Tecnicas de Aglutinacion y Precipitacion (RPR)

TECNICAS DE AGLUTINACION Y PRECIPITACION
TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN:
Son útiles para la detección de antígenos y anticuerpos. Su fundamento es inducir una agrupación
microscópicamente visible de partículas, causada por interacciones antígeno anticuerpo que
forman puentes entre ellas.
Usualmente el antígeno se encuentra en las partículas y los anticuerpos forman puentes. Existen
varios tipos de aglutinación en donde se destacan:
- Aglutinación activa: anticuerpos dirigidos contra componentes de las partículas (eritrocitos,

bacterias). Un ejemplo de este caso es la determinación de grupos sanguíneos.
- Aglutinación pasiva: los anticuerpos se dirigen contra moléculas que se han adherido
intencionalmente a una partícula que actúa como medio de soporte pasivo (látex). Una variante es
la aglutinación pasiva reversa, en donde lo que se detecta es el antígeno y las partículas están
recubiertas por el anticuerpo.
TECNICAS DE PRECIPITACIÓN:
Uno de los primeros descubrimientos acerca de la reacción antígeno-anticuerpo fue su capacidad

para dar lugar a precipitados cuando se combinan en proporciones iguales o próximas al punto de
equivalencia.
Cuando estas reacciones se llevan a cabo en geles de agarosa es posible probar diversos
antígenos en una sola muestra de suero.
Tipos:
Inmunodifusión en gel: se enfrentan antígenos y anticuerpos colocándolos en hoyos o pozos
circulares adyacentes hechos en la agarosa, para que se formen líneas de precipitación entre
ellos.
Inmunoelectroforesis: Algunas mezclas de antígenos son muy complejas como para ser
analizadas por difusión y precipitación simples, por lo que fue necesario desarrollar este método,
que consiste en separar los antígenos según su carga eléctrica y visualizarlos después por
precipitación.
Estas técnicas sólo permiten analizar los antígenos y los anticuerpos de forma cualitativa, pero
mediante una modificación posterior se desarrolló la técnica de:
Inmunodifusión radial: Para cuantificar se incorpora al gel cierta cantidad de de los anticuerpos
correspondientes, con lo que al aplicar la muestra al hoyo y dejarla difundir libremente, se forma un
precipitado circular, en forma radial.
El diámetro del círculo del precipitado guarda proporción con la cantidad de antígeno en la
muestra. De esta forma, se puede establecer una curva de referencia o calibración con
cantidades conocidas del antígeno e interpolar los valores de las muestras desconocidas.
TECNICA DE ELISA
Es una técnica de inmunoensayo en cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante

un anticuerpo enlazado a unaenzima capaz de generar un producto detectable como cambio
de color o algún otro tipo; en ocasiones, con el fin de reducir los costos del ensayo, nos
encontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al antígeno y que a su vez
es reconocido por un anticuerpo secundario que lleva enlazado la enzima anteriormente
mencionada. La aparición de colorantes permite medir indirectamente
mediante espectrofotometría el antígeno en la muestra.
Se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo particular está presente en la

muestra de sangre de un paciente. Aunque el procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a
un gran número de variables, tales como seleción de reactivo, temperatura, medición de
volumen y tiempo, que si no se ajustan correctamente, puede afectar los pasos sucesivos y el
resultado de la prueba.
La interacción antígeno-anticuerpo en el laboratorio puede ser utilizada para determinar si un

paciente tiene una infección o una enfermedad autoinmune. Pero como prueba diagnóstica,
posee diversas limitaciones que conviene conocer:
 En primer lugar, un resultado positivo que confirma la presencia de anticuerpos no

significa necesariamente que el paciente esté enfermo. El cuerpo de una persona que ha
estado enferma y que ya se ha recuperado puede seguir produciendo anticuerpos. Esto
originaría un falso positivo.
 En segundo lugar, hay personas que producen una baja cantidad de anticuerpos, por lo
que estos pueden pasar desapercibidos y no ser medidos, dando lugar a un falso
negativo. Sería el caso, por ejemplo, de personas que padezcan una inmunodeficiencia, o
que se encuentren en el periodo ventana de la infección en el momento de realizar la
prueba, o que estén infectadas por una cepa extraña.
 En tercer lugar, pueden aparecer falsos positivos cuando se da inespecificidad entre
antígeno-anticuerpo.
En estos casos de diagnóstico de enfermedad, es recomendable la eliminación (mediante

centrifugación) de células de la sangre que puedan interferir con el ensayo y puedan ocasionar
un resultado falso positivo, careciendo aquel de especificidad. También, debemos tener en
cuenta que cuando se trata de diagnosticar una enfermedad que posee un valor predictivo
positivo bajo en una determinada población —es decir, que esa enfermedad tiene muy baja
incidencia en dicha población—, es necesario volver a confirmar el resultado positivo mediante
otro método de diagnóstico independiente. Normalmente, se lleva a cabo un western
blot donde se detecta la presencia de varios anticuerpos, simultáneamente, frente a la misma
infección en una muestra. El resultado del western se considera positivo cuando aparecen al
menos 5 bandas, que indica que 5 anticuerpos diferentes están presentes en el sujeto frente a
esa infección. Es entonces cuando se diagnostica como positivo a dicho paciente.
Este principio tiene muchas de las propiedades de un inmunoensayo ideal: es versátil, robusto
y simple en su realización, mediante el uso de la fase sólida, una separación fácil entre la
fracción retenida y la fracción libre.
Además se han propuesto y desarrollado diferentes métodos de amplificación de la señal

(luminiscentes, cascadas enzimáticas...) que han permitido elevar la sensibilidad de algunos
ELISA a la obtenida en el RIA (radioinmunoensayo) hormonal.
Este método ha tenido una enorme aplicación en todos aquellos campos en los que se
precisaba la cuantificación de productos mediante anticuerpos: diagnóstico clínico, detección
viral, clasificación de anticuerpos en isotipos, búsqueda de anticuerpos monoclonales, etc.
LISTA DE COTEJO
Reactivos (antígenos) Si
bata si
Placa de cerámica Si
Torundas,lanceta, si
reactivos si
si
si

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- Aglutinación activa: anticuerpos dirigidos contra componentes de las partículas (eritrocitos,

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