Agentes Vivos de Enfermedad, 2017 Clase: Dra. Vivian Luchsinger F.

Transcripción: Javiera Gallardo C.

Clase 13: Inmunodiagnóstico.

Diagnóstico es establecer una patología y, diagnóstico en términos de

técnicas es detectar algo que nos indique que el paciente está infectado o
enfermo.

La palabra inmunodiagnóstico nos está determinando la técnica, el cómo

vamos a hacer esta detección, en inmunodiagnóstico utilizamos en el
laboratorio algo que es natural de la respuesta inmune que es la interacción
antígeno-anticuerpo.

El contexto de querer saber si una persona está infectada o se infectó, o si

está enferma, en base al cuadro clínico intentaremos descubrir cuál es el
agente infeccioso, en algunas ocasiones eso es suficiente, por ejemplo en el
caso de la varicela. Pero en muchas otras ocasiones el cuadro clínico no es
suficiente porque este puede ser compartido por varios agentes infecciosos
y ahí nos apoyamos en laboratorio, en el diagnóstico de laboratorio clínico
habitual, como el hemograma en el cual veremos, del punto de vista
infeccioso, algo muy importante: los leucocitos (su cantidad y sus
especificaciones o qué tipos prevalecen mayormente). Si esto no es
suficiente se llega a un diagnóstico de laboratorio especializado, es decir, si
hay sospechas de que el paciente tiene una amigdalitis, por ejemplo, por
estreptococo se tendrá que buscar ese agente en las amígdalas.

En el caso del diagnóstico de laboratorio especializado hay varias

alternativas: buscar directamente el agente o buscar la respuesta inmune
del hospedero. La búsqueda del agente puede ser directamente
observando el agente a través de microscopía o por cultivo (en caso de
virus por microscopía electrónica). También podemos identificar antígenos, o
sea, componentes del agente y otra alternativa es detectar el genoma. En
la detección de la respuesta inmune buscamos anticuerpos que la persona
desarrolla al enfrentarse a este agente infeccioso. Tanto en la búsqueda de
antígenos como en la búsqueda de anticuerpos utilizamos el
inmunodiagnóstico.

El inmunodiagnóstico es una técnica que está basada en la interacción

específica antígeno-anticuerpo, esta propiedad natural de nuestra
respuesta inmune la aprovechamos en el laboratorio, pues que esta unión
sea específica es lo que nos permite utilizarlo, permite identificar al agente
que estamos buscando. Por esta propiedad podemos tener en laboratorio
un antígeno que nos permita identificar la presencia de un antígeno

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determinado en una muestra biológica, o podemos tener el laboratorio

antígeno y buscar la presencia de anticuerpos específicos contra ese
antígeno en la muestra biológica, que habitualmente es suero. Entonces, en
base a esta interacción específica antígeno-anticuerpo tenemos estas dos
alternativas y vamos a utilizar una dependiendo de las preguntas que nos
estemos haciendo frente al paciente y de lo que tengamos en laboratorio.

Para saber que esta interacción antígeno-anticuerpo existe se utilizan

distintas marcas que se unen a un anticuerpo, por lo tanto, la presencia de
estas marcas nos ayudarán a identificar la presencia de este complejo
antígeno-anticuerpo (sorry la redundancia, la profe lo repitió musho).

Entonces, el anticuerpo marcado se une a un antígeno y una de esas

marcas es la aglutinación que permite identificar a simple vista la
interacción. También puede ser la inmunocromatografía, la inmuno
flurescencia, el ELISA (ensayo inmunoenzimático) o alguna marca
radioactiva que cada vez se usa menos por el riesgo asociado.

Estas técnicas de inmunodiagnóstico, dependiendo de qué se marque, se

pueden dividir en directas e indirectas:

Las directas permiten detectar los antígenos, es el primer anticuerpo que se

une al antígeno el que está marcado, nos permite detectar sólo antígeno, a
diferencia de las técnicas indirectas en las cuales tiene q haber al menos
dos anticuerpos y es el segundo anticuerpo el que está marcado.

Anticuerpo
con la
marca

Técnicas
Receptor
celular directas
(creo)

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Anticuerpo marcado unido

a un primer anticuerpo

Como mínimo se utilizan dos

anticuerpos, no obstante el
“sándwich” de anticuerpos podrías
ser más grande (2, 3, 4… anticuerpos)

Recordar: Los métodos directos nos permiten identificar sólo antígenos, los
indirectos nos permiten identificar antígenos y anticuerpos, cualquiera de
los dos, dependiendo de lo que tengamos.

Tipos de marca

Recordemos que estas marcas nos indican la presencia de complejo

antígeno-anticuerpo.

 Aglutinación: Se utiliza entre otras cosas la técnica de látex, en la cual

las partículas (esferas) de látex tienen unidos los anticuerpos, si hay
unión al antígeno la aglutinación se puede ver a simple vista. (Dio
como ejemplo algo como regulación (¿?) de glóbulos rojos)

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 Inmunocromatografía: Se busca la reacción antígeno-anticuerpo

utilizando un soporte sólido, una membrana. Se utiliza mucho en el
diagnóstico de streptococcus pneumoniae, pues es muy útil en
ADULTO con neumonía, se busca esta bacteria en orina. La muestra
(3-4 gotas de orina) se aplica en una membrana, se demora entre 5 y
15 minutos, es sumamente rápida. Se usa la misma técnica para
detectar el virus respiratorio sincicial.
o Técnica: En pocillo se pone la muestra, si está presente el
antígeno se unirá a un anticuerpo y la muestra seguirá
avanzando y se unirá a otro anticuerpo y queda la primera
marca, luego se une a otro anticuerpo y quedará la segunda
marca para confirmar.
Test PAC es inmunocromatografía*

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 Inmunofluorescencia: La marca es una molécula fluoresceína que

emite fluorescencia (se ve verde manzana). Si está la marca está el
anticuerpo y si está el anticuerpo está el antígeno, pues se marca el
anticuerpo específico para el antígeno. Esta técnica se utiliza, por
ejemplo, para el diagnóstico del virus rábico y también de Bordetella
pertussis (provoca tos ferina). La fluorescencia puede ser de distintos
colores dependiendo del antígeno.
Esta técnica también se usa en el diagnóstico de virus respiratorio a
través del panel viral que es la detección, por medio de
inmunofluorescencia, de 5 virus respiratorios: sincicial,
metapneumovirus, virus influenza, adenovirus, parainfluenza. Todos los
hospitales públicos de nuestro país utilizan esta técnica, es una
excelente alternativa en niños pero muy mala en adultos, esto se da

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porque los adultos excretan pocos virus y la sensibilidad de esta

técnica no es capaz de detectarlo, en adultos se requieren técnicas
más sensibles como la inmunocromatografía antes mencionada.

También se usa inmunofluorescencia en el diagnóstico dental (¿?) de

citomegalovirus (CMV), que es muy importante y lo debemos
aprender porque es la principal causa de infección congénita, entre
TODOS los tipos de agentes infecciosos. El procedimiento que se
realiza es el Aislamiento vial Rápido o Shell Vial, se toma una muestra,
hay una centrifugación entremedio, se utilizan células, o sea, hace un
aislamiento viral pero además se hace una detección rápido por
inmunofluorescencia, se ven los núcleos teñidos (no está la imagen en el
ppt que subieron), la confirmación es el inmunodiagnóstico.

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Otra técnica de detección de CMV es la antigenemia en la que se

detectan antígenos de CMV en neutrófilos:

Hasta ahora se ha visto la detección de agente, es decir, las técnicas

directas. Ahora veremos la detección de reacción inmune.

Cuando uno se expone al agente infeccioso hay una repuesta inmune y

dentro de la respuesta inmune desarrollamos anticuerpos específicos para
ese agente (antígeno), por lo tanto, si yo quiero saber si alguna paciente
está infectada o si se infectó alguna vez (en el pasado) puedo buscar
anticuerpos, por ejemplo, si quiero saber si una embarazada tiene riesgo de
infectarse con rubeola (ésta traspasa la barrera transplacentaria) puedo
hacerlo por medio de la detección de anticuerpos (que aparecen ante
vacuna o contagio natural).

La detección puede ocurrir por varias técnicas:

Clásicas:
- Neutralización: Los anticuerpos neutralizantes se unen a ligandos del
agente infeccioso para interferir en la unión de este al receptor
celular, es importante porque cuando uno se vacuna espera generar
anticuerpos neutralizantes.

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- Inhibición de aglutinación: se ve si hay aglutinación o se rompen los

glóbulos rojos.

- Fijación del complemento

Las técnicas que sí se utilizan para la detección de anticuerpos,

habitualmente en diagnóstico, son principalmente el ELISA y la
inmunofluorescencia.

El ensayo inmunoenzimático (ELISA) es el que más se utiliza porque es fácil de

usar, no requiere mayor implemento ni mayor capacitación y demora
relativamente poco (2 hrs). Si queremos saber si la persona tiene anticuerpos
o no (técnica indirecta) en el laboratorio debemos tener el antígeno y
colocar la muestra, si tiene el anticuerpo va a reaccionar de forma
específica y se van a quedar unidos, se lava para sacar lo que no se unió y
luego agregamos otro anticuerpo que tiene el marcaje, en este caso una

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enzima que actúa sobre un sustrato que se le agrega a la “mezcla” y

produce color. Se ve finalmente amarillo y mientras más intenso el amarillo
quiere decir que más anticuerpo hay.

La inmunofluorescencia tiene el mismo principio que cuando se utiliza para

detectar directamente el antígeno pero aquí los elementos del sándwich
son distintos. Se utilizan células que tienen el antígeno, se utiliza la muestra
del paciente (el suero) si están los anticuerpos se van a unir, después se
agrega el anticuerpo con la marca, en este caso la fluoresceína, se forma el
complejo anticuerpo―anti-anticuerpo y se ve positivo. Se puede utilizar por
ejemplo para la detección de Toxoplasma gondii.
Para aislar el suero se debe tomar muestra, coagular y centrifugar, por lo
tanto, es importante que esa muestra se deposite en un tubo que no
tenga anticoagulante.

En técnica indirecta la marca está en un anticuerpo anti-anticuerpo

humano que se obtiene de algunos animales y que se une a un
anticuerpo que es DEL PACIENTE.

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Western blot

La profe dijo que era una técnica muy compleja, así que sólo la mencionó,
pero dejo la diapo por si acaso:

Dependiendo del anticuerpo que yo detecte puedo tener más información

sobre esa persona y, además de saber si la persona tiene una infección o la
tuvo, puedo saber si la infección que tuvo fue reciente detectando IgM pues
ésta es la primera que se produce al exponerse a un agente y dura entre 2 a
3 meses, por lo tanto, en términos generales, si yo detecto IgM puedo decir
al paciente que se infectó hace poco, por lo menos hace dos semana
porque pasado ese tiempo se puede detectar el anticuerpo a través de las
técnicas (a los 12 días con el ELISA). Esto ayuda a determinar que es una
infección reciente y, por lo tanto, es sumamente útil en infecciones agudas,
pero es poco útil en infecciones latentes pues en éstas las reactivaciones
también estimula la producción de IgM.

Lo otro en detección de anticuerpos que nos ayuda en el diagnóstico es lo

que llamamos la conversión serológica que consiste en un cambio en los
anticuerpos, por ejemplo que en una primera muestra no hayan anticuerpos
pero en una segunda muestra sí aparezcan, esto sirve aún más para
determinar infecciones recientes.

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Nosotros sabemos que en una

primera infección se produce sólo
IgM hasta llegar a un pick, esto se
detecta, comienza la producción de
IgG y la producción de IgM decae.
Por lo tanto, si en una muestra se
encuentra sólo IgM podemos
determinar, también, que la
infección es reciente.

Si sólo hay IgG se puede decir que el

paciente se expuso al agente, ya sea
por vacuna o en una exposición
natural pero no podemos decir cuándo porque ésta dura mucho tiempo.

La otra opción es hacer otra muestra, si en esta el título de anticuerpos

aumenta, por lo menos 4 veces, quiere decir que se estaba desarrollando la
infección en el momento de tomar la muestra. Por en nuestra usuaria
embarazada en una primera muestra yo determino sólo presencia de IgG no
puedo saber cuándo se infectó pero si yo tomo una segunda muestra dos
semanas después y los títulos aumentaron por lo menos 4 veces, la única
opción es que estaba desarrollando la infección en ese momento. Este
aumento también se llama Seroconversión.

Si la primera
muestra de suero
de la paciente da
positivo y la
segunda, tomada 3
semanas después
también da positivo,
quiere decir que
esa infección
ocurrió antes de
que nosotros la
tratáramos, no
sabemos cuándo pero hace un tiempo largo porque no hay seroconversión.
Pero la presencia del anticuerpo da cuenta de que la persona sí se expuso
al agente y, por ende, es inmune ante otra infección por el mismo agente.

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Si ambas muestras son negativas la paciente es susceptible pues nunca se

ha expuesto al agente.

Por último si la primera muestra es negativa y la segunda positiva hay una

seroconversión, esto quiere decir que la persona se infectó hace poco, en el
periodo en que se tomaron las muestras o un poco antes.

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