Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Químicas

Carrera de Química y Farmacia
INFORME DE LABORATORIO
PRÁCTICA CURVA ESTANDAR DE CALIBRADO PARA EL ION (MnO4)- A PARTIR DEL
#5 PERMANGANATO DE POTASIO
Análisis Instrumental I DOCENTE: DRA. ZORAIDA BURBANO GÓMEZ, MSc
Integrantes:
SEMESTRE: SEXTO SEMESTRE PARALELO: G1-A
Objetivos de la práctica de laboratorio.
 Comprobar el fundamento de la Ley de Lambert – Beer, mediante la medición de las absorbancias.
 Realizar una curva de calibrado en relación a la absorbancia y concentración del ion (MnO4)-.
Fundamento

La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se basa en la relación que existe entre la
absorción de luz por parte de un compuesto y su concentración. Cuando se hace incidir luz monocromática (de una
sola longitud de onda) sobre un medio homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y otra
transmitida, como consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad
de la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz transmitido. Dependiendo del compuesto y el tipo de absorción
a medir, la muestra puede estar en fase líquida, sólida o gaseosa. En las regiones visibles y ultravioleta del espectro
electromagnético, la muestra es generalmente disuelta para formar una solución. (Alejandría Gallego, R.M.,2013)

Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción, el cual es una curva que muestra la cantidad de energía
radiante absorbida, Absorbancia, por la sustancia en cada longitud de onda del espectro electromagnético, es decir,
a una determinada longitud de onda de la energía radiante, cada sustancia absorbe una cantidad de radiación que es
distinta a la que absorbe otro compuesto.

Transmitancia y Absorbancia Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io incide
perpendicularmente sobre una disolución de un compuesto químico que absorbe luz o cromóforo, el compuesto
absorberá una parte de la radiación incidente (Ia) y dejará pasar el resto (It), de forma que se cumple: Io = Ia + It

La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz transmitida que llega al
detector una vez que ha atravesado la muestra, It, y la cantidad de luz que incidió sobre ella, Io, y se representa
normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100.
La transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad incidente y transmitida al pasar por la
muestra. La relación entre %T y la concentración no es lineal, pero asume una relación logarítmica inversa.
(Cartas, S.T., 2015)
La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz
absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It/ Io.
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del 100% e indica que la
muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale log 1 = 0.

LEY DE LAMBERT-BEER

Según (Hernández y González, 2002) se puede decir que esta ley se trata de
un medio o método matemático, el cual es utilizado para expresar de qué
modo la materia absorbe la luz. En óptica (Rama de la física que se encarga
del estudio de la luz) La ley de Beer afirma que la totalidad de luz que emana
de una muestra puede disminuir debido a tres fenómenos de la física, que
serían los siguientes:

1. El número de materiales de absorción en su trayectoria, lo cual se denomina concentración.

2. Las distancias que la luz debe atravesar a través de la muestra. Denominamos a este fenómeno, distancia del
trayecto óptico.
3. Las probabilidades que hay de que el fotón de esa amplitud particular de onda pueda absorberse. por el
material. Esto es la absorbencia o también coeficiente de extinción.

Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática (de longitud de onda fija) y concentración de
un cromóforo en solución:

A = Absorbencia

ε = Coeficiente molar de extinción

d = Recorrido (en cm)

c = Concentración molar

La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración a mayor número de moléculas

mayor interacción de la luz con ellas; también depende de la distancia que recorre la luz por la solución a igual
concentración, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará; y, por último,
depende de ε, una constante de proporcionalidad denominada coeficiente de extinción que es específica de cada
cromóforo.

La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de c altos, ε varía con la concentración,
debido a fenómenos de dispersión de la luz, agregación de moléculas, cambios del medio, etc. (Hernández y
González, 2002)

A medida que la luz atraviesa un medio que la absorbe, la cantidad de luz absorbida en cualquier 0volumen
corresponde a la intensidad de luz que incide, luego se multiplica por el coeficiente de la absorción.
Frecuentemente la intensidad de un haz de luz incidente declina significativamente a medida que pasa a través del
medio absorbente. Cuando esta relación se expresa como Ley de LAMBERT-BEER, tenemos que:

T = Transmitancia
ε = Coeficiente molar de extinción
c = Concentración molar del absorbente
d = Recorrido en cm

La transmitancia se puede expresar como la intensidad de la radiación incidente, Io. Esto puede dividir a la luz que
emerge de la muestra, I. Se refiere a la relación I/Io como transmitancia o como T. (Herrera, 2019)
Limitaciones de la ley de Lambert-Beer:
No se conocen excepciones a la generalización que la absorbancia está relacionada linealmente a la longitud del
camino óptico. En cambio, las desviaciones de la proporcionalidad directa entre la absorbancia medida y la
concentración, para b constante, son más frecuentes. Algunas de estas desviaciones son tan fundamentales que
representan limitaciones reales de la ley, otras ocurren como una consecuencia de la manera en que se hacen las
mediciones de absorbancia (desviaciones instrumentales), o como un resultado de cambios químicos asociados con
cambios en la concentración (desviaciones químicas). A continuación, se describen los principales factores que
limitan la aplicabilidad de la ley de Beer.

La concentración. Sólo es aplicable a disoluciones diluidas, en disoluciones concentradas la distancia entre

partículas absorbentes es tan pequeña que se produce una modificación en la distribución de cargas de estas, lo que
se traduce en una alteración en la capacidad de absorción a una longitud de onda determinada. Este efecto se puede
eliminar mediante dilución.

Desviaciones instrumentales por el uso de radiación no monocromática, puesto que la ley está definida para
radiaciones con una sola longitud de onda. Sin embargo, si la calidad del equipo no es buena, se obtienen bandas de
radiaciones con un estrecho intervalo de longitudes de onda. También provoca desviaciones la presencia de
radiación dispersa.

Falta de uniformidad de la muestra o especie absorbente, o presencia de impurezas.

Desviaciones químicas, debidas a reacciones del absorbente con el disolvente, como en el caso del dicromato en
disoluciones no amortiguadas. Para cualquier longitud de onda la absortividad molar del ion dicromato y del
cromato son muy diferentes, de modo que la absorbancia total depende de la razón de concentraciones entre las
formas dimétricas y monoméricas. Esta razón cambia notablemente con la dilución y provoca una desviación de la
linealidad entre la absorbancia y la concentración total de cromo (VI).
Reactivos de laboratorio.
 Permanganato de Potasio KMn O4
 Agua destilada
Materiales de laboratorio.
 Pipetas volumétricas
 Matraces Volumétricos
Equipos de laboratorio.
 Balanza analítica
 Espectrofotómetro GENESYS 20
Actividades por desarrollar.
 Preparar una solución estándar de Permanganato de potasio que contenga 500 µg ION (MnO4)-/ml.
 A partir de esta solución tome una alícuota y prepare una DILUCIÓN PRIMARIA:

SUBGRUPO ALICUOTA VOL. DILUCION CONCENTRACION

µg (MnO4)-/ml
4 8 ml 25 ml 160 µg (MnO4)-/ml

 Luego, de esta dilución prepare 5 estándares de trabajo en matraces volumétricos de 10 ml, enrase con agua
destilada.
Dilución primaria ALICUOTAS VOL. CONCENTRACION
DILUCION µg (MnO4)-/ml
 Según el subgrupo 0.5 ml 10 ml 8 µg (MnO4)-/ml
de trabajo 1.0 ml 10 ml 16 µg (MnO4)-/ml
1.5 ml 10 ml 24 µg (MnO4)-/ml
2.0 ml 10 ml 32 µg (MnO4)-/ml
PARTE INSTRUMENTAL:
1. Encienda el instrumento.
2. Seleccione la longitud de onda ideal para el Permanganato de potasio.
3. Configure el instrumento utilizando agua destilada como blanco.
4. Coloque en el recipiente de la muestra la cantidad necesaria de cada una de las diluciones preparadas, lleve
a la marcha de los rayos y realice las diferentes lecturas de ABSORBANCIA.

ACTIVIDADES:
1. Realice los cálculos para la preparación de la solución stock, la dilución primaria y los estándares de
trabajo.

500 µg (MnO4)- 1 ml 4000 µg (MnO4)- 25 ml (MnO4)-

x 6ml x 1 ml (MnO4)-

X= 4000 µg (MnO4)- X= 160 µg (MnO4)-

160 µg (MnO4)- 1 ml 80 µg (MnO4)- 10 ml

x 0.5 ml x 1 ml
-
X= 80 µg (MnO4) X= 8 µg (MnO4)-

160 µg (MnO4)- 10 ml
160 µg (MnO4)- 1 ml

x 1.0 ml x 1 ml

X= 160 µg (MnO4)- X= 16 µg (MnO4)-

160 µg (MnO4)- 1 ml 240 µg (MnO4)- 10 ml

x 1.5 ml x 1 ml
X= 240 µg (MnO4)- X= 24 µg (MnO4)-

160 µg (MnO4)- 1 ml
320 µg (MnO4)- 10 ml
x 2.0 ml
x 1 ml
-
X= 320 µg (MnO4)
X= 32 µg (MnO4)-

Concentración Absorbancia
0 0
 125 µM 0,24
Absorbancia vs Concentración
150 µM 0,28
0.45 175 µM 0,33
0.4 f(x) = 0 x + 0 200 µM 0,38
R² = 1
0.35 225 µM 0,42
0.3
ABSORBANCIA

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 50 100 150 200 250
CONCENTRACIÓN

 Según el grafico: ¿Cuál es la relación que existe entre las variables?

Existe una relación entra la absorbancia y la concentración, a medida que una de las dos aumenta la otra también lo
hace, ósea son directamente proporcional.
 Según el trabajo realizado. ¿Qué es una curva estándar de calibrado y para qué sirve?
Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se mide en función de la concentración de
un analito. Es un método muy utilizado en química analítica para determinar la concentración de una sustancia
(analito) en una muestra desconocida, sobre todo en disoluciones, basándose en la relación proporcional entre la
concentración y una determinada señal analítica.
Conclusiones.
Por lo tanto, se realizó una curva estándar de calibrado para el ion (MnO4)- a partir del permanganato de potasio,
obteniendo una pendiente y = 0,0019x + 0,0013 y R² = 0,9995. Por otro lado, se pudo comprobar lo que afirma la
ley de Lambert – Beer, que a medida que aumenta la concentración aumenta las absorbancias.
Recomendaciones.
 Al momento de realizar la curva de calibrado en Excel, no olvidar que como primer dato en la tabla debe ir
el número 0, tanto en absorbancia como en concentración.
 Realizar correctamente los cálculos de la solución estándar y disoluciones para que no afecte al momento de
realizar la curva de calibrado.
Bibliografía:
Hernández-Hernández, L. y González-Pérez, C. INTRODUCCIÓN AL ANÁLISIS INSTRUMENTAL. Capítulo 3.
Ed. Ariel Ciencia, 2002.
Herrera, A. (2019). LEY DEBOUGUER-LAMBERT-BEER. [online] Uv.mx. Available at:
https://www.uv.mx/personal/aherrera/files/2014/05/L.-Ley-de-Bouguer-Lambert-Beer-0.pdf [Accessed 26 Nov.
2019].
Alejandrina Gallego Picó, R. M. (2013). Espectroscopia de emisión y absorción. UNED - Universidad Nacional de
Educación a Distancia.
Cartas, S. T. (2015). Química: prácticas de laboratorio. Editorial de la Universidad Politécnica de Valencia.