relacionadas, con diferencias en las secuencias limitadas funciones de la vasta mayorı́a de los miRNA humanos y
a los dominios funcionales especı́ficos. En muchos casos, por ende es un á rea de creciente investigació n. Si la
el corte y empalme alternativo del RNA está regulado mayorı́a de los miRNA efectivamente tienen funciones
para satisfacer la necesidad de una isoforma concreta de significativas, los genes de los miRNA constituyen un
la proteı́na, en un tipo celular especı́fico. Dada la subgrupo importante de los ∼ 25 000 genes humanos. Un
complejidad del proceso de corte y empalme del pre- proceso estrechamente relacionado, llamado
mRNA, no es sorprendente que ocasionalmente se interferencia por RNA (RNAi), conduce a la degradació n
produzcan errores, originando precursores de mRNA con de los RNA virales en las cé lulas infectadas y la
exones procesados de manera inapropiada. Sin embargo, degradació n de los RNA codificados por transposones en
las cé lulas eucariontes han desarrollado mecanismos de muchos eucariontes. Esto es de una enorme importancia
vigilancia que evitan el transporte de estos RNA para investigaciones bioló gicas debido a que es posible
incorrectamente procesados al citoplasma o llevan a su diseñ ar RNA de interferencia pequeño (siRNA), a fin de
degradació n si ellos son transportados. inhi- bir experimentalmente la traducció n de los mRNA
especı́ficos mediante un proceso llamado silenciamiento
génico por siRNA. Esto hace posible la inhibició n de la
En el citoplasma pueden ocurrir controles adicionales de
funció n de cualquier gen que se desee, incluso en
expresió n gé nica. En el caso de los genes que codifican
organismos que no son susceptibles a los mé todos
proteı́na, por ejemplo, la cantidad de proteı́na producida
gené ticos clá sicos para el aislamiento de mutantes.
depende de la estabilidad de los mRNA correspondientes
en el citoplasma y la velocidad de sus transducciones. Por
ejemplo, durante la respuesta inmunitaria, los linfocitos Nos referimos a todos los mecanismos que regulan la
se comunican secretando hormonas polipeptı́dicas expresió n gé nica a continuació n de la transcripció n como
llamadas citocinas, las cuales señ alan linfocitos vecinos a control génico postranscripcional (Fig. 8-1). Como la
travé s de los receptores que atraviesan sus membranas estabilidad y la velocidad de la traducció n de un RNA
plasmá ticas (Cap. 23). Es importante para los linfocitos contribuyen a la cantidad de proteı́na expresada a partir
sintetizar y secretar citocinas en estallidos breves. Esto es de un gen, estos procesos postranscripcionales son
posible debido a que los mRNA de las citocinas son componentes impor- tantes en el control génico. En
extremadamente inestables. En consecuencia, la efecto, el resultado proteico de un gen está regulado en
concentració n del mRNA en el citoplasma desciende cada paso en la vida de un mRNA desde la iniciació n de su
rá pidamente una vez que su sı́ntesis se detiene. Por el sı́ntesis hasta su degradació n. Por ende, los procesos
contrario, los mRNA que codifican proteı́nas requeridas gené ticos reguladores actú an sobre el RNA, ası́ como
en grandes cantidades y que funcionan por perı́odos sobre el DNA. En este capı́tulo, se considerará n los
largos de tiempo (tales como las proteı́nas ribosó micas) acontecimientos que se producen en el procesamiento de
son extremadamente estables, de manera tal que se un mRNA a continuació n de la iniciació n de la
transcriben muchos polipé ptidos de cada mRNA. transcripció n y de la elongació n proximal al promotor, y
los diversos mecanismos que se conoce que regulan estos
acontecimientos. En la ú ltima secció n, analizaremos
Ademá s de regular el procesamiento del pre-mRNA, la
brevemente el procesamiento de los transcritos
exportació n nuclear y la traducció n, las localizaciones
primarios producidos a partir de los genes que codifican El 5 ́ cap y la cola 3 ́ poli(A) distinguen a las molé culas de
los rRNA y los tRNA. pre-mRNA de muchas otras clases de RNA en el nú cleo.
Las molé culas de pre-mRNA (vé ase el Cuadro 8-1) está n
unidas a las proteı́nas nucleares que funcionan en la
exportació n del mRNA al citoplasma. Despué s de que los
mRNA son exportados al citoplasma, estos se unen a un
grupo de proteı́nas citoplasmá ticas que estimulan la
traducció n y son crı́ticas para la estabilidad del mRNA en
el citoplasma. Antes de la exportació n nuclear se deben
eliminar los intrones para generar la correcta regió n de
codificació n del mRNA. En los eucariontes superiores,
incluyendo a los seres humanos, el proceso de corte y
empalme alternativo está regulado de modo intrincado
con el fin de sustituir diferentes dominios funcionales en
proteı́nas, produciendo una expansió n considerable del
proteoma de estos organismos.
los mRNA a los cuales se hibridan, en general en la regió n 3 ́ no traducida. Los tRNA y los rRNA tambié n son
sintetizados como precursores de RNA que deben ser procesados antes de que sean funcionales. Las regiones de
los precursores cor- tados a partir de los RNA maduros son degradadas por los exosomas nucleares.
recié n sintetizada. Por ejemplo, las proteı́nas hnRNP A1, la hoja b del RRM2 orientada hacia abajo. Las regiones cargadas positivamente en la proteı́na Sxl se muestran
como sombras en azul; las regiones cargadas negativamente, en sombras en rojo. El pre-mRNA se une a las
C y D se unen preferentemente a las secuencias ricas en superficies de las hojas b cargadas positivamente, haciendo el mayor contacto con las regiones RNP1 y RNP2 de
cada RRM. (c) Sorprendentemente la orienta- ció n diferente de los dominios RRM en una hnRNP diferente, el
pirimidina en los extremos 3 ́ de los intrones (vé ase la Fig. segmento de polipirimidina de unió n a proteı́na (PTB), ilustra que los RRM está n orientados en diferentes
posiciones relativas en diferentes hnRNP; los colores son como en (b). El RNA de polipirimidina [p(Y)] de una
8-7). Algunas proteı́nas hnRNP interactú an con la hé lice se une con las hojas b hacia arriba (RRM3) y hacia abajo (RRM4). El RNA se muestra en amarillo, (Parte [a]
adap- tado de K. Nagai y cols., 1995 Trends Biochem. Sci. 20:235. Parte [b] despué s N. Harada y cols., 1999, Nature
secuencia RNA que especifica el corte y empalme del RNA 398:579. Parte [c] despué s F. C. Oberstrass y cols., 2006 Science 309:2054.)
o el corte/poliadenilació n y contribuyen al
reconocimiento de la estructura por parte de los factores El proceso de corte y empalme se produce en
de procesamiento del RNA. Finalmente, los experimentos secuencias cortas, conservadas en los pre-
de fusió n de cé lulas han demostrado que algunas
mRNA a través de dos reacciones de
proteı́nas hnRNP permanecen localizadas en el nú cleo,
mientras que otras alternan entre adentro y afuera del
transesterificación
citoplasma, lo cual sugiere que funcionan en el transporte
de mRNA (Fig. 8-4). Durante la formació n de un mRNA maduro, funcional, se
eliminan los intrones y se unen los exones. Para las
unidades de transcripció n cortas, el proceso de corte y
Motivos de unión al RNA conservados El motivo de
reconocimiento al RNA (RPM), tambié n llamado motivo empalme del RNA en general es seguido por el corte y la
RNP y dominio de unió n al RNA (RBD), es el dominio de poliadenilació n del extremo 3 ́ del transcrito primario,
unió n al RNA en las proteı́nas hnRNP. Este dominio de como se describe en la Figura 8-2. Sin embargo, para las
unidades de transcripció n largas que contienen mú ltiples
∼ 80 residuos, que se produce en muchas otras proteı́-
exones, el corte y empalme de los exones en el RNA
nas de unió n al RNA, contiene dos secuencias altamente
naciente comienza antes de que se complete la
conservadas (RNP1 y RNP2) que se encuentran en otros
transcripció n del gen.
organismos que van desde las levaduras hasta los seres
humanos, lo cual indica que al igual que muchos dominios
de unió n al DNA, ellos se desarrollaron temprano en la Los investigadores pioneros en el procesamiento nuclear
evolució n eucarionte. de los mRNA, revelaron que los mRNA inicialmente se
transcriben como molé culas de RNA mucho má s largas
que los mRNA ya maduros en el citoplasma. Tambié n se
demostró que las secuencias cerca del 5 ́ cap añ adidas
FIGURA EXPERIMENTAL 8-6 La microscopia electrónica de híbridos de DNA molde-mRNA de- muestra que
poco tiempo despué s de la iniciació n de la transcripció n los intrones son eliminados durante el proceso de corte y empalme del pre-mRNA. (a) Diagrama del
fragmento de EcoRI A del adenovirus de DNA, que se extiende desde el extremo izquierdo del genoma hasta antes
son retenidas en el mRNA maduro y que las secuencias de del exó n del extremo final del gen hexó n. El gen consiste en tres exones cortos y uno largo (∼ 3,5 kb) separados por
RNA cerca del extremo poliadenilado de los tres intrones de ∼ 1, 2,5 y 9 kb. (b) Microfotografı́a electró nica (izquierda) y dibujo es- quemá tico (derecha) de un
hı́brido entre un fragmento de DNA EcoRI y un mRNA de hexó n. Los lazos marcados como A, B, y C corresponden a
intermediarios del procesamiento del mRNA en los los intrones indicados en (a). Puesto que estas secuencias intró nicas en el DNA ge- nó mico viral no está n presentes
en el mRNA maduro de hexó n, forman un lazo hacia afuera entre las secuencias exó nicas que se hibridan con sus
FIGURA 8-9 Apareamiento de bases entre el pre-mRNA, el snRNA U1 y el snRNA U2 temprano en el proceso
de corte y empalme. (a) En este diagrama, las estructuras secundarias en los snRNA que no está n alteradas duran-
te el corte y empalme se describen de manera esquemá tica. Aquı́ se muestra la secuencia del punto de ramificació n
en levadura. Nó tese que snRNA U2 forma apareamiento de bases con una secuencia que incluye al punto de
ramificació n A, aunque este residuo no se aparea. Los rectá ngulos violetas representan secuencias que unen
proteı́nas snRNP reconocidas por los anticuerpos anti-Sm. Por razones desconocidas, el antisuero de pacientes con
la enfermedad autoinmunitaria lupus eritematoso sisté mico contiene anticuerpos contra proteı́nas snRNP, que han
sido ú tiles en la caracterizació n de los componentes de la reacció n de corte y empalme. (b) Aquı́ solo se muestran
los extremos 5 ́ de los snRNA U1 y los sitios 5 ́ de corte y empalme en los pre-mRNA. (Izquierda) Una mutació n (A)
en un sitio de corte y empalme del pre-mRNA que interfiere con el apareamiento de bases en el extremo 5 ́ del
snRNA U1 bloquea el corte y empalme. (Derecha) La expresió n de un snRNA U1 con una mutació n compensatoria
(U) que restaura el apareamiento de bases, tambié n restaura el corte y empalme del pre-mRNA mutante.
FIGURA 8-10 Estructuras de una A que sobresalen en una hélice RNA-RNA y un intermediario en el proceso
de corte y empalme. (a) Se determinó por cristalografı́a de rayos X la estructura de un RNA dú - plex con la
secuencia mostrada, que contiene residuos A que sobresalen (rojo) en la posició n 5 en la hé lice de RNA. (b) Los
residuos A que sobre- salen se extienden desde el lateral de una hé lice de RNA-RNA de tipo A. El esqueleto fosfato
de una hebra se muestra en verde; el de la otra hebra en azul. La estructura sobre la derecha está girada 90 grados
para una vista hacia abajo del eje de la hé lice. (c) Una estructura de 30 Ag de resolució n, de un intermediario del
procesamiento de corte y empalme espliceosó mico que contiene las snRNP U2, U4, U5 y U6, determinada por
microscopia crioelectró nica y reconstrucció n de imagen. El complejo snRNP-tri U4/U6/U5 tiene una estructura
similar a la del cuerpo triangular de este complejo, lo cual sugiere que estos snRNP se encuentran en la parte inferior
de la estructura mostrada aquı́ y que la cabeza está compuesta en gran medida por la snRNP U2 (Parte [a] y [b] de
J. A. Berglund y cols., 2001, RNA 7:682. Parte [c] de D. Boehringer y cols., 2004, Nat. Struct. Mol. Biol. 11:463. Vé ase
tambié n H. Stark y R. Luhrmann, 2006, Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 35:435.)
FIGURA 8-11 Modelo de corte y empalme del pre-mRNA mediado por espliceosoma. Paso : despué s de que
U1 forma apareamiento de bases con el sito de corte y empalme 5 ́ consenso, el SF1 (factor de corte y empalme 1)
se une al punto de ramificació n A; U2AF (el factor asociado a snRNP U2) se une con el segmento de polipirimidina
y el sitio de corte y empalme 3 ́; y el snRNP U2 se asocia con el punto de ramificació n A mediante interacciones de
pares de bases que se muestran en la Figura 8-9, desplazando a SF1. Paso : un com- plejo snRNP trimé rico de U4,
U5 y U6 se une al complejo inicial para formar el espliceosoma. Paso : los reordenamientos de las interacciones de
pares de bases entre los snRNA convierten al espliceosoma en una conformació n catalı́ticamente activa y FIGURA 8-12 Diagrama esquemático de la RNA polimerasa II con el CTD extendido. La longitud del dominio
desestabilizan a los snRNP U1 al U4, que son liberados. Paso : el centro catalı́tico, que se piensa está formado por carboxilo terminal (CTD) de la RNA polimerasa II de levadura completamente extendido y la regió n conectora que
U6 y U2, cataliza entonces la primera reacció n de transesterificació n, formando el intermediario que contiene un lo une a la polimerasa se muestran con relació n al dominio globular de la polimerasa. El CTD de la RNA polimerasa
enlace 2 ́,5 ́-fosfodié ster como se muestra en la Figura 8-8. Paso : siguiendo los reordenamientos entre las snRNP, II de mamı́feros es del doble de largo. En su forma extendida, el CTD se puede asociar con mú ltiples factores de
la segunda reacció n de transesterificació n une los dos exones mediante un enlace 3 ́,5 ́-fosfodié ster está ndar y libera procesamiento del RNA de manera simultá nea. (De P. Cramer, D. A. Bushnell y R. D. Kornberg, 2001, Science
al intró n como una estructura con forma de lazo y a las snRNP restantes. Paso : el intró n con forma de lazo escindido 292:1863.)
es convertido en un RNA lineal mediante una enzima desramificante. (Adaptado de T. Villa y cols., 2002, Cell
109:149.)
FIGURA 8-18 Función del corte y empalme alternativo en la percepción de los sonidos de diferentes
frecuencias. (a) La có clea del pollo, un tubo de 5 mm de longitud, contiene un epitelio de cé lulas pilosas auditivas
que se sin- tonizan con un gradiente de frecuencias vibratorias desde 50 Hz en el extremo apical (izquierda) hasta
2+ +
5 000 Hz en el extremo basal (derecha). (b) El canal de Ca activado por K contiene siete hé lices α
transmembranas (S0-S6), que se asocian para formar el canal. El dominio citosó lico, que incluye cuatro regiones
2+
hidró fobas (S7-S10), regula la apertura del canal en respuesta al Ca . Isoformas del canal, codificadas por formas
2+
alternativas de los mRNA producidos a partir del transcrito primario, se abren a diferentes concentraciones de Ca
y por lo tanto responden a diferentes frecuencias. Los nú meros rojos se refieren a regio- nes donde el corte y
empalme alternativo produce diferentes secuencias de aminoá cidos en varias isoformas. (Adaptado de K. P.
Rosenblatt y cols., 1997, Neuron. 19:1061.)
En las neuronas de los vertebrados se han observado FIGURA 8-19 Edición del RNA del pre-mRNA apo-B. El mRNA apoB producido en el hı́gado tiene la misma
secuencia que los exones en el transcrito primario. Este mRNA es traducido a apoB-100, que tiene dos dominios
muchos ejemplos de genes similares a los que codifican el funcio- nales: un dominio N-terminal (verde) que se asocia con lı́pidos y un dominio C-terminal (anaranjado) que
se une a los receptores LDL sobre las membranas celulares. En el mRNA apo-B producido en el intestino, el codó n
canal de K+ coclear; mRNA procesados de manera CAA en el exó n 26 es editado a un codó n de terminació n UAA. Como resultado, las cé lulas intestinales producen
apoB-48, que corresponde al dominio N-terminal de apoB-100. (Adaptado de P. Hodges y J. Scott., 1992, Trends
alternativa, coexpresados a partir de un gen especı́fico en Biochem. Sci. 17:77.)
La edició n del RNA está muy difundida en las • El corte y empalme alternativo puede ser regulado por
mitocondrias de los protozoos y las plantas y tambié n en las proteı́nas de unió n al RNA que se unen a secuencias
los cloroplastos. En las mitocondrias de ciertos especı́ficas cerca de los sitios de corte y empalme. Los
tripanosomas patogé nicos, má s de la mitad de la represores pueden bloquear de manera esté rica la unió n
secuencia de algunos mRNA está alterada respecto de la de los factores de corte y empalme a sitios especı́ficos en
secuencia correspondiente en los transcritos primarios. A los pre- mRNA o inhibir sus funciones. Los activadores del
las adiciones y deleciones de nú meros especı́ficos de U corte y empalme amplifican dicho corte y empalme
siguen los moldes proporcionados por el apareamiento mediante la interacció n con factores del corte y empalme,
de bases de RNA “guı́as” cortos. Estos RNA está n promoviendo de esta manera sus asociaciones con un
codificados por miles de minimolé culas de DNA sitio de corte regulado. Las secuencias de RNA unidas por
mitocondrial circulares concatenados, a muy pocas los represores del corte y empalme se denominan
molé culas de DNA mitocondrial grandes. Es incierta la silenciadores del corte y empalme exó nico o intró nicos,
razó n para este mecanismo barroco de codificar dependiendo de sus localizaciones en un exó n o en un
proteı́nas mitocondriales en tales protozoos. Pero este intró n. Las secuencias unidas por los activadores del
sistema representa un punto diana potencial para corte y empalme se denominan potenciadores del corte y
fá rmacos que inhiban el complejo procesamiento de empalme in- tró nico o exó nico.
enzimas esenciales para el microbio, las cuales no existen
en las cé lulas de los seres humanos o de otros hué spedes • En la edició n del RNA, la secuencia nucleotı́dica de un
vertebrados. pre-mRNA se altera en el nú cleo. En los vertebrados, este
proceso es bastante raro y comprende la desaminació n de
En los eucariontes superiores, la edició n del RNA es una ú nica base en la secuencia del mRNA, dando como
mucho má s rara y por lo tanto hasta ahora ú nicamente se resultado un cambio en el aminoá cido especi- ficado por
han observado cambios de una sola base. Sin embargo, el correspondiente codó n y la producció n de una proteı́na
tales ediciones menores revelaron tener consecuencias funcionalmente diferente (vé ase la Fig. 8-19).
funcionales significativas en algunos casos. Un ejemplo
importante de la edició n del RNA en los mamı́feros 8.3 Transporte del mRNA a través de la
involucra al gen apoB. Este gen codifica dos formas
alternativas de una proteı́na sé rica central en la captació n
envoltura nuclear
y al transporte del colesterol. En consecuencia, es
importante en los procesos patogé nicos que llevan a la Los mRNA totalmente procesados en el nú cleo
ateroesclerosis, la enfermedad arterial que constituye la permanecen unidos a las proteı́nas hnRNP en los
principal causa de muerte en los paı́ses desarrollados. El complejos denominados como mRNP nucleares. Antes de
gen apoB expresa tanto la proteı́na sé rica apolipoproteı́na que un mRNA pueda ser traducido a la proteı́na que
B-100 (apoB-100) en los hepatocitos (el principal tipo codifica, debe ser transportado fuera del nú cleo al
celular en el hı́gado) y la apoB-48, expresada en las citoplasma. La envoltura nuclear es una membrana
cé lulas intestina- les epiteliales. La apoB-48 de ∼ 240 kDa doble que separa el nú cleo del citoplasma (vé ase la Fig. 9-
corresponde a la regió n N- terminal de la apoB-100 de 32). Al igual que la membrana plasmá tica alrededor de las
∼ 500 kDa. Como se detalló en el Capı́tulo 10, ambas cé lulas, cada membrana nuclear consiste en una bicapa
proteı́nas apoB son componentes de complejos fosfolipı́dica impermeable al agua y con mú ltiples
lipoproteicos grandes que transportan lı́pidos en el suero. proteı́nas asociadas. Los mRNP y otras macromolé culas,
Sin embargo, solo los complejos de lipoproteı́na de baja incluyendo los tRNA y las subunidades ribosó micas,
densidad (LDL) que contienen la apoB- 100 en sus atraviesan la envoltura nuclear a travé s de los poros
superficies distribuyen el colesterol a los tejidos del nucleares. Esta secció n se centrará en la exportació n de
cuerpo, mediante su unió n al receptor LDL presente en los mRNP a travé s del poro nuclear y los mecanismos que
todas las cé lulas. permiten algú n nivel de regulació n de este paso. El
trasporte de otras cargas a travé s del poro nuclear se
analiza en el Capı́tulo 13.
La expresió n especı́fica del tipo de cé lula de las dos
formas de apoB es el resultado de la edició n del pre-
mRNA apoB, de manera tal que cambia el nucleó tido en la Las macromoléculas entran y salen del núcleo
posició n 6666 en la secuencia de una C a una U. Esta a través de los complejos del poro nuclear
alteració n, que se produce solo en las cé lulas intestinales,
convierte al codó n CAA para la glutamina en UAA (un
codó n de detenció n) que lleva a la sı́ntesis de la apoB-48 Los complejos del poro nuclear (CPN) son estructuras
má s corta (Fig. 8-19). Estudios con la enzima simé tricas, grandes, compuestas de mú ltiples copias de
parcialmente purificada que efectú a la desaminació n aproximadamente 30 proteı́nas diferentes llamadas
postranscripcional de C6666 a U, muestran que puede nucleoporinas. Embebidas en la envoltura nuclear, los
reconocer y editar un RNA tan corto como de 26 CPN tienen forma cilı́ndrica con un diá metro de ∼ 30 nm
nucleó tidos con la secuencia que rodea la C6666 en el (Fig. 8-20a). Una clase especial de nucleoporinas,
llamadas nucleoporinas FG, alinean el canal central a
transcrito primario de apoB.
travé s del CPN. Las nucleoporinas FG forman una barrera
semipermeable la cual permite que pequeñ as molé culas
se difundan libremente, pero restringe el paso de
molé culas grandes. El dominio globular de la Los filamentos proteicos se extienden desde el centro
nucleoporina FG ancla la proteı́na en la matriz NPC. A hacia el nucleoplasma formando una “cesta nuclear”
partir de estos anclajes, segmentos largos de (vé ase la Fig. 8-20a). Los filamentos proteicos tambié n se
enrollamientos al azar se extienden dentro del canal. extienden hacia el citoplasma. Estos filamentos asisten en
Estas extensiones está n compuestas por secuencias de la exportació n de mRNP. Gle2, una proteı́na adaptadora
aminoá cidos hidró filos separados por repeticiones FG que se une reversiblemente a NXF1 y a una nucleoporina
hidró fobas, secuencias cortas ricas en fenilalanina (F) y en la cesta nuclear, trae a los mRNP nucleares hacia el
glicina (G) hidró fobas. Estos dominios de repeticiones FG poro en preparacion para la exportació n. Una
integran una nube de cadenas polipeptı́dicas en el canal nucleoporina en los filamentos citoplasmá ticos del CPN
central y se extienden hacia el nucleoplasma y el se une a una RNA helicasa (Dbp5), que funciona en la
citoplasma, limitando efectivamente la difusió n libre de disociació n de NXF1/NXT1 y otras proteı́nas hnRNP del
las macromolé culas a travé s del canal. El agua, los iones, mRNP a medida que alcanza el citoplasma.
los metabolitos y las pequeñ as proteı́nas globulares de
hasta ∼ 40-60 kDa pueden difundir a travé s de la nube de
En un proceso llamado remodelación del mRNP, las
dominios con repeticiones FG. Sin embargo, los dominios
proteı́nas asociadas con un mRNA en el complejo mRNP
FG en el canal central forman una barrera que restringe la
nuclear está n intercambiadas por un grupo diferente de
difusió n de las macromolé culas má s grandes entre el
proteı́nas, a medida que el mRNP es transportado a travé s
citoplasma y el nú cleo.
del CPN (Fig. 8-21). Algunas proteı́nas mRNP se disocian
temprano en el transporte, permaneciendo en el nú cleo
Las proteı́nas y las RNP má s grandes de ∼ 40-60 kDa hasta unir otro pre-mRNA naciente recié n sintetizado.
deben ser transportadas de manera selectiva a travé s de Otras proteı́nas mRNP nucleares permanecen con el
la envoltura nuclear, con la asistencia de proteı́nas complejo mRNP al tiempo que atraviesan el poro y por lo
transportadoras solubles que se unen a ellas y tambié n tanto, no se disocian del mRNP hasta que el complejo
interactú an de manera reversible con las repeticiones FG alcanza el citoplasma. Las proteı́nas en esta categorı́a
de las nucleoporinas FG. Como consecuencia de estas incluyen el exportador de mRNP NXF1/NXT1, el complejo
interacciones reversibles con los dominios FG, el de unió n a la caperuza unido a la caperuza 5 ́ y la PABPII
transportador y su carga establemente unida pueden unida a la cola de poli(A). Ellos se disocian del mRNP en
pasar de dominio FG en dominio FG, permitiendo que el lado citoplasmá tico del CPN a travé s de la acció n de la
ambos difundan a favor del gradiente de concentració n RNA helicasa Dbp5 que se asocia con los filamentos
desde el nú cleo hasta el citoplasma. citoplasmá ticos del CPN, como se describió antes. Estas
proteı́nas luego son importadas de regreso al nú cleo,
como se analizó para otras proteı́nas nucleares en el
Los mRNP son transportados a travé s de los CPN Capı́tulo 13, donde pueden funcionar en la exportació n de
mediante los exportadores de mRNP, un heterodı́mero otro mRNP. En el citoplasma, el factor de iniciació n de la
que consiste en una subunidad grande, llamada factor de traducció n de unió n a la caperuza elF4E reemplaza al CPN
exportació n nuclear 1 (NXF1) y una subuni- dad pequeñ a, unido a la caperuza 5 ́ de los mRNP (Fig. 4-24). En los
el transportador de exportació n nuclear 1 (NXT1) (Fig. 8- vertebrados, la proteı́na de unió n a poli(A) nuclear
20b). El NXF1 se une a los mRNP nucleares a travé s de PABPII es reemplazada con la proteı́na de unió n a poli(A)
asociaciones tanto con RNA como con otras proteı́nas en citoplasmá tica PAB- PI (tambié n denominada ası́ debido
el complejo mRNP. Uno de los má s importantes de estos
a que fue descubierta antes que PABPII). Solo una PABP
es el REF (factor de exportació n de RNA), un componente
se encuentra en las levaduras en gemació n, tanto en el
de los complejos exó n-unió n analizados anteriormente, nú cleo como en el citoplasma.
que se une a aproximadamente 20 nucleó tidos en la
direcció n 5 ́ de la unió n exó n-exó n (vé ase la Fig. 8-21). El
exportador de mRNP NXF1/NXT1 tambié n se asocia con Proteína SR de levadura Estudios de S. cerevisiae
las proteı́nas SR unidas a los potenciadores del corte y indican que la direcció n de exportació n de mRNP del
empalme exó nicos. Por lo tanto, las proteı́nas SR nú cleo al citoplasma está controlada por la fosforilació n y
asociadas con los exones funcionan en dirigir tanto el desfosforilació n de las proteı́nas adaptadoras mRNP,
corte y empalme de los pre-mRNA, como en la como la REF que asiste en la unió n del exportador
exportació n de los mRNA completamente procesados a NXF1/NXT1 a los mRNP. En un caso, una proteı́na de
travé s de los CPN al citoplasma. Los mRNP levadura SR (Npl3) funciona como una proteı́na
probablemente se unen a lo largo de sus longitudes adaptadora que promueve la unió n del exportador de
mediante los exportadores de mRNP NXF1/NXT1, los levadura mRNP (Fig. 8-22). La proteı́na SR inicialmente se
cuales interactú an con los dominios FG de las une al pre-mRNA en sus formas fosforiladas. Cuando el
nucleoporinas FG para facilitar la exportació n de los corte 3 ́ y la poliadenilació n se han completado, la
mRNP a travé s del canal central del CPN (Fig. 8-20b). proteı́na adaptadora es desfosforilada por una proteı́na
fosfatasa nuclear especı́fica esencial para la exportació n
de mRNP. Solo la proteı́na adaptadora desfosforilada
puede unirse al exportador mRNP, acoplando ası́ la
exportació n mRNP a la poliadenilació n correcta. Esta es
una forma de “control de calidad” del mRNA. Si el mRNP
naciente no está correctamente procesado, no es
reconocido por la fosfatasa que desfosforila Npl3. En
consecuencia, no es unido por el exportador mRNA y no
es exportado desde el nú cleo. En su lugar es degradado
por el exosoma, el complejo multiproteı́na que degrada
los RNA desprotegidos en el nú cleo y en el citoplasma
FIGURA 8-20 Modelo del paso del transportador a través del complejo del poro nuclear (NPC). (a) Diagrama
para la estructura del NPC. La envoltura nuclear formada por bicapas lipı́dicas se representa en verde. Las proteı́nas (vé ase la Fig. 8-1).
transmembranas representadas en rojo forman un anillo luminal, alrededor del cual se pliega la membrana para
constituir las membranas nucleares interna y externa. Los dominios transmembranas de estas proteı́nas está n
conectados a los dominios globulares en el interior del poro al cual se unen otras nucleopo- rinas, formando la
estructura central. Los dominios globulares de las nucleoporinas FG se muestran en pú rpura. Los dominios FG de
las nucleoporinas FG (formas de gusanos en color tostado) tienen una conformació n aleatoria extendida, que forma Despué s de la exportació n al citoplasma, la proteı́na SR
una nube molecular de polipé ptido aleatorio que se mueve continuamente. (b) Los transportadores nucleares
(NXF1/NXT1) tienen regiones hidró fobas sobre sus superficies que se unen de manera reversible a los dominios Npl3 es fosforilada por una proteincinasa citoplasmá tica
FG en las nucleoporinas FG. Como consecuencia, ellos pueden penetrar la nube molecular en el canal central del
NPC y difundirse hacia adentro y hacia afuera del nú cleo. especı́fica. Esto causa su disociació n del mRNP, junto con
el exportador mRNP. De esta for- ma, la desfosforilació n
de las proteı́nas adaptadoras mRNP en el nú cleo una vez
que se ha completado el procesamiento del RNA y sus aunque menos eficientemente que para el mRNA cortado.
fosforilaciones y la disociació n resultante en el Cuando ambos sitios de corte y empalme está n mutados,
citoplasma, producen una mayor concentració n de los pre-mRNA no se unen de manera eficiente a las snRNP
complejos mRNP-exportador de mRNP en el nú cleo, y por consiguiente, no se bloquea su exportació n.
donde se forman y una menor concentració n de estos
complejos en el citoplasma, donde se disocian. Como
Estudios recientes en levadura, demostraron que una
resultado, la direcció n de la exportació n de mRNP puede
proteı́na nuclear que se asocia con una nucleoporina en la
ser impulsada por difusió n simple a favor de un gradiente
cesta nuclear del CPN es necesaria para retener los pre-
de concentració n del transporte competente del complejo
mRNA asociados a las snRNP en el nú cleo. Si se elimina
exportador de mRNP-mRNP a travé s del CPN, desde el
esta proteı́na o la nucleoporina a la cual se une, se
nú cleo (donde la concentració n es má s elevada) hasta el
exportan los pre-mRNA sin procesar.
citoplasma (donde es má s baja).
Estudios detallados por microscopia electró nica acerca (ovales) son exportadas a travé s del NCP asociados con el mRNP, pero se disocian en el citoplasma y son
transportadas de vuelta al nú cleo a travé s de un NPC. En el citoplasma, el factor de inicia- ció n de la traducció n
del transporte de los mRNP del anillo de Balbiani a travé s elF4E reemplaza a CBC unido a la caperuza 5 ́ y PABPI reemplaza a PABPII.
En un tipo de experimento que demuestra esta FIGURA 8-22 Fosforilación reversible y dirección de la exportación nucleardemRNP. Paso: la proteı́na SR de
levadura NpI 3 seunealos pre-mRNA nacientes en su forma fosforilada. Paso : cuando la poliadenilació n se produjo
restricció n, un gen que codifica un pre-mRNA con un de forma exitosa, la fosfatasa nuclear Glc7 esencial para la exportació n del mRNP desfosforila a NpI3, promoviendo
la unió n del exportador mRNP de levadura, NXF1/NXT1. Paso : el exportador mRNP permite la difusió n del
ú nico intró n que normalmente es eliminado se mutó para complejo mRNP a travé s del canal central del complejo del poro nuclear (NPC). Paso 4 la proteincinasa
citoplasmática Sky1 fosforila a Npl3 en el citoplasma causando la disociació n del exportador de mRNP y NpI3
introducirle desviaciones de las secuencias de consenso fosforilado, proba- blemente a travé s de la acció n de una RNA helicasa asociada con los filamen- tos citoplasmá ticos
NPC. El transportador de mRNA y el NpI3 fosforilado son llevados de regreso al nú cleo a travé s de los NPC. El mRNA
del sitio de corte y empalme. La mutació n de cualquiera transportado está disponible para la traducció n en el citoplasma. (De E. Izaurralde, 2004, Nat. Struct. Mol. Biol.
11:210-212. Vé ase W. Gilbert y C. Guthrie, 2004, Mol. Cell 13:201-212.)
de las bases invariantes de los sitios de corte y empalme
5 ́ y 3 ́ en los extremos del intró n, da como resultado que
los pre-mRNA son unidos por las snRNP para formar los La proteína Rev regula el transporte de los
espliceosomas; sin embargo, se bloqueó el proceso de mRNA virales no procesados
corte y empalme y los pre-mRNA se retuvieron en el
nú cleo. Por el contrario, las mutaciones de ambos sitios de Como se analizó anteriormente, el transporte de los
corte y empalme 5 ́ y 3 ́ en el mismo pre-mRNA dio como mRNP conteniendo los mRNA funcionales y maduros
resultado la exportació n del pre-mRNA no procesado, desde el nú cleo hasta el citoplasma comprenden un
mecanismo complejo, el cual es crı́tico para la ex- presió n
gé nica (vé anse las Figs. 8-21, 8-22 y 8-23). La regulació n
de este transporte teó ricamente podrı́a proporcionar
otro significado del control gé nico, aunque parece ser
relativamente raro. En efecto, los ú nicos ejemplos
conocidos de exportació n de mRNA regulado se producen
durante la respuesta celular a las condiciones (p. ej.,
choque té rmico) que causan la desnaturalizació n de
proteı́nas, o durante la infecció n viral cuando las
alteraciones inducidas por el virus en el transporte nu-
clear maximizan la replicació n viral. Aquı́ describiremos
la regulació n de la exportació n del mRNP mediada por
una proteı́na codificada por el virus de la
inmunodeficiencia humana (HIV).
proteı́nas virales; alguno de los RNA sin procesar de 9 kb los mRNP desde del núcleo. (a) Modelo de un lazo de transcripció n de cromatina y ensamblado del mRNP anillo
del Balbiani en Chironomous tentans. Los transcritos de RNA nacientes producidos a partir del DNA molde
se usa como genoma viral en los viriones progenie que se rá pidamente se asocian con proteı́nas, formando las hnRNP. El incremento gradual en tamañ o de las hnRNP refleja
la longitud creciente de los transcritos de RNA a distancias mayores desde el sitio de inicio de la transcripció n. El
modelo se reconstruyó a partir de microfoto- grafı́as electró nicas de cortes finos seriados de cé lulas de glá ndulas
desprenden por gemació n desde la superficie celular. salivales. (b) Diagrama esquemá tico de la biogé nesis de las hnRNP. Siguiendo con el procesamiento del pre-mRNA,
la partı́cula de ribonucleoproteı́na resultante es denominada como mRNP. (c) Modelo para el transporte de los
mRNP BR a travé s del complejo del poro nuclear (NPC) sobre la base de estudios de microscopia electró nica. Nó tese
que los mRNP curvados parecen desenrollarse a medida que pasan a travé s de los poros nucleares. A medida que
Puesto que los mRNA del HIV de 9 kb y de 4 kb contienen el mRNA entra al citoplasma, rá pidamente se asocia con los ribosomas, indicando que el extremo 5 ́ pasa a travé s
del primer NPC. (Parte [a] de C. Erricson y cols., 1989, Cell 56:631; cortesı́a de B. Daneholt. Partes [b] y [c] adaptado
sitios de corte y empalme, pueden ser vistos como mRNA de B. Daneholt, 1997, Cell 88:585. Vé ase tambié n B. Daneholt, 2001, Proc. Nat ́l. Acad. Sci. USA 98:7012.)
Antes de avanzar, repasemos rá pidamente los pasos en la Los micro-RNA (miRNA) se descubrieron por primera vez
expresió n gé nica en los cuales se ejerce control. En los durante el aná lisis de mutaciones en los genes lin-4 y let-
capı́tulos anteriores vimos que la regulació n de la 7 del nematodo C. elegans, que influye en el desarrollo del
iniciació n de la transcripció n y la elongació n de la organismo. La clonació n y el aná lisis de lin-4 y let-7 de tipo
traducció n en la regió n proximal al promotor, son los silvestre revelaron que ellos no codifican productos
mecanismos iniciales para el control de la expresió n proteicos, sino má s bien RNA de solo 21 y 22 nucleó tidos
gé nica en la vı́a de la expresió n gé nica DNA → RNA de longitud, respectivamente. Los RNA se hibridan a las
→ proteı́na. En las secciones anteriores de este capı́tulo, regiones 3 ́ no traducidas de los mRNA diana especı́ficos.
aprendimos que la expresió n de las isoformas de proteı́na Por ejemplo, el miRNA del lin-4, que se expresa temprano
está controlada por la regulació n del corte y empalme en la embriogé nesis, se hibrida a las regiones 3 ́ no
alternativo del RNA y la escisió n y poliadenilació n de los traducidas tanto de los mRNA del lin-14 como del lin-28
sitios de poli(A) alternativos. Aunque la exportació n en el citoplasma, reprimiendo de esta forma sus
nuclear de los mRNP total y correctamente procesados al traducciones mediante un mecanismo analizado a
citoplasma en raras ocasiones está regulada, se evita la continuació n. La expresió n del miRNA lin-4 cesa má s
exportació n de los pre-mRNP procesados tarde en el desarrollo, permitiendo la traducció n de los
inadecuadamente o remodelados de manera aberrante, y mRNA de lin-14 y lin-28 recié n sintetizados. La expresió n
tales transcritos anó malos son degradados por el del miRNA del let-7 se produce en momentos
exosoma. Sin embargo los retrovirus, incluyendo al HIV, comparables durante la embriogé nesis de todos los
han desarrollado mecanismos que permiten que los pre- animales con simetrı́a bilateral.
mRNA que retienen sitios de corte y empalme sean
exportados y traducidos. La regulació n de la traducció n de miRNA parece estar
ampliamente diseminada en todas las plantas y animales
En esta secció n se considerará n otros mecanismos de multicelulares. En los ú ltimos añ os se han aislado,
control pos-transcripcional para regular la expresió n de clonado y secuenciado RNA pequeñ os de 20-26
algunos genes. La mayorı́a de estos mecanismos nucleó tidos, de varios tejidos de mú ltiples organismos
funcionan en el citoplasma, controlando la estabilidad o la modelo. Estimaciones recientes sugieren que la expresió n
localizació n del mRNA o su traducció n en proteı́na. de un tercio de todos los genes humanos está regulada
Comenzamos con el aná lisis de dos mecanismos de por ∼ 500 miRNA humanos aislados de varios tejidos. El
control gé nico relacionados, recientemente descubiertos, potencial de regulació n de mú ltiples mRNA por un miRNA
los cuales proporcionan nuevas té cnicas poderosas para es formidable, debido a que el apareamiento de bases
la manipulació n de la expresió n de genes especı́ficos para entre el miRNA y la secuencia en los extremos 3 ́ de los
propó sitos terapé uticos y experimentales. Estos mRNA que ellos regulan no necesita ser perfecta (Fig. 8-
mecanismos está n controlados por los RNA de una hé lice, 25). En efecto, la considerable experimentació n con
cortos, de ∼ 22 nucleó tidos, llamados micro-RNA miRNA sinté ticos demostró que la complementariedad
(miRNA) y RNA de interferencia o inhibidor pequeño entre seis o siete nucleó tidos de un miRNA y su regió n 3 ́
(siRNA). Ambos forman apareamiento de bases con los no traducida del mRNA diana son cruciales para la
mRNA diana especı́ficos, ya sea inhibiendo sus selecció n de un mRNA diana.
traducciones (miRNA) o causando sus degradaciones
(siRNA). Los seres humanos expresan ∼ 500 miRNA. La La mayorı́a de los miRNA son procesados a partir de los
mayorı́a de estos se expresan en tipos celulares transcritos de la RNA polimerasa II de varios cientos a
especı́ficos en momentos particulares durante la miles de nucleó tidos de longitud, llamados pri-miRNA
embriogé nesis y despué s del nacimiento. Muchos miRNA (por transcrito primario) (Fig. 8-26). Los pri-miRNA
se pueden dirigir a má s de un mRNA. En consecuencia, pueden contener la secuencia de uno o má s miRNA. Los
estos mecanismos recientemente descubiertos miRNA tambié n son procesados a partir de algunos
contribuyen signiQicativamente a la regulació n de la intrones escindidos y a partir de las regiones 3 ́ no
expresió n gé nica. Los siRNA, involucrados en el proceso traducidas de algunos pre-mRNA. Dentro, estos
llamado interferencia por RNA, tambié n son defensas transcritos largos tienen secuencias que se pliegan en
celulares importantes contra la infecció n viral y la estructuras con forma de horquilla de ∼ 70 nucleó tidos
excesiva transposició n por parte de los transposones. de longitud, con apareamientos de bases imperfectos en
el tallo. Una RNasa nuclear especı́fica para RNA doble
FIGURA 8-25 El apareamiento de bases con los RNA dianas distingue a los miRNA y los siRNA. (a) Los miRNA
se hibridan de manera imperfecta con sus mRNA diana, reprimiendo la traducció n del mRNA. Los nucleó tidos 2 a 7
hebra llamada Drosha, actú a con una proteı́na de unió n a
de un miRNA (resaltado en celeste) son los má s importantes para seleccionar un mRNA especı́fico. (b) El siRNA se
hibrida perfectamente con su mRNA diana, causando un corte del mRNA en la posició n indicada por la flecha roja,
RNA doble hebra llamada DGCR8 en los seres humanos
desenca- denando su rá pida degradació n (Pasha en Drosophila), y corta y elimina la regió n del bucle
del precursor de RNA generando un pre-miRNA. Los pre-
miRNA son reconocidos y unidos por un transportador
nuclear especı́fico, Exportina 5, que interactú a con los
dominios FG de las nucleoporinas, permitiendo que el
complejo difunda a travé s del canal interior del complejo
de poro nuclear, como se describió antes (vé anse la Fig. 8-
20 y el Cap. 13). Una vez en el citoplasma, una RNasa
especı́fica de RNA doble hebra llamada Dicer actú a con
una proteı́na de unió n a RNA doble hebra citoplasmá tica
llamada TRBP en los seres humanos (por proteı́na de
unió n a Tar; denominada Loquacious en Drosophila), para
procesar aú n má s al pre-miRNA en un miRNA doble
hebra. El miRNA doble hebra tiene una longitud
aproximada a dos vueltas de una hé lice de RNA de la
forma A, con hebras de 21-23 nucleó tidos de largo y dos
nucleó tidos 3 ́ desapa- reados en cada extremo.
Finalmente, se selecciona una de las dos hebras para lo cual demuestra la importancia de los miRNA en la
ensamblarla en un complejo silenciador inducido por regulació n adecuada del nivel de traducció n de mú ltiples
RNA (RISC), el cual contiene un miRNA maduro de una mRNA. De los ∼ 500 miRNA humanos, el 53% parece ser
hé lice unido mediante una proteı́na Argonauta ú nico de los primates. Parece probable que los nuevos
multidominio, un miembro de una familia de proteı́nas miRNA surgieron rá pidamente durante la evolució n por
con una secuencia conservada reconocible. Diversas duplicació n de un gen pri-mRNA, seguido por la mutació n
proteı́nas Argonautas se expresan en algunos de bases que codificaba el miRNA maduro. Los miRNA son
organismos, en especial en plantas y se encuentran en particularmente abundantes en las plantas: ¡se han
distintos complejos RISC con diferentes funciones. caracterizado má s de 1,5 millones de miRNA diferentes
en Arabidopsis thaliana!
Los complejos miRNA-RISC se asocian con las mRNP
diana mediante apareamiento de bases entre el miRNA
maduro unido a Argonauta y a zonas complementarias a
las regiones 3 ́ no traducidas (3 ́ UTR) de los mRNA diana
(vé ase la Fig. 8-25). La inhibició n de la traducció n del
mRNA diana requiere la unió n de dos o má s complejos
RISC para distinguir las regiones complementarias en la
regió n 3 ́ UTR del mRNA diana. Se ha sugerido que esto
puede permitir la regulació n combinatoria de la
traducció n del mRNA mediante la regulació n separada de
la transcripció n de dos o má s pri-miRNA diferentes, los
cuales son procesados a los miRNA requeridos en la
combinació n para suprimir la traducció n de un mRNA
diana especı́fico.
Los estudios con los mRNA almacenados en ovocitos de FIGURA 8-28 Modelo para el control de la poliadenilación citoplasmáti- ca y la iniciación de la traducción.
(Izquierda) En los ovocitos inmaduros, los mRNA que contienen el elemento de poliadenilació n citoplasmá tico
Xenopus han ayudado a elucidar el mecanismo de este (CPE) rico en U tienen colas de poli(A) cortas. La proteı́na de unió n a CPE (CPEB) media la represió n de la traducció n
a travé s de las interacciones descritas, que evitan el ensamblaje de un complejo de iniciació n en el extremo 5 ́ del
tipo de control de traducció n. Los experimentos en los mRNA. (Derecha) La estimulació n hormonal de los ovocitos activa a la proteı́na cinasa que fosfori- la a CPEB,
causando la liberació n de Maskin. El factor de especificidad de corte y poliadenilació n (CPSF) luego se une al sitio
cuales los mRNA con cola corta son inyectados en los de poli(A), interactuando tanto con CPEB unida como con la forma citoplasmá tica de la poli(A) polimerasa (PAP).
Despué s de que se ha alargado la cola de poli(A), se pueden unir mú ltiples copias de la proteı́na de unió n a poli(A)
ovocitos, han demostrado que dos secuencias en sus 3 ́ citoplasmá tica I (PABPI) e interactú a con elF4G, que funciona junto con otros factores de iniciació n para unir la
subunidad ribosó mica 40S e iniciar la traducció n
UTR son necesarias para sus poliadenilaciones en el
citoplasma: la señ al poli(A) AAUAAA que tambié n es
requerida para la poliadenilació n nuclear de los pre- La degradación de los mRNA en el
mRNA y una o má s copias de un elemento de citoplasma se produce por medio de
poliadenilación citoplasmático rico en U en direcció n 5 ́. diversos mecanismos
Este elemento regulador se une a una proteína de unión a
CPE (CPEB) altamente conservada que contiene un
dominio RRM y un dominio dedo de cinc. La concentració n de un mRNA es una funció n tanto de su
velocidad de sı́ntesis como de su velocidad de
degradació n. Por esta razó n, si dos genes se transcriben a
De acuerdo al modelo actual, en ausencia de una señ al la misma velocidad, la concentració n en estado
estimuladora, CPEB se une al CPE rico en U e interactú a estacionario del mRNA correspondiente que es má s
con la proteı́na Maskin, que a su vez se une al elF4E estable será má s elevada que la concentració n del otro. La
asociado con la caperuza 5 ́ del mRNA (Fig. 8-28, estabilidad de un mRNA tambié n determina cuá n
izquierda). Como resultado, el elF4E no puede interactuar rá pidamente se puede detener la sı́ntesis de la proteı́na
con otros factores de iniciació n y con la subunidad codificada. Para un mRNA estable, la sı́ntesis de la
ribosó mica 40S, por lo que se bloquea la iniciació n de la proteı́na codificada persiste largo tiempo despué s de que
traducció n. Durante la maduració n del ovocito se fosforila la transcripció n del gen se ha reprimido. La mayorı́a de
una serina CPEB especı́fica, causando que Maskin se los mRNA bacterianos ajustan la sı́ntesis de las proteı́nas
disocie del complejo. Esto permite que las formas para acomodar cambios en el ambiente celular. La
citoplasmá ticas del factor de especificidad de corte y mayorı́a de las cé lulas en los organismos multicelulares,
poliadenilació n (CPSF) y la poli(A) polimerasa se unan al por el otro lado, existen en un ambiente bastante
mRNA de manera cooperativa con CPEB. Una vez que la constante y llevan a cabo un conjunto especı́fico de
poli(A) polimerasa cataliza la adició n de los residuos de funcio- nes durante periodos de dı́as a meses o incluso el
A, la PABPI se pueden unir a la cola de poli(A) alargada, tiempo de vida del organismo (por ejemplos, las cé lulas
llevando a la interacció n estabilizada de todos los factores nerviosas). Por consiguiente, la mayorı́a de los mRNA de
los eucariontes superiores tienen vidas medias de muchas encontrado proteı́nas de unió n al RNA especı́ficas, que se
horas. unen tanto a estas secuencias 3 ́ ricas en AU que
interaccionan con una enzima desadenilante, como con el
exosoma. Esto causa la desadenilació n rá pida y la
Sin embargo, algunas proteı́nas en las cé lulas eucariontes
posterior degradació n 3 ́ → 5 ́ de estos mRNA. En este
son necesarias solo durante periodos cortos de tiempo y
mecanismo, la velocidad de la degradació n del mRNA está
deben expresarse en picos. Por ejemplo, como se analizó
desacoplada de la frecuencia de traducció n. Por ende, los
en la introducció n del capı́tulo, ciertas molé culas de
mRNA que contienen la secuencia AUUUA pueden ser
señ alizació n llamadas citocinas, que está n involucradas
traducidos a una elevada frecuencia y tambié n
en la respuesta inmunitaria de los mamı́feros, son sinteti-
degradados rá pidamente, permitiendo que las proteı́nas
zadas y secretadas en rá fagas cortas (vé ase el Capı́tulo
codificadas se expresen en rá fagas cortas.
23). De manera similar, muchos de los factores de
transcripció n que regulan el inicio de la fase S del ciclo
celular, como c-Fos y c-Jun, son sintetizados só lo por Como se mostró en la Figura 8-29, algunos mRNA son
breves perı́odos (Capı́tulo 19). La expresió n de tales degradados por una vía endonucleolítica que no involucra
proteı́nas se produce en rá fagas cortas debido a que la la eliminació n de la caperuza o la desadenilació n
transcripció n de sus genes puede rá pidamente significativa. Un ejemplo de este tipo de vı́a es la del RNAi,
encenderse y apagarse, y sus mRNA tienen vidas medias analizada anteriormente (vé ase la Fig. 8-25). Cada
inusualmente cortas, del orden de los 30 minutos o complejo siRNA-RISC puede degradar miles de molé culas
menos. de RNA diana. Los fragmentos generados por escisió n
interna luego son degradados por exonucleasas.
Los mRNA citoplasmá ticos son degradados por una de las
tres vı́as que se muestran en la Fig. 8-29. La mayorı́a de Cuerpos P Como se mencionó anteriormente, los cuerpos
los mRNA siguen la vía dependiente de desadenilación: la P son sitios para la represió n de la traducció n de los
longitud de la cola de poli(A) disminuye gradualmente mRNA unidos por los complejos miRNA-RISC. Ellos
con el tiempo a travé s de la acció n de una nucleasa tambié n son los principales sitios de la degradació n del
desade- nilante. Cuando se ha acortado lo suficiente, las mRNA en el citoplasma. Estas regiones densas del
molé culas de PABPI no pueden unirse má s y estabilizar la citoplasma contienen la enzima que elimina la caperuza
interacció n de la caperuza 5 ́, ası́ como los factores de (Dcp1/Dcp2 en levadura), los activadores de la
iniciació n de la traducció n (vé ase la Fig. 4-24). La eliminació n de la caperuza (Dhh, Pat1, Lsm1-7 en
caperuza expuesta luego se elimina por una enzima levadura), la principal exonucleasa 5 ́ → 3 ́ (Xrn1), ası́
especı́fica (Dcp1/Dcp2 en S. cerevisiae) y el mRNA como los mRNA densamente asociados. Los cuerpos P son
desprotegido es degradado por una exonucleasa 5 ́ → 3 ́ estructuras diná micas que crecen y se reducen en tamañ o
(Xrn1 en S. cerevisiae). La eliminació n de la cola de poli(A) dependiendo de la velocidad a la cual se asocian los mRNP
tambié n torna a los mRNA susceptibles a la degradació n con ellos, la velocidad a la cual se degradan los mRNA y la
por parte de los exosomas citoplasmá ticos, que contienen velocidad a la cual los mRNP dejan los cuerpos P y
exonucleasas 3 ́ → 5 ́. Las exonucleasas 5 ́ → 3 ́ reingresan al grupo de mRNP traducidos. Los mRNA
predominan en las levaduras y los exosomas 3 ́ → 5 ́ cuyas traducciones se inhiben por apareamiento de bases
predominan en las cé lulas de mamı́feros. Las enzimas que imperfecto de los miRNA (Fig. 8-25) son los componentes
llevan a cabo la eliminació n de la caperuza y las principales de los cuerpos P.
exonucleasas 5 ́ → 3 ́ está n concentradas en los cuerpos P,
las regiones del citoplasma de densidad inusualmente
elevada.
estimulando la exportació n de los mRNP desde el nú cleo partir de las cé lulas de mé dula ó sea poco tiempo despué s de la recolecció n, o 30 minutos despué s de su incubació n
en un medio con Actinomicina D, un fá rmaco que inhibe la transcripció n. Se midió la cantidad de RNA b-globina
mediante interacció n con el mRNA exportador (vé ase la 0
usando un mé todo de protecció n con nucleasa S1 (flecha). El pa- ciente con talasemia b tenı́a mucho menos mRNA
b–globina que el paciente con el gen b-globina de tipo silvestre (− Act D). El mRNA b-globina mutante se degrado
Fig. 8-21). El aná lisis de mutantes de levadura indicó que rá pidamente cuando se inhibió la transcripció n (+ Act D), mientras que el mRNA de b-globina de tipo silvestre
permaneció estable. (c) Un modelo ac- tual de NMD. PTC, el codó n de terminació n prematuro. Norm term, el codó n
una de las proteı́nas en los complejos de unió n de exones de terminació n normal. SURF, complejo de proteincinasa SMG1, UPF1 y los factores de terminació n de la traducció n
eRF1 y eRF3. La formació n del complejo SURF lleva a la fosforilació n de UPF1 y a la asociació n de fosfo-UPF1 con el
(UPF3) funciona en la degradació n mediada por complejo UPF2-UPF3 unido a cualquiera de los complejos de unió n exó n-exó n que no fueron desplazados del mRNA
por el primer ribosoma pionero en traducir el mensaje. Esto lleva a la asociació n del mRNA que contiene PTC con
mutaciones sin sentido. En el citoplasma, este cuerpos P, eliminando la cola de poli(A) y la degradació n del mRNA.
FIGURA 8-33 Alternancia del tipo de apareamiento en células de leva- dura haploides. (a) La divisió n por
gemació n forma una gran cé lula madre (M) y cé lulas hijas pequeñ as (D), ambas de las cuales tienen el mismo tipo
de apareamiento que la cé lula original (á en este ejemplo). La cé lula madre puede alternar el tipo de apareamiento
durante G1 del siguiente ciclo celular y luego se vuelve a dividir, produciendo cé lulas del tipo de apareamiento
opuesto (a en este ejemplo). El cambio depende de la transcripció n del gen HO, que se produce solo en ausencia de
la proteı́na Ash1. Las cé lulas hijas má s pequeñ as, que producen la proteı́na Ash1, no pueden cambiar; despué s de
crecer en tamañ o en la interfase, se dividen para formar una cé lula madre y una cé lula hija. (b) Modelo para la
restricció n de la alternancia del tipo de apareamiento para las cé lulas madres en S. cerevisiae. La proteı́na Ash1 evita
que una cé lula transcriba el gen HO cuya proteı́na codificada inicia el reordenamiento del DNA que produce la
alternancia del tipo de apareamiento de a a a o de a a a. La alternancia se produce ú nicamente en la cé lula madre,
despué s de que se separa de una cé lula hija que brotó recientemente, debido a que la proteı́na ASH1 está presente FIGURA EXPERIMENTAL 8-34 Transporte de las partículas desde una célula madre al interior de un brote.
solo en la cé lula hija. La base molecular para esta localizació n diferencial de Ash1 es el transporte unidireccional (a) Se modificaron gené ticamente cé lulas de levadura para que expresen mRNA ASH1 con sitios de unió n para
del mRNA de ASH1 al brote. Una proteı́na conectora, She2, se une a secuencias especı́ficas 3 ́ no traducidas en el la proteı́na ëN del bacterió fago en su regió n 5 ́ no traducida y un mRNA IST2 con sitios de unió n para la proteı́na
mRNA de ASH1 y tambié n se une a la proteı́na She3. Esta proteı́na a su vez se une a un motor de miosina, Myo4, que MS2 de la cubierta del bacterió fago en su regió n 3 ́ no traducida. Tambié n se expresó en las mismas cé lulas una
se mueve a lo largo de los filamentos de actina hacia el interior del brote. fusió n de proteı́na verde fluorescente con la proteı́na ëN (GFP-ëN) y una fusió n de proteı́na roja fluorescente con la
proteı́na de la cubierta MS2 (RFP-MS2). En otros experimentos, se demostró que estas proteı́nas de unió n a
secuencias especı́ficas de RNA marcadas se unen a sus propios sitios de unió n especı́ficos, modificados
gené ticamente para los mRNA de ASH1 e IST2 y no a los sitios de unió n de los demá s. Ambas proteı́nas marcadas
con fluorescencia tambié n contenı́an una señ al de localizació n nuclear, de manera tal que las proteı́nas
fluorescentes que no se unieron a sus sitios de unió n de alta afinidad en estos mRNA fueron transportadas a los
nú cleos a travé s de los complejos del poro nuclear (vé ase el Cap. 13). Esto fue necesario para evitar una alta
fluorescencia del exceso de GFP-ëN y RFP-MS2 en el citoplasma. A la derecha, se visualizó
de manera independiente a GFP-ëN y RFP-MS2 mediante el uso de excitació n lá ser con milisegundos de alternancia
de GFP y RFP. (b) Se muestran imá genes de un video de cé lulas fluorescentes. El nú cleo al lado de la vacuola grande
en la cé lula madre cerca del centro de las microfotografı́as, ası́ como tambié n los nú cleos en las cé lulas vecinas, se
observaron por fluorescencia verde y
roja como se muestra con las flechas en la parte superior y central. En la parte inferior se muestra una combinació n
de dos imá genes, que tambié n indica el tiempo transcurrido entre las imá genes. Una partı́cula de RNP conteniendo
ambos mRNA ASH1 con sitios de unió n ëN y el mRNA IST2 con sitios de unió n MS2, se observó en el citoplasma de
la cé lula madre en la columna izquierda de las imá genes (flecha). La partı́cula incrementó su intensidad entre 0,00
y 46,80 segundos, lo cual indica que hay má s de estos mRNA unidos a la partı́cu- la RNP. La partı́cula RNP se
transportó al brote entre los 46,80 y 85,17 segundos y luego se localizó en el extremo del brote. traducció n o degradació n de muchos mRNA en el
citoplasma.
FIGURA EXPERIMENTAL 8-35 Un mRNA neuronal específico se localiza en las sinapsis. Se cultivaron neuronas
sensitivas de la babosa de mar Aplysia califórnica con neuronas motoras diana, de manera tal que los procesos de
las neuronas sensitivas formen sinapsis con los procesos de las neuronas motoras. La microfotografı́a a la izquierda
• La degradació n mediada por mutaciones sin sentido y
muestra los procesos de la neurona motora visualizados con un colorante azul fluorescente. La GFP-VAMP (verde)
se expre- só en las neuronas sensitivas y marca la localizació n de las sinapsis formadas entre los procesos de
otros mecanismos de vigilancia del mRNA evitan la
neurona sensitiva y motora (flechas). La microfotografı́a de la derecha muestra fluorescencia roja de la hibridació n
in situ de una sonda de mRNA antisensorina. La sensorina es un neurotransmisor expresado por la neurona
traducció n de los mRNA procesados de manera
sensitiva sola: los procesos de la misma no se visualizan en esta prepa- ració n, pero se encuentran adyacentes a los
procesos de la neurona motora. El resultado de esta hibridació n in situ indica que el mRNA sensorina se localiza en
inadecuada que codifican proteı́nas anó malas, las cuales
las sinapsis [ podrı́an interferir con el funcionamiento de las proteı́nas
normales correspondientes.
CONCEPTOS CLAVE de la sección 8.4
Mecanismos citoplasmáticos de control • Muchos mRNA son transportados a localizaciones
postranscripcional subcelulares especı́ficas mediante proteı́nas de unió n a
RNA de secuencia especı́fica que se unen a secuencias de
localizació n, las cuales en general se encuentran en la 3 ́
• La transcripció n se puede reprimir mediante los micro- UTR. Estas proteı́nas de unió n al RNA luego se asocian
RNA (miR- NA), que forman hı́bridos imperfectos con las directamente o a travé s de proteı́nas intermediarias con
secuencias en la regió n 3 ́ no traducida (UTR) de mRNA proteı́nas motoras que transportan los grandes complejos
diana especı́ficos. RNP, con muchos mRNA que tienen la misma señ al de
localizació n sobre Qibras de actina o microtú bulos hasta
localizaciones especı́Qicas en el citoplasma.
• El fenó meno relacionado de interferencia por RNA, que
probablemente evolucionó como un sistema de defensa
primitivo contra virus y transposones, condujo a la 8.5 Procesamiento del rRNA y tRNA
degradació n de los mRNA que forman hı́bridos perfectos
con los RNA de interferencia cortos (siRNA).
Aproximadamente el 80% del RNA total en las cé lulas de
mamı́fero en crecimiento rá pido (p. ej., cé lulas HeLa
• Tanto los miRNA como los siRNA contienen 21-23 cultivadas) es rRNA y el 15% es tRNA; ası́, el mRNA que
nucleó tidos, son generados a partir de molé culas codifica proteı́na constituye solo una pequeñ a porció n del
precursoras má s largas y son unidos por una proteı́na RNA total. Los transcritos primarios producidos a partir
Argonauta, ensamblá ndose en un complejo multiproteico de la mayorı́a de los genes rRNA y de los genes de tRNA,
silenciador inducido por RNA (RISC) que reprime la como los pre-mRNA, son procesados exhaustivamente
traduc- ció n de los mRNA diana o los corta (vé anse las para dar las formas funcionales maduras de estos RNA.
Figs. 8-25 y 8-26).
que este DNA comparte diversas propiedades en todos los partir del nucléolo de un ovocito de rana. Cada “pluma” representa las mú ltiples molé culas de pre-rRNA
asociadas con pro- teı́nas en un complejo pre-ribonucleoproteı́na (pre-rRNP) saliendo de una uni- dad de
eucariontes. Primero, los genes de pre-rRNA está n transcripció n. Nó tese la “protuberancia” densa en el extremo 5 ́ de cada pre-RNP naciente que se cree es un
proceosoma. Las unidades de transcripció n de pre-rRNA está n dispuestas en tá ndem, separadas por regiones
organizados en disposiciones en tá ndem largas, espaciadoras de cromatina nucleolar no transcritas. (Cortesı́a de Y. Osheim y O. J. Miller, Jr.)
esencial que ocurre durante la formació n de las involucrado en la 2 ́-O-metilació n de ribosa. Las secuencias en este snoRNA se hibridan a dos regiones diferentes en
el pre-rRNA, dirigiendo la metilació n en los sitios indicados. (b) Los snoRNA caja H + ACA se pliegan en dos tallos
subunidades ribosó micas. lazo con protuberancia de hé lice sencilla internas en los tallos. El pre-rRNA se hibrida a las protuberancias de hé lice
sencilla, demarcando un sitio de seudouridilació n. (c) Conversió n de uridina a seudouridina dirigida por los snoRNA
caja H + ACA de la parte (b)
FIGURA 8-43 Los cuerpos nucleares son diferencialmente permeables a las moléculas en el centro del
nucleoplasma. Cada par de panel muestra una zona ú nica del nú cleo de ovocito de Xenopus vivo, que fue
previamente inyectado con dextrano fluorescente de la masa molecular indicada (3-2 000 kDa). Cada secció n del
panel superior es una imagen confocal en la cual la intensidad de fluorescencia es una medida de la concentració n
de dextrano (p. ej., las zonas oscuras muestran regiones donde se ha excluido el dextrano). Cada secció n del panel
inferior es una imagen de contraste por interferencia diferencial del mismo campo. Las puntas de flecha abiertas
indican los nuclé olos, las puntas de flechas rellenas muestran los cuerpos de Cajal (CB) con las motas nucleares
adheridas má s grandes en los ovocitos de Xenopus que en la mayorı́a de las cé lulas somá ticas. Los dextranos de bajo
peso molecular (p. ej., 3 kDa) penetran casi por completo los CB, pero son má s excluidos de las motas nucleares y
los nuclé olos. La exclusió n del dextrano aumenta con la masa molecular. Barra = 10 um.
• Aproximadamente 150 snoRNA, asociados con
proteı́nas en las snoR- NP, forman apareamientos de
bases con sitios especı́ficos en el pre-rRNA donde dirigen
la metilació n de ribosas, la modificació n de uridina a
seudouridina y la escisió n en sitios especı́ficos durante el
procesamiento del rRNA en el nucleolo.
• Todas las especies de molé culas de RNA se asocian con
proteı́nas en varios tipos de partı́culas de
ribonucleoproteı́na, ambas en el nú cleo y despué s de la
exportació n al citoplasma.
CLASE 1
GENERALIDADES
SISTEMA INDUCIBLES
• La transcripción de los genes con la RNA polimerasa con σ54 se regula por
potenciadores o intensificadores localizados entre 80 y 160 pb corriente arriba
de +1.
• La proteína NtrC, reguladora de nitrógeno, actúa sobre el gen glnA que codifica
la enzima glutamina sintetasa y forma glutamina a partir del ácido glutámico y el
amoniaco.
• RNA polimerasa σ54 se une al promotor glnA y debe ser activada por la proteína
simérica NtrC la cual, a su vez ha sido accionada por la cinasa NtrB.
• Con niveles bajos de glutamina, NtrB fosforila a NtcC, esta se potenciador
corriente arriba del promotor de glnA.
• RNA polimerasa σ54 unida la promotor forma un bucle con las hebras de DNA.
• NtrC tiene actividad ATPasa, una vez fosforilada por NtrB hidroliza el ATP lo
que suministra energía para la separación de las hebras de DNA, iniciando la
transcripción.
• NtrC y NtrB son proteínas sensoras de histidina.
• En concentraciones altas de glutamina, esta se une al dominio sensor de NtrB
que inhibe la actividad de histidina cinasa.
• El dominio regulador de NtrC bloquea al dominio de unión de DNA a partir del
potenciador glnA.
• En concentraciones bajas de glutamina, esta se disocia del dominio sensor de
NtrC activado el dominio histidina cinasa transmisor de NtrB que transfiere el
fosfato γ del ATP a un residuo de histidina en ese dominio.
• Fosfohistidina transfiere el fosfato a un residuo de ácido aspártico en NtrC
desenmascarando su dominio de unión a DNA para que se ligue al potenciador
del glnA.
CLASE 1
GENERALIDADES
CAJAS TATA
• TATAA/TA/G
• -25 a-35
• TDFIID reconoce la caja TATA
• Sus mutaciones afectan la velocidad de la transcripción
• Un cambio en su posición altera la localización del sitio de iniciación.
CAJA CAAT
• C/TC/TANT/AC/TC/T.
• Justamente sobre +1
• TDFIID reconoce a Inr.
• N= cualquier base purica o pirimidinica.
• Es una secuencia que puede o no estar presente.
• -80 a -100.
• Es reconocida por algunos factores de transcripción.
• G/AG/ACCAATCTA/G.
HOMEOBOX O HOX
• Los genes HOX a través de sus proteínas confieren identidad espacial o posición
inequívoca a las célula del cuerpo.
• Controlan el desarrollo del eje antero- posterior y cabeza-cola
• Después de la formación de los segmentos embrionarios determinan el tipo de
estructuras que se formarán en un segmento determinado.
• Son genes altamente conservados durante la evolución.
• Se expresan en el desarrollo embrionario y en la vida posnatal
PAX O CAJA PAREADA
• Los genes PAX a través de sus proteínas actúan en el desarrollo de los órganos
de los sentidos y del sistema nervioso central.
• Determinan la diferenciación celular de las células epitelio-mesenquimatosas.
• Tienen un motivo par o pareado que se une al DNA.
TBX O CAJA T
HETEROCROMATINA Y EUCROMATINA
LISINAS
REMODELACIÓN DE LA CROMATINA
• El complejo remodelador de la cromatina SW1/SNF acción helicasas y usa ATP
para su función.
• Obliga al DNA unido al octámero de histonas a disociarse.
• Los nucleosomas se translocan por deslizamiento y dejan al DNA libre para que
puedan unirse los factores de transcripción.
• Al dominio de activación se le unen además acetilasas de histonas.
REMODELACIÓN DE LA CROMATINA
MEDIADOR
• Abierta la cromatina se une un complejo multiprotéico coactivador o mediador.
• Esta unión estimula el ensamblaje del complejo de iniciación en el promotor.
• La cabeza y el intermedio del complejo interactúan con las subunidades RBP3,
4, 7 y 11 de la pol-ll.
• Los activadores unidos a los potenciadores o a los elementos proximales de los
promotores pueden interactuar con el mediador que está anclado a un promotor.
• Esto se debe a la flexibilidad del DNA que produce bucles entre las diversas
estructuras.
RECEPTORES NUCELARES
ELEMENTOS DE RESPUESTA
• Son secuencias del DNA que unen diversos receptores nucleares.
• Las secuencias consenso son repeticiones invertidas de 6 pb separadas por 3 pb
donde los receptores se ligan como dímeros asimétricos.
• La especificidad de respuesta a diferentes hormonas de los distintos receptores
está determinada por el espaciamiento entre las secuencias consenso.
RECEPTORES HETERODIMÉRICOS
RECEPTORES HOMODIMÉRICOS
• En ausencia de ligando, se encuentran en el citoplasma unidos a un complejo de
proteínas como Hsp90.
• Cuando el ligando se une los receptores, los libera del complejo proteico y les
permite translocarse al núcleo.
• Se ligan con orientación invertida al receptor nuclear.
• Activan la transcripción interactuando con los complejos remodeladores de
cromatina, la histona acetilasa y el mediador.
Genes y proteínas de choque térmico
• El estrés celular causa desnaturalización de las proteínas.
• Las moléculas pierden su conformación funcional nativa.
• Los chaperonas y su familia de chaperoninas de 60 y de 70 kDa ayudan las
proteínas desnaturalizadas a conformación funcional. recuperar su
• Si las proteínas desnaturalizadas no son reparadas se tornan insolubles formando
cuerpos de inclusión intracelular.
• Las chaperonas son codificadas por los genes de choque térmico o de respuesta
al estrés
• En las células diferenciadas los promotores con islas CpG tiene 5-metilcitosinas
• Las citosinas se metilan de novo por las DNA metiltransferasas DNMT3ay
DNMT3b.
• Los patrones de metilación se transmiten en la replicación por acción de las
metiltransferasas de mantenimiento ubicuas DMTI
• A las islas CpG 5-metiladas se asocian proteinas de unión a metil-CpG (MBD).
• MBD tienen afinidad por las histonas desacetiladas El complejo de islas CpG 5-
metiladas-MBD-Histonas desacetiladas reprime los complejos de remodelación
de la cromatina, promueve su condensacion y origina la represión de la
transcripción
• El complejo de islas CpG 5-metiladas-MBD-Histonas desacetiladas reprime los
complejos de remodelación de la cromatina, promueve su condensacion y
origina la represión de la transcripción
CLASE 3 mRNA
miRNA Y siRNA
CAPERUZA 5
• Cuando el transcrito primario de mRNA alcanza una longitud de -25
nucleótidos, se añade al extremo 5, una caperuza de ribosas con
guanina 7 metilada
• Esto protege a la molécula de las 5- exoribonucleasas nucleares y
citoplasmáticas
• Una subunidad de la enzima dimérica formadora de caperuza elimina
el fosfato y del extremo 5 del RNA naciente.
• Otro dominio de la subunidad transfiere el resto del GMP del GTP al
5 difosfato del transcrito naciente.
• El enlace es guanosina 5-5 trifosfato
• Enzimas metiladoras transfieren metilos desde la S-
adenositmetionina al N. de la guanina
• Se metilan los OH 2 de las 2 primeras ribosas en el extremo 5' del
RNA
• La enzima dimérica formadora de caperuza se asocia al dominio
carboxilo terminal (CTD) fosforilado por TFIIH en las serinas 5 de la
pol-IL
• La elongación inicial del RNA es lenta debido que está unido el
factor de elongación negativa o NELF a la pol-ll.
• Cuando se ha completado la formación de cap5' NELF se libera por
acción de CTD fosforilado y DISF que se fosforilo por acción de
proteincinasa CDK9-ciclina T.
• Pol-ll entra en modo rápido de elongación alejándose del promotor.
ASOCIACIÓN DEL PRE-MRNA A HNRNP
• Evitan que los pre-mRNA forme una estructura secundaria corta por
apareamiento de bases complementarias.
• hnRNP A1, Cy D se unen preferencialmente con pre-mRNA con secuencias
ricas en pirimidinas en 3 de los intrones
• Otras son específicas para corte y empalme o corte y poliadenílación.
• Algunas son exclusivamente nucleares, otras se transportan al citoplasma junto a
los mRNAs.
RPM O RNP Y RBD DE LAS HNRNP
• Dominio de reconocimiento RRM o RNP al RNA:
• Dominio de unión al RNA: RBD.
hnRNP
• La G del 5' del intrón se une a la A del sitio de ramificación mediante un enlace
2-5' fosfodiester.
• Intervienen nRNA+proteínas.
• Forman snRNP ricos en uraciles: U1, U2, U4, U5, U6.
• U1 tiene secuencias complementarias al punto de ramificación.
• 02 sobresale" y permite que su hidroxilo 2' participe en la primera reacción.
ESPLICEOSOMA
• Es un complejo ribonucleoproteico.
• Se aparean bases del snRNA U1 en el 5' del intrón.
• El factor 1 del espliceosoma SF1 se une a la A de la ramificación. El factor
asociado a U2 U2AF se junta al tramo de pirimidinas corriente abajo de A y al
AG del 3' del intrón.
• snRNP U2 se aparea con la región de ramificación y se libera SF!
• Se forma tri-snRNP = U4/U6/US.
• Tri-snRNP se junta a U1/U2/pre-mRNA
• Se libera snRNP Uty U4.
• Se cataliza la primera reacción con el enlace 2-5' en la A de la ramificación
• Se hace la segunda reacción uniendo los dos exones 3-5.
• Se libera el intrón asociado a snRNP
• Se suelta el intrón en forma de lazo y es degrado por una enzima desramificante.
MRNA
• Un grupo especifico de proteinas hnRNP permanecen unidad al mRNA
procesado aproximadamente a 20 nucleótidos del 5 de la unión exón-intrón
formando un complejo de unión al exon
• Se adhiere el factor de exportación de RNA REF, que llevará los mRNP al
citoplasma.
• Al complejo se asocian proteínas que degradaran los mRNA mal procesados,
• Esto se llama decaimiento mediado por secuencias sin sentido.
• Hay intrones con AUS y AC3 que se procesan de manera similar.
LAS PROTEINAS SR
POLIADENILACIÓN
• Señal para la poliadenilación: secuencia rica en GU o solo en U, dentro de los 50
nucleótidos de corte
• La simplekina hace de plataforma para que se unan
• CPSF o factor de especificidad de corte y poliadenilación. Se une en forma
inestable con la secuencia AAUAAA en dirección 5
• CStF factor estimulante de corte Proteina heterodimérica que interactua con GU
• Factores de corte CF1 que es heterotetramérico y el heterodimerico CFI
• La poli(A) polimerasa=PAP se une al complejo antes de que ocurra la escisión
para colocar A.
Tras la escision:
• Adición lenta de 12 primeros residuos de A mediante la acción de PAP
• Adición rápida de 200 a 250 residuos de A por la acción la proteina de
unión a poli(A) con mo-vos RRM-PABPIL
PABPII también:
• Señala a la poli(A) polimerasa para que termine el proceso.
• Es esencial para exportar el mRNA al citoplasma
HISTONAS
• El enlace fosfodiester en 2-5 del intrón eliminado es hidrolizado por una enzima
desrramificante para producir una molécula lineal
• Entonces, el complejo proteico de 11 exonucleasas con helicasas que forman el
exoxoma, hidroliza base a base los intrones en dirección 3'-5.
• Las helicasas del complejo interrumpen el 4 apareamiento de bases y la
interacción RNA- proteína.
• Los exoxomas degradan los pre-mRNA mal procesados mediante una subunidad
PM-Scl de 100 kD.
CLASE 3 CORTE Y EMPALME ALTERNATIVO
• El gen sex-lethal tiene dos promotores, uno temprano (PE) y uno tardio (PL).
• PE se activa, durante el periodo inicial de la embriogenesis. en las hembras, pero
no en los machos y produce una proteína Sxl que activará a PL para que
produzca una Sxl funcional.
• En los machos, en el periodo de embriogénesis tardía, se activa PL y forma una
proteina truncada.
• Sxl temprana se une cerca del 3' del intrón entre el exón 2 y 3.
• Esto impide que se forme el complejo de U2AF/U2/snRNP.
• El complejo Ul/snRNP del 3' del exón 2. en el sitio denominado silenciador de
corte y empalme, se ensambla con U2/snRNP se une al punto de ramificación
del intrón entre los exones 3 y 4.
• El corte se lleva el exón 3 que contiene una secuencia de parada de lectura de la
proteína por lo que el transcrito final es funcional y permite un buen empalme
del gen transformer.
LOS REPRESORES Y ACTIVADORES DEL PROCESO DE CORTE Y EMPALME
CONTROLAN ESTE PROCESO EN SITIOS ALTERNATIVOS
• Las mutaciones del gen Dscam interfieren con las sinapsis durante el vuelo.
• Dscam contiene 95 exones procesados de maneras alternativa.
• Las isoformas pueden ser aptas o no para mantener las sinapsis.
EDICIÓN DEL RNA DE APOB
hnRNP Y NUCLEOPORINAS
• Los mRNA procesados permanece unidos a hnRNP formado los complejos
mRNP nucleares grandes.
• Para salir al citoplasma a través del CPN se unen a exportadores de mRNP
• Estos exportadores son proteinas heterodiméricas que contienen una subunidad
grande o factor de exportación nuclear 1 = NXF1 y una subunidad pequeña o
transportador de exportación nuclear 1 = NXT1
NXF1-mRNP-RNA
LEVADURA
• Si el mRNP naciente no está correctamente procesado, no es reconocido por la
fosfatasa que desfosforila al Np13, impidiendo la exportación de mRNP al
citoplasma.
• La fosfatasa funciona como control de calidad.
• En el citoplasma Npl3 es fosforilada por una protéincinasa causando su
disociacion de mRNP y sus exportadores.
• Todo este proceso aumenta la concentración de complejos mRNP-exportador
mRNP en el núcleo favoreciendo, por gradientes de concentración, mayor
exportación hacia el citoplasma.
EXOSOMA
RETROVIRUS: VIH
• El DNA del retrovirus se forma por copia del RNA a través de el "complejo
de preintegración con acción retr transcriptasa
• Se estructura en el citoplasma de la célula nfectada y es responsable de la
transcripción reversa y del transporte al núcleo
• El RNP contiene al ARN genómico junto a las proteina NC y MA así como
las enzimas virales RT e IN 29
• Ese DNA se integra al DNA del linfocito T CD4 formando el provirus.
• El provirus contiene una unidad de transcripción que se transcribe a un pre-
mRNA mediante la RNApol- del CD4
• El pre-mRNA puede ser cortado empalmado de forma alternativa
• mRNA no procesado de 9 kb.
• mRNA de 4 kb por eliminación de un intrón
• mRNA de 2 kb por eliminación de dos o más intrones.
• Los RNA son transportados al citoplasma y traducidos a proteínas virales
• Algunos RNA no procesados se usan como viriones progenie que se
desprenden por gemación de la superficie de a célula
• Varios retrovirus han desarrollado una secuencia denominada elemento de
transporte constitutivo CTE que se une al exportador m- RNP NXF1/NXT1
para exportar los RNA incompletamente procesados.
• HIV, en cambio, a través de sus mRNA de 2 kb codifica una proteína Rev
que se une a elementos de respuesta Rev o RRE de su propio RNA
• Rev tiene una secuencia rica en leucinas que interactúa con la exportina 1.
• Todas estas interacciones permiten el transporte desde el núcleo al
citoplasma de los RNA más grandes
CLASE 4
miRNA-siRNA
miRNA
miR133 EN MIOBLASTOS
INDEPENDIENTE DE DESADENILACIÓN
CUERPOS P
Traduccion eucariote:
• Unión del complejo de iniciación elF4E a cap5.
• La concentración de elF4E activa es regulada por las proteínas de unión a elF4E-
4E-BP que inhiben la interacción del factor con cap5'.
• 4E-BP es fosforilada por mTOR y libera a elF4E estimulando el inicio de la
transcripción.
• mTOR fosforila a la proteincinasa 56K para que active a S6 en la unidad
ribosómica pequeña.
• Esto incrementa la velocidad de la síntesis proteica.
mTOR activa:
• La traducción de los mRNA con cadenas de pirimidinas en UTRS' =
mRNA TOP que codifican proteinas ribosomales y factores de
elongación de la traducción.
• Al factor de transcripción de RNA polimerasa 1= TIF-1A que estimula la
traduccion de un precursor de rRNA largos.
• A proteincinasas para que fosforilen a MAF1 que reprime en el núcleo, la
acción de RNA polimerasa III. MAF! fosforilado es transportado al
citoplasma, liberando a la polimerasa.
• A 2 activadores de RNA polimerasa li que estimulan la transcripción de
genes de proteínas ribosomicas y factores de traducción.
• El procesamiento del precursor de rRNA
• mTOR está regulada por una proteína G monomérica pequeña de la
familia Ras llamada Rheb.
• Pheb unida a GTP se une a mTOR induciendo un cambio
conformacional que estimula la actividad cinasa de mTOR.
• Rheb es regulada por el complejo heterodimérico de TSC1/TSC2,
involucradas es esclerosis tuberosa.
• TSC1 codifica la hamartina (9q34) y TSC2, la tuberina (16p13)
TSC1/TSC2 es una proteína activadora de la GTPasa de
• Rheb cambia el complejo Rheb-GTP a Rheb-GDP.
• Rheb-GDP inhibe a mTOR.
Via TOR-target of rapamycin
CINASAS ELF2
• GCN2
• control general no desreprimible 2.
• PKR:
• proteincinasa activada por RNA.
• HRI:
• inhibidor hemiregulado.
• PERK
• cinasa pancreática elF2.
Genes pre-rRNA
GENES PRE-RRNA
SNORNA U3-PROCESOMA
RIBOSOMAS
INTRONES GRUPO 1 Y 2
TRNA
SPECKLES
- Gránulos intercromáticos
- Notables cuando se inhibe procesamiento de RNA
• 240 proteinas
• RNA-splicing processing
• Cuerpos de Cajal
- 1 a 10 por dominio intercromosomal
- Cuerpos espirales (coiled), hebras enredadas
- 1 micrometro de diámetro
- Poseen factores de procesamiento del RNA mensajero.
• Se dispersan cuando se inhibe transcripcion y procesamiento de RNA
• Prominentes en celulas de crecimiento rapido y con altos niveles de expresión
genética
1 2 3 # DOMENICA MARTINA DELGADO BARAHONA
&
+ Q0660-09-N01
, % Mis cursos CBS3: BIOLOGÍA MOLECULAR - P4606-TEÓRICO-Q0660-09-N01 Clase 5 Prueba 5 $
"
Complejos heterodiméricos
Acción coordinada
Unión cooperativa
Respuesta incorrecta.
La respuesta correcta es:
Unión cooperativa
Pregunta 2 El gen SALL1 interviene en el desarrollo normal del intestino, los riñones, los miembros y:
Finalizado
Se puntúa 1 Páncreas
sobre 1
Oídos
Marcar
pregunta Sistema nervioso
Hígado
Corazón
Respuesta correcta
La respuesta correcta es:
Oídos
Se puntúa 1 Trifosfatados
sobre 1
Monofosfatados
Marcar
pregunta Sólo a adenosina trifosfatada
Mono o difosfatados
Mono o trifosfatados
Respuesta correcta
La respuesta correcta es:
Trifosfatados
Respuesta incorrecta.
La respuesta correcta es:
Separar las hebras de DNA
Partícula de reconocimiento
Control de la traducción
Respuesta correcta
La respuesta correcta es:
Corte y empalme
Finalizar revisión
Actividad previa
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◀ Examen parcial 1
Los derechos de diseño, contenido y metodología son de uso exclusivo de la Pontificia Universidad Católica del Ecuador,
queda prohibida su reproducción parcial o total.
Contacto Soporte
+ Q0660-09-N01
, % Mis cursos CBS3: BIOLOGÍA MOLECULAR - P4606-TEÓRICO-Q0660-09-N01 Clase 6 Prueba 6 $
"
OTC-4
Tsix
Respuesta incorrecta.
La respuesta correcta es:
XIST
Respuesta correcta
La respuesta correcta es:
Son nucleares
Pregunta 3
El complejo remodelador de la cromatina SW1/SNF tiene acción:
Finalizado
Se puntúa 1
sobre 1
Polimerasa
Marcar
pregunta Helicasa
Acetilasa
Topoisomerasa
Metilasa
Respuesta correcta
La respuesta correcta es:
Helicasa
Pregunta 4
Los HSF mantienen a las HSP:
Finalizado
Se puntúa 0
sobre 1
Activas en el citoplasma
Marcar
pregunta Ancladas al DNA
Inactivas en el citoplasma
Activas en el núcleo
Respuesta incorrecta.
La respuesta correcta es:
Inactivas en el citoplasma
Pregunta 5 Se forman levaduras diploides que no pueden aparearse cuando hay mutaciones en:
Finalizado
αHML y aHMR
UME6 y SIR2
Respuesta correcta
La respuesta correcta es:
αHML y aHMR
Finalizar revisión
Actividad previa
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◀ Prueba 5
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queda prohibida su reproducción parcial o total.
Contacto Soporte
+ Q0660-09-N01
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"
UTR3'
Caperuza 5'
Respuesta correcta
La respuesta correcta es:
UTR3'
snoRNA
Respuesta correcta
La respuesta correcta es:
snoRNA cajas C+D
Pregunta 3 miR-133:
Finalizado
Se induce en:
Se puntúa 1
sobre 3 Elimina la traducción de:
RISC
Dicer
PTB
Mioblastos diferenciados
Isoformas proteicas
Ninguna proteína
Mioblastos en diferenciación
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Actividad previa
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◀ Prueba 7
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"
Marcar
Intestinal
pregunta
Pregunta 2
Los iRNA producen Transposones de los RNA codificados por Traducción en los
Finalizado
eucariotes.
Se puntúa 0
sobre 2 Núcleo Inhibición Degradación Estabilidad
Marcar
pregunta Mitocondria
Respuesta incorrecta.
La respuesta correcta es:
Los iRNA producen [Degradación] de los RNA codificados por [Transposones] en los
eucariotes.
Se puntúa 1 Neutras
sobre 1
Apolares
Marcar
pregunta Hidrófobas
Hidrófilas
Polares
Respuesta correcta
La respuesta correcta es:
Hidrófilas
Finalizar revisión
Actividad previa
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◀ Prueba 6
Los derechos de diseño, contenido y metodología son de uso exclusivo de la Pontificia Universidad Católica del Ecuador,
queda prohibida su reproducción parcial o total.
Contacto Soporte
CUERPOS NUCLEARES DE LA
LEUCEMIA PROMIELOCITICA:
Son sitios de ensamblaje y modificación
de complejos proteicos encargados de la
reparación y de inducción de la
APOPTOSIS. Por ejemplo P53 es
modificada mediante fosforilación y
acetilación en este lugar . En estos sitios
también se modiMcan y controla la
actividad de ciertas proteínas mediante la
adición de la proteína SUMO 1 que suele
inhibir a las proteínas que se unen a ella
Cuando comienza a salir el transcrito se Las proteínas que se mantiene unidos al arn
añade el casquete 5’. Se da gracias a que al mensajero durante todo su estadio en la
inicio la Pol 2 tiene una actividad lenta célula se denominan PARITUCLAS DE
gracias a la unión del NELF y DSIF. Cuando RIBONUCLEOPROTEINA
se llega a los 25 nucleótidos se comienza a HETEROGENEAS (hnRNP) que contienen
formar el casquete. PROCESO: arn heterogéneo nuclear (pre ARN
mensajero unido a otros arn nucleares).
La enzima dimerica encargada es la Contribuyen a los proceso del corte y
FORMADORA DEL CAPUCHON, que empalme, poli adenilizacion y la exportación
primer se une al CTD fosforilado por TF2H de arn al citoplasma. Las proteínas HnRNP
del RTRB 1 de la POL 2. Una vez que se une tiene dominios de unión al ARN y dominios
la enzima se activa, esta reconoce el extremo para interactuar con otras proteínas
5’ trifosfato del arn naciente (es trifosfato
porque antes de el no hubo un nucleótido FUNCIONES DE LAS PROTEINAS hnRNP:
para formar un enlace fosfoester), en donde
su unidad FOSFO HIDROLASA RETIRA Gracias a la unión de estas proteínas, el pre
el fosfato Y (el ultimo fosfato). Luego una ARNm se mantiene de manera uniforme y se
GUANIL TRANSFERASA trae un GMP evita la creación de horquillas con bases
para que su extremo 5’ se una con el extremo complementaria en el ARN , permitiendo
5’ del arn. Luego se metila el carbono 7 de que las proteínas que actúen en su
preparación puedan actuar sin ningún EL PROCE DE CORTE Y EMPALME
problema. Los HnRNp tienen diferentes SE PRODUCE EN SECUENCIAS
zonas de unión al pre ARN: CORTAS, CONSERVADAS EN LOS
PRE-ARNm A TRAVES DE DOS
HnRNP A1, C, D: interactúan con regiones REACCIONES DE
ricas en pirimidinas (uracilo y citosina) de TRANSESTERIFICACION.
los extremos 3’ de los intrones. Tambien
otras se unen a las regiones que permiten Para que se el arn m funcional maduro se
identificar donde se debe realizar le corte y deben eliminar los intrones y los exones se
empalme para eliminar intrones. Y otras se deben unir, proceso conocido como CORTE
ha visto que ayudan al transporte hacia el y EMPALME. Cuando se trata de un
citosol del ARN. transcrito corto, primero se da la agregación
de la cola poli A y luego se realiza el corte y
MOTIVOS DE UNION AL ARN: Son las empalme. En cambio, cuando es un
regiones de los HnRNP que se unen al ARN, transcrito largo el corte y el empalme se da
llamados también RPM. Tienen el antes de que se complete la transcripción
generalmente 80 aminoácidos y de estos del ARN, es decir, en medio proceso de
salen 2 secuencias altamente conservadas elongación.
RNP1 y 2.
Las secuencias de ARN que se encuentran en
Uno de los dominios de estas proteínas los extremos 5’ y 3’ se mantienen el ARN
HnRNP llamado RRM, se compone de una maduro. Las secuencias que indican donde
lamina B formada por 4 hebras de se debe realizar los cortes van a ser
aminoácidos que están rodeadas de 2 helices secuencias pequeñas: El intrón siempre
alfa. En las 2 hebras centrales que forman la comienza con una Guanina y un Uracilo en
lamina B se encuentran las secuencias RNP el extremo 5’, en cambio en el extremo 3’ va
1 y 2 que gracias a sus cadenas laterales a estar una adenina y una citocina. En el
cargadas positivamente pueden centro del intrón va a encontrarse la
interaccionar con los fosfatos del arn secuencia CURAY, llamada así por los
cargados negativamente. nucleótidos que la forman: C/citocina;
U/uracilo; R/purina ( Guanina o Adenina);
A/adenina; Y/pirimidina ( citosina o
Uracilo). La adenina de la secuencia
CURAY se denomina PUNTO DE
RAMIFICACION ya que este será el lugar
donde se una las G/U del extremo 5’ cuando
se despegue el intrón formando un Lazo
cuando se una la guanina.
LA ESCISION 3’ Y LA
POLIADENILACION DE LOS PRE-
ARNm ESTAN ESTRECHAMENTE
ACOPLADAS.
EL CORTE Y EMPALM
ALTERNATIVO GENERA
TRANSCRITOS ON DIFERENTES
COMBINACIONES DE EXONES