I.

INTRODUCCION :
El presente trabajo es un estudio sobre la contaminación por coliformes
fecales (CF) en el caserío de Miraflores – castilla –Piura . La importancia de
identificar las principales fuentes de contaminación bacteriana en el caserío
Miraflores radica en poder proponer y establecer medidas para su control.
La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el
suministro de agua puede estar contaminado con aguas negras u otro tipo de
desechos en descomposición. Generalmente, las bacterias coliformes se
encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los
sedimentos del fondo.Las investigaciones ecológicas han puesto de
manifiesto que E. Coli, procede del intestino de hombre y de los intestinos de
los animales de sangre caliente, si bien puede sobrevivir y aun multiplicarse
en determinados substratos. Del origen fecal de E. Coli, se concluye que si
esta bacteria se encuentra en algún alimento ello indica que han tenido lugar
una contaminación de origen fecal y que, consiguientemente, existe el riesgo
de que hayan llegado al alimento en cuestión microorganismos patógenos de
procedencia entérica.
II. DATOS GENERALES :
Determinación de bacterias indicadores de contaminación fecal en agua de
uso doméstico en el caserío de Miraflores diciembre del 2013.
TITULO:
Determinación de coliformes fecales en agua potable caserío Miraflores
INTEGRANTES
 Alvarez Abad Maria Claudia
 Berru Calle Nayda
 Holguin Holguin Clariza
 Pintado Alberca Rosalva Yosmara
 Rondoy cordova victor
 Saavedra Pacherrez Isabel.
 LUGAR DE EJECUCION:
El caserío Miraflores, es un centro poblado rural del distrito de castilla
perteneciente a la provincia d Piura.
UBICACIÓN:
 EXTENCION :

 CLIMA:

 LA ECOLOGIA:

 EL SUELO:

 LA TIERRA :

 EL AGUA:
En lo cuanto al agua potable , este caserío si presenta este servicio básico
, se abastece del liquido elemental atreves de redes domiciliarias . Todo e
sistema de agua potable instalado en el caserío que construye también
tanques elevados fue construido por la ONG misión esperanza en el año
2003 y administrado atreves de una junta administradora del servicio de
saneamiento, JSS.
III. PROBLEMA:

¿Cuál es la cantidad e incidencia de microorganismos indicadores de

contaminación fecal presentes en el agua de uso doméstico?.

IV. ANTECEDENTES:
Los agentes patógenos transmitidos por el agua constituyen un problema
mundial que demanda un urgente control mediante la implementación de
medidas de protección ambiental a fin de evitar el incremento de las
enfermedades relacionadas con la calidad del agua (VARGAS, 1996).
La determinación de microorganismos intestinales normales como
indicadores de contaminación fecal, en lugar de patógenos, es un principio
de aceptación universal en la vigilancia y evaluación de la seguridad
microbiana en los sistemas de abastecimiento de agua (GOEZ, 1999).
El objetivo de las normas y estándares es el de controlar la cantidad de un
determinado microorganismo en el agua, siendo este microorganismo la
causa de una enfermedad específica o un indicador de las condiciones
dentro de las cuales dé podría transmitir esa enfermedad (JONES, 1997).
El grupo coliforme abarca los géneros Klebsiella, Escherichia, Enterobacter,
Citrobacter y Serratia. Cuatro de estos géneros (Klebsiella, Enterobacter,
Citrobacter y Serratia) se encuentran en grandes cantidades en el ambiente
(fuentes de agua, vegetación y suelos) no están asociados necesariamente
con la contaminación fecal y no plantean ni representan necesariamente un
riesgo evidente para la salud (ALLEN, 1996). Las bacterias coliformes, no
deben estar presentes en sistemas de abastecimiento, almacenamiento y
distribución de agua, y si así ocurriese, ello es indicio de que el tratamiento
fue inadecuado o que se produjo contaminación posterior. Se ha demostrado
que las especies de Enterobacter y Klebsiella colonizan con frecuencia las
superficies interiores de las cañerías de agua y tanques de almacenamiento
(a menudo llamado "rebrote") y crecen formando una biopelícula cuando las
condiciones son favorables, es decir, presencia de nutrientes, temperaturas
cálidas, bajas concentraciones de desinfectantes y tiempos largos de
almacenamiento (ALLEN, 1996).
La determinación de coliformes se usa como indicador de la eficacia del
tratamiento (CACERES, 1990). Los coliformes fecales (termorresistentes) se
definen como el grupo de organismos coliformes que pueden fermentar la
lactosa a 44°-45°C, comprenden el género Escherichia y en menor grado,
especies de Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter (EASTON, 1998). Los
coliformes termorresistentes distintos de E. coli pueden provenir también de
aguas orgánicamente enriquecidas, por ejemplo de efluentes industriales o
de materias vegetales y suelos en descomposición.
 Como los organismos coliformes termoresistentes se detectan con facilidad,
pueden desempeñar una importante función secundaria como indicadores de
la eficacia de los procesos de tratamiento del agua para eliminar las
bacterias fecales (OMS, 1995).
En el Perú, Vergaray y Méndez (2001), modificaron el método de
Numeración de Estreptococos fecales y Enterococos por el Método de Tubos
múltiples establecido por la APHA (1995), utilizando Agar M-Enterococos en
lugar de Caldo Púrpura de Bromocresol, obteniendo resultados satisfactorios.
V. HIPOTESIS:
Los microorganismos indicadores de contaminación fecal que se encuentran
más frecuentemente en el agua , son las bacterias entéricas que colonizan el
tracto gastrointestinal del hombre y son eliminadas a través de la materia
fecal; las más frecuentes son las bacterias que conforman el grupo de los
coliformes totales; Escherichia, Enterobacter,Klebsiella, Serratia, Edwarsiella
y Citrobacter, y otros como streptococos (enterococcus) los cuales viven
como saprofitos independientes o como bacterias intestinales.
VI. OBJETIVOS Y METAS:
Objetivo:

Determinación de bacterias indicadores de contaminación fecal

presentes en el agua de uso doméstico en el caserío de Miraflores
noviembre –diciembre 2013

 Meta : Conocer la cantidad e incidencia de los microorganismos

indicadores de contaminación fecal presentes en el agua de uso
doméstico en el Caserío de Miraflores – castilla.

JUSTIFICACION:
 La razón por la que se realizara una evaluación microbiológica en el
caserío de Miraflores es con la finalidad de conocer la calidad de agua
que consumen los pobladores y con los presentes resultados ayudar a
reducir estos patógenos.

I.MARCO TEORICO:
Fundamento: La determinación de microorganismos coliformes totales por el método
del Número más Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo
microbiano de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas al incubarlos a 35°C
± 1°C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales biliares. Esta
determinación consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase confirmativa.
En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato de
sodio el cual permite la recuperación de los microorganismos dañados que se
encuentren presentes en la muestra y que sean capaces de utilizar a la lactosa como
fuente de carbono. Durante la fase confirmativa se emplea como medio de cultivo
caldo lactosado bilis verde brillante el cual es selectivo y solo permite el desarrollo de
aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las sales biliares como el verde
brillante.
La determinación del número más probable de microorganismos coliformes fecales se
realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta en la
capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir gas cuando son
incubados a una temperatura de 44.5 ± 0.1°C por un periodo de 24 a 48 h.
La búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de caldo EC,
los cuales se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales (Agar
Mac Conkey, Agar eosina azul de metileno) y posteriormente realizando las pruebas
bioquímicas básicas (IMViC) a las colonias típicas.
Total de bacterias coliformes
El total de bacterias coliformes (o coliformes totales) incluye una amplia variedad de
bacilos aerobios y anaerobios facultativos, gramnegativos y no esporulantes capaces
de proliferar en presencia de concentraciones relativamente altas de sales biliares
fermentando la lactosa y produciendo ácido o aldehído en 24 h a 35–37 °C.
Escherichia coli y los coliformes termotolerantes son un subgrupo del grupo de los
coliformes totales que pueden fermentar la lactosa a temperaturas más altas (véase el
apartado 11.6.2). Los coliformes totales producen, para fermentar la lactosa, la enzima
β-galactosidasa. Tradicionalmente, se consideraba que las bacterias coliformes
pertenecían a los géneros Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter, pero el
grupo es más heterogéneo e incluye otros géneros como Serratia y Hafnia. El grupo
de los coliformes totales incluye especies fecales y ambientales.
El grupo de los coliformes totales incluye microorganismos que pueden sobrevivir y
proliferar en el agua. Por consiguiente, no son útiles como índice de agentes
patógenos fecales, pero pueden utilizarse como indicador de la eficacia de
tratamientos y para evaluar la limpieza e integridad de sistemas de distribución y la
posible presencia de biopelículas. No obstante, hay mejores indicadores para estos
fines. El análisis de los coliformes totales, como indicador de desinfección, es mucho
más lento y menos fiable que la medición directa de la concentración residual de
desinfectante. Además, los coliformes totales son mucho más sensibles a la
desinfección que los protozoos y virus entéricos. El RHP detecta una gama más
amplia de microorganismos y se considera generalmente un mejor indicador de la
integridad y limpieza de los sistemas de distribución.
Las bacterias pertenecientes al grupo de los coliformes totales (excluida E. coli) están
presentes tanto en aguas residuales como en aguas naturales. Algunas de estas
bacterias se excretan en las heces de personas y animales, pero muchos coliformes
son heterótrofos y capaces de multiplicarse en suelos y medios acuáticos. Los
coliformes totales pueden también sobrevivir y proliferar en sistemas de distribución de
agua, sobre todo en presencia de biopelículas.
Aplicación en la práctica

Los coliformes totales se miden generalmente en muestras de 100 ml de agua.

Existen diversos procedimientos relativamente sencillos basados en la producción de
ácido a partir de la lactosa o en la producción de la enzima β-galactosidasa. Los
procedimientos incluyen la filtración del agua con una membrana que después se
incuba en medios selectivos a 35–37 °C; transcurridas 24 h, se realiza un recuento de
colonias. Otros métodos son los procedimientos de «número más probable» en los
que se utilizan tubos de ensayo o placas de microvaloración y pruebas de
presencia/ausencia (P/A). Existen equipos de análisis para uso sobre el terreno.

Relevancia de su presencia en el agua de consumo

Debe haber ausencia de coliformes totales inmediatamente después de la
desinfección, y la presencia de estos microorganismos indica que el tratamiento es
inadecuado. La presencia de coliformes totales en sistemas de distribución y reservas
de agua almacenada puede revelar una reproliferación y posible formación de
biopelículas, o bien contaminación por la entrada de materias extrañas, como tierra o
plantas.

Las enterobacteriáceas (Enterobacteriaceae):

son una familia de bacterias Gram negativas que contiene más de 30 géneros y más

de 100 especies que pueden tener morfología de bacilos o cocos. Los miembros de
esta familia forman parte de la microbiota del intestino (llamados coliformes) y de otros
órganos del ser humano y de otras especies animales. Algunas especies pueden vivir
en tierra, en plantas o en animales acuáticos. Sucumben con relativa facilidad a
desinfectantes comunes, incluido el cloro. Con frecuencia se encuentran especies
de Enterobacteriaceae en la bioindustria: para la fermentación de quesos y
productos lácteos, alcoholes, tratamientos médicos, producción de toxinas en el uso
de cosméticos, fabricación de agentes antivirales de la industria farmacéutica, etc.

En la definición clásica de una Enterobacteriaceae se usan siete criterios básicos,

adicional a la aparición de nuevos métodos taxonómicos para incluir a ciertos géneros
que no cumplen con todos los siguientes criterios, pero que forman parte de esta
familia:
 Son bacterias gram negativas, la mayoría bacilos, otros cocobacilos y
otrospleomórficos.
 No son exigentes, son de fácil cultivo.
 Son oxidasa negativo (excepto Plesiomonas, que es oxidasa positivo), es decir,
carecen de la enzima citocromo oxidasa.1
 Son capaces de reducir nitrato en nitrito.
 Son anaeróbicos facultativos.
 Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaeróbicas con o sin la
producción de gas (en especial glucosa y lactosa), y oxidadores de una amplia
gama de substratos en condiciones aeróbicas.2
 Muchos géneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque
algunosgéneros no son móviles.
Adicional a ello, las Enterobacteriaceae no forman esporas, algunas
producen toxinasy pueden ser encapsuladas y son organismos catalasa positivos.
Sonquimioheterótrofos, y necesitan para su crecimiento compuestos simples
de carbono ynitrógeno, generalmente sólo con D-glucosa, aunque algunas
requieren aminoácidos yvitaminas. La temperatura óptima de crecimiento es de entre
22 °C y 37 °C.
Las diferencias entre los nombres de los diversos géneros provienen de criterios más
precisos, como la fermentación de los diferentes azúcares, la producción o no
deazufre, la presencia de enzimas metabólicas (β-
galactosidasa, desaminasas,descarboxilasas), etc. Los serotipos de importancia
medica y sanitaria pueden distinguirse entre sí por la presencia o ausencia
de antígenos en su constitución celular, tales como en el lipopolisacárido (antígeno
O), el antígeno flagelar (antígeno H) o el antígeno capsular (antígeno K).

II. METODOLOGIA:

Para el estudio del presente trabajo se tomaran muestras de agua potable

de uso doméstico. La muestras se recolectaran en frascos de vidrio
esterilizado y luego será transportado a laboratorio de microbiología de
la UNP donde se le realizara el estudio microbiológico respectivo.

Determinación de coliformes fecales. E. coli:

 Prueba presuntiva:
 Se agita la muestra y se pipetean 10 ml de agua a los tubos con Caldo
Lactosado Concentración Doble, 1 ml a 3 tubos con CL Concentración
Simple y 0.1 ml a 3 tubos con CL Concentración Simple. Se dejara
encubar a 37 C por 24 horas y luego se observa la presencia de gas en
las campanas de Durham previamente introducidas a los tubos.

 Prueba confirmativa:

Se toma dos asadas de cada tubo positivo y se siembra en Caldo

LactosadoBilis Verde Brillante. Se dejan incubar a 44 C por 24-48 horas
y se observara la presencia de gas para tubos positivos. Y luego se
recurre a contar en la tabla del número más probable

PRESUPUESTO:

Recursos disponibles:

Equipo y materiales

3 Lapiceros S/. 2.50

3 Libretas de apuntes S/. 5.00

3 Borradores S/. 2.50

3 Tarjadores S/. 2.50

1 Folder Manila S/. 0.80

8 placas petri S/. 50.00

Tubos de ensayo S/. 90.00

Reactivos S/. 150.00

1 cámara digital S/. 800.00

Recursos no disponibles:

Copias S/. 5.00

Tipeos S/. 10.00

Internet S/. 8.00

Computadora S/. 2 500.00

Impresora S/. 200.00

2 C´D S/. 3.00

Medios de cultivo S/. 100.00

Pasajes S/. 50.00

TOTAL S/. 3 994,30

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES:

FECHA Noviembre Diciembre

Semanas 2 3 4 1 2 3
Actividades
Revisión X X X X X
 bibliográfica
Adquisición
de
X X
materiales y
equipos
Recolección
X X
de datos
Análisis de
X X
datos
Redacción
del informe X
final
Presentación
de informe X
final

MATERIALES YMETODOS:

 09 tubos de ensayo
 01 gradilla
 Algodón
 Alcohol
 Matraz
 Campanas de gas
 Agua potable del caserío Miraflores
 Solución salina
 Caldo lactosa
  Caldo brila ( no se uso ya que salió negativo )

ESQUEMAS:

PRUEBA PRESUNTIVA:

1m
1ml
10ml
 muestra 90ml SSF 9ml SSF 9ml SSF

10-1 10 -2 10-3

1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml

Caldo lactosa 37°C 24-48 HORAS

III. RESULTADOS:
  No se observo presencia de gas en el rango de 10%
 La prueva es negativa para presencia de coloformes fecales y totales .
 Agua potable proveniente del caserío se encuentra en óptimas condiciones para el
consumo (ausencia de coliformesfeces y tolates.

Reglamento de la calidad del agua para consumo humano:

 IV. DISCUCIONES:

La importancia que ha cobrado la calidad del agua ha permitido evidenciar que entre los
factores o agentes que causan la contaminación de ella están: agentes patógenos, desechos
que requieren oxígeno, sustancias químicas orgánicas e inorgánicas, nutrientes vegetales
que ocasionan crecimiento excesivo de plantas acuáticas, sedimentos o material
suspendido, sustancias radioactivas y el calor.La contaminación del agua es el grado de
impurificación, que puede originar efectos adversos a la salud de un número
representativo de personas durante períodos previsibles de tiempo. (Olivas et al 2004)

En este trabajo se investigó la presencia de microorganismos indicadores de

contaminación fecal.Tal como menciona el autor el agua puede estar contaminada por
materia orgánica, la cual genera el crecimiento de bacteriano producto de la fuente de
nutrientes que este le proporcionaes por ello que a través de las pruebas cuantitativas se
investigó la presencia de coliformes totales y fecales provenientes de una contaminación
por el aire, fuentes cercanas (basurales), y por una mala manipulación por parte de
personas encargadas de tratarla.

El agua puede ser vector de gérmenes peligrosos, por lo cual es necesario determinar su
potabilidad. Para ello deben realizarse una serie de análisis bacteriológicos cuyo objetivo
es determinar si el agua contiene microorganismos fecales (no es necesariamente
patógenos), cuya presencia es indicativa de contaminación de origen animal o humano. Se
considera agua apta para consumo aquella que no tenga ningún tipo de microorganismo,
parásito o sustancia en una cantidad o concentración que pueda suponer un peligro para
la salud humana. (BORREGO, J. 1987)

Es por ello que esta investigación conllevo a averiguar si el agua potable distribuida a los
diferentes hogares se encuentra entre los parámetros establecidos según las normas legales
de calidad del agua, estándares de calidad ambiental , y límites máximos permisibles,
establecidos para el consumo humano. En ello se corroboro que dicha agua analizada
obedece el reglamento establecido, dados en la tabla Nº 1 anterior.

Desde el punto de vista microbiológico se establece tolerancias para los siguientes

parámetros: aerobios mesófilos totales a 22 grados centígrados, coliformes totales y
Escherichiacoli, enterococcos y Clostridiumperfringens. Las bacterias aerobias mesófilas
son aquellas que se multiplican en aerobiosis a temperaturas entre 20 y 40 grados; en este
grupo incluyen bacterias patógenas y no patógenas. Unas tasas altas de mesófilos indican
que el agua no es apropiada para el consumo humano. (Gamazo, 2005).

Tales parámetros ambientales mencionados por el autor, son los que pueden toleran los
microorganismos indicadores de contaminación fecal. En esta investigación no se pudo
corroborar que dichos parámetros eran los ideales ya que esto se pudo deber a que el agua
analizada se encontró un numero bajo de microorganismos, dando como resultado
pruebas negativas para contaje de ufc, al no encontrarse en el rango establecido de 30 a 300
ufc. Tampoco se observó la presencia de gas en el tiempo (24 a 48 horas) ni en el rango
(10%) establecido para microorganismos que degradan la lactosa como fuente de
nutriente.

V. CONCLUCIONES :

 No se logró determinar microrganismos indicadores de contaminación

fecal ya que en la Numeración de bacterias aerobias y facultativas
viables mesófilas no se encontró en el rango establecido de 30 a 300
UFC. Tampoco se pudo observar presencia de gas en el rango de 10%
producto de la degradación de la lactosa (tubos con caldo lactosa
negativos)

 No se logró la confirmación de coliformes fecales por prueba

confirmativa (caldo bria) debido a que la prueba presuntiva para
coliformes totales fue negativa.
 También se logró concluir que el agua analizada proveniente del
Caserío De Chapaira es apta para el consumo ya que no presenta
microorganismo indicadores de contaminación fecal, los cuales puedan
causar enfermedades.

 El tratamiento de agua por parte de persona encargadas de su

manipulación es ideal ya que obedecen normas y estándares de
calidad ambiental.

 El agua que consumen los habitantes del Caserío De Chapaira se

encuentra entre los parámetros establecida.