Copoazu Tesis PDF

“Madre de Dios, Capital de la Biodiversidad”
UNIVERSIDAD NACIONAL AMAZÓNICA DE MADRE DE DIOS
FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
TITULO DE LA TESIS:
“EVALUACIÓN DE LOS MÉTODOS DE FERMENTACIÓN Y

SECADO PARA EL BENEFICIO DE SEMILLA DEL COPOAZU
(Theobroma grandiflorum) Y SUS EFECTOS EN LA CALIDAD DE
PASTA DE CHOCOLATE NATURAL EN LA PROVINCIA DE
TAMBOPATA-M.D.D.”
TESISTAS:
Bach. ALEX VICTOR ROJAS CORRALES
Bach. JUANA VILLAGRA HALANOCCA
Para optar el título profesional de:
INGENIERO AGROINDUSTRIAL
PUERTO MALDONADO – PERU
– 2016 –
“Madre de Dios, Capital de la Biodiversidad”
UNIVERSIDAD NACIONAL AMAZÓNICA DE MADRE DE DIOS
FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
TITULO DE LA TESIS:
“EVALUACIÓN DE LOS MÉTODOS DE FERMENTACIÓN Y

SECADO PARA EL BENEFICIO DE SEMILLA DEL COPOAZU
(Theobroma grandiflorum) Y SUS EFECTOS EN LA CALIDAD DE
PASTA DE CHOCOLATE NATURAL EN LA PROVINCIA DE
TAMBOPATA-M.D.D.”
TESISTAS:
Bach. ALEX VICTOR ROJAS CORRALES
Bach. JUANA VILLAGRA HALANOCCA
Para optar el título profesional de:
INGENIERO AGROINDUSTRIAL
PUERTO MALDONADO – PERU
- 2016 -
Esta tesis ha sido sustentada y aceptada en forma presente por el Jurado calificador de grado,
nominado por la Facultad de Ingeniería de la Universidad Nacional Amazónica de Madre de
Dios, como requisito para optar el título de Ingeniero Agroindustrial.
…………………………………………
Dra. María Isabel Cajo Pinche
PRESIDENTE
……………………………………… ………………………………………
Ing. Pedro Saúl Montalván Apolaya Dra. Roxana Madueño Portilla

SECRETARIO
VOCAL
ASESORES:
……………………………………… ………………………………………
Ing. Javier Eduardo Díaz Viteri Ing. Larry Oscar Chañi Paucar
Co-Asesor
ASESOR - UNAMAD
PUERTO MALDONADO - PERÚ
– 2016 –
DEDICATORIA
A Dios por guiarme en mi caminar, para

que siempre esté presente amando y
perdonándome, cuidando y orientándome
en todo momento.
A mis padres y hermanos por todo su

apoyo, su constante dedicación y
esfuerzo en mi formación profesional y
personal, por sus sabios consejos y sus
acertadas correcciones, para siempre
agradecido con ambos.
en todo momento.
Asimismo, el presente trabajo está dedicado a

todas aquellas personas que quieran promover
actividades de investigación científica,
desarrollo tecnológico e innovación como
herramientas que fomenten la competitividad
en todos los niveles donde estas sean
realizadas en todo momento.
Alex Víctor Rojas Corrales

DEDICATORIA
Esta tesis se la dedico a mi Dios quién supo
guiarme por el buen camino, darme fuerzas
para seguir adelante y no desmayar en los
problemas que se presentaban,
enseñándome a encarar las adversidades
sin perder nunca la dignidad
También ni desfallecer
Dedico mi tesis a la memoria de mis
en el intento. padres quienes son: Alejandrina Halanocca
Quispe (+) y Lorenzo Villagra Huanca (+) que
aunque Dios quiso llevárselos antes de que vieran
otro de mis triunfos, en honor a ellos he duplicado
mis esfuerzos para que sus sueños sean realidad.
Por todos los esfuerzos que hicieron por mí; en mi
infancia. Por la inmedible confianza que
depositaron en mí, y por
A mis todos los mi
familiares, recuerdos
hermana que
Delia por ser el
guardo de ellos. ejemplo de una hermana y de la cual
aprendí aciertos y de momentos difíciles; a mi
en todo momento.
tía Cristina, a mi tío Esteban y a todos aquellos
que participaron directa o indirectamente en la
elaboración de esta tesis.
¡Gracias a ustedes!
Son muchas las personas especiales a las que me

gustaría agradecer su amistad, ánimo y compañía en las diferentes etapas de
mi vida.
“La dicha de la vida consiste en tener siempre algo que hacer, alguien a quien
amar y alguna cosa que perseverar”. Thomas Chalmers
Juana Villagra Halanocca

AGRADECIMIENTOS
Deseo especialmente agradecer:
A la Universidad Nacional Amazónica de Madre de Dios, especialmente a la Escuela

Académica Profesional de Ingeniería Agroindustrial de la Facultad de Ingeniería, por la
formación académica durante mi permanencia en dicha casa de estudios.
A los Ing. Javier Eduardo Díaz Viteri e Ing. Larry Chañi Paucar por su asesoramiento
y constante apoyo en el desarrollo de la tesis, por aquellas noches interminables de
trabajo y por el interés mostrado a lo largo de toda esta etapa.
A toda mi familia por su apoyo permanente y desinteresado, especialmente a mis

padres y hermanos, por el apoyo brindado en muchas de las gestiones relacionadas al
desarrollo de la investigación.
A los miembros del jurado, conformado por la Dra. María Isabel Cajo Pinche, Ing.
Pedro Saúl Montalván Apolaya y Dra. Roxana Madueño Portilla, por todas las
sugerencias y acotaciones que contribuyeron a la mejora de la presente investigación.
A todas las demás personas que de alguna manera contribuyeron a la ejecución del
siguiente trabajo de investigación.
Alex Víctor Rojas Corrales
Juana Villagra Halanocca

PRESENTACION
El presente trabajo tiene como finalidad dar a conocer la evaluación de los métodos de
fermentación y secado para el beneficio de la semilla de copoazu (Theobroma
grandiflorum) y sus efectos en la calidad de la pasta de chocolate natural.
El trabajo de investigación consta de tres capítulos, estructurados de la siguiente

manera:
Capítulo I: Marco teórico, donde se consignan todos los antecedentes de la

investigación y la revisión bibliográfica de los conceptos relevantes utilizados en el
estudio.
Capítulo II: Materiales y Métodos, donde se consignan las generalidades de la

investigación, materiales y equipos utilizados, asimismo, se describe la metodología
utilizada para llevar a cabo la investigación.
Capítulo III: Resultados y discusiones, donde se consignan los reportes obtenidos,

mediante tablas, cuadros, gráficos y figuras, reforzadas por una discusión e
interpretación de dichos resultados.
ÍNDICE GENERAL
INDICE DE TABLA vii
INDICE DE CUADRO viii
INDICE DE FIGURA ix
INDICE DE GRAFICO x
RESUMEN xi
ABSTRACT xii
INTRODUCCION xiii
CAPITULO I: MARCO TEORICO 1
1.1. Antecedentes de estudios realizados 1

1.2. El copoazu (Theobroma grandiflorum Will ex Spreng. Schum) 3
1.2.1. Taxonomía del Copoazú 3
1.2.2. Principales variedades del copoazu 3
1.2.3. Descripción de la planta de copoazu 5
1.2.4. Clima, ecología y adaptación del copoazu 5
1.2.5. Principales plagas y enfermedades del copoazú 6
1.2.6. Época y método de producción del copoazu 6
1.2.7. Composición química de la semilla y pulpa 7
1.3. Beneficio de la semilla de copoazu 10
1.3.1. Cosecha y recolección 10
1.3.2. Remoción de la cascara y extracción de la semilla 11
1.3.3. Fermentación 12
1.3.4. Secado 18
CAPITULO II: MATERIALES Y METODOS 22
2.1. Lugar de ejecución 22
2.2. Materiales, equipos e infraestructura 22

2.2.1. Materia prima 22
2.2.2. Equipos 22
2.2.3. Materiales 23
2.2.4. Reactivos 24
2.2.5. Infraestructura 24
2.3. Metodología 25
2.3.1. Tratamiento 25
2.3.2. Muestreo 26
2.3.3. Beneficio y obtención de pasta de chocolate natural de copoazu 26
2.3.4. Método de análisis 39
2.4. Codificación 45
CAPITULO III: RESULTADOS Y DISCUSIONES 47
3.1. Caracterización Físicas de la semilla de Copoazú 47
3.2. Caracterización fisicoquímica del cotiledón y pulpa de copoazú 48
3.3. Análisis de los resultados de la semilla de copoazu, durante el proceso de
Comportamiento de los dos métodos de fermentación 49
3.3.1. Perfil de temperatura 50
3.3.2. Comportamiento del pH de la pulpa y cotiledón 54
3.3.3. Comportamiento de la acidez en la pulpa y cotiledón 59
3.3.4. Comportamiento de solidos solubles de la pulpa 66
3.3.5. Comportamiento de la humedad del cotiledón 70
3.3.6. Comportamiento del cambio en la pigmentación del cotiledón 73
3.4. Análisis de los resultados de la semilla de copoazu, durante el proceso de

comportamiento de los tres métodos de secado 77
3.4.1. Comportamiento de los dos secados naturales 77
3.4.2. Comportamiento del secado artificial (estufa) 81
3.5. Porcentaje de índice físico de fermentación: Prueba de corte 82
3.6. Comportamiento de los resultados de la capacidad antioxidante y los compuestos

fenólicos de la calidad de la pasta de chocolate de copoazu 85
3.6.1. Resultado de perfil de cromatografico de los estándares utilizados 85
3.6.2. Resultado de perfil de compuesto fenólico por HPLC-DAD 87
3.6.3. Resumen de los resultados de compuestos fenólicos totales por HPL 116
3.7. Determinación de la capacidad antioxidante de las seis muestras de pasta de

chocolate y una muestra de semilla fresca de copoazu 118
3.7.1. Curva de calibración del estándar del Trolox 119
3.7.2. Resultado de la capacidad antioxidante por el método de DPPH 120
CONCLUSION 121
RECOMENDDACIONES 123
BIBLIOGRAFIA 124
ANEXOS
vii
ÍNDICE DE TABLA
Pág.
TABLA 1. Análisis proximal de 100g de pulpa de Copoazú 8
TABLA 2. Composición química de la semilla de Copoazú 9
TABLA 3. Composición porcentual del Copoazú, según diferentes autores,

(Porcentajes) 9
TABLA 4. Codificación de los tratamiento de métodos de fermentación 46
TABLA 5. Codificación de los tratamiento de métodos de secado 46
TABLA 6. El porcentaje del rendimiento del fruto de copoazu 47
TABLA 7. Caracterización física de la semilla de copoazu 48
TABLA 8. Composición físico-químico del cotiledón y pulpa del copoazu 49
TABLA 9. Comportamiento de la temperatura en los tres puntos de la masa

fermentante 51
TABLA 10. Comparación del comportamiento del pH de la pulpa en los dos

tratamiento de fermentación 55
TABLA 11. Comportamiento del pH del cotiledón 58
TABLA 12. Comportamiento del % acidez de la pulpa de copoazu 61
TABLA 13. Comportamiento del % acidez del cotiledón de copoazu 64
TABLA 14. Comportamiento de los °Brix de la pulpa de copoazu 67
TABLA 15. Comportamiento del % de humedad del cotiledón 70

viii
TABLA 16. Comportamiento del % de humedad del cotiledón en la etapa de

secado natural 78
TABLA 17. Comportamiento del % de humedad del cotiledón de copoazu

durante el tiempo de secado artificial 81
TABLA 18. Porcentaje de índice de fermentación en los granos de copoazu

estudiados 83
TABLA 19. Área de los compuestos eluidos a 280 nm y 330 nm y el contenido

de porcentaje de ácidos fenólicos y flavonoide en la semilla
fresca de copoazu 91

de porcentaje de ácidos fenólicos y flavonoide del tratamiento
FN-SNBM de pasta de chocolate de copoazu 95

FN-SA de pasta de chocolate de copoazu 99

FN-SNBG de pasta de chocolate de copoazu 103

FS-SNBM de pasta de chocolate de copoazu 107

FS-SNBG de pasta de chocolate de copoazu 111
ix

FS-SA de pasta de chocolate de copoazu 115
TABLA 26. Resultado de las concentración de compuestos fenólicos totales 116
TABLA 27. Resultado de la capacidad antioxidante por DPPH en µmol de

ET/100 g muestra en húmeda 120
ÍNDICE DE CUADRO
Pág.
CUADRO 1. Balance de masa en el beneficio y la obtención de la pasta de

chocolate natural del fruto del copoazu 38
ÍNDICE DE FIGURAS
Pág.
FIGURA 1. Planta y fruto del copoazu en estado natural 3
FIGURA 2. Módulo de Área de fermentación de semilla de copoazu 24
FIGURA 3. Área de la infraestructura de Secado Natural de semilla de

copoazu 25
FIGURA 4. Beneficio y proceso de elaboración de pasta de chocolate 27
FIGURA 5. Localización del previo agrícola del fruto de copoazu 28
FIGURA 6. Recolección de la materia prima de copoazu 29
FIGURA 7. Selección y clasificación del fruto de copoazu 29

x
FIGURA 8. Lavado del fruto de copoazu 30
FIGURA 9. Remoción de la cascara del fruto de semilla de copoazu 30
FIGURA 10. Despulpado mecánicamente del copoazu 31
FIGURA 11. Módulo de Cajones de fermentación de semilla de copoazu 32
FIGURA 12. Secado natural de bandeja de madera (SNBM) 34
FIGURA 13. Secado natural de bandeja galvanizada (SNBG) 35
FIGURA 14. Secador artificial (SA) por el método de Estufa 35
FIGURA 15. Sistema de torrado por el método de Estufa 36
FIGURA 16. Descascarillado de forma Manual 36
FIGURA 17. Equipo de Molienda artesanal 37
FIGURA 18. Pasta de chocolate natural de semilla de copoazu 37
FIGURA 19. Lectura de temperatura en la masa de fermentación 39
FIGURA 20. Equipo de medición de pH potenciómetro 40
FIGURA 21. Medición de la Acidez 41
FIGURA 22. Equipo de medición de sólidos solubles (°Brix) refractómetro 42
FIGURA 23. Prueba de corte de la semilla de copoazu 43
FIGURA 24. Equipo de cromatografía por HPLC 44
FIGURA 25. Equipo espectrofotómetro 45
FIGURA 26. Cambio de pigmentación del cotiledón en el tratamiento FN 75

xi
FIGURA 27. Cambio de pigmentación del cotiledón en el tratamiento FS 76
FIGURA 28. Grano de copoazu bien fermentado (A), insuficientemente

fermentado (B) y pizarrosos (C) 82
ÍNDICE DE GRAFICOS
Pág.
GRAFICO 1. Curva de comportamiento de la temperatura en la fermentación

de la semilla de copoazu 54
GRAFICO 2. Perfil de pH de la pulpa en el comportamiento del pH de la pulpa
en la fermentación 57
GRAFICO 3. Perfil de las curvas del comportamiento de pH del cotiledón 60
GRAFICO 4. Perfil de las curvas del comportamiento de acidez de la pulpa 63
GRAFICO 5. Perfil de las curvas del comportamiento del acidez en el
Cotiledón 66
GRAFICO 6. Perfil de las curvas del comportamiento del °Brix en la pulpa 69
GRAFICO 7. Perfil de las curvas del comportamiento de humedad del cotiledón 72
GRAFICO 8. Perfil de las curvas del comportamiento de humedad del cotiledón 80
GRAFICO 9. Porcentaje del índice de fermentación de la semilla de copoazu 84
GRAFICO 10. Cromatograma y espectro UV del estándar quercetina 3-β-D-

glucosido monitorizado a 330 nm 85
xii
GRAFICO 11. Cromatograma y su espectro UV del estándar del Ácido Gálico

monitorizado a 280 nm 86
GRAFICO 12. Cromatograma de ácidos fenólicos y flavonoides de la muestra de

semilla fresca de copoazu, motorizado simultáneamente a 280 y
330 nm usando la técnica del HPLC-DAD 88
GRAFICO 13. Cromatograma motorizado a 280 nm 1 - 5 compuestos con sus

respectivos espectros UV, por HPLC de la muestra de la semilla
fresca de copoazu 89
GRAFICO 14. Cromatograma motorizado a 330 nm con espectros UV de los

primeros compuestos separados por HPLC de la muestra de la
semilla fresca 90
GRAFICO 15. Cromatograma de ácidos fenólicos y flavonoides del tratamiento

FN-SNM motorizado simultáneamente a 280 y 330 nm usando la
técnica del HPLC-DAD 92

primeros compuestos separados por HPLC del tratamiento FN-
SNBM 93

SNBM 94

FN-SA motorizado simultáneamente a 280 y 330 nm usando la

primeros compuestos separados por HPLC del tratamiento FN-SA 97
xiii

primeros compuestos separados por HPLC del tratamiento FN-SA 98

FN-SNBG motorizado simultáneamente a 280 y 330 nm usando
la técnica del HPLC-DAD 100

SNB 101

SNBG 102

FS-SNBM motorizado simultáneamente a 280 y 330 nm usando

primeros compuestos separados por HPLC del tratamiento FS-
SNBM 105

SNBM 106

FS-SNBG motorizado simultáneamente a 280 y 330 nm usando
xiv

SNBG 109

primeros compuestos separados por HPLC de la muestra FS-
SNBG 110

FS-SA motorizado simultáneamente a 280 y 330 nm usando la

primeros compuestos separados por HPLC del tratamiento FS-SA 113

primeros compuestos separados por HPLC de la muestra FS-SA 114
GRAFICO 33. Concentración de los compuestos fenólicos 117
GRAFICO 34. Curva de calibración del patrón del estándar del Trolox, donde ΔA
DPPH-Trolox es la diferencia de la absorbancia del DPPH y el
estándar 119
GRAFICO 34. Concentración de la capacidad antioxidante 121

xv
RESUMEN
La producción del cultivo de Copoazú (Theobroma grandiflorum) se viene

desarrollando en gran escala en la región de Madre de Dios, sin embargo presenta
elevadas pérdidas en su cosecha y aprovechamiento de la semilla, debido al poco o
ningún estudio realizado en el beneficio de la semilla, el copoazu es un producto de
gran potencialidad en la agroindustria chocolatera. Por ello la presente investigación
se enfoca en el beneficio y aprovechamiento de la semilla de copoazu, donde se evaluó
dos métodos de fermentación las cuales fueron fermentación natural (FN) y
fermentación con adición de solución de sacarosa (FS), también se evaluó tres
métodos de secado, que fueron secado natural con bandeja de madera (SNBM),
secado natural con bandeja galvanizada (SNBG) y secado artificial (SA), donde se
evaluó el comportamiento de las variables en la fermentación como temperatura,
acidez, pH, solidos solubles, humedad, prueba de corte y en el secado la perdida de
humedad y tiempo de secado , son variables que permiten estimar los indicadores del
porcentaje del índice de fermentación y como también los efectos en la concentración
de los compuestos fenólicos y capacidad antioxidante de las muestras de pasta de
chocolate natural de copoazu.
El mejor resultado en los métodos de fermentación se obtuvo en la FN el cual tuvo en

el quinto día una temperatura de 44°C, una humedad final de 43.67% y un cambio de
pigmentación aceptable al finalizar los ocho días de fermentación apropiada para el
cese de la actividad biológica del cotiledón y el mejor resultado de los métodos de
secado se obtuvo en la FN-SNBM quien tuvo una pérdida de humedad de 5.53% y un
tiempo de secado de cuatro días a diferencia de los cinco tratamientos y en donde se
obtuvo un índice de fermentación de 83%. El mejor tratamiento de pasta de chocolate
natural de copoazu fue FN-SA con una concentración de compuestos fenólicos de
3796.89 mg/100g. y con una capacidad antioxidante de 336,9 µmol de ET/100 g b.h.
Los resultados de la investigación sugieren que la FN-SA tiene la mejor calidad
nutritiva en su concentración de compuestos fenólicos y su capacidad antioxidantes.
Palabras claves: copoazu, fermentación, secado, compuestos fenólicos, capacidad

antioxidante y pasta de chocolate.
xvi
ABSTRACT
The farming of copoazu (Theobroma grandiflorum), wich is been developed in big scale
in the amazon region, especificaly in the province of Madre de Dios, however it presents
high losses in its harvest and usage of its seeds, because it has been poorly
investigated especially the fermentation of the seeds. The copoazu is a crop with great
potenciality in the chocolate industry. This investigation have the objective to assess
the behavior of the seed in the process of fermentation and drying, in wich two methods
of fermentation have been evaluated: the natural fermentation (NF) and fermentation
with adition of a sacarose solution (SF), also three methods of drying of the seed have
been evaluated: natural drying with wooden platter (NDWP), natural drying with
galvanized platter (NDGP) and artificial drying (AD). In all of this methods, the factors
that have been analyzed are: the behavior of the variables in the fermentation process
as temperature, acidity, pH, soluble solids, humidity, cutting test of the seed and the
loss of moisture and drying period in the drying process. All this variables aloud to
estimate the indicators of the percentage of the index of fermentation as the effects in
the concentration of the fenolic components and the antioxidant capacity of the samples
of copoazu chocolate.
The best result in the methods of fermentation have been obtained in the (NF) wich, in
the 5th day have a temperature of 44° C, a final moisture of 43.67% and a acceptable
change of pigmentation after eight days of appropriate fermentation that makes
possible the ceising of the biological activity of the cotyledon and the best result of the
methods of drying was obtained using the FN-SNBM wich have a loss of moisture of
5.53% and 4 days of drying in contrast with the 5 other methods witch the result was
a index of fermentation of 83%. The best method evaluated for the processing of the
paste of copoazú is the FN-SA with a concentration of fenolic compounds of 3796.89
mg/100g and a antioxidant capacity of 336.9 µmol of ET/100 g b h. The results of the
investigation sugest that the FN-SA drying have the best nuticition quality in the
antioxidant components.
Keywords: copoazu, fermentation, drying, phenolic compounds, antioxidant capacity

y chocolate paste.
xvii
INTRODUCCIÓN
El copoazú (Theobroma grandiflorum Willd. ex Spreng) es un fruto de origen

amazónico con múltiples cualidades nutritivas en la pulpa y como en la semilla, para
el consumo humano, la cascara se utiliza como abono o artesanía. En el Perú,
actualmente se viene cultivando el copoazu, en las regiones amazónicas de Loreto,
Ucayali y principalmente en la región de Madre de Dios se ha venido y se viene
difundiendo el cultivo de este fruto, y es así que de un tiempo a la actualidad, viene
ocupando un lugar muy importante en la producción agrícola en la región. Según la
Dirección Regional Agraria en el año 2014 se tiene una superficie cosechada de 175.5
ha., donde su rendimiento por hectárea es de 1681kg. El aprovechamiento del fruto
del copoazu en la región de Madre de Dios, está enfocado solo en la obtención de
pulpa alcanzando poca relevancia el aprovechamiento de la semilla, esto ocasiones
grandes pérdidas para los que cultivan este fruto, pues solo lo considera para su
propagación un cierto porcentaje de toda la perdida. En la actualidad en la región de
Madre de Dios se desconoce el estudio del aprovechamiento adecuado del beneficiado
y aprovechamiento de la semilla.
Por tal razón es así que este estudio de investigación está enfocado en el beneficio y
aprovechamiento de la semilla. La fermentación y secado son etapas muy importantes
para la elaboración de pasta de chocolate ya que son los precursores de las buenas
características sensoriales del sabor, aroma y alto valor nutricional en la concentración
de la capacidad antioxidante y compuestos fenólicos que caracteriza a una pasta de
chocolate natural. Cabe destacar, que la etapa de fermentación es donde se producen
reacciones bioquímicas que causan una disminución del amargor y de astringencia y
que dan origen a los precursores del aroma y sabor a chocolate y el proceso de secado
tiene como finalidad reducir la humedad, continúa la fase oxidativa iniciada en la
fermentación y se completa la formación de los compuestos del aroma y sabor. Cros
y Jeanjean (1995); Jinap et al. (1994).
Cabe destacar que no existe mucha información sobre el estudio del beneficio y
obtención de pasta de chocolate de copoazu. El copoazu y el cacao son familia del
genero Theobroma y tienen una diferencia en su comportamiento de su beneficio de
xviii
la semilla casi semejante en sus características físicas-químicas, una de las diferencia

más resaltantes es el tiempo de fermentación de la semilla de copoazu es mayor
debido al tamaño de la testa que es de 55 mm a comparación del cacao que es de 25
mm, esto indica un mayor tiempo de fermentación y como también de secado.
Por tal razón, la importancia de la presente investigación se planteó evaluar el

comportamiento de dos métodos de fermentación las cuales fueron fermentación
natural (FN) y fermentación con adición de solución de Azúcar al 30% (FS), en el
secado se aplicaron tres métodos las cuales fueron secado natural con bandeja de
madera (SNBM), secado natural con bandeja galvanizada (SNBG) y secado artificial
(SA), para el beneficio de la semilla de copoazu y sus efectos en la concentración de
los compuestos fenólicos y capacidad antioxidantes de los tratamientos de la pasta de
chocolate natural. Tal es así que en la fermentación se evaluaron dos métodos de
fermentación, considerando variables como: temperatura, pH, Acidez, solidos
solubles, humedad y la prueba de corte durante los ocho días de fermentación. En el
secado se evaluaron tres métodos de secado y se usó como variables la disminución
de humedad y tiempo de secado.
Para la presente investigación se utilizó la semilla del fruto del copoazu de la variedad
Mamorana, producida de la asociación de agricultores los Yanaocca donde se cosecho
684 kg. y se tomó una muestra en semilla de 120 kg para el estudio de investigación.
En cuanto al objetivo general de este trabajo de investigación, se basa en evaluar dos

métodos de fermentación y tres métodos de secado para el beneficio de la semilla de
copoazu (Theobroma grandiflorum) y sus efectos en el contenido de compuestos
fenólicos y capacidad antioxidante de la pasta de chocolate natural de copoazu
A continuación, los objetivos específicos son los siguientes:
Primer objetivo específico: Determinar las características físicas-químicas de la semilla

de copoazu (Theobroma grandiflorum) previo al beneficio.
Segundo objetivo específico: Evaluar los efectos de los dos métodos de fermentación
(Natural y con solución de sacarosa), en el grado de fermentación de la semilla de
copoazu (Theobroma grandiflorum).
xix
Tercer objetivo específico: Evaluar la eficiencia en la utilización de los métodos de

secado natural en bandeja de madera, secado natural en bandeja galvanizado y
secado artificial (ESTUFA), sobre el contenido de humedad de la semilla de copoazu
(Theobroma grandiflorum).
Tercer objetivo específico: Evaluar la eficiencia en la utilización de los métodos de

secado natural en bandeja de madera, bandeja galvanizado y secado artificial
(ESTUFA), sobre el contenido de humedad de la semilla de copoazu (Theobroma
grandiflorum).
Cuarto objetivo específico: Analizar y describir el efecto del método de beneficiado

sobre la concentración de los compuestos fenólicos y capacidad antioxidante de la
pasta de chocolate de copoazu (Theobroma grandiflorum).
En lo que respecto a la hipótesis principal planteada por esta investigación, esta

sostiene que los métodos de fermentación y secado aplicados a la semilla de copoazú,
causan efectos en la concentración de los compuestos fenólicos y capacidad
antioxidante de la pasta de chocolate natural de copoazu (Theobroma grandiflorum).
El desarrollo del estudio de investigación incluye tres capítulos, el primer capítulo está
dividido en tres secciones, la primera aborda el estado del arte de la investigación, la
segunda parte contempla conceptos y definiciones relevantes acerca de la materia de
estudio, el Copoazú, y finalmente, la tercera sección expone la revisión bibliográfica
sobre el beneficio de la semilla de copoazu y las definiciones pertinentes al tema de
investigación.
El segundo capítulo, se encuentra dividida en dos contenidos importantes la primera

relacionada a los materiales y equipos utilizados para la presente investigación, la
segunda contiene la descripción de los métodos y en general, la metodología de
desarrollo de la investigación.
El tercer capítulo se concentra en demostrar los resultados obtenidos en la evaluación

de los métodos de fermentación y secado para el beneficio de la semilla de copoazu y
los efectos en la concentración de compuestos fenólicos y capacidad antioxidante de
xx
la pasta de chocolate de copoazu, presenta tablas y gráficos del comportamiento de

la fermentación y secado, asimismo se precisa los resultados de las concentraciones
de los compuestos fenólicos y capacidad antioxidante de las muestras de pasta de
chocolate natural de copoazu (Theobroma grandiflorum), finaliza con la presentación
de las conclusiones y discusiones a partir de los resultados encontrados, en relación
a los objetivos de la investigación y tomando como referencia el marco teórico
presentado.
En conclusión, en el presente estudio se evaluó dos métodos de fermentación y tres

métodos de secado para el beneficio de la semilla de copoazú y sus efectos en el
contenido de compuestos fenólicos y capacidad antioxidante de la pasta de chocolate
de copoazu (Theobroma grandiflorum), fueron estudiando dicho comportamiento en
función de variables como la temperatura, acidez, solidos solubles, pH, humedad,
prueba de corte, tiempo de secado y perdida de humedad, para finalmente determinar
que método de fermentación y secado es adecuado para obtener un alto valor en la
concentración de compuestos fenólicos y capacidad antioxidante en la pasta de
chocolate de copoazu.
1
CAPITULO I:
MARCO TEORICO
1.1. Antecedentes de estudios realizados.

Existen pocos estudios de investigación con respecto al beneficio de la semilla de
copoazu, en el aspecto de métodos de fermentación y secado y sus efectos en la
concentración de compuestos fenólicos y capacidad antioxidante de la pasta de
chocolate de copoazu, ya que el más estudiado fue el cacao, los más relevantes serán
brevemente descritos a continuación y según el criterio de importancia y pertinencia
que guarden con la presente investigación.
Castro Z. (2010), realizo la investigación: caracterización del proceso de fermentación

del grano de Copoazú (Theobroma grandiflorum Willd. ex Spreng), lugar Colombia. La
presente investigación tuvo como objetivo la caracterización de tres tipos de
fermentación de semillas de copoazú, con tiempo de remoción y adición de una
solución de azúcar, las variables utilizadas en esta investigación fueron temperatura,
pH, acidez, azúcar total y reductor presencia de levaduras y lactobacillus. Al final del
proceso se evaluó el índice de fermentación (IF). Donde en el primer tratamiento (FC1)
se realizó con una remoción de 48, 96 y 120 horas, el segundo tratamiento (FC2) fue
cada 24 horas su remoción y el tercer tratamiento (FC3) con una adición al inicio, de
una solución de azúcar con una remoción de cada 24 horas. Donde los mejores
comportamientos se observaron en el tratamiento FC3 que presentó parámetros
evaluados, valores que sugieren el mejor proceso de fermentación entre los tres
tratamientos sobresaliendo en el IF con un valor del 83,2%, resultado que se puede
relacionar con el hecho de alcanzar una temperatura apropiada para estimular la
presencia de microorganismos que generaron sustancias y reacciones favorables al
proceso, además la temperatura máxima alcanzada de 46°C indujo la muerte del
embrión
Criollo J., Criollo D., Sandoval A. (2010), realizaron una investigación sobre:
Fermentación de la almendra de copoazú, lugar Colombia. Se evaluó el proceso de
2
fermentación variando el tiempo de remoción de la masa (24 y 48 horas) y la pulpa

inicial (30 y 100%). Teniendo como variables la temperatura de la masa en tres puntos
(superior, medio e inferior), acidez, pH, humedad, prueba de corte y análisis sensorial.
El tratamiento con 30% de pulpa inicial y la remoción cada 24 horas por 9 días, fueron
las mejores condiciones encontradas. La optimización con 0,1% de levadura
(Saccharomyces cerevisiae) aumentó la temperatura de fermentación hasta 44°C, los
granos fermentados hasta 56,14% y el mayor desarrollo de sabores frutales,
mostrando un mejor proceso de fermentación.
1.2. El copoazu (Theobroma grandiflorum Will ex Spreng. Schum)
Se conoce con el nombre de copoazu y se menciona como cacao silvestre, es una

planta fructífera, de la familia de las Esterculiáceas, típicamente amazónica y con
muchas cualidades nutritivas en su pulpa y semilla, es pariente semejante al cacao y
macambo, su domesticación es relativamente reciente, siendo Brasil el país donde se
han desarrollado programas se mejoramiento para su aprovechamiento comercial, su
habita son suelos trópico húmedo y es una especie nativa de América oriental,
distribuida en la cuenca amazónica de Brasil, Colombia, Ecuador, Guyana, Perú,
Venezuela y Surinam (Leal et al., 1997; Hernández y Barrera, 2004), contiene de su
rendimiento de 40% en pulpa, un 18% en semilla y 42% en corteza según Barbosa et
al (1988).
El principal producto obtenido de la fruta del copoazú es la pulpa congelada del fruto
natural. Para el efecto la pulpa es extraída cumpliendo normas de calidad que permiten
conservar su exquisito sabor y agradable aroma. La pulpa es utilizada para preparar
refrescos, helados, néctares, mermeladas, vinos, licores y otros productos frescos. De
las semillas se obtiene manteca de copoazú, muy utilizada en la formulación de
cosméticos hidratantes y en la industria alimenticia. De las semillas molidas se obtiene
una pasta similar al chocolate de cacao, denominada “cupulate”. Finalmente, la
cáscara es usada como abono orgánico en los sistemas agroforestales y debidamente
procesada constituye un componente en el alimento para animales de cría.
3
La semilla (cotiledón), es la materia prima del estudio de investigación, que tiene como
características físico-químicas en su color blanco, con un alto contenido de
compuestos fenólicos y capacidad antioxidante, la semilla es utilizada para la
elaboración de chocolate y manteca. Su importancia económica radica en su fruto, el
cual se puede aprovechar por su pulpa y se comercializa fresco o industrializada, la
semilla para la fabricación de chocolate y también se puede aprovechar la cáscara,
como abono orgánico.
1.2.1. Taxonomía del copoazu.
El Copoazú pertenece a la familia Sterculiaceae, que abarca aproximadamente 65

géneros y cerca de 1000 especies, con una distribución predominantemente tropical y
subtropical. En Brasil, esta familia está representada por once géneros y cerca de 115
especies.
Según Zapata et al., (1996) La clasificación taxonómica del copoazú es la siguiente:
División:Fanerogamas
Clase:Angiospermae.
Orden: Malvales.
Familia:Sterculiaceae
Género:Theobroma
Especie:grandiflorum (willd. ex Spreng.) Schum.
Figura 1. Planta y Frutos del copoazu en estado natural.

Fuente: Flores (1996)
4
1.2.2. Principales variedades del copoazu
El copoazu es un fruto que posee diferentes variedades que en términos generales, se

caracterizan por su forma o según su cáscara o corteza, y la presencia o no de las
semillas, se tiene los siguientes tipos:
 Copoazú redondo: Es la variedad más común de la Amazonia Brasilera, los

frutos presentan extremos redondeados y su cáscara tiene de 6 a 7 mm de grosor
y un peso aproximado de 1.5 kg.
 Copoazú mamorana: Sus frutos son los de mayor tamaño en todas las
variedades conocidas, sus extremos son puntudos y su cáscara es más gruesa,
entre 7 y 9 mm, y puede alcanzar un peso aproximado de 2.5 kg a 4 Kg. Esta
variedad fue utilizada para el estudio de investigación.
 Copoazú mamau: Su mayor característica es la carencia de semillas también

recibe los nombres de copo sin semilla o Copoazú sin semilla (Venturieri, 1984),
tiene un peso aproximado de 1.5 kg.
Sus características sensoriales como sabor, color y aroma son agradables, ofreciendo
perspectivas muy favorables para la aceptación de nuevos productos mediante su
transformación (Venturieri et al, 1988).
1.2.3. Descripción de la planta de copoazu.
Árbol del bosque tropical húmedo que puede alcanzar hasta 18m de altura,
presentando tallo con cáscara marrón oscuro y ramificaciones tricotómicas, con las
ramas superiores ascendentes y las inferiores horizontales. El crecimiento de la parte
aérea obedece a un patrón bien definido. El tallo crece en etapas de 1,0 a 1,5 m,
emitiendo ramas plagiotrópicas trifurcadas al final de cada período. (Leal et al., 1997;
Zapata et al., 1996).
Las hojas son simples, subcoriadas, con 25 a 35 cm de longitud por 6 a10 cm de ancho;
presentan lámina oblonga u oblongo-ovalada, glabra, verde en el haz y verde claro o
rosado pálido en el envés, con un revestimiento delicado de pilosidad. Las
inflorescencias están localizadas en las ramas plagiotrópicas de tres a cinco flores o
5
más; pedúnculos con tres bractéolas; cáliz con cinco sépalos espesos, parcialmente
unidos o libres; corola con cinco pétalos, presentando cada una forma de túnica en la
base, con la parte superior laminar de color rojo oscuro; cinco estambres localizados
en el interior de la túnica; ovario pentagonal, con cinco lóculos multiovalados.
(EMBRAPA, 2007; Urano et al., 1999).
El fruto es de forma elipsoidal y presenta características de drupa y de baya (baya

drupácea), con una variación de 12 a 25 cm de longitud y de 10 a 12 cm de diámetro,
con pesos entre 0,5 y 4,0 kg, con un promedio de 1,5 kg. El epicarpio es rígido y
leñoso, con epidermis verde, recubierto por una capa de coloración ferruginosa,
pulverulento que se desprende cuando se manipula; meso-endocarpio de coloración
blanco amarillento con 7mm de espesor. El fruto contiene entre 20 y 50 semillas,
promedio 32, superpuestas en hileras verticales en tomo a la placenta, envueltas por
abundante pulpa blanco amarillenta, acidulada y con aroma característico. (Cumana y
Rondón, 2005).
1.2.4. Clima, ecología y adaptación del copoazu.
El copoazú tiene como habitad natural el bosque tropical húmedo de las tierras altas
no inundables, siendo sombreado parcialmente por los árboles de mayor tamaño.
Otros países donde se cultiva ocasionalmente son Ecuador, Guyana, Martinica, Costa
Rica, Sáo Tomé, Trinidad Tobago, Ghana, Venezuela y Colombia.
Las condiciones climáticas favorables para su desarrollo son bastante variables. En

las zonas de ocurrencia natural, la temperatura media varía entre 21,6 a 27,5°C, la
humedad relativa del aire entre 64 y 93% y las precipitaciones pluviales anuales
pueden estar entre 1.900 y 3,100mm. Se ha observado buen desempeño de la especie
en regiones con clima sub húmedo y súper húmedo, con lluvias anuales superiores a
1,800 mm, bien distribuidas, y temperatura media anual superior a 22°C.
6
1.2.5. Principales plagas y enfermedades del copoazú.
En la actualidad la producción de cultivo de copoazu en la región de Madre de Dios se

viene desarrollando en gran escala, en donde no se detectaron aún infecciones
notables de enfermedades o ataques severos de plagas, la principal molestia
reportada es la escoba de bruja, cuyo combate se realiza mediante podas sanitarias
periódicas.
En Brasil se reportan las principales plagas y enfermedades que pueden ser

importantes en el futuro en Perú y que es necesario tomarlas en cuenta.
En la fase inicial del crecimiento mientras están en vivero, las plantas pueden ser
atacadas por Costalimaita ferruginea, un coleóptero de color castaño que causa daños
en las hojas y por la broca de las plántulas (Xyleborus ferrugineus) que ataca el tallo,
causando la muerte de la planta. El control de la primera plaga es efectuado con
insecticida de contacto y la segunda, con insecticidas sistémicos, siendo también
recomendable la eliminación de las plántulas atacadas.
Entre las enfermedades, la escoba de bruja, causada por el hongo Crinipelis

perniciosa, es sin lugar a dudas el mayor problema del copuazú. La raza de este hongo
aislada en el copuazú, tiene baja virulencia en el cacao. El hongo produce aumento
del diámetro de la parte afectada, hipertrofia de las ramas que se encorvan, secan y
mueren, produciendo basidiocarpos que darán origen a nuevas infecciones. Cuando
el ataque alcanza a las flores y frutos, estos no se desarrollan y se secan. El control
es efectuado eliminando las ramas y frutos atacados. Esta operación es efectuada
cortando las ramas 15 a 20 cm debajo del área infectada y debe realizarse en los
meses de mayor intensidad de lluvias, siendo conveniente repasar las plantas tres a
cuatro meses después de la poda de limpieza.
1.2.6. Época y método de producción del copoazu.
Según el Instituto de investigación Peruana, existe dos épocas de producción en la

región de Madre de Dios, el primero que es de alta producción son los meses de enero,
febrero, marzo, abril y mayo, la segunda época es los meses octubre, noviembre.
7
El copoazu se estima una productividad media de 12 frutos por planta; si se asume

que el peso medio de cada fruto es de 1kg y que el rendimiento en pulpa es del 30%:
se producen 0.300 gr. de pulpa por fruto. Como en una hectárea son plantados 179
árboles de copoazu, se concluye que la productividad seria de 644.4 kg de pulpa por
hectárea según Calzavara et al. (1984).
Con respecto al fruto, si se tiene en cuenta que el rendimiento en semilla es del 21%,
la productividad seria de 2.5 kg de semillas frescas por planta y 451 kg por hectárea
Calzavara et al. (1984).
1.2.7. Composición química de la semilla y pulpa.
Él copoazu es un fruto con alto valor nutritivo en la pulpa como en la semilla, la pulpa
contiene un elevado contenido de vitamina C, en la semilla contiene un alto contenido
de compuestos fenólicos y capacidad antioxidante, según los estudios Flores, (1996),
nos indica que compuestos físicos y químicos de la pulpa de copoazu son muy
variados dependiendo de su zona de cultivo.
En general, la pulpa es pobre en proteínas y grasas, pero tiene una baja acidez que
facilita la conservación. Los contenidos de proteínas, lípidos y carbohidratos están
dentro de los límites encontrados en la mayoría de los frutos tropicales. En relación a
los minerales y vitaminas, la pulpa del copoazú es relativamente rica en calcio, fósforo,
fierro y presenta un contenido moderado de Vitamina C (Zapata et al., 1996; INIAP y
SENACYT, 2008).
La pulpa constituye la parte del fruto de mayor valor económico, se utiliza

principalmente en la elaboración de refresco, néctar, gelatina, sorbete, dulce, crema y
licor. Las semillas son utilizadas, aunque en pequeña escala, en la elaboración de un
producto semejante al chocolate, denominado “cupulate” (Urano et al., 1999).
8
Tabla 1: Análisis proximal de 100g de pulpa de Copoazú.
COMPONENTE UNIDAD 1 2
Acidez 2,15 2,15
Brix 10,80 11,17
pH 3,30 3,45
Humedad g 89,00 87,27
Aminoácidos mg 21,90
Extracto Etéreo g 0,53 0,41
Cenizas g 0,67 0,70
Fibras g 0,50 1,04
Proteínas 0,923 1,31
Carbohidratos g 11,00 9,27
Azucares reductores g 3,00 6,29
Pectina mg 3900
Fuente: 1Villachica (1996) ,2INIAP (2008)
En la tabla 1, se puede apreciar el análisis proximal de la pulpa de copoazu, en donde

los parámetros más importantes para la investigación son la acidez, pH y °Brix, ya que
estos parámetros se evaluaran en la investigación.
Las semillas son esencialmente oleaginosas, con un contenido de lípidos superiores

al 50%, presentando, sin embargo, cantidades considerables de proteínas y
carbohidratos. Los principales ácidos grasos presentes en el aceite son los ácidos
oleico y esteárico. En proporciones menores se encuentran también los ácidos
araquídico, palmítico, linoleico, bénico, galadoléico, heptadecanoico y palmitoléico
(Chaar, 1980; Silva 1988).
9
Tabla 2: Composición química de la semilla de Copoazú.
Componente 100g semilla de copoazu
Humedad (%) 29.67
Extracto etéreo (%) 35.78
Fibra (%) 0.47
Proteína (%) 10.19
Carbohidratos (%) 21.31
Cenizas (%) 2.58

Fuente: Calzavara et al. ,1984.
En la tabla 2, se puede apreciar la composición química de la semilla de copoazu, en

su estado natural. Donde tiene como humedad inicial un 29.67% en el cotiledón.
Considerando las porciones aprovechables del fruto, o sea, la pulpa y la semilla, el

rendimiento de la parte útil del fruto alcanza el 55,4%. Se hace referencia a la
composición del fruto con algunos aportes recogidos, los cuales se muestran en la
Tabla 3 a continuación:
Tabla 3: Composición física del porcentaje del fruto de copoazú, según diferentes
autores.
Barbosa, Calzavara
PARTE DEL Santos &
Nazaré & , Müller & MEDIA
FRUTO Condurú
Nagata Kawage
Corteza (%) 42,0 46,0 46,0 44,6
Pulpa (%) 40,0 37,0 36,0 37,7
Semilla (%) 18,0 17,0 18,0 17,7

Fuente: Elaboración propia a partir de los autores mencionados (2015).
10
1.3. Beneficio de la semilla de copoazu.
El beneficio es un proceso que obedece a los principios básicos de conservación de

alimentos y se hace con la finalidad de mejorar la calidad del grano, están
determinados por las siguientes etapas, cosecha, quiebra, fermentación y secado
(Chávez at al, 2004)
La demanda de granos de calidad por parte de los industriales aunado al

desconocimiento de los agricultores en prácticas de beneficio plantean la necesidad
de capacitar a estos últimos en técnicas básicas que les permitan obtener un producto
de buena calidad que satisfagan los requerimientos exigidos por los compradores.
Granos mal fermentados, humedad elevada, mezcla de almendras sanas con
enfermas, demasiadas impurezas son factores negativos que afectan la calidad.
1.3.1. Cosecha y recolección
El copoazú es un fruto no climatérico y sin cambios visibles en la coloración externa

de la cáscara que sirva como indicativo del momento en que ha alcanzado el grado
máximo de maduración. La cosecha se realiza aproximadamente 140 días después de
la floración. Según Urano et al., (1999)
La calidad de los frutos está relacionada con el momento de la cosecha;

sensorialmente, el punto de maduración puede ser identificado por el aroma
característico de la fruta, que se torna más pronunciado en ese período. Como la
maduración se produce desde el ápice hacia la base del fruto es posible iniciar la
cosecha de aquellos frutos que exhalen en su porción terminal el aroma característico
del copoazu, se mantiene un segmento de rama de alrededor de 10cm. al momento
que el fruto completa su maduración dos a tres días después de la cosecha, el
pedúnculo se desprende naturalmente del fruto. Según Zapata, (1996).
Hay algunos indicadores de la madurez fisiológica de la fruta, como la intensidad

respiratoria, que es un índice fisiológico confiable, porque cuando es mínima, los frutos
han completado su desarrollo. Existen índices de cosecha que son métodos
destructivos de la fruta, como es el color de la pulpa, amarillo crema cuando está
madura y la acidez. Según Hernández y Barrera, (2004)
11
Los frutos son transportados a granel, sin grandes problemas, ya que debido a la
consistencia leñosa de la cáscara las pérdidas durante el transporte son prácticamente
nulas; tienen una vida pos-cosecha de cinco a siete días sin que se alteren
significativamente las propiedades físicas, químicas y organolépticas de la pulpa,
cuando se mantienen en un local con buena ventilación y protegidos de la radiación
solar directa. Almacenados en ambiente refrigerado, con una temperatura alrededor
de 10°C, presentan una vida pos-cosecha de 15 días (Lima, 1993).
1.3.2. Remoción de la cascara y extracción de la semilla.
Es la operación que consiste en partir la mazorca y extraer las almendras, las que una
vez separada de la placenta, serán sometidas a la fermentación. Antes de empezar a
partir las mazorcas, debe separarse las sanas de las afectadas por enfermedades o
plagas para beneficiar solamente granos provenientes de frutos sanos y no dañar la
calidad final del producto.
La apertura o quiebra de la cascara se puede hacer en una área limpia ya que se

necesita extraer un cierto porcentaje de pulpa de la semilla, para lo cual se puede usar
un machete corto o un mazo de madera evitando dañar los granos, lo cual depende
de la habilidad del operario.
Según las investigaciones por el INIAP (1993), nos indica que en algunos países
acostumbran guardar los frutos bajo techo durante 2 a 3 días antes de quebrar las
mazorcas y extraer las almendras, con el propósito de fomentar el desarrollo de
procesos bioquímicos en el interior de los granos, que ayudan a mejorar la calidad que
se obtiene en la fermentación posterior. En lo que se refiere al tiempo que debe
transcurrir entre el desgrane y la puesta en fermentación es recomendable no exceder
las 24 horas, igualmente debe evitarse mezclar almendras extraídas en diferentes días
de cosecha.
1.3.3. Fermentación.
La fermentación es un proceso que consiste en la eliminación del mucílago que cubre

al grano de copoazu. Este favorece la muerte del embrión, evita la germinación del
grano que deteriora su calidad y permite obtener un copoazu de buena calidad.
12
Durante este proceso ocurren una sucesión de diferentes procesos bioquímicos,

microbiológicos y enzimáticos, los cuales favorecen la reducción del amargor y
astringencia del cacao, así como también el desarrollo de las sustancias precursoras
del aroma y sabor característico del chocolate. Así mismo, son dos las fases o eventos
principales que ocurren durante este proceso. Según Hernández y León (2003)
Según las investigaciones realizadas por Reyes et al., (2000). Indica que el proceso
de fermentación puede caracterizarse como un proceso con dos etapas:
 Una etapa de hidrólisis o alcohólica, en condiciones anaeróbicas, donde

intervienen microorganismos como levaduras, que transforman el azúcar de la
pulpa en alcohol y anhídrido carbónico, a la vez que comienza a elevarse la
temperatura. Conforme se produce el descenso de la pulpa, hay penetración de
aire y se favorece la oxidación del alcohol a ácido acético, con la intervención de
bacterias acéticas.
Ácido acético provocó la muerte del embrión y de las almendras al penetrar en el

tejido cotiledón y a su vez la permeabilidad de las paredes celulares, permitiendo
la inter difusión de los componentes del jugo celular. Así, las enzimas se ponen
en contacto con los polifenoles y proteínas y se inician las reacciones hidrolíticas
que dan lugar a cambios en los pigmentos cianidinglucósidos, provocando el
inicio de la formación de los precursores del sabor a chocolate. Toda esta fase
hidrolítica ocurre a temperaturas cercanas a 45°C y con pH de 4,0 a 5,0.
 La etapa de oxidación se inicia inmediatamente cuando hay mayor penetración

de oxígeno y consiste esencialmente en la oxidación y condensación de los
compuestos polifenólicos en productos complejos, aminoácidos volátiles solubles
e insolubles que tienen poco o ningún sabor. Paralelamente con la condensación
oxidativa, disminuye el contenido de humedad, hasta el punto en que la falta de
agua detiene la actividad enzimática. Cuando el oxígeno tiene acceso a las
células de los cotiledones durante la fase de condensación oxidativa, el color de
la superficie de las almendras se vuelve pardo y esto se realiza en toda la
13
almendra, conforme se inicia el secado y se facilita la penetración del oxígeno al

interior del cotiledón.
A. Tipos de fermentación:
 Fermentación en lona o saco.
Según las investigaciones de Subprograma de Cooperación Técnica. (2001),
Consiste en dejar las almendras en dichos sacos para que ocurra el proceso de
fermentación. En estos se debe ser cubierto con plástico u hojas de plátano, o
bijao para evitar la pérdida de temperatura.
Según sus investigaciones Reyes et al., (2000). Afirma que para la fermentación
del cacao en sacos de polietileno o yute se colocan las almendras dentro de
estos, se cierran, se cuelga y se los deja fermentando. Para que tengan mejor
aireación durante dos o tres días y facilitar el drenaje del mucílago, al cabo de los
cuales son extraídas para someterlas al proceso de secado.
Este método de fermentación no es muy aconsejable ya que se dificulta las

necesarias remociones, resultando un proceso fermentativo muy heterogéneo
con un bajo porcentaje de granos fermentado y con un elevado porcentaje de
granos en mal estado, en este tipo de tecnología existe gran dificultad con la
retención del calor debido a los poros que permite la entrada de aire y la salida
del calor.
 Fermentación a montón.
Según las investigaciones de Chávez et al (2004). Nos indica que la fermentación
en montones consiste en amontonar el cacao en baba sobre un tendal de caña,
esterilla de guadua, madera, cemento o sobre hojas de plátano a fin de permitir
el drenaje del jugo. Cubren los montones con hojas de plátano, banano, razón
para que la altura de la caja sea de 10cm, es que en la fermentación de montones
solamente fermenta bien la parte superficial, posiblemente debido a la aireación.
A dichos montones transcurridos 48 horas se realiza el volteo, cubriéndolas con
hojas nuevas nuevamente. Este método tiene un costo mínimo y el tamaño del
14
montón varía de acuerdo al cacao cosechado siendo la cantidad mínima para

generar el calor necesario 36.36 Kg (80 libras) de cacao en baba.
 Fermentación en cajones.
Según las investigaciones realizadas por Gaitán, T. (2005). En este sistema se

dispone de cajas en el piso, las cajas debe tener ranuras de 5mm para dejar que
el aire circule libremente. El espacio entre orificio no debe ser menor de 5cm, ni
mayor de 10cm. Estas cajas se ponen unas sobre otras formando una escalera.
Posiblemente este método es el que puede usar más ventajosamente, un

pequeño productor, pues las cajas son fáciles de manejar y si se cuenta con una
cantidad suficiente de ellas se puede fermentar cualquier cantidad de almendras.
Durante la fermentación la temperatura en la masa de almendras puede subir
hasta 50°C aproximadamente. Cuando la temperatura llega a 45 °C, los
embriones de la semilla mueren, y ese momento marca el inicio de los cambios
bioquímicos que luego darán el sabor y el aroma a chocolate.
B. Indicadores de fermentación
Según las investigaciones basados en la referencia al cacao de Cabrera, S. y

Carlos, L. (2006). Nos indica que durante el proceso de fermentación existen
indicadores de fermentación así como se explica a continuación.
 Temperatura, la cual debe aumenta por encima de 40°C en los fermentadores

trinitarios, al cabo de 48 horas, y por encima de 36°C a las 24 horas.
 El mucílago que cubre el grano empieza a perderse y cambia su color blanco

por uno rojo claro o rosado.
 Al partir un grano con un objeto afilado, escurre un líquido abundante de color

vino tinto.
Para saber si el cacao ya está bien fermentado, además del tiempo transcurrido,
se debe constatar que:
 La temperatura en el sistema comience a descender.

15
 El grano se hinche.
 Se ha producido la muerte del embrión.
 Al partir las almendras en sentido longitudinal, se observa un color pálido en el

centro, rodeado por una circunferencia de color café oscuro.
C. Factores que afectan la fermentación del copoazu
De acuerdo a la variedad de copoazu; el tamaño, la forma y la constitución de los

cotiledones varían; por lo que para la fermentación se debe considerar la influencia
que tienen, en conjunto, los siguientes factores.
 Grupo genético y tiempo de fermentación
El tiempo de fermentación que se debe dar a las almendras depende del grupo
genético al que pertenece el copoazu. El mayor contenido de azúcar en el
mucílago de la variedad mamorana, redondo, y mamau se fermenta,
generalmente, en ocho días y nueve días, respectivamente.
 Tiempo de almacenamiento del fruto antes de la apertura y el desgrane
Es un factor que influye en la calidad del producto y el retardo en su desgrane

produce una fermentación acelerada debido a que mejora la hidrólisis de la
pulpa.
Esto produce incrementos más rápidos en la temperatura de la masa,

alcanzando valores más altos a medida que aumenta el tiempo entre la cosecha
y el desgrane del copoazu. Así mismo, promueve la formación de bajos niveles
de ácido láctico, ácidos volátiles y ácidos totales libres e incrementa el contenido
de taninos en el cotiledón. Sin embargo, es importante que se produzca un
ascenso gradual de la temperatura; facilitando la descomposición de las
proteínas y potenciando el sabor.
 Tamaño del lote de copoazu en el proceso de fermentación.
Este factor está íntimamente ligado al grado de aireación y desarrollo del calor
de la masa en proceso de fermentación. La cantidad de copoazu a fermentar
16
varía considerablemente de acuerdo a la temporada de cosecha y cuando se

tiene mayor masa fermentando, la temperatura en su parte central será mayor.
Diversos autores discrepan en cuanto a la mínima cantidad de masa de
copoazu que se debe fermentar en condiciones naturales y éstas,
generalmente, fluctúan entre 35 y 450 kg con referencia al cacao.
 Frecuencia de remoción durante la fermentación del copoazu.
Una buena remoción de la masa de almendras de copoazu favorece la

homogenización de la fermentación; mientras que su ejecución defectuosa o no
realización, hace que una gran proporción de su masa se quede sin fermentar.
Por ello en la fermentación la remoción debe realizarse a las 24 horas
sucesivamente todo los días evitando la proliferación de hongos y la desecación
de almendras de la superficie.
Así mismo, indica que la remoción diaria permite un incremento más rápido de
la temperatura, fermentación más homogénea y menor tiempo de duración.
D. Parámetros físico-químicos que varían durante la fermentación.
El control cuidadoso de los parámetros físicos y químicos, durante el proceso de

fermentación, permite obtener granos y pasta de copoazu de buena calidad. Sus
valores guardan relación con el monitoreo de cada uno de los factores que inciden
en los cambios físicos y químicos que la masa de almendras de copoazu
experimentada.
 Variación del pH
Debido al contenido de ácido cítrico, presente al inicio en el mucílago, hace que
el pH del mucílago y cotiledón presenten diferencias significativas. Durante la
fermentación y sobre todo por efecto de la remoción, el pH se incrementa
cuando el ácido cítrico se degrada por acción de microorganismos. En esta
etapa, el ácido acético formado migra hacia el cotiledón, descienda su pH y
luego se incremente debido a las reacciones entre ácido acético y las diversas
fracciones de proteínas.
17
 Variación de la temperatura
Al inicio, el incremento de la temperatura es muy lento debido a la poca cantidad

de calor que se genera cuando las levaduras degradan a los azúcares. Los
estudios muestran que la elevación de temperatura se produce alrededor de las
48 horas.
Esto ocurre porque las bacterias acéticas transforman el alcohol en ácido

acético; una reacción mucho más exotérmica. Sin embargo, este
comportamiento puede verse afectado por la cantidad de masa fermentativa y
los tiempos de remoción. El rango de temperatura, referido por la literatura,
fluctúa entre 26 y 45°C, durante las primeras 48 horas, pudiendo
posteriormente, alcanzar hasta los 60°C.
 Evolución de la acidez
La oxidación de ácido cítrico y la reducción de la acidez, ocurren bajo

condiciones de aireación y cuando el jugo de cacao drena desde las cajas de
fermentación. La conducta seguida por la acidez total fue evaluada por Augier
et al., (1997) y citado por García (2000) que toma como base la concentración
de ácido acético, determinada mediante la titulación con NaOH. Estos mismos
autores muestran la variación de la acidez total, tanto en la cascara como en el
grano, durante la fermentación.
1.3.4. Secado.
Según los estudios realizados por Rincón (1999), nos indica que el secado tiene como
objetivo eliminar el exceso de humedad y acides de las almendras recién fermentadas
de aproximadamente 55% al 7%, que garantiza para su posterior almacenamiento y
comercialización.
El proceso de secado debe hacerse en forma lenta y graduada, empezando por pocas
horas de exposición al sol durante los primeros días y aumentar progresivamente hasta
la plena exposición en los últimos días. Según Jiménez, (2000)
18
Con el secado violento no se logra un secado uniforme y se interrumpe la hidrolisis

enzimática de las antiocianinas generando almendras purpuras que le confieren un
sabor astringente, a la vez se endurece rápidamente la testa o cascarilla la cual una
vez secada impide la salida o difusión de los ácidos volátiles que se concentran en la
almendra generando almendras acidas. Según Ramos, (2004).
Tipos de secado
 Secado natural al sol: Es un método que presenta ventajas de la lentitud de la

temperatura moderada. Este secado depende de las condiciones climáticas.
 Secado artificial: este método tiene como única ventaja de no depender de las
condiciones climáticas, pero si presenta inconvenientes, como son las
temperaturas altas y la excesiva rapidez de secado de la semilla.
A. Secado natural.
Según las investigaciones de López et al., (2008). Nos indica que en el secado se
produce también una transformación enzimática durante la cual se oxidan algunas
sustancias, los cotiledones de las cascaras de las semillas se vuelven más cafés,
el aroma achocolatado empieza a desarrollarse. Además se volatiliza su ácido
acético excesivo. Para garantizar que el grado de estabilidad y conservabilidad de
las almendras de cacao sea suficiente, es necesario que el secado se efectúe con
sumo cuidado. Los granos se secan sobre instalaciones especiales como: esteras
o tejidos de madera, plástico o metal que se colocan a una altura suficiente del
suelo para evitar las impurezas de polvo o de animales domésticos. Los rayos
solares favorecen la buena coloración y el buen desarrollo de las diferentes etapas
de aromatización. Un secado lento y cuidadoso al sol, suele demandar hasta 7
días. Pasados estos días el contenido de humedad deberá ser inferior a 8 %. De
especial importancia es el secado uniforme y. cuidadoso removiendo
constantemente las almendras con un rastrillo.
Esta metodología de secado natural se puede aplicar en diferentes formas así

como:
19
 Los tendales pueden ser de cemento los cuales deben tener una ligera
pendiente para facilitar el drenaje.
 Otro tipo de tendal son las denominadas marquesinas que son de madera o de
caña con un caballete sobre el cual se despliega una lámina plástica térmica
transparente para evitar las lluvias y las bajas humedades.
 Parihuelas para secado, que pueden construirse de madera, bambú o guadua,

de dos metros de largo por 80 centímetros de ancho, que reposan sobre
travesanos levantados del suelo. Sus medidas permiten el fácil manipuleo y
protección de los granos en caso de lluvias.
Para garantizar que el grado de estabilidad y conservabilidad de las almendras de

cacao sea suficiente, es necesario que el secado se efectúe con sumo cuidado.
Los granos se secan sobre instalaciones antes descritas, especiales como
esteras o tejidos de madera, plástico o metal que se colocan a una altura suficiente
del suelo para evitar las impurezas de polvo o de animales domésticos.
Una práctica que se debe erradicar es el uso de las carreteras asfaltadas para el
secado de cacao, puesto que el asfalto contiene materiales pesados que dañan la
calidad, así mismo el humo de los escapes de los automotores contaminan el
cacao, los cuales se adhieren trastornando los sabores y adquiriendo un olor
indeseable.
B. Secado artificial.
Es de mencionar que las condiciones que se obtienen con el secado artificial no

son las mismas que proporciona el secado natural, lo único que garantiza es un
rápido secado del producto.
En el caso del uso de secado artificial la temperatura juega un papel importante,

debiéndose iniciarse con no más de 35 °C, no se puede elevar por encima de 60
°C, puesto que si no las almendras se tuestan y no se secan.
Según los estudios realizados con referencia al thebroma cacao por Garciani, L.
et al., (2003). Nos indica que el secado artificial puede solucionar este problema
20
sin que por ello se pierda la calidad organoléptica. En el estudio se usaron las
siguientes condiciones: temperatura del aire 60 °C, velocidad del aire 0.5 m/s con
lo que garantiza un cacao de buena calidad y de características muy similares al
obtenido con secado natural. En todo caso se evitará el contacto del cacao con el
humo del combustible, pues éste afecta al sabor y olor, y con ello a la calidad.
C. Indicador práctico del secado:
Según los estudios realizados por Garciani, L. et al., (2003), con referencia al
cacao, nos indica que el índice practico de secado se realiza por saber que la
presión de los dedos índice y pulgar, donde se rompe los granos fácilmente.
D. Influencia del secado en la calidad del grano y la pasta de copoazu.
Esta etapa es identificada como la continuación de la fase oxidativa o de

reacciones iniciadas durante el proceso fermentativo. Se sabe, también, que los
cambios ocurridos durante la fermentación afectan las características
fisicoquímicas del grano seco; figurando entre ellos la formación de pigmentos,
producidos por compuestos fenólicos que originan el color marrón de los granos y
dan lugar al aroma y sabor.
Así mismo, el secado reduce el exceso de humedad que queda retenida luego de
la fermentación, evita el desarrollo de hongos que afectan su calidad; facilitando
su manejo, almacenamiento y comercialización. La reducción debe hacerse hasta
un 6 a 7% y un máximo de 8%; pérdidas mayores lo vuelve muy quebradizo al
grano.
Por otro lado, la exposición al sol tiene relación con las condiciones climáticas y
puede variar de una zona a otra o también en función de la época del año; siendo
además afectado por la textura del piso y la frecuencia de remoción de los granos.
21
CAPITULO II:
MATERIALES Y METODOS
2.1. Lugar de ejecución.
El presente trabajo de investigación se llevó a cabo en los laboratorios de la planta

piloto de frutas, laboratorio de procesos agroindustriales y en el laboratorio de química,
ambos pertenecientes a la Universidad Nacional Amazónica De Madre De Dios –
Puerto Maldonado, durante los meses de Enero hasta Marzo del 2015. Es así que la
última parte de la investigación fue analizada en el laboratorio de cromatografía de la
carrera profesional de química en la Universidad Nacional de San Antonio Abad del
Cusco del 2015.
Esta zona presenta una precipitación anual de 1157 mm, siendo los meses de mayores
lluvias en enero, febrero y marzo, con una marcada diferencia entre el período seco y
lluvioso, una temperatura media anual de 33°C y una humedad relativa promedio de
82.5%.
2.2. Materiales, equipos e infraestructura
2.2.1. Materia prima
La materia prima a utilizar fue el fruto de Copoazú (Theobroma grandiflorum),

cosechada en la provincia de Tambopata distrito de Inambari, del centro poblado Unión
Progreso de la asociación de agricultores Yanahoca del Departamento de Madre De
Dios, que se encuentra a una altitud de 186 m.s.n.m. y una temperatura máxima de
38°C y temperatura mínima de 22°C, con una humedad relativa de 83%.
2.2.2. Equipos
 Estufa universal automática marca MERMMERT, temperatura máxima 200ºC.

Germany
 Balanza analítica marca DENVER – USA modelo 2 APX 200 serie Nº A24075040
 Refractómetro digital de mano marca ATAGO tipo Pocket de 0 a 53 ºBrix.
 pHmetro digital marca HANNA
22
 Molino
 Plancha.
 Licuadora
 Equipo de titulación
 Termómetro de alcohol de 0°C-100°C.
2.2.3. Materiales
a) De laboratorio:
 Campanas desecadoras de vidrio al vacío

 Matraces Erlenmeyer 50, 100 y 150 ml.
 Probetas graduadas 100 ml
 Pipetas graduadas
 Vasos de precipitación de 50, 100 y 200 ml.
 Placas Petri, marca KIMBLE USA.
 Fiolas de 250ml
 Picetas para agua destilada
 Bandejas de mallas metálicas
 Espátula
 Bagueta
 Indumentarias (Mandil, Mascarilla y guantes)
b) De campo:
 Cajones fermentadores
 Baldes
 Bandejas de madera para secado de 0.50mx0.60m
 Bandejas de calamina para secado de 0.50mx0.60m
2.2.4. Reactivos
 Hidróxido de sodio (NaOH) a 0,1 N.

23
 Fenolftaleína al 1%.
2.2.5. Infraestrutura
A. Área de módulos de fermentación.
El presente trabajo de investigación se desarrolló los métodos de fermentación en

el área de su infraestructura de fermentación del Centro de Investigación
Tecnológica de producción que está ubicado dentro de las instalaciones de la
Universidad Nacional Amazónica de Madre de Dios. Donde fueron instalados dos
módulos de cajones de fermentación, cada módulo consta de 2 cajas que están
divididos por 50 cm x 50 cm x 60 cm, cada cajón consta de una capacidad de 70kg
de semilla (Ver figura 2).
Figura 2. Módulo de Área de fermentación de semilla de copoazu.
Fuente: Elaboración Propia (2015).
B. Área de secado natural.

Los dos métodos de secado (secado natural de bandejas de madera y secado de
bandeja galvanizada) de la investigación se desarrollaron en la infraestructura del
área de secado del Centro de Investigación Tecnológica de producción que está
ubicado dentro de las instalaciones de la Universidad Nacional Amazónica de
Madre de Dios. Donde fueron instalados (Ver figura 3).
24
Figura 3. Área de la infraestructura de Secado Natural de semilla de

copoazu.
2.3. Metodología
2.3.1. Tratamiento.
En la investigación de la fermentación de la semilla de copoazu se evaluó dos métodos

de fermentación que fueron fermentación de forma natural y fermentación con
agregación de solución de sacarosa, determinando las variables y efectos e
indicadores de los parámetros óptimos de fermentaciones. En esta investigación se
plantearon dos niveles de tratamientos de fermentación son:
Tratamiento 1 (T1) = 60 Kg. (fermentación natural con 15% de pulpa adherida a la

semilla).
Tratamiento 2 (T2) = 60 Kg. (fermentación con solución de sacarosa con 15% de pulpa
adherida a la semilla).
En la investigación de los métodos de secado de la semilla de copoazu fermentada,

se evaluaron tres métodos de secado, donde los dos primeros métodos fueron de
forma natural uno con bandejas de madera y el otro con bandeja de plancha
galvanizada y el tercer método fue secado artificial en una estufa a una temperatura
25
de 55°C por un tiempo de 40 min. En esta etapa de la investigación se plantearon tres

tratamientos o niveles, cada tratamiento con 3 repeticiones.
Tratamiento 1 (T1) = 15 Kg (Secado Natural con Bandeja de Madera).
Tratamiento 2 (T2) = 15 Kg (Secado Natural con Bandeja de Calamina).
Tratamiento 3 (T3) = 15 Kg (Secado Artificial con Estufa).
2.3.2. Muestreo
La muestra se obtuvo en la provincia Tambopata, distrito Inambari de la comunidad

Unión Progreso – Asociación de agriculturas Yanahoca está ubicado en la carretera
Puerto Maldonado-Cusco en el km 84, del predio agrícola del señor Nicolás Huanca
Quispe, que consta de cuatro hectáreas de cultivo de copoazu, donde se cosecho, 650
kg de copoazu para la investigación.
Para la recolección de las muestras experimentales se recolectaron cuando el

pedúnculo se desprendió naturalmente (estado óptimo de maduración) tomando en
cuenta que el fruto este sin daños microbiológicos, sobremadura o su estado de
madurez este incompleto y no tenga alteraciones físicas para la investigación.
2.3.3. Beneficio y obtención de pasta de chocolate natural de copoazu
El beneficio del copoazu es un proceso que consta de dos etapas muy importante que
son la etapa de fermentación y secado, la obtención de la pasta de chocolate natural
de la semilla de copoazu, tiene el mismo procedimiento al del cacao. La calidad físico-
química de la pasta de chocolate depende del adecuado beneficio que se da a la
semilla, esto obedece a los principios básicos de conservación de alimentos y se hace
con la finalidad de mejorar la calidad del grano y la pasta de chocolate de copoazu.
Así mismo se detalla el procedimiento experimental desarrollado durante la
investigación del procesamiento de beneficio (fermentación y secado) y obtención de
pasta de chocolate natural de la semilla de copoazu se observan en el siguiente.
26
Figura 4. Beneficio y proceso de elaboración de pasta de chocolate.

27
DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS DEL FLUJOGRAMA DE LA METODOLOGIA

DEL BENEFICIO DE LA SEMILLA DE COPOAZU
A. Obtención y localización de la materia prima.
El copoazu se adquirió de los cultivos del predio agrícola del señor Nicolás
Huanca Quispe, que consta de cuatro hectáreas de cultivo de copoazu, donde
se recolecto, 650 kg de copoazu para la investigación, ubicado en la provincia
Tambopata, distrito Inambari de la comunidad Unión Progreso – Asociación de
agriculturas Yanaoca está ubicado en la carretera Puerto Maldonado-Cusco en
el km 84, (Ver figura 5).
Figura 5. Localización del previo agrícola del fruto de copoazu.
Fuente: Elaboración propia (2015).
B. Cosecha
Se realizo la recoleccion de los frutos que cayeron de forma natural, el copoazu

tiene caracteristica muy diferente a su indice de maduracion del cacao, ya que
al copoazu hay que esperar que caiga naturalmente de su planta y se recolecta
normalmente del suelo.
28
Figura 6. Recolección de la materia prima de copoazu.
C. Clasificación y selección.
Para la clasificación de los frutos de copoazu se realizó de acuerdo al color,

textura, en la selección se hizo una breve inspección en la que se tomó en
cuenta las investigaciones de Chávez, A. y Manzilla, J. (2004). La selección
consiste en separar los frutos en mal estado o en deterioro ya sea por daños
mecánicos, físicos y microbiológicos, esta etapa normalmente se lleva acabo de
forma manual.
Figura 7: Selección y clasificación del fruto de copoazu.

29
D. Lavado
Esta operación se realizó por un equipo llamado lavador de rodillos con una
aspersión de agua. Las frutas fueron sometidas a un lavado con agua potable
para así eliminar la tierra y partículas extrañas que viene adheridas en la
cascara del fruto con la ayuda de un escobillón.
Figura 8. Lavado del fruto de copoazu.
E. Remoción de la cascara
La remoción de la cascara externa del copoazu se realizó con un mazo de

madera para poder facilitar su posterior apertura de la cascara del fruto en forma
manual la parte interior (pulpa, semilla y raíces) se separó la cáscara realizando
un desgrane manual y retirando la raíces que se encuentran sujetas a las
semillas, esto se realiza debido a que ésta da lugar a granos aglomerados entre
sí que dificultan la etapa de secado y fermentación (Hernández et al., 2006).
Figura 9. Remoción de la cascara del fruto de semilla de copoazu.

30
F. Despulpado.
El despulpado se realizó en forma mecánica con una despulpadora de frutas

(Nova, Perú), con una malla con orificios de 5 mm, su función es en separar la
pulpa de la almendra. Durante este proceso tuvo un rendimiento la
despulpadora que se utilizó un 85% de la pulpa, donde un 15% se quedó
adherido a la semilla. El porcentaje mínimo de semillas fracturadas fueron
retiradas del proceso, pasando los granos directamente a los cajones
fermentadores.
Figura 10. Despulpado mecánicamente del copoazu.
G. Fermentación.
Para el proceso de fermentación se eligió dos métodos, donde el primero es el

método de forma natural y el segundo es el método con solución de sacarosa.
Este proceso de fermentación se realizó por el método en caja de madera, ya
que se ha demostrado que es uno de los mejores métodos de fermentación para
obtener una semilla de copoazu con un buen índice de fermentación y de buena
calidad. El material de madera que se usó para elaborar las cajas fue la especie
de tornillo, debido a la resistencia que tiene ante la acidez del copoazu, no
absorbe humedad y no tiene olores que puedan transferirle al copoazu ya que
este es higroscópico las dimensiones de las cajas fueron las siguientes: 100cm
de largo, 50 cm en anchura y 60 en altura, divididas en dos compartimiento de
31
50x50x60 cm, los cajones tuvieron un orificio en la parte interna de la base del
cajón de un diámetro de 0.5cm, espaciados a cada 2.5cm para permitir que
facilite la exudación de lixiviados en la masa o escurrido de la pulpa. Durante
los 8 días de fermentación se evaluaron los comportamientos de temperatura,
Acidez, pH, Solidos solubles, humedad, prueba de corte de la semilla de
copoazu en los dos métodos de fermentación. La fermentación tuvo como
volumen para cada tratamiento un lote de 60 kg de semilla con un 15% de pulpa
adherida a la semilla.
Figura 11. Módulo de Cajones de fermentación de semilla de copoazu.
Antes de comenzar el proceso de fermentación se tuvo que curar las cajas

fermentadoras debido a que la madera era nueva. Para ello se procedió a
realizar el curado colocando 50kg de semillas con pulpa en cada una de las
cajas, la acidez que tiene el copoazu ayudará a que las cajas desprendan
compuestos naturales en ellas, que provocan un sabor no característico a las
semillas de copoazu después de la fermentación y posteriormente se eviten
falsos resultados en la calidad de la pasta de chocolate natural.
En los dos tratamientos de fermentación fueron realizadas remociones para la

oxigenación y homogenización del proceso fermentativo, a partir de las 24 horas
del inicio de la fermentación y cada 24 horas, transfiriéndose el material de la
caja al siguiente compartimiento para facilitar la operación hasta el término de
los ocho días de fermentación.
32
Durante las 48 horas que comienza la fermentación anaeróbica, es ahí donde

se provoca la licuefacción de la pulpa que envuelve a las semillas, terminado
este tiempo, comienza la fermentación aeróbica donde favorece la actividad de
las bacterias lácticas. De esa forma, para impedir la actividad masiva de las
bacterias lácticas (no volátil), que afectan de forma negativa el desenvolvimiento
de los precursores de sabor, se debió realizar la oxigenación de la masa en
fermentación por medio de su remoción que serán efectuados cada 24 horas.
Este procedimiento es de extrema importancia en la uniformización de la
fermentación, y, por el contacto con el oxígeno del ambiente favorecerá al
desenvolvimiento de las bacterias acéticas (volátil).
H. Secado.
En el proceso de secado fue realizado según la investigación por tres métodos

diferentes, el primero fue secado natural con bandejas de madera, segundo
secado natural con bandejas galvanizadas y el tercero por secado artificial por
el método de Estufa a una temperatura de 55°C por un tiempo de 13 horas., en
esta etapa del proceso se evaluó el comportamiento de la pérdida de agua. En
los dos métodos de secado de forma natural se empezó con un secado gradual
durante los dos primeros días es decir no exponiendo los granos al sol por más
de 4 horas al día. El secado se realizó con las semillas procedentes del proceso
de fermentación natural y fermentación con solución de sacarosa, donde el
secado es una de las etapas más relevantes para el buen desarrollo de aromas
y sabores en el copoazu después de fermentado. La velocidad de secado junto
a la temperatura, son esenciales para mantener activas las reacciones de
oxidación de alcoholes y otros compuestos generados en la etapa anterior
(Liendo, 2005).
Adicionalmente, el secado permite a la semilla de copoazú a estabilizarse

durante el almacenamiento ya que posee un bajo contenido de humedad final y
actividad de agua en la almendra después del lapso de secado, al ser tan bajo
el valor de humedad (7%), no se permite la proliferación de hongos y bacterias
33
descontroladamente. Las condiciones más favorables en el secado según

ACOPAGRO, se obtienen cuando se realizan con el calor del sol, que es la
fuente más económica y adecuada en comparación al secado artificial.
Los procesos de secado se realizaron de las tres siguientes maneras:
 Secado natural en bandeja: Este proceso de secado se realizó en una

bandeja hecha con madera de tornillo y con las siguientes medidas 50cm
x 50cm y 60cm de profundidad, 5kg en cada bandeja debido a que presento
la ventaja de la temperatura moderada. El inconveniente fue la
dependencia del clima, de 4 días de secado natural pero en lo cual no
tuvimos ningún inconveniente en la realización del proceso de secado.
Figura 12. Secado natural de bandeja de madera (SNBM).
 Secado natural con bandeja galvanizado: En este proceso de secado se

realizó, bandejas de 1 x 1.5 m., el volumen que se utilizó para la
investigación fue de 5 Kg de semilla fermentada, este método se aplicó con
el método natural expuesto al sol, durante 4 días, con el fin de secar rápido
ya que la calamina conduce buena conductividad térmica expuesta al medio
ambiente y la desventaja fue la dependencia del clima.
34
Figura 13. Secado natural de bandeja galvanizada (SNBG).

 Secado artificial con Estufa: En este proceso se realizó en una estufa con
una temperatura de 55°C con un tiempo de 13 horas, para obtener los granos
bien secos y de forma rápida en menor tiempo posible la ventaja es que se
limita a grandes productores industriales exportadores las remociones serán
periódicamente.
Figura 14. Secador artificial (SA) por el método de Estufa
I. Tostado.
En esta etapa, el método de tostado por medio de los ensayos realizados según
Alessandra Santos, et al (2003) determinó que el tiempo recomendado para la
almendra de copoazu es un tiempo de 55 minutos, con una temperatura de
150°C donde las almendras tostadas presentaron mayor facilidad de
35
descascarillado por presión manual, que es evidencia del desprendimiento de

la corteza y la nuez.
Figura 15. Sistema de torrado por el método de Estufa.
J. Descascarillado.
Este proceso se realizó de una forma manual, el rendimiento de descascarillado

depende mucho de la temperatura adecuada para tener la cascarilla con una
fácil separación del cotiledón y por ello el tiempo probable será 25 – 30min. Con
una temperatura media para un buen descascarillado y fácil despegue del
cotiledón.
Figura 16. Descascarillado de forma Manual

36
K. Molienda.
El proceso de molienda se realizó, con un molino artesanal acoplado a un motor

2PH de potencia y un molino manual, así como se muestra en la figura 17,
donde se tuvo que hacer pasar la muestra 5 veces en el molino, para poder
obtener una pasta de chocolate natural lo más fino posible y sin granulaciones.
Figura 17. Equipo de Molienda artesanal.
L. Moldeado y Pasta de copoazu.
En esta etapa el moldeado se realizó de forma inmediata en tabletas de 100g,

y luego puesto a refrigeración para su solidificación rápida del moldeado, este
proceso es importante, con el fin de que la pasta no se oxide y cambie de color,
se haga oscuro y para mantener las características típicas de la pasta y alargar
la vida útil del producto se realiza el sellado al vacío.
Figura 18. Pasta de chocolate Natural de semilla de copoazu.

37
Cuadro 1. Balance de masa en el beneficio y la obtención de la pasta de

chocolate natural del fruto del copoazu.
OPERACIÓN INGRESO SALIDA PERDIDAS

(Kg) (Kg) (Kg) (%)
Recepción 0.00 0.00 0.00 0.00
Pesado 334.00 334.00 0.00 0.00
Selección y Clasificación 334.00 333.50 0.00 0.00
Lavado 334.00 333.50 0.50 0.15
Remoción de la cascara 333.50 180.09 153.41 45.00
Despulpado – semilla 180.09 60.03 120.06 36.00
Fermentación 60.03 46.43 13.60 22.60
Secado 46.43 16.95 29.48 46.43
Tostado 16.95 15.81 1.14 6.7
Descascarillado 15.81 12.33 3.48 22.00
Molienda 12.33 11.98 0.34 2.80
Moldeado 11.98 11.98 0.00 0.00
Rendimiento en la obtención de la pasta de chocolate de copoazú
 Peso inicial de la materia prima = 334.0 Kg
 Peso final de la pasta de chocolate de copoazú = 11.98 Kg
 Rendimiento en % de la pasta de chocolate natural = 3.58 %
En el cuadro 1, se muestra los resultados del rendimiento que se obtuvo durante el beneficio
y obtención de la pasta de chocolate natural de la semilla de copoazu, donde se obtuvo de
334.00 kg de fruta en coco de copoazu, donde tuvo un rendimiento en pasta de 3.58 % en
promedio que representa un 18kg de pasta de chocolate natural. Estos rendimientos dependen
de la variedad y zona de cultivo del fruto de copoazu.
38
2.3.4. Métodos de Análisis.
En la investigación se evaluaron el comportamiento del proceso de fermentación y

secado, las cuales fueron temperatura, pH, Acidez, solidos solubles, humedad y
prueba de corte. Estos análisis se realizaron a la pulpa y cotiledón en el proceso de
fermentación y en el secado solo la perdida de humedad. En estos análisis se utilizaron
los métodos recomendados por la Normas Técnicas Peruanas (NTP), durante los
procesos de fermentación y secado; los cuales se determinaron por medio de muestras
en triplicado, estos fueron:
A. Temperatura de la masa del copoazu.
Fue determinada mediante un termómetro manual calibrado de 0 a 100 °C con

una precisión de ± 0,1 °C, el cual fue introducido en tres puntos, superficie, medio
e inferior de la masa de semilla de copoazu en los cajones fermentadores, la
lectura fue tomada a la misma hora y durante los ocho días que duro el proceso
de fermentación.
Figura 19. Lectura de temperatura en la masa de fermentación.
B. Determinación de Humedad (NTP-ISO 2291)
La determinación del contenido de humedad se hizo por Triplicado en placas petri

a peso constante, se colocaron en cada una de ellas un peso conocido de
muestras (5 g aprox.). Una vez que la estufa fue precalentada a 103 ºC + 2 ºC,
39
cada muestra en su cápsula fue sometida a calentamiento en la estufa durante

16 horas. Transcurrido este período las cápsulas con las muestras fueron
retiradas de la estufa y colocadas en el desecador, dejándolas enfriar hasta que
alcanzara la temperatura ambiente; y finalmente pesadas una vez más. Se
calculó mediante la siguiente fórmula:
% H = Pi - Pf x 100
Pi Dónde:
Pi = Peso inicial (Peso de Placa + Muestra)
Pf = Peso final
%H = Porcentaje de humedad
C. Determinación del pH
Para la medición del pH se usó un pH-metro digital, previa calibración del

potenciómetro, se enjuago el electrodo con agua destilada y se secó
cuidadosamente, el potenciómetro se calibro con buffer pH 7, para la preparación
de la muestra del cotiledón y la pulpa se sigue el procedimiento de la NTP-
203.070, las determinaciones se hicieron por triplicado.
Figura 20. Equipo de medición de pH potenciómetro.

40
D. Determinación de acidez titulable (NTP-203.070)
Para la determinación de la acidez, se siguió el siguiente procedimiento para la

preparación de la muestra según (NTP-203.070), la determinación se hizo por
titulación con una solución valorada de hidróxido de sodio 0.1 N, se transfirieron
de la muestra a un vaso precipitado y se adicionó 2 a 3 gotas de solución de
fenolftaleína. Posteriormente se tituló a 48 muestra hasta que se estabilice el vire
al color rosa. El porcentaje de acidez es expresada como ácido cítrico
calculándose mediante la siguiente fórmula.
% Acidez = N x V x 0.064 x 100
Vm
Dónde:
N = Normalidad del Hidróxido de Sodio
V = Volumen del Hidróxido de Sodio usado para la titulación.
0.064 = Miliequivalentes del Ácido Cítrico.
Vm = Volumen de la Muestra (ml).
Figura 21. Medición de la Acidez

41
E. Determinación de solidos solubles (NTP 203.072)
Los sólidos solubles se expresaron como ºBrix, se determinó con un

refractómetro digital NR151, a 25ºC. La preparación de la muestra (pulpa) fue
preparada según la NTP 203.072. Una vez obtenido la muestra preparada se
toma dos gotas para determinar los sólidos solubles en un refractómetro de previa
calibración del equipo con agua destilada, posteriormente se leyeron los º Brix
por triplicado.
Ss = mS
15
En donde:
S = contenido de solidos solubles en el producto, en porcentaje en
masa
M = más de los 100 cm3 de la muestra preparada, en gramos
S = contenido de solidos solubles en la muestra preparada,
encontrado por medio de la lectura del refractómetro digital y
corregido a 20°C en porcentaje de masa.
Figura 22. Equipo de medición de sólidos solubles (°Brix) refractómetro.

42
F. Determinación de prueba de corte (NTP-ISO 1114)
Para realizar esta prueba se hizo un corte longitudinal por la parte central de 20
granos de copoazu, a fin de exponer la máxima superficie de corte de los
cotiledones. Examinamos visualmente las dos mitades de cada grano a la luz
diurna o bajo una iluminación artificial (lámpara fluorescente). Se determinó la
estructura física, color, adhesión de cascarilla y porcentaje de granos bien
fermentados, insuficientemente fermentados y pizarrosos.
Figura 23. Prueba de corte de la semilla de copoazu.
G. Determinación de los compuestos fenólicos
Para la determinación de los compuestos fenólicos totales, se utilizó el

procedimiento con algunas modificaciones de W. Brand-Williams et al (1995) se
llevó a cabo en el laboratorio de cromatografía de la Universidad Nacional de San
Antonio Abad del Cusco, donde se determinó los compuestos fenólicos con un
sistema de HPLC (Alliance Waters 2695) equipado con un detector de arreglo de
diodos (PDA, Waters 2998) y un automuestreador (Waters Cop., Milford, MA)
empleado el software Empower 3. La separación se realizó con una columna
Synergi Max-RP C12 (250 x 4.6 mm, tamaño de poro 4 µm). La separación
cromatografía se llevó a cabo inyectando 10µL de extracto utilizando dos
solventes: (A) ácido fórmico 0.01% (v/v) en agua y (B) acetonitrilo 100%, con un
43
flujo de 1mL/min en un tiempo total de corrida de 50 min. Las condiciones de

gradiente fueron como se describe a continuación: (A): del min 0 al min 34.90%;
del min 35 al min 39.50%; del min 40 al min 50.90%; solvente (B): del min 0 al
min 34.10%; del min 35 al min 39.50%; del min 40 al min 50.10%; las detecciones
se realizaron a 280 nm para los ácidos fenólicos y a los 320 nm para los
flavonoides. Los compuestos fenólicos fueron identificados y cuantificados
usando estándares comerciales de ácidos fenólicos (ácido gálico) y flavonoides
(quercetina-3-β-glucósido).
Figura 24. Equipo de cromatografía por HPLC.
H. Determinación de la capacidad antioxidante.
La determinación de la capacidad antioxidante se llevó a cabo en el laboratorio

de cromatografía de la Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco,
donde se utilizó el método del DPPH es un radical estable de color violeta, cuya
absorbancia disminuye al ser reducido por un antioxidante. La capacidad
antioxidante de los extracto se cuantifico según lo reportado por Funkumoto y
Mazza (2000) con algunas modificaciones realizadas por Cardador – Martínez et
al. (2000). El radical DPPH se preparó inmediatamente antes de ser utilizado a
44
una concentración de 150 µM, protegido por la luz. En una microplaca de 96

pozos se colocaron 20 µ de muestra, estándar y blanco por triplicado; a cada
muestra se agregó 200 µL de DPPH y se leyó la absorbancia a 515 nm
(espectrofotómetro Thermo Scientific Multiskan GO) desde el tiempo de reacción
0 hasta los 60 min en intervalos de 10 min. Se utilizaron como estándares Trolox
(6-hidroxi-2, 5, 7,8-tetrametilcromo-2-acido carboxílico). Las determinaciones se
llevaron a cabo por triplicado. La capacidad antioxidante se expresó en µmol de
ET/100 g muestra húmeda según lo reportado por Cardador-Martinez et al.
(2006). Así mismo, se calculó el valor IC50 (mg/mL) que corresponde a la
concentración requerida para inhibir en un 50% la actividad del radical DPPH.
Figura 25. Equipo espectrofotómetro.
2.4. Codificación
Para poder identificar los diferentes tratamientos estudiados en el proceso de

fermentación y secado de la semilla de copoazu se estableció una codificación en
función al proceso y método que se aplicó en la investigación y así como se detalla en
la tabla 4, la codificación de los dos métodos de fermentación.
45
Tabla 4: Codificación de los tratamientos de métodos de fermentación.
TRATAMIENTO CÓDIGO
Fermentación Natural FN
Fermentación con Solución FS
Fuente: Elaboración Propia 2015.
En la tabla 5, se muestra la codificación de los tres métodos de secado para cada

tratamiento de fermentación así como se muestra.
Tabla 5. Codificación de los tratamientos de métodos de secados.
TRATAMIENTO CÓDIGO
Fermentación Natural - Secado Natural con Bandeja de Madera FN-SNBM
Fermentación Natural - Secado Natural con Bandeja Galvanizado FN-SNBG
Fermentación Natural - Secado Artificial FN-SA
Fermentación con Solución - Secado Natural con Bandeja de Madera FS-SNBM
Fermentación con Solución - Secado Natural con Bandeja Galvanizado FS-SNBG
Fermentación con Solución - Secado Artificial FS-SA
Fuente: Elaboración propia 2015.

46
CAPITULO III:
RESULTADOS Y DISCUSIONES
3.1. Características físicas de la semilla
Para este estudio de investigación se utilizó una de las tres especie de copoazu
(Theobroma grandiflorum), que fue el mamorana es una de las especies mayor
cultivadas en la región de Madre de Dios, según la Dirección Regional Agraria. Para el
estudio del fruto se evaluó y analizó el rendimiento del fruto de copoazu, donde los
datos obtenidos fueron tomados por triplicado y promediado con su desvió estándar,
así como se muestra en la tabla 6.
Tabla 6. El porcentaje del rendimiento del fruto de copoazu.
PARTE DEL FRUTO RENDIMIENTO*
Corteza (%) 42.22 ± 0.87
Pulpa (%) 41.01 ± 1.06
Semilla (%) 17.29 ± 0,83
*Media ± Desviación estándar
En la tabla 6, se muestra los resultados obtenidos del rendimiento, donde nos indica
un alto contenido de pulpa que fue de 41.01 ± 1.06 %, en base a la semilla se tiene
un valor de 17.29 ± 0,83 % y corteza un valor de 42.22 ± 0.87 %, estos valores
obtenidos indican un alto rendimiento del fruto en el departamento de Madre de Dios,
ya que los resultados encontrados en esta investigación son similares a los reportes
por Barbosa, (1979) y Calzavara, (1984).
En la Tabla 7, se puede apreciar las características físicas de la semilla donde se

determinó peso, longitud y diámetro, donde se realizaron y se obtuvieron datos por
47
triplicado de su media y se calculó su desvío estándar y los valores se presentan a

continuación en la tabla 7.
Tabla 7. Caracterización física de la semilla de copoazu.
Medidas Valores*
Peso (g) 6.65 ± 0.63
Longitud (cm) 2.72 ± 0.21
Diámetro (cm) 1.15 ± 0.05

Fuente: Elaboración propia (2015)
En la tabla 7, se aprecia los resultados obtenidos en las mediciones, se observa que

la semilla utilizada en la investigación tiene un promedio de longitud de 2.72 cm,
diámetro de 1.15 cm y peso 6.645 g.
Los valores obtenidos en sus propiedades físicas de la semilla de copoazu, donde los
datos del peso, longitud y diámetro son similares a los reportados por Venturieri, (1993)
y Rocha Neto, (1999).
3.2. Caracterización fisicoquímico del cotiledón y pulpa
Al inicio de la investigación se realizó un análisis físico-químico del cotiledón y pulpa

del copoazu, en la Universidad Nacional San Antonio Abad del Cusco donde los
resultados en semilla y pulpa fresca se presentan en la tabla 8.
48
Tabla 8. Composición físico-químico del cotiledón y pulpa del copoazu.
ANÁLISIS COTILEDÓN PULPA NORMA
Humedad % 45.22 83.77 NTP 206.011
Proteína % 5.09 0.97 AOAC 935.39C
Grasa % 18.07 0.13 NTP 206.017
Ceniza % 2.84 0.27 AOAC 935.39B
Fibra % 4.9 2.14 FAO 14/7
Carbohidratos % 21.25 14.86 Diferencia

Acidez %
(H2SO4) 0.12 0.22 NTP 206.013
Fuente: Laboratorio de Análisis químico de la UNSAAC (2015).
En la tabla 8, se muestra la composición físico-química del cotiledón y pulpa en el cual

se puede observar que tiene un contenido de humedad de 45.22%, grasa un 18.7%
con respecto a la acidez en el cotiledón se observa que tiene un 0.12% y de la pulpa
un 0.22%, los valores obtenidos son similares a los valores referenciales mencionados
en Pizarro et al., (2010) y Calzavara (1984).
3.3. Resultados de las evaluaciones del comportamiento de los dos métodos de

fermentación de la semilla de copoazu (Theobroma grandiflorum).
En la etapa de fermentación de la semilla, se evaluaron el comportamiento de su

variación de la temperatura, acidez, pH, solidos solubles, humedad y prueba de corte,
durante los ochos días de fermentación, donde se observaron una variación en sus
comportamientos de sus compuestos físico-químico de la pulpa y cotiledón del fruto
49
de copoazu, a continuación explicaremos paso a paso de la evaluación de estas

variables durante el proceso de fermentación de la semilla de copoazu.
3.3.1. Perfil de Temperatura.
En los resultados de las evaluaciones del comportamiento de la temperatura en los

dos tratamientos de fermentación natural (FN) y fermentación con solución (FS) de la
semilla de copoazu, los valores se obtuvieron en tres puntos diferentes de la masa
fermentada los cuales fueron en la superficie, medio e inferior de la masa de
fermentación, obtenidos como resultados una diferencia aceptable en el
comportamiento de la temperatura en los dos métodos de fermentación.
El comportamiento en la temperatura fue de forma ascendente en ambos tratamientos

donde existe una variación de datos en los tres puntos que se tomaron la temperatura,
en donde el mayor comportamiento de la temperatura se observa en el punto medio
de la masa de fermentación de los dos tratamientos durante todo el proceso de
fermentación.
En la tabla 9, se muestra los valores obtenidos durante la evaluación del

comportamiento de la temperatura en los tres puntos tomados de la masa de
fermentación de los dos tratamientos de fermentación, donde los resultados que se
obtuvieron fueron tomados por triplicado y promediado con su desvió estándar, así
como se muestra en la tabla 9.
50
Tabla 9. Comportamiento de la temperatura en los tres puntos de la masa

fermentante.
TEMPERATURA °C
Días Fermentación Promedio Fermentación con Promedio

natural (FN) solución (FS)
TS TM TI TS TM TI
0 29 28 29 29 29 29 28 29
1 30 30 29 30 31.5 30 29.5 30
2 31 31 30 31 32 31 30 31
3 32 33 30 32 33 32 31 32
4 36 35 31 34 33 31 29 31
5 45 45 43 44 43 40 38 40
6 43 45 41 43 44 41 39 41
7 43 44 40 42 45 46 45 45
8 42 43 39 41 43 44 43 43
TS: Temperatura en la Superficie, TM: Temperatura Medio, TI: Temperatura Inferior

En la tabla 9, se puede observar los valores obtenidos durante el comportamiento de

la temperatura entre niveles de la masa de fermentación en los dos tratamientos, como
son fermentación natural (FN) y fermentación con solución (FS). En el tratamiento FN,
se muestra un comportamiento inicial de la temperatura de 29°C en la superficie, 28°C
en el medio y 29°C en inferior, donde el promedio de las tres medidas es 29°C de
temperatura. En el tratamiento FS, tuvo un comportamiento en su temperatura inicial
en la superficie de 29°C, en el medio 29°C y en el interior fue de 28°C de temperatura,
donde el promedio de las tres medidas es de 29°C de la masa de fermentación.
En los tres primeros días de fermentación, el comportamiento de la temperatura del

tratamiento FN, se observó un ascenso leve en los tres días como también en los tres
niveles de medición de la temperatura, donde el día uno tuvo como valor promedio
30°C y el cuarto día tuvo 34°C de promedio de temperatura, donde la diferencia de
51
incremento entre el primero y el cuarto es de 5°C de temperatura. El comportamiento

de la temperatura en los tres primeros días de fermentación del tratamiento FS, tuvo
como resultado un incremento leve, donde el día uno se obtuvo 30°C de promedio de
temperatura y el cuarto día un valor de 31°C en promedio, donde esto hace una
diferencia de incremento de 1°C de temperatura ganada durante los tres primeros días.
Estos resultados del leve incremento en la temperatura de los dos tratamientos se
deben a que los microorganismos presentes en el proceso de fermentación se
encuentran en un estado de adaptación al medio de la masa de fermentación, también
se debe a la cantidad de pulpa adherida en la semilla ya que fue un promedio de 15%,
lo cual provoca una dificultad en el aumento de temperatura en los primeros días de
fermentación.
Según la investigación realizada por Leal (2008), nos indica que el exceso de pulpa
adherida a la semilla de copoazu en los primeros días impide la plena respiración de
la almendra y requiere de mayor tiempo de fermentación y acción de los
microorganismos presentes en la pulpa la cual incrementa significativamente el
parámetro de la masa fermentante.
En el quinto día de evaluación de la fermentación se observó, que el tratamiento FN,

alcanzo su valor más alto en su temperatura promedio que fue de 44°C, esto se explica
por el hecho que la pulpa adherida a la semilla fue en su totalidad consumida sus
nutrientes por los microorganismos, en comparación con el tratamiento FS, donde solo
hubo un incremento en la temperatura de 40°C, esto se explica a la alta concentración
de nutrientes debido a la cantidad de sacarosa adicionada al tratamiento y eso provoca
que la temperatura de la fermentación se prolongue.
En el séptimo día de evaluación del tratamiento FS, mostro su valor más alto alcanzado
en su temperatura, el cual fue de 45°C, promedio.
En los últimos días de fermentación, el comportamiento de la temperatura del

tratamiento FN, tuvo un descenso leve, donde los valores obtenidos en el sexto día fue
de 43°C en promedio y el octavo día fue de 41°C de temperatura en promedio de la
masa de fermentación del tratamiento FN, el cual hace una diferencia de disminución
52
de temperatura entre el sexto y octavo día de 2°C de temperatura. En el tratamiento

FS, el descenso de la temperatura se da en el octavo día de fermentación, donde el
valor fue de 43°C de temperatura promedio. Este comportamiento del descenso en la
temperatura al final de la fermentación en los dos tratamientos se debe a la falta de
nutrientes en la masa fermentada y esto provoca la muerte de los microorganismos
presentes en el proceso de fermentación. Según las investigaciones realizadas por
Portillo et al. (2005), nos indica que el descenso de la temperatura en los últimos días
de la etapa de fermentación, se debe a la inactivación de las bacterias acéticas y la
muerte del cotiledón, ocasionado por la penetración del ácido acético al interior de la
cotiledón.
Durante todo la investigación del proceso de fermentación, en los resultados se

observó que el comportamiento de la temperatura en los tres niveles tomados fueron
en la superficie (TS), medio (TM) e interno (TI) de la masa de fermentación, donde tuvo
un comportamiento de la temperatura diferente en los tres niveles tomados, en donde
el nivel de la superficie tomada se obtuvo los valores más altos en el comportamiento
de temperatura de los dos tratamientos FN y FS.
Según los estudios realizados con referencia al cacao por Senanayake et al (1995),
nos indica que el comportamiento de la temperatura en los tres puntos; superficie,
medio e interno del proceso de fermentación del cacao, observa que en la superficie
de la masa de cacao, la temperatura es mayor que en el medio y en el interno de la
masa de fermentación.
53
46 y = -0.1633x3 + 1.9116x2 - 3.2054x + 29.525

44 R² = 0.9252
T. sin solucion
42
TEMPERATURA (°C) T. con solucion
40
38
36
y = -0.0742x3 + 1.0565x2 - 1.7197x + 29.71
34 R² = 0.9238
32
30
28
0 1 2 3 4 5 6 7 8
DIAS DE FERMENTACION
Grafico 1. Curva de comportamiento de la temperatura en la fermentación.

En el grafico 1, se puede apreciar gráficamente la curva del comportamiento de la

temperatura con respecto a los días de fermentación de los dos tratamientos, donde
los resultados obtenidos fueron eficiente ya que alcanzaron la temperatura adecuada
para la muerte del cotiledón en los dos tratamientos, donde el tratamiento FN, tuvo
como valor más alto en el quinto día de fermentación que fue de 44°C de temperatura
promedio. En el tratamiento FS, se obtuvo un valor mayor que el otro tratamiento que
fue de 45°C de temperatura en el séptimo día.
Los datos obtenidos en el comportamiento de la temperatura en los tres niveles

(superficie, medio e interno) del cotiledón son semejantes a los estudios de
investigación realizados por Criollo (2010).
3.3.2. Comportamiento del pH de la pulpa y cotiledón.
En la evaluación del comportamiento de pH de la pulpa y el cotiledón durante el

proceso de fermentación se observó que el pH de la pulpa tiene un comportamiento
ascendente y en el pH del cotiledón tiene un comportamiento descendente lo cual
significa que los comportamientos de las masas fermentantes fueron buenas tanto
para el pH de la pulpa y pH del cotiledón. A continuación explicaremos el
comportamiento del pH en la pulpa y cotiledón del fruto del copoazu.
54
a. pH de la Pulpa.
Los resultados de la evaluación del comportamiento del pH que se realizó a los
dos tratamientos de fermentación, muestra un comportamiento, donde existe una
diferencia significativa (P <0.05) entre la FN y FS, se pudo observar un
comportamiento de forma ascendente en los dos tratamientos de fermentación,
teniendo valores similares reportados de acuerdo con lo analizado por Hernández
y León (2003), quienes aseguran que el ascenso del pH se genera gracias a la
conversión del etanol a ácido acético, dándose una migración en la semilla de
compuestos de la testa al cotiledón. Los resultados que se obtuvieron fueron
tomados por triplicado y promediado con su desvió estándar, así como se
muestra en la tabla 10.
Tabla 10. Comparación del comportamiento del pH de la pulpa en los dos

tratamientos de fermentación.
pH DE PULPA
DIA FN FS
0 3,07 3,1
1 3,44 3,31
2 3,72 3,42
3 4,04 3,47
4 4,21 3,53
5 4,23 3,75
6 4,53 4,45
7 5,13 4,5
8 6,15 4,73
Fuente: Elaboración propia 2015.
En la tabla 10, se muestra los datos obtenidos durante la evaluación del pH de los dos
tratamientos como son Fermentación Natural (FN) y Fermentación con Solución (FS),
55
el comportamiento del día cero tuvo una diferencia significativa mínima, donde el
tratamiento FN, comenzó con un pH acido de 3.07 y FS con un pH, 3.1.
En el tratamiento FN, se observa que en los primeros días uno, dos y tres existe un
incremento acelerado, debido al incremento de la masa de fermentación donde esto
provoca un desdoblamiento y transformación de los carbohidratos existentes en la
pulpa y a la formación del ácido acético por la formación del alcohol el cual provoca
una fermentación eficiente donde los valores del primer día fue un pH de 3.44 y el
tercer día fue de 4.04, con una diferencia de ascenso de un pH de 0.6 el incremento.
En el caso del tratamiento FS, los primeros días uno, dos y el tres día, tuvo un
incremento moderado, esto se debe a la agregación de sacarosa en el tratamiento,
donde provoco un incremento en los nutrientes y esto hace que los microorganismos
produzcan poco ácido acético por la alta concentración de nutrientes, donde los
valores obtenidos en el día uno fue de un pH 3.31 y el tercer día tuvo un pH de 3.47,
con una diferencia de un pH de 0.16 del incremento de los tres días.
En el cuarto y quinto días de fermentación el tratamiento FN, tuvo un comportamiento

de su incremento moderado de pH, debido a que en esos días la temperatura de
fermentación estuvo en sus valores más altos, esto provoca el desgaste de los
nutrientes, en donde los microorganismo se encontraba en la fase estacionaria en el
proceso de fermentación, donde la diferencia entre los dos días fue de un incremento
de un pH de 0.17. En el tratamiento FS, tuvo un incremento de pH en los días cuatro
y quinto, donde la diferencia de incremento fue de un pH de 0.06.
Los resultados del pH de la pulpa de copoazu en los últimos días de fermentación tuvo
un comportamiento en el tratamiento FN, un incremento moderado en donde tuvo
como valor final del octavo día de fermentación un pH de 6.15 mayor que el tratamiento
FS, donde solo se obtuvo un pH de 4.73, final, la diferencia en los dos tratamiento se
da por un diferencia de 1.42. Los datos obtenidos en esta investigación sobre el
comportamiento del pH en la pulpa son semejantes a los datos obtenidos por
Hernández y León (2003).
56
6.5
5.5
pH DE LA PULPA
5
y = 0.016x3 - 0.1628x2 + 0.6636x + 3.007
R² = 0.9927
4.5
3.5
y = -0.0012x3 + 0.0334x2 + 0.0114x + 3.176
3 R² = 0.9482
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Grafico 2. Perfil del comportamiento del pH de la pulpa.

En el grafico 2, se muestra gráficamente las curvas del comportamiento de pH de la

pulpa que tuvo los dos tratamientos de fermentación, se puede apreciar que existe una
variación en el comportamiento de pH en los dos métodos de fermentación durante los
ocho días evaluados. En el método de fermentación natural se puede observar que
tuvo un incremento mayor, esto se debe a las propias condiciones que fue
acondicionado el fermento de una forma natural. Por el otro lado el método de
fermentación con solución de sacarosa tuvo un comportamiento aceptable para la
formación del ácido acético y la muerte del cotiledón.
b. pH del cotiledón.
Los resultados del comportamiento del pH en el cotiledón, fue de forma

descendente en los dos tratamientos de fermentación y teniendo valores
similares reportados de acuerdo con lo analizado por Hernández y León (2003),
quienes aseguran que el descenso del pH se genera gracias a la conversión del
etanol a ácido acético, dándose una migración en la semilla de compuestos de la
testa al cotiledón.
57
En la siguiente tabla 11, se muestra los valores obtenidos del comportamiento

del pH del cotiledón durante los días de fermentación, donde los resultados que
se obtuvieron fueron tomados por triplicado y promediado con su desvió
estándar, así como se muestra en la tabla 11.
Tabla 11. Comportamiento del pH del cotiledón
pH DEL COTILEDON
DIA FN FS
0 6,46 6,25
1 6,85 6,78
2 6,62 6,64
3 6,66 6,53
4 6,05 6,46
5 5,28 6,21
6 5,79 5,06
7 4,95 5,21
8 5,08 4,79
En la tabla 11, se aprecia los valores de pH del cotiledón obtenidos durante el proceso
de fermentación, donde se muestra la comparación de Fermentación Natural (FN) y
Fermentación con Solución (FS), en su comportamiento del pH del cotiledón con
relación a los días de fermentación, donde se observa que el inicio de los dos métodos
de FN, fue con un pH, 6.46 y FS con un pH, 6.25.
En el día uno se observa una variación de incremento de pH en el cotiledón en los dos

tratamientos, donde en tratamiento FN, tuvo un valor de 6.85 de pH y una diferencia
58
con el día cero de incremento moderado de 0.39 de pH y el tratamiento FS, tuvo como
valor 6.78 de pH y una diferencia de incremento leve con el día cero de 0.53 de pH.,
estos incrementos en los dos tratamiento se debe a que existe una retención de la
penetración del ácido cítrico hacia el interior del cotiledón.
En los días dos, tres y cuatro existe un descenso leve del pH del cotiledón en ambos
tratamientos, donde el tratamiento FN, tuvo un pH en el día dos de 6.62 hasta el cuarto
día que tuvo un pH de 6.05, con una diferencia de descenso moderado de 0.57 de pH.
En el tratamiento FS, se obtuvo un pH en el día dos de 6.64 hasta el días cuatro que
se tuvo un pH de 6.46, con una diferencia mínima de descenso que fue de 0.18 de pH.
Este descenso del pH del cotiledón en los dos tratamientos se debe a que existe una
penetración del ácido acético producido por los microorganismos presentes en la parte
externa de la semilla.
En los últimos días de fermentación el comportamiento del pH del cotiledón, tuvo un

descenso moderado en ambos tratamientos, donde existe una variación en los datos
finales, donde el tratamiento FN, tuvo un pH final de 5.08, que fue menor que el otro
tratamiento. El tratamiento FS, donde se obtuvo el valor de pH de 4.79. El más bajo y
acido que fue de un pH de 4.79.
Los resultados obtenidos en el comportamiento del pH del cotiledón, durante el

proceso de fermentación son semejantes a los datos obtenidos por el estudio de
investigación de Hernández y León (2003).
59
6.5 pH de cotiledon sin

solucion
pH DEL COTILEDON
6
y = 0.0145x3 - 0.1926x2 + 0.438x + 6.5015
R² = 0.8916
5.5
5
y = 0.0118x3 - 0.1913x2 + 0.593x + 6.262
R² = 0.9267
4.5
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Grafico 3. Perfil de las curvas del comportamiento de pH del cotiledón

En el grafico 3, se muestra gráficamente las curvas del comportamiento del pH del

cotiledón, donde las curvas del descenso se refleja de una forma paulatino, donde
existe una variación de ascenso en el primer día y descenso en los posteriores días
de fermentación en los dos tratamientos, donde se observa que el tratamiento FS,
tuvo el valor más bajo de pH de 4.79, a comparación del tratamiento FN, donde solo
tuvo un valor de 5.08.
3.3.3. Comportamiento de la acidez en la pulpa y cotiledón.
Durante la evaluación del comportamiento de acidez de la pulpa y cotiledón del fruto

de copoazu, existe una barrera llamada testa, cuyo grosor tiene alrededor de 0.54 mm,
superior y casi doble del grosor de la testa del cacao que es de 0.26 mm. Esta
diferencia del espesor implica el tiempo de fermentación de la semilla de copoazu y el
buen desarrollo de los microorganismos para generar ácido acético y romper la
estructura de la pared de la testa, para el ingreso del ácido acético al interior de la
semilla y provocar la muerte del cotiledón. A continuación se describirá e interpretara
los resultados del comportamiento de la acidez que tuvo la pulpa y el cotiledón, durante
los días de fermentación.
60
a. Comportamiento del porcentaje de acidez en la pulpa

Los resultados de los valores obtenidos en el comportamiento del acidez de la
pulpa de copoazu, mostro una variación leve en el comportamiento de los dos
tratamiento de fermentación FN y FS, el cual se obtuvo datos aceptable durante
su evaluación, donde el descenso del acidez fue de forma leve en los dos
tratamientos. La acidez de la pulpa al inicio de la fermentación se le considera
ácido cítrico ya que por su naturaleza del fruto contiene este acido, durante los
días de fermentación el ácido cítrico se va convirtiendo en ácido acético debido
al desdoblamiento de los nutriente por los microorganismos presentes en la
pulpa. En la tabla 12, se muestra el comportamiento de acidez de la pulpa de los
dos tratamientos de fermentación, donde los resultados que se obtuvieron fueron
tomados por triplicado y promediado con su desvió estándar, así como se
muestra en la tabla 12.
Tabla 12. Comportamiento del % acidez de la pulpa de copoazu.
% DE ACIDEZ DE LA PULPA
DIA FN* FS*
0 2,47 ± 0.02 2,31 ± 0.09
1 2,19 ± 0.01 2,7 ± 0.03
2 1,83 ± 0.01 2,4 ± 0.02
3 1,34 ± 0.01 2,4 ± 0.03
4 1,32 ± 0.01 1,54 ± 0.86
5 1,88 ± 0.30 1,68 ± 0.06
6 0,77 ± 0.01 1,21 ± 0.02
7 0,46 ± 0.01 0,97 ± 0.01
8 0,22 ± 0.02 0,96 ± 0.01

61
En la tabla 12, se muestra los valores obtenidos durante la evaluación del porcentaje
de acidez de la pulpa, en los dos tratamientos de fermentación, en donde obtuvieron
una variación en su descenso de la acidez en los dos tratamientos. El tratamiento FN,
tuvo como valor inicial en el día cero un acidez de 2.47% y el tratamiento FS, tuvo un
acidez de 2.31%, menor al del tratamiento FN.
En el comportamiento del primero, segundo, tercero y cuarto día se puede observar

que existe una disminución moderada del porcentaje de acidez en la pulpa en ambos
tratamientos. El tratamiento FN, tuvo un comportamiento de forma descendente, donde
los valores obtenidos fueron menores al tratamiento FS, ya que se obtuvo un valor de
acidez de 2.19% en el día uno y en el cuarto día se obtuvo un valor de acidez de
1.32%, con una variación entre el primero al cuarto día con una disminución de 0.87%.
El tratamiento FS, se observó que existe un mayor descenso del porcentaje de acides
en la pulpa, donde observo que en el primer día uno obtuvo un porcentaje de acidez
de 2.7% y cuarto día con un porcentaje de acidez de 2.4%, esto hace una diferencia
en su disminución entre el primero y cuarto día de 1.16%. Este descenso de la acidez
de la pulpa, se deben a la leve producción de ácido acético generado por los
microorganismos presentes en la pulpa.
En los últimos días de fermentación del comportamiento del porcentaje de acidez de

la pulpa, se observó una disminución elevada en ambos tratamientos, donde el
tratamiento FN, se evaluó una disminución mayor al otro tratamiento, donde se obtuvo
en el día quinto un valor de 1.88 % de acidez y en el octavo y último día tuvo un valor
de 0.22% de acidez, con una diferencia en su disminución del quinto al octavo día de
1.66% de acidez. El tratamiento FS, se obtuvo un descenso leve, donde se obtuvo un
valor de acidez en el quinto día de 1.68% y en el octavo y último día se obtuvo 0.96%
de acidez en la pulpa, con una diferencia entre el quinto y octavo día de 0.72% de
descenso del acidez. Este comportamiento de descenso del acidez en la pulpa en los
últimos días se debe a que la temperatura se encuentra en sus valores más altos,
estos factores provocan la muerte del cotiledón, donde el ácido acético producido por
los microorganismos comienza a perforar la testa que rodea al cotiledón, en donde
comienza la penetración del ácido acético con el agua, donde este fenómeno provoca
62
el hinchamiento de la semilla de copoazú durante la etapa de fermentación. Este

comportamiento del acidez en la pulpa se presentó de igual forma en los estudios
realizados por Hernández & León (2002) y Marçal de Vasconselos (1999).
2.5
y = 0.0128x3 - 0.1659x2 + 0.3359x + 2.3759
R² = 0.9423
ACIDEZ EN LA PULPA
1.5
1
acidez de pulpa sin
0.5 solucion
acidez de pulpa con y = -0.0088x3 + 0.0962x2 - 0.5051x + 2.5009
solucion R² = 0.8812
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Grafico 4.Perfil de las curvas del comportamiento de acidez de la pulpa.

En el grafico 4, se aprecia gráficamente el comportamiento de las curvas del porcentaje

del acidez en la pulpa en los dos tratamientos de fermentación, donde se observa que
existe un descenso de forma paulatino en ambos tratamientos, donde existe una
variación de ascenso y descenso en los tratamientos, donde se observa que el
tratamiento FN, tuvo el valor más bajo del porcentaje de acidez que fue 0.22%, a
comparación con el tratamiento FS, donde solo se obtuvo un valor de 0.96% de acidez.
Según los estudios realizados por Portillo et al. (2005), nos da a conocer que el
comportamiento del ascenso y descenso del porcentaje de la acidez de la pulpa en el
proceso de fermentación, es un buen indicador del avance en el proceso de
fermentación.
63
b. Porcentaje del comportamiento de acidez en el cotiledón:
Los resultados de los valores obtenidos en el comportamiento de la acidez del

cotiledón en los dos tratamientos de fermentación, se observó que tuvo una
variación de ascenso gradual del porcentaje de acidez en ambos tratamientos FN
y FS, el cual se obtuvo datos aceptables durante su evaluación.
Tabla 13. Comportamiento del % acidez del cotiledón de copoazu.
% DE ACIDEZ DEL COTILEDÓN

DIA FN* FS*
0 0,22 ± 0.02 0,19 ± 0.02
1 0,21 ± 0.03 0,19 ± 0.02
2 0,26 ± 0.01 0,28 ± 0.07
3 0,24 ± 0.04 0,32 ± 0.03
4 0,35 ± 0.01 0,34 ± 0.03
5 0,59 ± 0.15 0,27 ± 0.01
6 0,44 ± 0.00 0,77 ± 0.02
7 0,88 ± 0.07 0,67 ± 1.80
8 0,66 ± 0.03 0,86 ± 0.01

En la tabla 13, se muestra el comportamiento de acidez del cotiledón de los dos

tratamientos de fermentación, donde los resultados que se obtuvieron fueron tomados
por triplicado y promediado con su desvió estándar, así como se muestra en la tabla
3.8, donde se muestra que el inicio del tratamiento FN, obtuvo como valor 0.22% de
acidez y el tratamiento FS, tuvo un 0.19% de acidez.
En los primeros cuatro días, el comportamiento de la acidez en el cotiledón del

tratamiento FN, se mostró de forma ascendente en el primero, segundo y cuarto día y
también se mostró una descendiente en el tercer día, el valor obtenido en el primer día
64
fue de 0.21% de acidez y en el cuarto con un valor de 0.35% de acidez, en donde la

diferencia de incremento del primero al cuarto es de 0.14% de acidez. El tratamiento
FS, tuvo como valore en el primer día 0.19% de acidez y en el cuarto día 0.34% de
acidez, donde hace una diferencia de incremento de 0.15% de acidez. Este
comportamiento de ascenso lento se explica al retraso en la pérdida de la viabilidad
del grano y en consecuencia de un retardo en la ruptura de las células de la pulpa y
en la liberación de los jugos, lo que ocasiona un menor desarrollo de las bacterias
acéticas.
En los últimos días la acidez mostro en el tratamiento FN, un incremento leve, donde
se obtuvo en el quinto día un 0.59% de acidez y en el octavo y último día un 0.66% de
acidez, esto hace una diferencia entre el quinto al octavo día crecimiento mínimo que
fue de 0.07% de acidez. En tratamiento FS, mostro un mayor crecimiento en los últimos
días de fermentación, donde los valores fueron en el quinto día 0.27% de acidez y el
octavo y último día un 0.86% de acidez, esto hace una diferencia de crecimiento entre
el quinto y octavo de 0.59% de acidez y que fue mayor que el otro tratamiento en el
resultado final.
Durante la fermentación, los ácidos acético y láctico producidos por la degradación

microbiana de la pulpa son difundidos hacia el cotiledón, aumentando la acidez de la
fracción del cotiledón de la almendra, este comportamiento de ascenso en la acidez
influye en la muerte del cotiledón, en donde el ácido acético penetra a los tejidos del
cotiledón provocante la muerte y el cambio de pigmentación del cotiledón, este
comportamiento del acidez en la pulpa se presentó de igual forma en los estudios
realizados por Hernández & León (2002) y Marçal de Vasconselos (1999), a
continuación se mostrara el gráficamente el comportamiento del acidez del cotiledón
durante los días de fermentación (figura 5).
65
0.9
y = 8E-05x3 + 0.01x2 - 0.001x + 0.1971
R² = 0.854
0.8
0.7
acidez de cotiledon sin
ACIDEZ DE COTILEDON
solucion
0.6
acidez de cotiledon con
solucion
0.5
0.4
y = -0.0034x3 + 0.0466x2 - 0.096x + 0.2421
R² = 0.8135
0.3
0.2
0.1
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Grafico 5. Perfil de las curvas del comportamiento de acidez en el Cotiledón.
En el grafico 5, se puede apreciar gráficamente las curvas de los dos tratamientos,

donde existe una variación del porcentaje de la acidez en el cotiledón en los dos
tratamientos FN y FS del cotiledón con relación a los días de fermentación, donde se
observa que existe una eficiencia en el tratamiento FS, debida a la penetración de una
mayor cantidad de ácido acético en el cotiledón.
Según los estudios realizados por Enríquez (1985), en cacao la muerte de las
almendras producen un aumento en la permeabilidad de las paredes celulares, lo cual
permite la interdifusión de los componentes del jugo celular y por ello las enzimas
actúan con los polifenoles y proteínas iniciando ciertas reacciones hidrolíticas en la
que los pigmentos sufren un cambio y se produce el precursor del sabor característico
del chocolate.
3.3.4. Comportamiento de solidos solubles de la pulpa.
El contenido de los sólidos solubles totales expresados en °Brix de la pulpa de

copoazu, se evaluó en el proceso de fermentación de los dos tratamientos, donde se
66
obtuvo un comportamiento de forma descendente durante todo el proceso de

fermentación.
Tabla 14. Comportamiento del ° Brix de la pulpa de copoazu.
SOLIDOS SOLUBLES
DIA °Brix sin solución °Brix con solución
0 12.46 13.11
1 10.48 11.02
2 6.46 8.37
3 5.24 7.76
4 4.6 7.17
5 4.21 6.49
6 3.91 5.81
7 3.28 5.19
8 3.87
3.24
En la tabla 14, se muestra el comportamiento de los sólidos solubles totales de la pulpa

de copoazu en el proceso de fermentación de los dos tratamientos de fermentación,
donde los resultados que se obtuvieron fueron tomados por triplicado y promediado
con su desvió estándar, así como se muestra los valores obtenidos durante la
evaluación de los sólidos solubles totales (°Brix) de los días de fermentación en los
dos tratamientos, donde se puede apreciar que al comienzo existe una variación
debido a que uno de los tratamiento que es FS se adiciono una concentración del 30%
de sacarosa en donde se tuvo como valor inicial 13.11°Brix y el otro tratamiento FN,
se obtuvo un valor inicial de 12.46°Brix.
En los primeros cuatro días de fermentación se observa que existe un descenso rápido
de los sólidos solubles en los dos tratamientos, donde en el tratamiento FN, se obtuvo
como valor en el comportamiento de los sólidos solubles en el día uno de 10.48°Brix
67
y en el cuarto día tuvo un valor de 4.6°Brix, con una variación de disminución entre el
primero y el cuarto día, de un valor de 5.88°Brix en perdida, El tratamiento FS, tuvo
como valor en el comportamiento de los sólidos solubles en el día uno 11.02°Brix y el
cuarto día con un valor de 7.17°Brix, donde existe una diferencia de disminución de
3.85°Brix en perdida. Estos resultados de descenso o pérdida excesivos de los sólidos
solubles durante los días de fermentación, se debe al consumo excesivo de los
nutrientes presentes en la pulpa por los microorganismos.
En el comportamiento de los sólidos solubles de la pulpa, en los últimos días de

fermentación tuvo como resultado una leve disminución del °Brix en ambos
tratamientos de la investigación. El tratamiento FN, tuvo como datos en el quinto día
un valor de 4.21°Brix y en el octavo e último día tuvo un valor de 3.24°Brix, en donde
existe una diferencia de disminución de 0.97°Brix de perdida. El tratamiento FS, tuvo
un comportamiento diferente al otro tratamiento ya que se aprecia en los resultados de
la tabla 3.9, que tuvo una mayor disminución en el °Brix de la pulpa, donde tuvo valores
en el día cinco de 6.49°Brix y el octavo e ultimo día tuvo un valor de 3.87°Brix, donde
la diferencia de disminución entre el quinto y octavo día es de 2.62°Brix. Estos
resultados obtenidos en los últimos días de fermentación del comportamiento de
descenso leve de los sólidos solubles en los dos tratamientos, se debe al desgaste de
la fuente de nutrientes que existe en la masa de fermentación.
La determinación del contenido de sólidos solubles es de mucha importancia en la

predicción del proceso de fermentación ya que indirectamente refleja la cantidad de
azúcares presentes en la pulpa. En la actualidad no existen análisis bibliográficos que
relacionen este parámetro con el proceso de fermentación.
68
14
°Brix sin solucion

12
°Brix con solucion
10
grados Brix
8
y = -0.0369x3 + 0.54x2 - 3.1275x + 13.227
R² = 0.9932
6
4
y = -0.0305x3 + 0.583x2 - 3.916x + 12.83
R² = 0.9798
2
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Grafico 6. Perfil de las curvas del comportamiento del °Brix en la pulpa.

En el grafico 6, se aprecia gráficamente el comportamiento de las curvas de los sólidos

solubles totales de la pulpa en los dos tratamientos de fermentación, donde se observa
que existe un descenso rápido en los primeros cuatro días y en los últimos días un
descenso lento así como se muestra en el gráfico en ambos tratamientos, donde existe
una variación de ascenso y descenso, donde se observa que el tratamiento FN, tuvo
el valor más bajo de los sólidos solubles que fue 3.24°Brix, a comparación con el
tratamiento FN, donde solo se obtuvo un valor de 3.87°Brix.
El comportamiento de los sólidos solubles en el proceso de fermentación, es muy

importante conocer ya que es un indicador de la concentración de nutrientes de
sacarosa para el consumo de los microorganismos presentes en la naturaleza de la
pulpa y que ayudan el incremento de temperatura de la fermentación.
3.3.5. Comportamiento de la humedad en el cotiledón.
En la evaluación del comportamiento de la humedad en el cotiledón, se observó un

aumento ascendente y descendente en ambos tratamientos, durante los días de
fermentación, en los resultados de la evaluación existe una variación del porcentaje de
humedad en ambos tratamientos.
69
Según las investigaciones Hernández et al., (2006) nos indica que durante el proceso
de fermentación, el interior de la semilla va adquiriendo agua y ácido acético de la parte
externa de la pulpa adherida a la semilla que traspasa las membranas de la semilla,
aumentando el porcentaje de humedad en el cotiledón.
En la siguiente tabla 15, se muestra los valores obtenidos del comportamiento de

humedad del cotiledón durante los días de fermentación, donde los resultados que se
obtuvieron fueron tomados por triplicado y promediado con su desvió estándar, así
como se muestra en la tabla 15.
Tabla 15. Comportamiento del % de humedad del cotiledón.
% DE HUMEDAD DEL COTILEDÓN

DIAS FN* FS*
0 36.29 ± 0.77 38.2 ± 0.45
1 35.51 ± 0.82 36.66 ± 0.32
2 34.94 ± 0.59 35.2 ± 0.98
3 34.72 ± 0.80 34.01 ± 0.23
4 35.7 ± 0.17 35.02 ± 0.25
5 36.42 ± 0.93 37.39 ± 0.54
6 37.42 ± 0.99 41.08 ± 0.30
7 38.18 ± 0.29 42.02 ± 1.13
8 43.67 ± 0.22 45.05 ± 0.19
En la tabla 15, se puede apreciar los valores obtenidos del porcentaje de humedad en
los dos tratamientos de fermentación, donde el inicio del tratamiento FN, obtuvo un
valor de humedad de 36.29% y el tratamiento FS, tuvo una humedad de 38.2%,
En los primero tres días se observa que existe un descenso leve en el tratamiento FN
y FS, donde los valores obtenidos en el tratamiento FN, en el día uno es de 35.51%
de humedad y en el tercer día es de 34.72% de humedad, esto hace una diferencia
del porcentaje de disminución de la humedad del día uno al tercer día un valor de
70
0.79%. En el tratamiento FS, ocurre lo mismo que el tratamiento FN, en donde los tres
primero días existe un descenso en la humedad, donde los valor obtenidos en el día
uno es de 36.66% y el tercer día de 34.01% de humedad en el cotiledón, donde esto
hace una diferencia de disminución de perdida de humedad entre el día uno y el quinto
día es de 2.65%. Este comportamiento al descenso del porcentaje de la humedad en
los primeros tres días de fermentación se debe a que durante estos primeros días el
ácido acético no afecto las paredes celulares de la testa, debido a la poca producción
del ácido acético por los microorganismos.
A partir del cuarto y octavo día existe un incremento elevado del porcentaje de
humedad en el cotiledón, donde el resultado en los últimos días de fermentación tuvo
un comportamiento aceptable. El tratamiento FN, tuvo como valor en el cuarto día una
humedad de 35.02% y el octavo e ultimo día tuvo 45.05% de humedad en el cotiledón,
esto hace una diferencia entre el cuarto y octavo día de 10.03% de humedad ganada
durante el proceso de fermentación. En el tratamiento FS, mostro un mayor incremento
de la humedad que el otro tratamiento, donde los valores obtenidos fueron en el cuarto
día 35.02% de humedad y en el octavo un valor de 45.05% de humedad en el cotiledón,
esto hace una diferencia en el incremento entre el cuarto y el octavo día un valor de
10.0% de humedad de ganancia en el cotiledón. Este comportamiento del incremento
elevado en los dos tratamiento se debe a la roptura de la testa de la semilla, debido a
la producción de ácido acético de los microorganismo presente en su naturaleza de la
pulpa de copoazu, según la investigaciones de Lemus et al. (2001) nos indica que
durante la etapa fermentación ocurre la descomposición microbiana de la pulpa que
causa ruptura de las células y desprendimiento de jugos y se elimina parte del agua
en el exudado. Los datos obtenidos en esta investigación sobre el comportamiento del
porcentaje de humedad del cotiledón son semejantes a los datos obtenidos por Criollo
et al (2010). En los estudio realizados por Enríquez (1985), nos manifiesta que al inicio
del proceso de fermentación el cotiledón tiene una humedad entre 35 y 38% de
humedad, donde también nos indica que al finalizar el proceso de fermentación el
cotiledón aumenta su contenido de humedad hasta niveles de 40% y 45% y esto indica
un buen proceso de fermentación.
71
46 H° sin solucion
y = -0.0408x3 + 0.8764x2 - 3.5939x + 38.679
°H con solucion
44 R² = 0.966
humedad del cotiledon
42
40
38
36
y = 0.0312x3 - 0.1014x2 - 0.319x + 36.063
34 R² = 0.9449
0 1 2 3 4 5 6 7 8
dias
Grafico 7. Perfil de las curvas del comportamiento de humedad del cotiledón.

En el grafico 7, se puede observar gráficamente las curvas de comportamiento del

porcentaje de humedad del cotiledón adquirida durante el proceso de fermentación en
los dos tratamientos, gráficamente se observa que tuvo un comportamiento en los
primeros tres días un descenso del porcentaje de humedad en el cotiledón y luego en
el cuarto hasta el octavo existe un aumento elevado de la humedad en el cotiledón,
donde esto nos indica que ambos tratamientos tuvieron un aceptable comportamiento
del porcentaje de humedad en el cotiledón. Portillo et al. (2005), quienes afirman que
durante el proceso de exudación busca establecer un equilibrio osmótico entre la pulpa
y el cotiledón, de forma que el agua presente en la pulpa adherida durante el proceso
de fermentación se difunden a través de la testa hacia el cotiledón, logrando un
incremento en el porcentaje de humedad interna del cotiledón.
3.3.6. Comportamiento del cambio de pigmentación del cotiledón.
Durante los ocho días de fermentación se evaluó el cambio de pigmentación del

cotiledón mediante la prueba de corte, donde se evaluó el estado de fermentación
mediante tres niveles, donde fueron granos bien fermentados, insuficientemente
72
fermentado, pizarrosos. Estos parámetros establecidos de los tres niveles de

coloración fueron adaptados de acuerdo a la norma, pues el fruto del copoazú posee
un cotiledón de color blanco y que no es igual al de cacao, porque no desarrolla el
color de violeta o tonalidades intensas como las desarrolladas en cacaos trinitarios y
forasteros.
Los resultados del porcentaje obtenidos en los dos tratamientos de fermentación, tuvo
un comportamiento aceptable en el cambio de pigmentación del cotiledón así como se
muestra en la figura 26 y figura 27.
En la Figura 26, en el tratamiento de Fermentación Natural (FN) se muestra los

cambios en la pigmentación que tuvo durante los ocho días de fermentación, el cambio
de coloración del cotiledón empieza a notarse a partir del segundo día con pequeñas
manchas pardas, hasta el quinto día se observa el cambio lento de coloración del
cotiledón, al final de la fermentación se puede aprecia una distribución de la coloración
pardo gris con manchas rojas y en el centro una coloración color blanco como se
observa en la figura 26.
En la figura 27, el tratamiento de Fermentación con Solución (FS), tuvo un

comportamiento mucho mejor en la coloración de su pigmentación del cotiledón, el
cambio comienza a partir del segundo día con machas de color pardo; el aumento de
este color se da de forma progresiva hasta el sexto día donde el cotiledón presenta un
color marrón, mientras que en los dos últimos días su coloración fue más intenso como
su desprendimiento de la testa como el cotiledón, esto se debe a la excelente
fermentación que tuvo este tratamiento así como muestra la figura 27.
Según las investigaciones de Enríquez (1985), nos indica que los cambios de
pigmentación seda debido a la muerte del cotiledón, donde hay difusión de pigmentos
en las células que inicialmente no las contenía ya que al penetrar el ácido acético
destruye la semipermeabilidad de las membranas de las células de la testa para que
los pigmentos se difundan por todo el cotiledón.
73
FERMENTACION NATURAL (FN)
Semilla fresca – DIA 0 DIA 1 DIA 2
DIA 3 DIA 4 DIA 5
DIA 6 DIA 7 DIA 8
Figura 26. Cambio de pigmentación del cotiledón en el tratamiento FN.

74
FERMENTACION NATURAL (FS)
Semilla fresca – DIA 0 DIA 1 DIA 2
DIA 3 DIA 4 DIA 5
DIA 6 DIA 7 DIA 8

Figura 27. Cambio de pigmentación del cotiledón en el tratamiento FS.
75
3.4. Resultado de los análisis del comportamiento del proceso de secado de

los tres métodos.
En esta etapa de la investigación se evaluaron tres métodos de secado de la semilla

fermentada de copoazu, donde los primeros dos métodos son de forma natural, las
cuales son secado con bandeja de madera y secado con bandeja galvanizada, en
donde estos dos métodos tuvieron un buen comportamiento en la perdida de humedad
de la semilla de copoazu. El tercer método de secado, es de forma artificial de las
cuales se utilizó por el método de Estufa, este método tuvo un buen comportamiento
en la perdida de humedad de la semilla de copoazu.
Según las investigaciones por Rincon (1999), nos indica que la etapa de secado
natural tiene como finalidad, disminuir el exceso de humedad de los granos
fermentados de 55% a 7%, condiciones necesarias para su posterior almacenamiento
y comercialización
Según las investigaciones por Enríquez (1995), nos indica que el proceso de secado
interfiere en el desarrollo de los precursores del sabor y aroma a chocolate que inicio
en la fermentación y termina en el proceso de secado.
A continuación explicaremos con mucho detalles el comportamiento de la evaluación

de estos tres métodos de secado que se realizó a la semilla fermentada.
3.4.1. Comportamiento de los dos métodos de secados naturales.
Durante la evaluación de estos dos métodos de secado de forma natural, se realizó en

cuatro días, donde a cada hora se hacía su respectiva remoción para que el proceso
de secado natural sea homogéneo y eficiente, donde los valores obtenidos en estos
dos métodos tuvieron una pérdida de humedad del cotiledón aceptable.
Según los estudios realizados por Braudeau (1970), nos indica el proceso de secado
se puede realizar de forma natural, donde se aprovecha el calor producido por los
rayos solares durante ocho días, según las condiciones climáticas de la zona.
76
En la tabla 16, se aprecia los valores obtenidos que fueron tomados por triplicado
durante la evaluación de la humedad del cotiledón en los dos métodos de secado
natural de los dos tratamientos de fermentación, mostrando una variación durante los
cuatro días de secado, así como se muestra en el tabla 16.
Tabla 16. Comportamiento del % de humedad del cotiledón en la etapa de secado

natural.
PROMEDIO DEL % DE HUMEDAD DEL COTILEDON

DIA FN FS
FN-SNBM FN-SNBG FS-SNBM FS-SNBG
0 43.67 43.67 45.05 45.05
1 (2hr) 40.66 39.23 37.33 39.07
2 (3hr) 25.67 23.65 21.35 23.42
3 (10hr) 14.57 13.96 15.79 16.98
4 (10hr) 5.53 5.11 7.65 7.62
FN: Fermentación Natural, FS: Fermentación con Solución

SNBM: Secado Natural con Bandeja de Madera, SNBG: Secado Natural con Bandeja Galvanizada
En la tabla 16, se puede apreciar los resultados de los dos tratamientos de

fermentación, como también los dos métodos de secado natural, que se aplica a los
dos tratamientos de fermentación, donde los resultados de la humedad del cotiledón
en el tratamiento FN, tuvo como valor 43.67% de humedad para el inicio de los dos
métodos de secado natural. En el tratamiento FS, tuvo como valor inicial un 45.05%
de humedad para el inicio de los dos métodos de secado natural.
En el día uno, se puede observar que el tratamiento FN-SBM, tuvo como valor 40.66%
de humedad en el cotiledón, donde su pérdida de humedad fue moderada. El
tratamiento FN-SBG, tuvo como resultado en el día uno un valor de 39.23% de
humedad, con una perdida superior al otro tratamiento de FN-SBM.
77
El tratamiento FS-SBM, tuvo un comportamiento de descenso moderado, donde se

obtuvo un valor de 37.33% de humedad en el cotiledón y el tratamiento FS-SBG, tuvo
un valor de 39.07% de humedad.
Estos valor obtenidos en el día uno de secado natural en los cuatro tratamientos, tuvo
un descenso leve, debido al tiempo de secado que se expuso a los tratamientos, ya
que en el día uno solo se hace orear la semilla y en donde solo se expuso dos horas
en el día uno. Esto se debe para evitar el arrugamiento de la testa y provoque que se
pegue con el cotiledón y eso no permite un fácil descascarillado.
En el día dos, de la evaluación se tuvo como resultado en los cuatro tratamientos en

el comportamiento de humedad del cotiledón durante el secado natural, en el
tratamiento FN-SBM, se tuvo un valor de 25,67% de humedad, con una perdida entre
el día uno con el dos un valor de 14.99% de humedad. En el tratamiento FN-SBG, se
obtuvo un valor de 23.67% de humedad, donde la diferencia entre el día uno y el dos
hay un perdida de 15.58% de humedad. El tratamiento FS-SBM, tuvo un resultado de
21.35% de humedad, donde se observó una diferencia entre el día uno y dos una
pérdida de 15.98% de humedad. En el tratamiento FS-SBG, se obtuvo un valor de
23.42% de humedad, con una diferencia entre el día uno y dos de 15.65% de perdida
de humedad del cotiledón. Estos resultados de descenso obtenidos de pérdida
humedad del cotiledón en el día dos, se debe a que se expuso seis horas durante
todo el día dos, donde el secado se izó también en montón y con una remoción de
cada hora.
El tercer y cuarto día se expuso en una totalidad de dieciséis horas al solo, donde se
obtuvo como resultados finales en los tratamiento datos aceptables ya que tuvieron la
humedad adecuada para su almacenamiento, el resultados de la humedad final de los
cuatro tratamientos tuvo una diferencia ya que se debe a la humedad inicial que
comenzaron en el proceso de secado.
78
50.00 fn-sm
45.00
y = -1.2913x4 + 10.893x3 - 28.474x2 + 12.894x + 45.048 fn-sc
R² = 1
40.00
Humedad del cotiledon y = -0.5828x2 - 7.904x + 45.324 fs-sm
35.00 R² = 0.9775
y = 0.5626x3 - 3.2018x2 - 5.5525x + 45.491 fs-sc
30.00 R² = 0.9857
25.00
20.00
15.00
10.00
5.00
0.00
0 1 2 3 4 5
Dias
Grafico 8.Perfil de las curvas del comportamiento de humedad del cotiledón.

En el grafico 8, se aprecia gráficamente el comportamiento de las curvas de la perdida

de humedad del cotiledón durante el proceso de secado natural de los cuatro
tratamientos, donde se observa que existe un descenso lento en los dos primeros días
y en los últimos días se observa un descenso elevado de la perdida de humedad del
cotiledón, así como se muestra en el gráfico de los cuatro tratamientos, donde existe
una variación de descenso en, donde se observa que el tratamiento FN-SBG, que tuvo
el valor más bajo de perdida de humedad que fue 5.11%.
Según las investigaciones por Bradley et al. (2003), nos indica que el contenido de
humedad en la semilla es un factor de calidad para su almacenamiento y preservación,
como también para su calidad sensorial de la semilla.Durante el proceso de secado
natural de la semilla de copoazu, el tiempo y la velocidad promedio de descenso de la
humedad en la semilla es en función del número de días de secado y varía
considerablemente según las condiciones climáticas imperantes al exponer las
semillas al sol, dependiendo de la temperatura ambiental y la velocidad de viento,
Ghosh y Cunha (1975), puesto que el calor y el movimiento del aire contribuyen a la
79
remoción de la humedad, Jinap et al. (1994). En este proceso, la pérdida de agua es

gradual y continua. Jinap et al. (1994).
3.4.2. Comportamiento del secados artificial (estufa)
Durante la evaluación del contenido de humedad en el cotiledón en los dos

tratamientos de secado por el método de secado artificial, tuvieron un comportamiento
aceptable ya que los resultados finales del porcentaje de humedad del cotiledón,
estuvieron en los rangos permitidos para su almacenamiento. El secado artificial se
realizó mediante una estufa, donde se utilizó los parámetros de a una temperatura de
45°C por un tiempo de 18hr de acuerdo a Gómez (2008)
Según las investigaciones realizadas por Gómez (2008), nos indica que el secado de
las semillas no debe ser violento debido a que sella la testa con el cotiledón y esto
evita la evaporación de agua y ácido acético presente en el interior de la semilla. Este
método tuvo un comportamiento descendente con variación de la perdida de humedad
en función del tiempo y temperatura, done la finalidad era en reducir el porcentaje de
humedad del cotiledón. En la tabla 3.12, se aprecia los datos obtenidos y que fueron
tomados por triplicado durante la evaluación del porcentaje de humedad del cotiledón
en los dos tratamientos de secado por el método de secado artificial, mostrando una
variación durante el tiempo y temperatura aplicada, así como se muestra en la tabla
17.
Tabla 17. Comportamiento del % de humedad del cotiledón de copoazu

durante el tiempo de secado Artificial.
PROMEDIO DEL % DE HUMEDAD DEL COTILEDON

Hora FN-SA* FS-SA*
0 43.67 ± 0.24 % 45.05 ± 0.22 %
18 9.34 ± 0.12 % 8.23 ± 0.17 %
*Media ± Desviación estándar , SA: Secado Artificial
80
En la tabla 17, se muestra los datos obtenidos durante la evaluación de los dos
tratamientos de secado artificial, en donde se observa que tuvo un comportamiento
con el tiempo y temperatura establecida por Gómez (208), donde se obtuvo como valor
final de 9.34 ± 0.12% del tratamiento FN-SA y el resultado en el tratamiento FS-SA se
obtuvo 8.23 ± 0.17%.
3.5. Porcentaje de índice físico de fermentación: Prueba de corte
Los resultados que se obtuvieron en el índice físico de fermentación de los granos

fermentados y secados, se observó que los tratamientos tuvieron un comportamiento
aceptable en el porcentaje de índice de fermentación, donde el índice se clasifico en
tres niveles así como se muestra en la figura 28.
A B C
Figura 28. Grano de copoazu bien fermentado (A), insuficientemente fermentado (B)
y pizarrosos (C).
En la figura 28, se puede observar la diferencia que existe en el índice de fermentación

de semilla seca, donde se clasifico en tres niveles que son grano bien fermentado,
insuficientemente fermentado y pizarrosos, estos análisis se realizó después del
proceso de secado donde se utilizó 100 granos secos de semilla de copoazu de cada
tratamiento, así como se muestra en la tabla 18.
81
Tabla 18. Porcentaje de índice de fermentación en los granos de copoazu

estudiados.
TRATAMIENTOS
NIVELES FN FS
FN- FN- FS- FS- FS-
SNBM FN-SNBG SA SNBM SNBG SA
Bien fermentado 85 81 84 75 72 69
Insuficientemente fermentado 12 15 14 18 20 19
Pizarrosos 3 4 2 7 8 12
En la tabla 18, se observa los valores obtenidos del índice de fermentación de los seis
tratamientos evaluados, donde se observa que los tratamientos que fueron
fermentados de forma natural obtuvieron los valores más altos alcanzados a
comparación de la fermentación con solución. El tratamiento FN-SNBM, tuvo el valor
más alto en su índice de fermentación que fue un 85% de grano bien fermentado. El
tratamiento FS-SA, tuvo el más bajo que fue de 69% de grano bien fermentado. Estos
resultados nos indican que los tratamientos que tuvieron la fermentación de forma
natural son de mayor calidad en el índice de fermentación de la semilla de copoazu
fermentada y seca. Los valores obtenidos en los dos tratamientos de fermentación
obtuvieron los valores adecuados que se encuentran en el rango establecidos de los
granos con buena fermentación.
Los resultados del índice de fermentación encontrados en los dos tratamientos fueron
similares encontrados por Criollo et la (2010) y Castro (2010), esta variación de los
resultados se produjo probablemente por diferencias en el procesamiento de grano y
condiciones climáticas. Así mismo los resultados superan los rangos establecidos por
INDECOPI (2006) como requisito para considerar el producto como copoazu fino de
primera calidad.
82
El análisis de varianza para los índices físicos de fermentación promedio en la semilla

de copoazu, reveló que no existe diferencias significativas (P<0.05) entre:
fermentación natural (FN) y fermentación con solución (FS).
90
80
INDICE DE FERMENTACION
70
60
50
40
30
20
10
0
FN-SNBM FN-SNBG FN-SA FS-SNBM FS-SNBG FS-SA
Bien fermentado 85 81 84 75 72 69
Insuficientemente fermentado 12 15 14 18 20 19
Pizarrosos 3 4 2 7 8 12
Grafico 9: Porcentaje del índice de fermentación de la semilla de copoazu

El grafico 9, se puede apreciar que el tratamiento FS tuvo un porcentaje menor del

índice de fermentación ya que tuvo aproximadamente en promedio de 72% de semillas
bien fermentadas y un 19% de insuficientemente fermentadas y el 9% la mal
fermentada, dentro de esto se encuentra los granos mohosos que también se
presentan en la evaluación.
El mejor tratamiento fue el FN fue de 83.3% de semillas bien fermentadas y con un

13.7% de granos insuficientemente fermentados y un 3% mal fermentado. Según los
estudios por Rohan et al (1964), nos indica que el índice de fermentación de los granos
secos se relacionan con el grado de madurez de los frutos, donde nos trata de decir
que si el fruto se encuentra en un estado no completamente maduro dan origen a
granos insuficientemente fermentados, pizarrosos, ya que carecen de suficiente
cantidad de azúcar para su adecuando proceso de fermentación.
83
3.6. Comportamiento de los resultados de la capacidad antioxidante y los

compuestos fenólicos de la calidad de la pasta de chocolate de copoazu.
El análisis realizado por cromatografía liquida por HPLC, se realizó para determinar
los compuestos fenólicos totales de seis muestras de pasta de chocolate y de una
muestra de semillas frescas de copoazu para su comparación de la perdida de los
compuestos fenólicos., los extractos metanolicos fueron obtenidos a partir de las
muestras de pasta de chocolate e semillas, las cuales primeramente se sometieron a
purificación con y a seguir fueron analizados por cromatografica liquida de HPLC-DAD.
Para interpretación de los cromatograma de las muestras, primeramente se realizó a
los dos estándares su cromatograma.
3.6.1. Resultados de perfil de cormatografico de los estándares utilizados.
Estándar Quercetina 3 β-D-Glucósido:
Este estándar Quercetina 3-β-D-glucosido se utilizó para poder determinar flavonoides

en las seis muestras de pasta de chocolate natural y semilla fresca de copoazú, a una
longitud de onda de 330 nm, por la cromatografía por HPLC.
DAD1 B, Sig=330,8 Ref=off (FENOLICOS\2015-09-23 FT 14-59-26\ARC-000021.D)
mAU
9.352
140
120
m A U
Q u e r c e t in a
100 250
200
80
150
100
60
50
40
0
200 250 300 350 400 450 nm
20
11.233
3.139
2.858
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
Grafico 10. Cromatograma y espectro UV del estándar quercetina 3-β-D-

glucosido monitorizado a 330 nm.
Fuente: Laboratorio de Cromatografía – UNSAAC, elaboración propia (2015).

84
En el grafico 10, se muestra el primer cromatograma del estándar de la Quercetina 3-

β-D-glucosido, nos muestra un pico claramente definido y grande, donde también se
observa otro pico de tamaño pequeño, el pico del estándar está acompañado con su
respectivo espectro UV. Se puede apreciar el cromatograma en una longitud de onda
de 330 nm del estándar Quercetina 3 β-D-Glucósido, cuyo tiempo de retenciones es
de 9.352 minutos y su correspondiente espectro UV se muestra en el gráfico, también
se puede ver una impureza no identificada cuyo tiempo de retención es a 11.233
minutos, en la descripción del estándar de Quercetina 3-β-D-glucósido, esta medida y
este reactivo se usaron para detectar todos los compuestos de ácidos fenólicos en las
muestra estudiadas.
Estándar de Ácido Gálico:
El estándar del ácido gálico fue utilizado para poder determinar los ácidos fenólicos,
en las que eluyen estos componentes a una medida de longitud de onda de 280 nm
por cromatografía por HPLC, se utilizó para poder determinar de las seis muestras de
chocolate natural y semilla fresca de copoazu.
DAD1 A, Sig=280,8 Ref=off (FENOLICOS\2015-09-23 FT 14-59-26\ARC-000022.D)

mAU
2.764
175
D A D 1 , 3 .4 1 7 (1 5 8 m A U , - ) o f A R C -0 0 0 0 2 2 .D
150 m A U
140 A c id o G a lic o
125 120
100
100 80
60
75 40
20
50 0
3.424
200 300 400 nm
25
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
Grafico 11. Cromatograma y su espectro UV del estándar del Ácido Gálico

monitorizado a 280 nm.
85
En el grafico 11, el comportamiento que tuvo el estándar del ácido gálico durante la
prueba por el cromatograma por HPLC, donde se puede apreciar un pico claramente
definido que corresponde al estándar del ácido gálico, que se encuentra acompañado
de su respectivo espectro UV.
Se observa el cromatograma a una longitud de onda de 280 nm del reactivo estándar
del ácido Gálico, donde muestra un tiempo de retención de 2.763 minutos, que se
muestra con su respectivo espectro UV, en donde la longitud de onda utilizada y el
reactivo estándar utilizados fueron para determina el total de los ácidos fenólicos en
las muestra estudiadas.
3.6.2. Resultados de perfil de cromatografico de los compuestos fenólicos

totales por HPLC-DAD.
Una vez que se determinó la presencia de compuestos fenólicos en la muestra, se

realizó hacer la determinó de los compuestos fenólicos en los seis tratamiento de pasta
de chocolate natural y una muestra de semilla fresca de copoazu, se determinó
mediante el método de cromatografía por HPLC-DAD. Los resultados de los análisis
mostraron una variación en los tratamientos en la concentración del contienen de
compuestos fenólicos. Así como mostraremos a continuación los perfiles de ácido
fenólico y flavonoide de los resultados de las seis muestras de pasta de chocolate
natural y semilla fresca de copoazu.
86
A. Perfil de resultado de cromatograma de la semilla fresca de copoazu
Acido Fenólicos – 280 nm
Flavonoides – 330 nm
Grafico 12. Cromatograma de ácidos fenólicos y flavonoides de la muestra de

semilla fresca, motorizado simultáneamente a 280 y 330 nm
usando la técnica del HPLC-DAD.
En el grafico 12, se muestra el comportamiento del perfil cromatografico por HPLC de

la muestra de semilla fresca de copoazu a una medida de longitudes de onda de 280
nm y 330 nm, para todos los componentes que eluyen diferentes tiempos de retención,
en la primera longitud de onda que se programo fue para detectar la presencia de
ácidos fenólicos y la segunda para poder detectar los flavonoides como se observa en
el grafico 12.
87
* D A D 1 , 2 .8 2 2 ( 1 1 4 m A U ,D n 1 ) R e f= 2 .2 2 2 & 3 .2 0 8 o f A R C - 0 0 0 0 0 1 .D * D A D 1 , 3 .8 8 9 ( 6 4 .3 m A U , - ) R e f= 3 .5 9 5 & 4 .9 6 8 o f A R C - 0 0 0 0 0 1 .D * D A D 1 , 4 .2 6 2 (9 5 .4 m A U , - ) R e f= 3 .5 9 5 & 4 .9 6 8 o f A R C -0 0 0 0 0 1 .D

m A U m A U m A U
6 0 2 3
1
1 0 0
8 0
5 0
8 0
6 0
4 0
6 0
3 0
4 0
4 0
2 0
2 0
2 0
1 0
0 0 0
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m
* D A D 1 , 4 .6 0 8 (1 7 7 m A U ,A p x ) R e f= 3 .5 9 5 & 4 .9 6 8 o f A R C -0 0 0 0 0 1 .D * D A D 1 , 5 .1 5 5 (4 9 .9 m A U , - ) R e f= 4 .9 6 8 & 5 .4 3 5 o f A R C -0 0 0 0 0 1 .D
m A U m A U
5
1 6 0
4
1 4 0 4 0
1 2 0
3 0
1 0 0
8 0
2 0
6 0
4 0
1 0
2 0
0 0
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m
*DAD1A, Sig=280,8Ref=off (FENOLICOS\2015-09-23FT14-59-26\ARC-000001.D- FENOLICOS\2015-09-24FT07-49-47\CAN-000000

mAU
200
175
1
150 4
125
100
3
75 5
2
50
25
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
Grafico 13. Cromatograma motorizado a 280 nm 1 - 5 compuestos con sus

respectivos espectros UV, por HPLC de la muestra de la semilla
fresca de copoazu
En el grafico 13, se puede visualizar mejor y comprensión de los cromatogramas

obtenidos por el HPLC-DAD, se procedió a enumerar consecutivamente los picos del
cromatograma que corresponde a la longitud de onda de 280 nm, se comenzó a
enumerar de 1 a 5, donde se puede observar que se encuentran acompañados de
sus respectivo espectro UV en donde se pudo determinar la concentración de los
ácidos fenólicos, de los componentes del cromatograma a 280 nm, para los
compuestos enumerados como (1) se tiene un tiempo de retención de 2.783 min, para
el (2) se tiene un tiempo de retención de 3.927 min, para el (3) se tiene un tiempo de
retención de 4.603 min, para el (4) se tiene un tiempo de retención de 4.603 min, para
88
retención de 6.484 min, cada uno de estos compuestos eluidos están acompañados
con su respectivo espectro, así como se muestra en el grafico 13.
* D A D 1 , 6 .4 7 5 (2 2 .1 m A U , - ) R e f= 6 .2 7 5 & 6 .6 8 9 o f A R C -0 0 0 0 0 1 .D * D A D 1 , 6 .9 1 5 ( 1 1 3 m A U ,A p x ) R e f= 6 .6 8 9 & 7 .6 3 5 o f A R C - 0 0 0 0 0 1 .D * D A D 1 , 7 .3 6 8 ( 8 2 .1 m A U , - ) R e f= 6 .6 8 9 & 7 .6 3 5 o f A R C - 0 0 0 0 0 1 .D
m A U m A U m A U
6 7 8 0 8
2 0
1 0 0
7 0
1 7 .5
6 0
8 0
1 5
5 0
1 2 .5
6 0
4 0
1 0
4 0 3 0
7 .5
2 0
5
2 0
2 .5 1 0
0 0 0
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m
* D A D 1 , 7 .8 3 5 ( 8 9 .1 m A U ,A p x ) R e f= 7 .6 4 9 & 8 .0 3 5 o f A R C - 0 0 0 0 0 1 .D * D A D 1 , 8 .2 6 2 ( 2 4 5 m A U , - ) R e f= 8 .0 3 5 & 9 .0 7 5 o f A R C - 0 0 0 0 0 1 .D
m A U m A U
9 1 0
8 0
2 0 0
7 0
6 0
1 5 0
5 0
4 0
1 0 0
3 0
2 0
5 0
1 0
0 0
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m
*DAD1 B, Sig=330,8 Ref=off (FENOLICOS\2015-09-23 FT 14-59-26\ARC-000001.D - FENOLICOS\2015-09-24 FT 07-49-47\CAN-000000

m AU
10
250
200
150
100 7
9
8
50
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 m in
Grafico 14. Cromatograma motorizado a 330 nm con espectros UV de los primeros

compuestos separados por HPLC de la muestra de la semilla fresca
En el grafico 14, se puede visualizar mejor y una mejor comprensión de los

cromatogramas obtenidos por el HPLC-DAD, se procedió a enumerar
consecutivamente los picos del cromatograma que corresponde a la longitud de onda
de 330 nm, se comenzó a enumerar de 10 a 13, donde se puede observar que se
encuentran acompañados de sus respectivo espectro UV en donde se pudo determinar
la concentración de flavonoides, de los componentes del cromatograma a 330 nm,
para los compuestos enumerados como (10) se tiene un tiempo de retención de 6.913
89
min, para el (11) se tiene un tiempo de retención de 7.342 min, para el (12) se tiene un
tiempo de retención de 7.833 min, para el (13) se tiene un tiempo de retención de 8.218
min, cada uno de estos compuestos eluidos están acompañados con su respectivo
espectro, así como se muestra en el grafico 14.
Tabla 19. Área de los compuestos eluidos a 280 nm y 330 nm y el contenido de

porcentaje de ácidos fenólicos y flavonoide en la semilla fresca de
copoazu.
SEMILLA TIEMPO DE
PICOS Area Mau*s %
FRESCA RETENCION
1 2.783 1542.23 15.21
2 3.927 362.56 3.72
3 4.215 973.45 10.14
Ácidos 4 4.603 1369.87 14.20
fenólicos 280 5 5.171 385.36 3.91
mm 6 5.568 61.44 0.64
7 5.791 125.03 1.28
8 6.043 99.97 1.04
9 6.484 164.06 1.67
10 6.913 763.11 7.69
Flavonoides 11 7.342 622.23 6.26
330 12 7.833 707.55 7.10
13 8.218 2703.41 27.15
9880.27 100
En la tabla 19, se muestra la cantidad en porcentajes calculados en función a las áreas

de cada pico de acuerdo a la enumeración que se realizó mostrados en el grafico 13 y
14, en donde se sumó todas las áreas mostrados en el reporte del análisis por HPLC,
siendo este el 100%, luego se calcula para cada área a cuanto equivale en porcentaje
para cada uno de los compuestos.
90
Para los ácidos fenólicos enumerados del 1 - 9 se tiene 51.81%, para los flavonoides
totales 10 - 13 se tiene un 48.2% y para los compuestos cuyo espectros son parecidos
a los flavonoides glicosidicos 10 se tiene un 7.69% que están presentes en el proceso
final de purificación.
B. Perfil de resultado de cromatograma del tratamiento FN-SNBM.
Grafico 15. Cromatograma de ácidos fenólicos y flavonoides de la muestra FN-SNM

motorizado simultáneamente a 280 y 330 nm usando la técnica del HPLC-
DAD.
En el grafico 15, se muestra el comportamiento del perfil cromatografico por HPLC del
tratamiento FN-SNBM (fermentación natural – secado natural con bandeja de madera)
a longitudes de onda de 280 nm y 330 nm, para todos los componentes que a eluyen
diferentes tiempos, en la primera longitud que se programo fue para detectar la
presencia de ácidos fenólicos y la segunda para poder detectar los flavonoides como
se observa en el grafico 15.
91
* D A D 1 , 2 .4 9 5 (9 1 .8 m A U , - ) R e f= 2 .1 3 4 & 3 .1 7 4 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D * D A D 1 , 2 .7 3 5 (4 9 5 m A U ,U p 2 ) R e f= 2 .1 3 4 & 3 .1 7 4 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D * D A D 1 , 3 .4 8 1 (5 1 .4 m A U ,A p x ) R e f= 3 .1 8 8 & 5 .9 8 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D * D A D 1 , 4 .1 7 4 (1 5 5 m A U , - ) R e f= 3 .1 8 8 & 5 .9 8 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D

m A U m A U m A U m A U
1 2 3 4
8 0 1 4 0
4 0 0 4 0
1 2 0
6 0
1 0 0
3 0 0 3 0
8 0
4 0
2 0
2 0 0
6 0
4 0
2 0 1 0
1 0 0
2 0
0
0 0 0
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 n m n m
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0
* D A D 1 , 4 .6 4 1 (3 1 .3 m A U , - ) R e f= 3 .1 8 8 & 5 .9 8 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D * D A D 1 , 5 .1 7 4 (1 1 3 m A U ,A p x ) R e f= 3 .1 8 8 & 5 .9 8 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D * D A D 1 , 5 .5 8 8 (9 .9 m A U , - ) R e f= 3 .1 8 8 & 5 .9 8 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D * D A D 1 , 5 .7 8 8 (8 .1 m A U , - ) R e f= 3 .1 8 8 & 5 .9 8 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D

3 0 8
6 7 8
5 1 0 0
8 7
2 5
6
8 0
2 0
6
5
6 0
1 5 4
4
3
1 0 4 0
2
2
5 2 0
1
0 0
0
0
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 n m n m n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 n m
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0
D A D 1 A , S ig = 2 8 0 , 8 R e f = o f f ( F E N O L I C O S \ 2 0 1 5 - 0 9 - 2 3 F T 1 4 -5 9 -2 6 \A R C -0 0 0 0 0 3 .D )
m AU
A ci d o s F e n o l i co s C o p o az u
300
250
2
200 Acido Fenólicos – 280 nm

150
4
6
1
100
3
5
50
7
8
0 2 .5 5 7 .5 10 1 2 .5 15 1 7 .5 m in
Grafico 16. Cromatograma motorizado a 280 nm con espectros UV de los

primeros compuestos separados por HPLC de la muestra FN-SNBM.

el (8) se tiene un tiempo de retención de 5.573 min, cada uno de estos compuestos
eluidos están acompañados con su respectivo espectro, así como se muestra en el
grafico 16.
92
* D A D 1 , 6 .4 5 5 (5 .9 m A U , - ) R e f= 5 .9 7 5 & 8 .0 2 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D * D A D 1 , 6 .9 3 5 (2 0 5 m A U , - ) R e f= 5 .9 7 5 & 8 .0 2 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D * D A D 1 , 7 .3 7 5 (1 2 8 m A U ,A p x ) R e f= 5 .9 7 5 & 8 .0 2 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D * D A D 1 , 7 .8 5 4 (1 5 3 m A U , - ) R e f= 5 .9 7 5 & 8 .0 2 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D

1 0 1 1 1 2
2 0 0
9 1 2 0
1 4 0
5
1 7 5
1 0 0 1 2 0
1 5 0
4
1 0 0
1 2 5 8 0
3 8 0
1 0 0
6 0
6 0
2 7 5
4 0
4 0
5 0
1
2 0 2 0
2 5
0 0
0 0
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 n m
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 n m
* D A D 1 , 8 .2 6 8 (3 0 7 m A U , - ) R e f= 8 .0 2 8 & 8 .8 2 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D * D A D 1 , 8 .6 1 4 (1 8 .8 m A U , - ) R e f= 8 .0 2 8 & 8 .8 2 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D * D A D 1 , 8 .9 8 8 (6 .9 m A U , - ) R e f= 8 .8 4 1 & 9 .1 8 8 o f A R C -0 0 0 0 0 3 .D
m A U m A U m A U
3 0 0 1 3 1 4
1 7 .5
1 5
6
2 5 0
1 5
2 0 0 1 2 .5
4
1 0
1 5 0
3
7 .5
1 0 0
2
5
5 0
2 .5 1
0 0 0
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m
D A D 1 B , S ig = 3 3 0 ,8 R e f = o f f ( F E N O L IC O S \2 0 1 5 - 0 9 - 2 3 F T 1 4 - 5 9 - 2 6 \A R C - 0 0 0 0 0 3 .D )
m AU
1 3
C o m p u e st o s F l av o n o i d e s C o p o az u
350
300
250
200
1 0
1 2
150
1 1
100
50
1 4
9
1 5
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in

primeros compuestos separados por HPLC de la muestra FN-
SNBM

sus respectivo espectro UV en donde se pudo determinar la concentración de
flavonoides, de los componentes del cromatograma a 330 nm, para los compuestos
enumerados como (9) se tiene un tiempo de retención de 5.772 min, para el (10) se
tiene un tiempo de retención de 6.918 min, para el (11) se tiene un tiempo de retención
de 7.362 min, para el (12) se tiene un tiempo de retención de 7.836 min, para el (13)
se tiene un tiempo de retención de 8.224 min, para el (14) se tiene un tiempo de
retención de 8.617 min, para el (15) se tiene un tiempo de retención de 9.006 min,
93
cada uno de estos compuestos eluidos están acompañados con su respectivo

espectro, así como se muestra en el grafico 17.

porcentaje de ácidos fenólicos y flavonoide del tratamiento FN-SNBM de
pasta de chocolate de copoazu.
TIEMPO DE
1A PICOS Área Mau*s %
RETENCION
1 2.466 1189.65 7.57

2 2.765 2084.21 13.26
3 3.473 522.98 3.28
Ácidos fenólicos 4 4.14 1950.29 12.47
280 nm. 5 4.611 483.15 3.07
6 4.889 102.57 0.64
7 5.173 1219.71 7.76
8 5.573 126.93 0.76
9 5.772 78.42 0.51
10 6.918 1515.95 9.66
11 7.362 1144.15 7.3
Flavonoides 330 12 7.836 1343.26 8.57
nm. 13 8.224 3734.35 23.77
14 8.617 158.79 1.02
15 9.006 58.02 0.37
15285.46 100

94
a los flavonoides glicosidicos 14 y 15 se tiene un 1.39% que están presentes en el
proceso final de purificación.
C. Perfil de resultado de cromatograma del tratamiento FN-SA.
Fenólicos – 280 nm
Grafico 18. Cromatograma de ácidos fenólicos y flavonoides de la muestra FN-SA

motorizado simultáneamente a 280 y 330 nm usando la técnica del
HPLC-DAD.
tratamiento FN-SA (fermentación natural – secado artificial) a longitudes de onda de
280 nm y 330 nm, para todos los componentes que a eluyen diferentes tiempos, en la
primera longitud que se programo fue para detectar la presencia de ácidos fenólicos y
la segunda para poder detectar los flavonoides como se observa en el grafico 18.
95
* D A D 1 , 2 .4 7 9 (5 9 .3 m A U , - ) R e f = 2 .1 3 2 & 3 .1 4 6 o f A R C -0 0 0 0 0 7 .D * D A D 1 , 2 .7 3 2 (4 0 6 m A U ,U p 2 ) R e f = 2 .1 3 2 & 3 .1 4 6 o f A R C -0 0 0 0 0 7 .D
* D A D 1 , 3 .4 9 2 (4 6 .7 m A U ,A p x ) R e f = 3 .1 5 9 & 5 .9 9 9 o f A R C -0 0 0 0 0 7 .D
m A U m A U m A U
1 40
50 350 2
3
300
40 30
250
30 200 20
150
20
100 10
10
50
0
0 0
200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm
* D A D 1 , 4 .1 5 9 (8 6 .3 m A U , - ) R e f = 3 .1 5 9 & 5 .9 9 9 o f A R C -0 0 0 0 0 7 .D * D A D 1 , 4 .6 3 9 (3 0 .8 m A U , - ) R e f = 3 .1 5 9 & 5 .9 9 9 o f A R C -0 0 0 0 0 7 .D * D A D 1 , 5 .1 9 9 (8 0 .1 m A U , - ) R e f = 3 .1 5 9 & 5 .9 9 9 o f A R C -0 0 0 0 0 7 .D
m A U m A U m A U
80
4 5 70 6
25
70
60
60 20
50
50
15 40
40
30 10 30
20 20
5
10 10
0
0 0
200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm
*DAD1 A, Sig=280,8 Ref=off (FENOLICOS\2015-09-23 FT 14-59-26\ARC-000007.D - FENOLICOS\2015-09-24 FT 07-49-47\CAN-000000
mAU
140 2
120
100
6
80 4
60 1
40
3
5
20
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min

primeros compuestos separados por HPLC de la muestra FN-SA
Fuente: Laboratorio de Cromatografía – UNSAAC, Elaboración propia (2015).

96

grafico 19.
* D A D 1 , 6 . 9 1 9 ( 1 0 5 m A U , - ) R e f = 6 . 2 9 2 & 8 . 0 6 6 o f A R C - 0 0 0 0 0 7 . D * D A D 1 , 7 . 4 1 2 ( 6 9 . 2 m A U , A p x ) R e f = 6 . 2 9 2 & 8 . 0 6 6 o f A R C - 0 0 0 0 0 7 .*DD A D 1 , 7 . 8 3 9 ( 7 7 . 4 m A U , A p x ) R e f = 6 . 2 9 2 & 8 . 0 6 6 o f A R C - 0 0 0 0 0 7 . D

m A U m A U m A U
100
7 60
8 70 9
80 60
50
50
60 40
40
30
40 30
20
20
20
10 10
0 0 0
200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm
* D A D 1 , 8 .2 9 2 (1 8 0 m A U , - ) R e f = 8 .0 6 6 & 8 .8 3 9 o f A R C -0 0 0 0 0 7 .D * D A D 1 , 8 .5 9 9 (1 9 .0 m A U , - ) R e f = 8 .0 6 6 & 8 .8 3 9 o f A R C -0 0 0 0 0 7 .D
m A U m A U
160 1 0 1 7 .5
1 1
140 15
120 1 2 .5
100
10
80
7 .5
60
5
40
20 2 .5
0 0
200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm

mAU
10
175
150
125
100
7
9
75
8
50
25
11
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min

primeros compuestos separados por HPLC de ma muestra FN-SA

se tiene un tiempo de retención de 8.619 min, para el (15) se tiene un tiempo de
97

porcentaje de ácidos fenólicos y flavonoide del tratamiento FN-SA de pasta
de chocolate de copoazu.
TIEMPO DE
1B PICOS Área Mau*s %
RETENCION
1 2.456 722.53 8.20
2 2.760 1184.22 13.39
3 3.482 275.21 3.12
4 4.132 1100.71 12.54
Ácidos fenólicos
280 mm 5 4.607 295.46 3.38
6 4.879 88.66 1.02
7 5.178 803.12 9.15
8 5.559 89.27 1.02
9 0 0.00 0.00
10 6.920 777.43 8.87
11 7.399 688.76 7.86
Flavonoides 330 12 7.839 686.17 7.83
nm 13 8.269 1842.98 21.02
14 8.619 172.14 1.96
15 9.007 56.07 0.64
8775.27 100

98

D. Perfil de resultado de cromatograma del tratamiento FN-SNBG
Grafico 21. Cromatograma de ácidos fenólicos y flavonoides de la muestra FN-SNBG

HPLC-DAD.
tratamiento FN-SNBG (fermentación natural – secado natural con bandeja
galvanizado) a longitudes de onda de 280 nm y 330 nm, para todos los componentes
que a eluyen diferentes tiempos, en la primera longitud que se programo fue para
detectar la presencia de ácidos fenólicos y la segunda para poder detectar los
flavonoides como se observa en el grafico 21.
99
* D A D 1 , 3 .4 6 0 (6 .1 m A U ,U p 2 ) R e f= 3 .3 0 0 & 3 .7 4 0 o f A R C - 0 0 0 0 0 9 . D* D A D 1 , 4 . 1 8 0 (1 7 .6 m A U , - ) R e f= 3 .7 5 3 & 5 .0 3 3 o f A R C -0 0 0 0 0 9 .D * D A D 1 , 5 .1 4 0 (1 .9 m A U , - ) R e f= 5 .0 3 3 & 5 .3 8 0 o f A R C -0 0 0 0 0 9 .D
m A U m A U m A U
1 1 .2 5 3
4 1 6 2
1 4 1
3
1 2 0 .7 5
2 1 0
0 .5
8
1 0 .2 5
6
0
0
4
-0 .2 5
2
-1
-0 .5
0
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m
* D A D 1 A , S ig = 2 8 0 ,8 R e f = o f f ( F E N O L IC O S \2 0 1 5 - 0 9 - 2 3 F T 1 4 - 5 9 - 2 6 \A R C - 0 0 0 0 0 9 .D - F E N O L IC O S \2 0 1 5 - 0 9 - 2 4 F T 0 7 - 4 9 - 4 7 \C A N - 0 0 0 0 0 0
m AU
1 7 .5
15

1 2 .5
10
7 .5
2 .5
- 2 .5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in

primeros compuestos separados por HPLC de la muestra FN-
SNBG.

100
* D A D 1 , 6 .9 2 7 (6 .7 m A U , - ) R e f= 6 .7 0 0 & 8 .0 8 7 o f A R C -0 0 0 0 0 9 .D * D A D 1 , 7 .4 4 7 (3 .2 m A U ,A p x ) R e f= 6 .7 0 0 & 8 .0 8 7 * D A D 1 , 7 .8 6 0
o f A R C -0 0 0 0 0 9 .D (4 .7 m A U ,A p x ) R e f= 6 .7 0 0 & 8 .0 8 7 o f A R C -0 0 0 0 0 9 .D
m A U m A U m A U
5 4
4 6
5 2 .5
3
4 2
3 1 .5
2
2 1
1
1 0 .5
0 0 0
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m
* D A D 1 , 8 .3 1 3 (7 .4 m A U , - ) R e f= 8 .0 8 7 & 1 9 .9 0 0 o f A R C -0 0 0 0 0 9 .D* D A D 1 , 8 .6 2 0 (9 .5 m A U , - ) R e f= 8 .0 8 7 & 1 9 .9 0 0 o f A R C -0 0 0 0 0 9 .D

m A U m A U
7 7
8
6 6
4
4
3
2
0
1
0
-2
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m
* D A D 1 B , S ig = 3 3 0 ,8 R e f = o f f ( F E N O L IC O S \2 0 1 5 - 0 9 - 2 3 F T 1 4 - 5 9 - 2 6 \A R C - 0 0 0 0 0 9 .D - F E N O L IC O S \2 0 1 5 - 0 9 - 2 4 F T 0 7 - 4 9 - 4 7 \C A N - 0 0 0 0 0 0
m AU
1 7 .5
15
1 2 .5
10
7 .5
7
4
5
6
5
2 .5
- 2 .5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in

primeros compuestos separados por HPLC de la muestra FN-SNBG.

de 7.846 min, para el (7) se tiene un tiempo de retención de 8.316 min, para el (8) se
tiene un tiempo de retención de 8.627 min, cada uno de estos compuestos eluidos
101
están acompañados con su respectivo espectro, así como se muestra en el grafico

23.
porcentaje de ácidos fenólicos y flavonoide del tratamiento FN-SNBG de
TIEMPO DE
1C PICOS Área Mau*s %
RETENCION
1 4.040
3.486 14.83
Ácidos fenólicos
2 37.719
280 nm 4.139 138.49
3 3.013
5.172 11.02
10.008
4 6.929 47.22
9.976
5 7.439 31.00
Flavonoides 330
9.994
nm 6 7.846 39.42
16.393
7 8.316 70.70
8.858
8 8.627 12.62
100
369.92

102

E. Perfil de resultado de cromatograma del tratamiento FS-SNBM.
Grafico 24. Cromatograma de ácidos fenólicos y flavonoides de la muestra FS-SNBM

HPLC-DAD.
tratamiento FS-SNBM (fermentación solución – secado natural con bandeja de
madera) a longitudes de onda de 280 nm y 330 nm, para todos los componentes que
a eluyen diferentes tiempos, en la primera longitud que se programo fue para detectar
la presencia de ácidos fenólicos y la segunda para poder detectar los flavonoides como
se observa en el grafico 24.
103
* D A D 1 , 2 .4 8 2 (1 1 4 m A U , - ) R e f = 2 .2 2 8 & 2 .8 1 5 o f A R C -0 0 0 0 1 3 .D * D A D 1 , 2 .7 4 8 (3 8 6 m A U , - ) R e f = 2 .2 2 8 & 2 .8 1 5 o f A R C -0 0 0 0 1 3 .D * D A D 1 , 3 .4 8 2 (1 1 7 m A U , - ) R e f = 3 .0 2 8 & 3 .7 4 8 o f A R C -0 0 0 0 1 3 .D

m AU m AU m AU
1 3
350 2
100 100
300
80 80
250
60 200 60
150
40 40
100
20 20
50
0 0 0
200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm
* D A D 1 , 4 .2 0 2 (2 0 .6 m A U , - ) R e f = 3 .7 4 8 & 5 .3 8 8 o f A R C -0 0 0 0 1 3 .D * D A D 1 , 5 .5 6 2 (3 .5 m A U ,A p x ) R e f = 5 .3 8 8 & 5 .9 8 8 o f A R C -0 0 0 0 1 3 .D
m AU m AU
2 7
1 7 .5 4
1 .5
15
1
1 2 .5
10 0 .5
7 .5 0
5
-0 .5
2 .5
-1
0
200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm
mAU
17.5
15
1 2 4
12.5
10
7.5
5
3
6
2.5
-2.5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min

primeros compuestos separados por HPLC de una muestra FS-
SNBM.

104
* D A D 1 , 6 .9 2 2 (4 .3 m A U , - ) R e f = 6 .7 3 5 & 8 .0 9 5 o f A R C -0 0 0 0 1 3 .D * D A D 1 , 7 .4 5 5 (4 .2 m A U , - ) R e f = 6 .7 3 5 & 8 .0 9 5 o f A R C -0 0 0 0 1 3 .D * D A D 1 , 7 .8 5 5 (3 .6 m A U ,A p x ) R e f = 6 .7 3 5 & 8 .0 9 5 o f A R C -0 0 0 0 1 3 .D

m A U m A U m A U
3 .5 7 3 .5
8 9
3 2 .5
3
2 .5 2 .5 2
2 2
1 .5
1 .5 1 .5
1
1 1
0 .5
0 .5 0 .5
0 0 0
-0 .5 -0 .5 -0 .5
200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm
* D A D 1 , 8 .3 6 2 (7 .2 m A U , - ) R e f = 8 .0 9 5 & 1 9 .8 9 5 o f A R C -0 0 0 0 1 3 .D * D A D 1 , 8 .6 4 2 (9 .4 m A U , - ) R e f = 8 .0 9 5 & 1 9 .8 9 5 o f A R C -0 0 0 0 1 3 .D
m A U m A U
1 0 1 1
5
6
4
3 4
2
2
1
0 0
-1
200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm

mAU
17.5
15
12.5
10
7.5
10
5
8
7 9
2.5 11
-2.5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min

compuestos separados por HPLC de una muestra FS-SNBM.

105
se tiene un tiempo de retención de 8.621 min, cada uno de estos compuestos eluidos
están acompañados con su respectivo espectro, así como se muestra en el grafico
26.

porcentaje de ácidos fenólicos y flavonoide del tratamiento FS-SNBM
de pasta de chocolate de copoazu.
TIEMPO DE
2A PICOS Área Mau*s %
RETENCION
1 2.450 137.76 0.96
2 2.731 67.82 0.44
Ácidos
3 3.490 23.06 0.15
fenólicos 280
nm 4 4.140 153.86 0.99
5 5.176 9.94 0.06
6 5.544 24.54 0.16
7 6.9280 30.70 0.20
8 7.4500 38.55 0.25
Flavonoides
330 nm 9 7.8430 29.59 0.19
10 8.3210 49.95 0.32
11 8.6210 25.56 0.17
595.81 3.90

106
a los flavonoides glicosidicos 10 y 11 se tiene un 0.49% que están presentes en el
F. Perfil de resultado de cromatograma del tratamiento FS-SNBG.
Grafico 27. Cromatograma de ácidos fenólicos y flavonoides de la muestra FS-SNBG

HPLC-DAD.
tratamiento FS-SNBG (fermentación con solución – secado natural con bandeja
galvanizada) a longitudes de onda de 280 nm y 330 nm, para todos los componentes
que a eluyen diferentes tiempos, en la primera longitud que se programo fue para
detectar la presencia de ácidos fenólicos y la segunda para poder detectar los
flavonoides como se observa en el grafico 27.
107
* D A D 1 , 2 . 4 6 1 ( 1 7 . 7 m A U , A p x ) R e f = 1 . 8 8 8 & 5 . 4 0 8 o f A R C - 0 0 0 0 1 6 *. D
D A D 1 , 2 .7 1 4 (3 1 8 m A U , - ) R e f = 1 .8 8 8 & 5 .4 0 8 o f A R C -0 0 0 0 1 6 .D * D A D 1 , 3 .5 0 1 (1 5 .8 m A U , - ) R e f = 1 .8 8 8 & 5 .4 0 8 o f A R C -0 0 0 0 1 6 .D
m AU m AU m AU
4
1 300 0
2
2 250 -2
0 -4
200
-2 -6
-4 150
-8
-6 100 -1 0 3
-8
50 -1 2
-1 0
-1 4
-1 2 0
200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm
* D A D 1 , 4 .1 8 1 (3 5 .3 m A U , - ) R e f = 1 .8 8 8 & 5 .4 0 8 o f A R C -0 0 0 0 1 6 .D * D A D 1 , 5 .1 8 1 ( 3 .7 m A U ,A p x ) R e f = 1 .8 8 8 & 5 .4 0 8 o f A R C - 0 0 0 0 1 6 .D
m AU m AU
5
25 4 2 .5
20 2
15 1 .5
10 1
0 .5
5
0
0
-0 .5
-5
200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm
mAU
25 4
20
15
10
1
3 5
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min

primeros compuestos separados por HPLC de ma muestra FS-
SNBG.

grafico 28.
108
* D A D 1 , 6 . 9 2 8 ( 6 . 9 m A U , A p x ) R e f = 6 . 6 8 8 & 8 . 0 8 8 o f A R C - 0 0 0 0 1 6 . D* D A D 1 , 7 . 4 3 4 ( 3 . 4 m A U , A p x ) R e f = 6 . 6 8 8 & 8 . 0 8 8 o f A R C - 0 0 0 0 1 6 . D* D A D 1 , 7 . 8 7 4 ( 4 . 6 m A U , - ) R e f = 6 . 6 8 8 & 8 . 0 8 8 o f A R C - 0 0 0 0 1 6 . D

m A U m A U m A U
9
6 7 3 8 4
5 2 .5
3
4 2
3 1 .5 2
2 1
1
1 0 .5
0 0 0
200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm
* D A D 1 , 8 . 3 5 4 ( 9 . 6 m A U , - ) R e f = 8 . 1 0 1 & 1 9 . 9 0 1 o f A R C - 0 0 0 0 1 6 . D* D A D 1 , 8 . 6 3 4 ( 9 . 2 m A U , - ) R e f = 8 . 1 0 1 & 1 9 . 9 0 1 o f A R C - 0 0 0 0 1 6 . D
m A U m A U
1 1
1 0
8 6
6 4
4 2
2 0
0 -2
200 250 300 350 400 450 nm 200 250 300 350 400 450 nm
m AU
40
6
7
9
4
8
2
11
-2
-4
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 m in

primeros compuestos separados por HPLC de la muestra FS-
SNBG.

de 7.362 min, para el (8) se tiene un tiempo de retención de 7.836 min, para el (9) se
109
de 8.617 min, cada uno de estos compuestos eluidos están acompañados con su
respectivo espectro, así como se muestra en el grafico 29.

porcentaje de ácidos fenólicos y flavonoide del tratamiento FS-SNBG de
TIEMPO DE
2B PICOS Área Mau*s %
RETENCION
1 2.448 71.52 0.46
2 2.732 85.59 0.55

Ácidos fenólicos
280 nm 3 3.49 20.77 0.14
4 4.135 304.57 2.01
5 5.17 19.62 0.13
6 6.928 57.56 0.37
7 7.433 33.55 0.21

Flavonoides 330
nm 8 7.845 47.70 0.30
9 8.328 108.42 0.69
10 8.617 15.16 0.10
758.47 4.96

110
G. Perfil de resultado de cromatograma del tratamiento FS-SA.
Fenólicos – 280 nm
Grafico 30. Cromatograma de ácidos fenólicos y flavonoides de la muestra FS-SA

HPLC-DAD.
tratamiento FS-SA (fermentación con solución – secado artificial) a longitudes de onda
de 280 nm y 330 nm, para todos los componentes que a eluyen diferentes tiempos, en
la primera longitud que se programo fue para detectar la presencia de ácidos fenólicos
y la segunda para poder detectar los flavonoides como se observa en el grafico 30.
111
* D A D 1 , 2 .4 4 7 (1 7 1 m A U , - ) R e f= 1 .7 1 4 & 2 .8 0 7 o f A R C -0 0 0 0 1 9 .D * D A D 1 , 2 .7 1 4 (5 6 4 m A U ,A p x ) R e f= 1 .7 1 4 & 2 .8 0 7 o f A R C -0 0 0 0 1 9 .D
* D A D 1 , 3 .5 0 1 (8 8 .8 m A U , - ) R e f= 2 .8 0 7 & 3 .7 2 7 o f A R C -0 0 0 0 1 9 .D
m A U m A U m A U
1 6 0
1 5 0 0
8 0 3
1 4 0 2
7 0
1 2 0 4 0 0 6 0
1 0 0 5 0
3 0 0
8 0 4 0
6 0 2 0 0 3 0
4 0 2 0
1 0 0
2 0 1 0
0 0 0
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m
* D A D 1 , 4 .1 2 7 (1 2 .8 m A U ,A p x ) R e f= 3 .7 4 1 & 5 . 4 3 4 o f A R C - 0 0 0 0 1 9 .* DD A D 1 , 5 . 1 8 1 ( 5 . 9 m A U , A p x ) R e f = 3 . 7 4 1 & 5 .4 3 4 o f A R C -0 0 0 0 1 9 .D
m A U m A U
1 2 5 5
4
1 0
4
8
3
6
2
4
1
2
0
0
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 n m
*D A D 1 A , S ig=280,8 R ef=off (FE N O LIC O S \2015-09-23 FT 14-59-26\A R C -000019.D - FE N O LIC O S \2015-09-24 FT 07-49-47\C A N -000000
m AU
17.5
15
12.5
10
2
7.5
5
1 4
5
2.5
3
-2.5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in

primeros compuestos separados por HPLC de la muestra FS-SA.

grafico 31.
112
* D A D 1 , 6 .9 4 1 (5 .4 m A U , - ) R e f= 6 .7 0 1 & 7 .2 2 1 o f A R C -0 0 0 0 1 9 .D * D A D 1 , 7 .4 0 7 (2 .9 m A U , - ) R e f= 7 .2 2 1 & 8 .1 0 1 o f A R C -0 0 0 0 1 9 .D
m A U m A U
5
7 1 .5
8
4
1
3 0 .5
2 0
1 -0 .5
-1
0
200 250 300 350 400 450 n m 200 250 300 350 400 450 n m
* D A D 1 , 7 . 8 4 7 ( 3 . 4 m A U , A p x ) R e f = 7 . 2 2 1 & 8 . 1 0 1 o f A R C - 0 0 0 0 1 9 . D* D A D 1 , 8 . 3 6 7 ( 5 . 3 m A U , - ) R e f = 8 . 1 1 4 & 8 . 8 4 7 o f A R C - 0 0 0 0 1 9 . D
m A U m A U
5
3 9 1 0
2 .5 4
2
3
1 .5
2
1
1
0 .5
0 0
200 250 300 350 400 450 n m 200 250 300 350 400 450 n m

m AU
17.5
15
12.5
10
7.5
10
5 7
9
2.5
8
-2.5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in

compuestos separados por HPLC de la muestra FS-SA.

de 7.842 min, para el (9) se tiene un tiempo de retención de 8.333 min, cada uno de
estos compuestos eluidos están acompañados con su respectivo espectro, así como
se muestra en el grafico 32.
113

porcentaje de ácidos fenólicos y flavonoide del tratamiento FS-SA de
TIEMPO DE Área
2C PICOS %
RETENCION Mau*s
1 2.506 61.35 0.40

2 2.725 45.60 0.34
Ácidos fenólicos
280 nm 3 3.489 16.85 0.12
4 4.127 32.18 0.20
5 5.176 18.13 0.11
6 6.926 43.13 0.27
Flavonoides 330 7 7.425 14.38 0.09
nm
8 7.842 32.78 0.21
9 8.333 62.43 0.40
327.57 2.14

de cada pico de acuerdo a la enumeración que se realizó mostrados en la figura 31 y
totales 6 - 9 se tiene un 0.97% y para los compuestos cuyo espectros son parecidos a
los flavonoides glicosidicos 14 y 15 se tiene un 1.39% que están presentes en el
114
3.6.3. Resumen de los resultados de compuestos fenólicos totales por HPLC.
Para la determinación de los compuestos fenólicos totales se determinó por el método

de cromatografía por HPLC, donde se utilizó dos estándares que fue el ácido gálico y
la quercetina 3 β-D-Glucósido, donde el ácido gálico se utilizó para determinar los
ácidos fenoles a una longitud de onda de 280 nm y la quercetina 3 β-D-Glucósido fue
para determinar los flavonoides a una longitud de onda de medida de 330 nm. Los
resultados tuvieron una variación en los tratamientos de pasta de chocolate
En la tabla 26, se aprecia los valores obtenidos que fueron tomados durante la
evaluación de los compuestos fenólicos totales en las seis muestras de pasta de
chocolate y una muestra de semilla fresca de copoazu, mostrando una variación en
los resultados finales, así como se muestra en el tabla 26.
Tabla 26. Concentración de compuestos fenólicos totales
Muestra codificada Teor fenólicos totales (mg/100g)
Cotiledón 5849,30ª
FN-SNBM 3092,05c
FN-SA 3796,89b
FN-SNBG 299,80d
FS-SNBM 19,47e
FS-SNBG 14,88f
FS-SA 2,14g
En la tabla 26, se observa los valores finales obtenidos durante la evaluación de los
compuestos fenólicos totales de las seis muestras de pasta de chocolate natural y una
muestra de semilla fresca de copoazu, donde los resultados nos indican que la semilla
115
fresca contiene una elevada concentración de compuestos fenólicos totales de 5849.0

mg/100g a comparación con las seis muestras de pasta, estos nos indica que durante
la etapa de beneficio y obtención de la pasta de chocolate naturas existe cambios y
disminución de su componentes.
Los tratamiento de pasta de chocolate natural de copoazu que fueron aplicados con el
método de fermentación natural, tuvieron los mejores comportamiento en la
concentración de compuestos fenólicos totales donde el tratamiento FN-SA, tuvo el
valor más alto de 3796 mg/100g y el tratamiento FN-SNBM con 3092.05 mg/100g, el
tratamiento FS-SNBG tuvo 299.80 mg/100g. El método de fermentación con solución
tuvo en sus tratamientos de pasta de chocolate una baja concentración de compuestos
fenólicos totales, donde el tratamiento más bajo fue el FS-SA con un valor de 2.14
mg/100g.
COMPUESTOS FENOLICOS TOTALES

7000.00
5849.30
6000.00
5000.00
mg/100 g
3796.89
4000.00
3092.05
3000.00
2000.00
1000.00
299.80
19.47 14.88 2.14
0.00
Cotiledon FN-SNBM FN-SA FN-SNBG FS-SNBM FS-SNBG FS-SA
fresco
TRATAMIENTO
Grafico 33. Concentración de los compuestos fenólicos

116
En el grafico 33, se aprecia gráficamente el resultado final de la concentración de

compuestos fenólicos totales en los tratamientos de chocolate, donde claramente se
muestra que en el estado natural de la semilla de copoazu existe una elevada
concentración de compuestos fenólicos totales y en los tratamientos de pasta existe
una disminución dependiendo al método aplicado en su proceso de fermentación y
secado.
3.7. Determinación de la capacidad antioxidante de las seis muestra de pasta

de chocolate y una muestra de semilla fresca de copoazu.
Para la determinación la capacidad antioxidante por el método del DPPH, el rango de

longitud para este trabajo fue de 517 nm donde presenta su máxima absorción. La
solución del DPPH se preparaba minutos antes de realizar los ensayos, debido a que
tiene a degradarse rápidamente por efectos de la luz y la temperatura (Molyneux,
2004)
El método del radical libre DPPH estable, es una manera fácil, rápida y sensible para
estudiar la actividad antioxidante de un compuesto específico o extracto de muestras
de pasta de chocolate natural y la semilla fresca de copoazu.
3.7.1. Curva de calibración del estándar del Trolox.
Para la determinación del método del DPPH, primero se determinó la curva patrón del
estándar para determinar la capacidad antioxidante, del cual se obtuvo la ecuación por
regresión lineal, con el fin de realizar los cálculos de actividad antioxidante expresando
en equivalentes Trolox. La curva estándar fue construida con ayuda de un
espectrofotómetro (Thermo Scientific Multiskan GO), las absorbancia fueron medidas
a 517 nm en un tiempo de 30 minutos. La curva estándar fue construida graficando las
lecturas de las absorbancias versus las concentraciones de Trolox presente en cada
ensayo, como puede ser visualizada en el grafico 34.
117
0,5
0,4
Absorbancia
0,3
0,2
0,1
0,0
0 4 8 12 16
Concentración de Trolox (µg)
Grafico 34. Curva de calibración del patrón del estándar del Trolox,
donde ΔA DPPH-Trolox es la diferencia de la absorbancia
del DPPH y el estándar.
El grafico 34, se aprecia la curva de calibración del patrón estándar del Trolox (6-
hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcromo-2-acido carboxílico) es un análogo del a-tocoferol
soluble en agua. Es conocido por su alta capacidad antioxidante y por tanto es utilizado
como compuesto de referencia y actividad antioxidante es expresada como
equivalentes Trolox (Oehlke et al., 2011), principalmente para el método del DPPH.
La ecuación fue determinada por regresión linear utilizando el método de mínimos

cuadrados con ayuda del software OriginPro 2015 64 bit, obteniéndose una ecuación
(ecuación 1) con un R2 ajustado de 0,9964. Los factores de correlación obtenidos
indican claramente que la ecuación hallada es capaz de explicar en 99,64% las
variaciones de los datos experimentales, lo que lleva a considerar esta ecuación como
apropiada para previsión de la absorbancia en función de la concentración del
antioxidante, a partir de las cuales fue posible expresar la actividad antioxidante de las
seis muestras de pasta de chocolate y una muestra de semilla fresca de copoazu,
evaluadas en µg Trolox/g de extracto. Por tanto, la ecuación determinada puede ser
utilizada para calcular la concentración de un antioxidante natural expresado en Trolox,
a partir de la absorbancia.
118
Absorbancia = 0,0084 + 0,03184 ∗ (µg Trolox) (1)
3.7.2. Resultado de la capacidad antioxidante de los tratamientos por el método

de DPPH
Una vez determinado la calibración del estándar del Trolox, se prosiguió a la

determinación de la capacidad antioxidantes de los seis tratamientos de muestras de
pasta de chocolate y una muestra de semilla fresca de copoazu. Donde se obtuvo
valores altos y bajos en su concentración de capacidad antioxidante en las muestras
de la investigación.
En la tabla 27, se aprecia los valores obtenidos que fueron tomados por triplicado y
con su respectivo desvió estándar durante la evaluación de la capacidad antioxidante
en los tratamientos de pasta de chocolate, mostrando una variación en las
concentraciones de cada tratamiento, así como se muestra en la tabla 27.
Tabla 27.Capacidad antioxidante por DPPH en µmol de ET/100 g muestra en

húmeda.
DPPH*
TRATAMIENTO
(µmol de ET/100 g.h.)
Cotiledón 1644,855 ± 1,813a
FN-SNBM 343,832 ± 0,361b
FN-SA 336,900 ± 0,363c

FS-SNBM 17,094 ± 0,048d
FN-SNBG 16,941 ± 0,018ed
FS-SNBG 16,927 ± 0,036fd
FS-SA 16,656 ± 0,031gd
* Media ± desvío estándar
En la tabla 27, se puede apreciar los resultados obtenidos en las muestras, donde se
observa claramente que la semilla fresca de copoazu contiene un elevado contenido
119
de capacidad antioxidante de 1644.855 µmol de ET/100 g b.h. en su naturaleza a

comparación con los resultados de las muestras de pasta de chocolate de copoazu,
esto nos indica que los métodos de proceso de fermentación y secado afecta la
concentración de la capacidad antioxidante en la pasta de chocolate. Los tratamientos
FN-SNBM y FN-SA tuvieron los valor más alto en la concentración de capacidad
antioxidante de los tratamientos de muestras de chocolate, en donde el tratamiento
FN-SNBM tuvo un valor de 343.832 µmol de ET/100 g b.h. y el tratamiento FN-SA,
tuvo un valor de 336.90 µmol de ET/100 g b.h que los demás tratamientos de pasta
de chocolate.
En tratamiento FS-SA tuvo el valor más bajo en la evaluación de la capacidad

antioxidante que fue de 16.658 µmol de ET/100 g b.h. El análisis estadístico indico
que no existe diferencia significativa (P<0.05) entre los tratamientos de pasta de
chocolate ya que solo la muestra de semilla fresca mostró una significancia mayor
(P≤0.05) que el restos de los tratamiento.
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
1,800.00
1,644.86
1,600.00
µmol de ET/100 g. b .h.
1,400.00
1,200.00
1,000.00
800.00
600.00
400.00 343.83 336.90
200.00
17.09 16.94 16.93 16.66
0.00
Cotiledón FN-SNBM FN-SA FS-SNBM FN-SNBG FS-SNBG FS-SA
TRATAMIENTO
Grafico 35. Concentración de la capacidad antioxidante

120
El grafico 35, se aprecia gráficamente los resultados finales de la capacidad

antioxidante de los tratamientos de pasta de chocolate y la muestra de semilla fresca
de copoazu, donde se observa que existe un alto valor de 1644.86 µmol de ET/100 g
b.h en la semilla fresca en comparación a los tratamiento de pasta de chocolate, esto
indica que los métodos aplicados en la investigación causan un efectos en la
concentración de la capacidad antioxidante de la pasta de chocolate de copoazu, en
el anexo 3 se muestran los datos obtenidos en el análisis de la determinación de
capacidad antioxidantes. .
121
CONCLUSIONES
 Los resultados obtenidos en la determinación de las características físico-

químicos del copoazu, se pudo determinar su rendimiento de la semilla que es
de 17.29%, pulpa 41.01% y su corteza un 42.22%. Con respecto a la semilla se
obtuvo un peso promedio de 6.65g, una longitud de 2.72cm y un diámetro de
1.15cm. Los datos obtenidos son similares a los reportados por (Barbosa, 1979
y Calzavara et al, 1984) y (Venturieri, 1993 y Rocha Neto, 1999). Los valores más
relevantes obtenido en su composición química de la semilla es el porcentaje de
humedad que es de 36%, grasa de 18.07% y carbohidratos de 21.25%, estos
valores se aproximan a los valores referenciales obtenidos por Calzavara et al.
,1984.
 Respecto a los resultado de la evaluación de la fermentación natural (FN) y

fermentación con solución (FS), se pudo determinar que el método de FN tuvo
una eficiencia en el grado de fermentación, las cuales tuvo los mejores resultados
en su comportamiento de sus variables más resaltantes como temperatura que
tuvo un máxima promedio de 44°C en el quinto día, una humedad final de 43%
y una coloración gradual en su pigmentación del cotiledón durante los 8 días de
fermentación. Como se observa en el proceso de fermentación natural alcanza
en menor tiempo las temperaturas óptimas necesarias para que el cotiledón cese
su actividad biológica.
 Respecto a los efectos de los tres métodos de secado aplicado a la presente

investigación tales como secado natural con bandeja de madera (SNBM), secado
natural con bandeja galvanizada (SNBG) y secado artificial (SA), donde el mejor
resultado se obtuvo en la muestras sometidas a fermentación natural y secado
natural con bandejas de madera (FN-SNBM), alcanzaron los más bajos niveles
de humedad (7%) en 4 días. Una vez fermentado y secado se pudo determinar
por la prueba de corte los mejores resultados en el índice de fermentación: el
tratamiento que tuvo el mejor resultado fue la fermentación natural con secado
natural con bandeja de madera (FN-SNBM), donde se obtuvo semillas bien
122
fermentados (85%), semillas insuficientemente fermentadas (12%) y pizarrosos

(3%). Valores que se aproximan a lo establecido en las Normas Técnicas
Peruanas (NTP) para conservación de granos.
 Los métodos aplicados en las etapas de fermentación y secado si causaron un

efecto en la concentración de compuestos fenólicos y capacidad antioxidante de
las muestras de la pasta de chocolate natural, donde el mejor resultado en su
concentracion se obtuvo en el tratamiento de fermentación natural con secado
artificial (FN-SA) cuyos valores fueron de 3796.05 mg/100g de compuestos
fenólicos y 343.83 µmol de ET/100 g b.h. de capacidad antioxidante.
123
RECOMENDACIONES
 Se recomienda que antes de iniciar el proceso de fermentación, de la pulpa

adherida a la semilla un rango de 15% mínimo y un máximo de 30%, para que
tenga un buen acondicionamiento en el proceso de fermentación, con respecto a
los cajones nuevos de madera, tiene que hacerse un curado a los cajones debido
a que por su naturaleza la madera contiene un pH y una acidez elevada que
afecta al proceso de fermentación de la semilla de copoazu.
 Es importante estandarizar el proceso de fermentación y secado de la semilla de

copoazu para determinar su índice de fermentación adecuada mediante la
prueba de corte y un registro fotográfico donde se muestre el cambio progresivo
de la pigmentación de los granos bien fermentados, insuficientemente
fermentado y pizarrosos y así brindar a los productores de dicho fruto una
herramienta de fácil acceso para que la puedan comparar con sus proceso de
índice de fermentación.
 Una vez concluido la investigación, se nos permite proponer futuras

investigaciones orientadas a profundizar con respecto a la evaluación del
comportamiento microbiológico durante el proceso de fermentación.
 Evaluar el proceso de tostado ya que es una de las etapas fundamental para la

calidad de la pasta de chocolate natural.
 Se recomienda evaluar los periodos de almacenamiento óptimos del grano

fermentado y seco al fin de determinar la temperatura y humedades adecuadas
y al final evaluar su influencia en el contenido de grasa, compuestos fenólicos y
capacidad antioxidantes.
 Es necesario determinar otros parámetros físicos y fisicoquímicos que permitan

diferenciar concluyentemente la calidad de la pasta de chocolate natural en las
diferentes variedades. Esta recomendación es aplicable a otras zonas
productoras con iguales o diferentes variedades de copoazu.
124
BIBLIOGRAFÍA
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Copoazú (Theobroma grandiflorum Willd. ex Spreng), (tesis), Bogotá, Programa
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Corpoica Regional 10, Florencia, España, pp. 3-12..
126
Anexo 1: Resultados de análisis proximal.
Fuente: Laboratorio de química de la UNSAAC (2015).

127
Anexo 2: Constancia de análisis de compuestos fenólicos y capacidad antioxidante

de la pasta de chocolate de copoazu.
Fuente: Laboratorio de Cromatografía de la UNSAAC (2015).

128
Anexo 03: Datos obtenidos en la determinación de compuestos fenólicos de una

muestra fresca del cotiledón y de los seis tratamientos de muestras de
Muestra fresca del cotiledón del Copoazu.
Tiempo de Area 1 mAU*s Extracto Picos en Volumen Volm Extrac Peso de Contenido en
Semillas Pico % Corregido
Retencion min (HPLC) seco mg/mL mg/mL de mg/50 mL Muestra mg/100g
1 2.78 1542.23 15.21 11.7 1.78 50 88.95 10.00 889.40
2 3.93 362.56 3.72 11.7 0.44 50 21.76 10.00 217.58
3 4.22 973.45 10.14 11.7 1.19 50 59.34 10.00 593.31
Acidos 4 4.60 1369.87 14.20 11.7 1.66 50 83.09 10.00 830.82
fenolicos 5 5.17 385.36 3.91 11.7 0.46 50 22.87 10.00 228.69
280 nm 6 5.57 61.44 0.64 11.7 0.07 50 3.73 10.00 37.26
7 5.79 125.03 1.28 11.7 0.15 50 7.49 10.00 74.94
8 6.04 99.97 1.04 11.7 0.12 50 6.06 10.00 60.55
9 6.48 164.06 1.67 11.7 0.20 50 9.79 10.00 97.92
10 6.91 763.11 7.69 11.7 0.90 50 44.97 10.00 449.69
11 7.34 622.23 6.26 11.7 0.73 50 36.60 10.00 366.00
Flavonoides 12 7.83 707.55 7.10 11.7 0.83 50 41.54 10.00 415.34
330 nm 13 8.22 2703.41 27.15 11.7 3.18 50 158.80 10.00 1587.80
14 0 0 0 11.7 0 50 0 10.00 0.00
15 0 0 0 11.7 0 50 0 10.00 0.00
Suma Total 100% 100 11.7 585 5849.30
Fuente: Laboratorio de cromatografía - UNSAAC, elaboración propia (2015)
Muestra de Fermentación natural con secado natural en bandeja de madera (FN-

SNBM).
Tiempo de Area mAU*s Extracto Picos en Volumen Volm Extrac Peso de Contenido en
1 2.47 1189.65 7.57 6.20 0.47 50.000 23 10.03 234.01
2 2.77 2084.21 13.26 6.20 0.82 50.000 41 10.03 409.88
3 3.47 522.98 3.28 6.20 0.20 50.000 10 10.03 101.57
Acidos 4 4.14 1950.29 12.47 6.20 0.77 50.000 39 10.03 385.50
fenolicos 5 4.61 483.15 3.07 6.20 0.19 50.000 10 10.03 94.91
280 nm 6 4.89 102.57 0.64 6.20 0.04 50.000 2 10.03 19.79
7 5.17 1219.71 7.76 6.20 0.48 50.000 24 10.03 239.97
8 5.57 126.93 0.76 6.20 0.05 50.000 2 10.03 23.53
9 5.77 78.42 0.51 6.20 0.03 50.000 2 10.03 15.70
10 6.92 1515.95 9.66 6.20 0.60 50.000 30 10.03 298.70
11 7.36 1144.15 7.30 6.20 0.45 50.000 23 10.03 225.70
Flavonoides 12 7.84 1343.26 8.57 6.20 0.53 50.000 27 10.03 264.91
330 nm 13 8.22 3734.35 23.77 6.20 1.47 50.000 74 10.03 734.90
14 8.617 158.79 1.02 6.20 0.063344222 50.000 3 10.03 31.59
15 9.006 58.02 0.37 6.20 0.022876322 50.000 1 10.03 11.41
Suma Total 100% 15712.42 100 6.2 310 3092.05

129
Muestra de fermentación natural con secado artificial (FN-SA)
1 2.46 722.53 8.20 7.60 0.62 50 31 10.01 311.44
2 2.76 1184.22 13.39 7.60 1.02 50 51 10.01 508.58
3 3.48 275.21 3.12 7.60 0.24 50 12 10.01 118.46
Acidos 4 4.13 1100.71 12.54 7.60 0.95 50 48 10.01 476.05
fenolicos 5 4.61 295.46 3.38 7.60 0.26 50 13 10.01 128.22
280 nm 6 4.88 88.66 1.02 7.60 0.08 50 4 10.01 38.74
7 5.18 803.12 9.15 7.60 0.70 50 35 10.01 347.39
8 5.56 89.27 1.02 7.60 0.08 50 4 10.01 38.81
9 0.00 0.00 0.00 7.60 0.00 50 0 10.01 0.00
10 6.92 777.43 8.87 7.60 0.67 50 34 10.01 336.67
11 7.40 688.76 7.86 7.60 0.60 50 30 10.01 298.31
Flavonoides 12 7.84 686.17 7.83 7.60 0.60 50 30 10.01 297.32
330 nm 13 8.27 1842.98 21.02 7.60 1.60 50 80 10.01 797.98
14 8.619 172.14 1.96 7.60 0.149 50 7 10.01 74.60
15 9.007 56.07 0.64 7.60 0.049 50 2 10.01 24.31
Suma Total 100% 8782.74 100 7.6 380 3796.89
Muestra de fermentación natural con secado natural de bandeja galvanizada (FN-

SNBG)
1 3.49 14.83 4.06 0.60 0.02 50 1 10.01 12.17
2 4.14 138.49 37.91 0.60 0.23 50 11 10.01 113.66
3 5.17 11.02 3.02 0.60 0.02 50 1 10.01 9.05
Acidos 4 0.00 0.00 0.00 0.60 0.00 50 0 10.01 0.00
fenolicos 5 0.00 0.00 0.00 0.60 0.00 50 0 10.01 0.00
280 nm 6 0.00 0.00 0.00 0.60 0.00 50 0 10.01 0.00
7 0.00 0.00 0.00 0.60 0.00 50 0 10.01 0.00
8 0.00 0.00 0.00 0.60 0.00 50 0 10.01 0.00
9 0.00 0.00 0.00 0.60 0.00 50 0 10.01 0.00
10 6.93 47.22 12.93 0.60 0.08 50 4 10.01 38.75
11 7.44 31.00 8.49 0.60 0.05 50 3 10.01 25.44
Flavonoides 12 7.85 39.42 10.79 0.60 0.06 50 3 10.01 32.35
330 nm 13 8.32 70.70 19.36 0.60 0.12 50 6 10.01 58.03
14 8.627 12.62 3.45 0.60 0.021 50 1 10.01 10.36
15 0 0.00 0.00 0.60 0.000 50 0 10.01 0.00
Suma Total 100% 365.29 100 0.6 30 299.80

130
Muestra de fermentación con solución – secado natural de bandeja de madera

(FS-SNBM)
1 2.45 137.76 0.96 1.00 0.01 50 0 10.01 4.79
2 2.73 67.82 0.44 1.00 0.00 50 0 10.01 2.18
3 3.49 23.06 0.15 1.00 0.00 50 0 10.01 0.75
Acidos 4 4.14 153.86 0.99 1.00 0.01 50 0 10.01 4.95
fenolicos 5 5.18 9.94 0.06 1.00 0.00 50 0 10.01 0.32
280 nm 6 5.54 24.54 0.16 1.00 0.00 50 0 10.01 0.80
7 0.00 0.00 0.00 1.00 0.00 50 0 10.01 0.00
8 0.00 0.00 0.00 1.00 0.00 50 0 10.01 0.00
9 0.00 0.00 0.00 1.00 0.00 50 0 10.01 0.00
10 6.93 30.70 0.20 1.00 0.00 50 0 10.01 1.00
11 7.45 38.55 0.25 1.00 0.00 50 0 10.01 1.26
Flavonoides 12 7.84 29.59 0.19 1.00 0.00 50 0 10.01 0.96
330 nm 13 8.32 49.95 0.32 1.00 0.00 50 0 10.01 1.62
14 8.621 25.56 0.17 1.00 0.002 50 0 10.01 0.83
15 0 0.00 0.00 1.00 0.000 50 0 10.01 0.00
Suma Total 100% 591.33 3.897865346 0.038978653 1.948932673 19.47
Muestra de Fermentación con solución – secado natural con bandeja galvanizada

(FS-SNBG)
1 2.45 71.52 0.46 0.60 0.00 50 0 10.00 1.38
2 2.73 85.59 0.55 0.60 0.00 50 0 10.00 1.65
3 3.49 20.77 0.14 0.60 0.00 50 0 10.00 0.43
Acidos 4 4.14 304.57 2.01 0.60 0.01 50 1 10.00 6.03
fenolicos 5 5.17 19.62 0.13 0.60 0.00 50 0 10.00 0.38
280 nm 6 0.00 0.00 0.00 0.60 0.00 50 0 10.00 0.00
7 0.00 0.00 0.00 0.60 0.00 50 0 10.00 0.00
8 0.00 0.00 0.00 0.60 0.00 50 0 10.00 0.00
9 0.00 0.00 0.00 0.60 0.00 50 0 10.00 0.00
10 6.93 57.56 0.37 0.60 0.00 50 0 10.00 1.10
11 7.43 33.55 0.21 0.60 0.00 50 0 10.00 0.64
Flavonoides 12 7.85 47.70 0.30 0.60 0.00 50 0 10.00 0.91
330 nm 13 8.33 108.42 0.69 0.60 0.00 50 0 10.00 2.08
14 8.617 15.16 0.10 0.60 0.001 50 0 10.00 0.29
15 0 0.00 0.00 0.60 0.000 50 0 10.00 0.00
Suma Total 100% 764.46 4.96 0.03 1.49 14.88

131
Muestra de Fermentación con solución – secado artificial (FS-SA)
1 2.51 61.35 0.40 0.20 0.00 50 0 10.00 0.40
2 2.73 45.60 0.34 0.20 0.00 50 0 10.00 0.34
3 3.49 16.85 0.12 0.20 0.00 50 0 10.00 0.12
Acidos 4 4.13 32.18 0.20 0.20 0.00 50 0 10.00 0.20
fenolicos 5 5.18 18.13 0.11 0.20 0.00 50 0 10.00 0.11
280 nm 6 0.00 0.00 0.00 0.20 0.00 50 0 10.00 0.00
7 0.00 0.00 0.00 0.20 0.00 50 0 10.00 0.00
8 0.00 0.00 0.00 0.20 0.00 50 0 10.00 0.00
9 0.00 0.00 0.00 0.20 0.00 50 0 10.00 0.00
10 6.93 43.13 0.27 0.20 0.00 50 0 10.00 0.27
11 7.43 14.38 0.09 0.20 0.00 50 0 10.00 0.09
Flavonoides 12 7.84 32.78 0.21 0.20 0.00 50 0 10.00 0.21
330 nm 13 8.33 62.43 0.40 0.20 0.00 50 0 10.00 0.40
14 0 0.00 0.00 0.20 0.000 50 0 10.00 0.00
15 0 0.00 0.00 0.20 0.000 50 0 10.00 0.00
Suma Total 100% 326.84 2.14 0.00 0.21 2.14

132
Anexo 04: Datos obtenidos en la determinación de capacidad antioxidantes por el

método del DPPH de una muestra fresca del cotiledón y de los seis
tratamientos de muestras de pasta de chocolate de copoazu.
Curva patrón del estándar Trolox.
Trolox
Tolox Trolox EtOH DPPH Abs ΔADPPH-
tubo Vol 1 2 3 Promedio Abs DPPH
100ug/mL uM uL uL DPPH STD
uL
Control 0 0 0 2000 1000 0.545 0.546 0.544 0.545 0.545 0.0000 0.545
1 4 16 40 1960 1000 0.412 0.412 0.4 0.408 0.545 0.1370 0.545
2 8 32 80 1920 1000 0.267 0.273 0.262 0.2673 0.545 0.2777 0.545
3 16 64 160 1840 1000 0.037 0.034 0.034 0.035 0.545 0.5100 0.545
BLANCO 0 0 3000 0 0.0000
Muestra fresca del cotiledón del Copoazu.
ΔADPPH- Factor de Equi-Trolox

Muestr Abs- Conc. Volumen Equi-Trolox Volum.
Abs 1 Abs 2 Abs 3 Prom ADPPH % Inhb AAO % Semilla a b dilucion µg /peso
a uL Coriledon Trolox ug Extrac. mL µg /g cacao Inhb CI50
Copoazu (1/100) cacao g
0 0.541 0.540 0.540 0.5403 0.5403 0.5403 0.000 0 0.00 0.0318 0.0083 0 100 50 0.00 14.80
50 0.488 0.489 0.485 0.4873 0.5403 0.4873 9.81 9.81 0.0530 0.0318 0.0083 1.406 100 50 7028.30 15.60
100 0.435 0.433 0.425 0.4310 0.5403 0.4310 20.23 20.23 0.1093 0.0318 0.0083 3.177 100 50 15885.74 16.60
150 0.361 0.364 0.360 0.3617 0.5403 0.3617 33.07 33.07 0.1787 0.0318 0.0083 5.357 100 50 26787.21 18.15
200 0.304 0.306 0.306 0.3053 0.5403 0.3053 43.49 43.49 0.2350 0.0318 0.0083 7.129 100 50 35644.65 19.77
250 0.233 0.228 0.229 0.2300 0.5403 0.2300 57.43 57.43 0.3103 0.0318 0.0083 9.498 100 50 47489.52 22.80
300 0.173 0.172 0.177 0.1740 0.5403 0.1740 67.80 67.80 0.3663 0.0318 0.0083 11.259 100 50 56294.55 26.24
350 0.129 0.124 0.126 0.1263 0.5403 0.1263 76.62 76.62 0.4140 0.0318 0.0083 12.758 100 50 63789.31 30.82
400 0.099 0.103 0.095 0.0990 0.5403 0.0990 81.68 81.68 0.4413 0.0318 0.0083 13.617 100 50 68087.00 34.83
450 0.090 0.093 0.079 0.0873 0.5403 0.0873 83.84 83.84 0.4530 0.0318 0.0083 13.984 100 50 69921.38 37.09
500 0.079 0.072 0.073 0.0747 0.5403 0.0747 86.18 86.18 0.4657 0.0318 0.0083 14.383 100 50 71913.00 40.12
202.68 0.2702 0.5403 0.2702 50 50 0.2702 0.0318 0.00830 8.235 100 50 41174.00 4116.91 21.03
202.68 0.2702 0.270167 1.7303 0.00005 202.68

133
Muestra de Fermentación natural con secado natural en bandeja de madera (FN-

SNBM).
Factor de Equi-Trolox
Muestr ΔADPPH- Conc. Volumen Equi-Trolox Volum.
Abs 1 Abs 2 Abs 3 Prom ADPPH Abs-1A % Inhb AAO % a b dilucion µg /peso
a uL 1A Trolox ug Extrac. mL µg /g cacao Inhb CI50
(1/20) cacao g
0 0.566 0.565 0.565 0.565 0.565 0.565 0.000 0.000 0.000 0.032 0.008 0.000 20 50 0.00 0.000
50 0.449 0.450 0.456 0.452 0.565 0.452 20.106 20.106 0.114 0.032 0.008 3.313 20 50 3313.42 124.340
100 0.372 0.360 0.359 0.364 0.565 0.364 35.672 35.672 0.202 0.032 0.008 6.081 20 50 6080.71 140.165
150 0.374 0.370 0.369 0.371 0.565 0.371 34.375 34.375 0.194 0.032 0.008 5.850 20 50 5850.10 218.182
200 0.281 0.270 0.271 0.274 0.565 0.274 51.533 51.533 0.291 0.032 0.008 8.900 20 50 8900.42 194.050
250 0.197 0.190 0.187 0.191 0.565 0.191 66.156 66.156 0.374 0.032 0.008 11.500 20 50 11500.00 188.948
300 0.118 0.113 0.120 0.117 0.565 0.117 79.304 79.304 0.448 0.032 0.008 13.838 20 50 13837.53 189.145
350 0.072 0.071 0.072 0.072 0.565 0.072 87.323 87.323 0.494 0.032 0.008 15.263 20 50 15263.10 200.405
400 0.060 0.058 0.058 0.059 0.565 0.059 89.623 89.623 0.507 0.032 0.008 15.672 20 50 15671.91 223.158
450 0.055 0.056 0.055 0.055 0.565 0.055 90.212 90.212 0.510 0.032 0.008 15.777 20 50 15776.73 249.412
500 0.055 0.053 0.054 0.054 0.565 0.054 90.448 90.448 0.511 0.032 0.008 15.819 20 50 15818.66 276.402
194.05 0.28 0.57 0.28 50.00 50.00 0.28 0.03 0.01 8.63 20.00 50.00 8627.88 862.68 194.050
194.08 0.283 1.730 0.000 0.000 194.080
Muestra de fermentación natural com secado artificial (FN-SA).

(1/20) total g
0 0.554 0.553 0.553 0.553 0.553 0.553 0.000 0.000 0.000 0.032 0.008 0.000 20 17 0.00 0.000
50 0.453 0.455 0.455 0.454 0.553 0.454 17.892 17.892 0.099 0.032 0.008 -2.852 20 17 -969.75 139.731
100 0.364 0.354 0.364 0.361 0.553 0.361 34.819 34.819 0.193 0.032 0.008 5.798 20 17 1971.22 143.599
150 0.276 0.264 0.254 0.265 0.553 0.265 52.169 52.169 0.289 0.032 0.008 8.817 20 17 2997.63 143.764
200 0.177 0.169 0.169 0.172 0.553 0.172 68.976 68.976 0.382 0.032 0.008 11.741 20 17 3991.97 144.978
250 0.107 0.098 0.095 0.100 0.553 0.100 81.928 81.928 0.453 0.032 0.008 13.995 20 17 4758.22 152.574
300 0.067 0.070 0.065 0.067 0.553 0.067 87.831 87.831 0.486 0.032 0.008 15.022 20 17 5107.48 170.782
350 0.063 0.060 0.059 0.061 0.553 0.061 89.036 89.036 0.493 0.032 0.008 15.232 20 17 5178.76 196.549
400 0.059 0.059 0.090 0.069 0.553 0.069 87.470 87.470 0.484 0.032 0.008 14.959 20 17 5086.10 228.650
450 0.055 0.059 0.059 0.058 0.553 0.058 89.578 89.578 0.496 0.032 0.008 15.326 20 17 5210.84 251.177
500 0.056 0.059 0.059 0.058 0.553 0.058 89.518 89.518 0.495 0.032 0.008 15.316 20 17 5207.27 279.273
143.76 0.28 0.55 0.28 50.00 50.00 0.28 0.03 0.01 8.44 20.00 50.00 8439.20 843.82 143.764
143.76 0.277 1.730 0.000 0.000 198.157
Muestra de fermentación natural con secado natural de bandeja galvanizada (FN-

SNBG)
(0) cacao g
0 0.557 0.556 0.556 0.556 0.556 0.556 0.000 0.000 0.000 0.032 0.008 0.000 1 27.5 0.00 0.000
50 0.473 0.461 0.461 0.465 0.556 0.465 16.417 16.417 0.091 0.032 0.008 -2.611 1 27.5 -71.81 152.281
100 0.372 0.383 0.334 0.363 0.556 0.363 34.751 34.751 0.193 0.032 0.008 5.819 1 27.5 160.01 143.879
150.00 0.30 0.30 0.30 0.30 0.56 0.30 46.38 46.38 0.26 0.03 0.01 7.85 1.00 27.50 215.94 161.72
200 0.210 0.217 0.217 0.215 0.556 0.215 61.414 61.414 0.342 0.032 0.008 10.483 1 27.5 288.29 162.829
250 0.146 0.234 0.139 0.173 0.556 0.173 68.904 68.904 0.383 0.032 0.008 11.794 1 27.5 324.32 181.413
300 0.096 0.099 0.077 0.091 0.556 0.091 83.703 83.703 0.466 0.032 0.008 14.383 1 27.5 395.52 179.205
350 0.065 0.066 0.066 0.066 0.556 0.066 88.197 88.197 0.491 0.032 0.008 15.169 1 27.5 417.14 198.421
400 0.055 0.053 0.063 0.057 0.556 0.057 89.754 89.754 0.499 0.032 0.008 15.441 1 27.5 424.64 222.830
450 0.051 0.051 0.051 0.051 0.556 0.051 90.833 90.833 0.505 0.032 0.008 15.630 1 27.5 429.82 247.708
500 0.051 0.050 0.051 0.051 0.556 0.051 90.893 90.893 0.506 0.032 0.008 15.640 1 27.5 430.11 275.049
162.83 0.28 0.56 0.28 50.00 50.00 0.28 0.03 0.01 8.49 1.00 50.00 424.32 42.43 162.829
197.13 0.278 0.556 1.730 0.000 0.000 197.129

134
Muestra de fermentación con solución – secado natural de bandeja de madera

(FS-SNBM)
(0) cacao g
0 0.560 0.563 0.561 0.561 0.561 0.561 0.000 0.000 0.000 0.032 0.008 0.000 1 25 0.00 0.000
50 0.476 0.480 0.483 0.480 0.561 0.480 14.549 14.549 0.082 0.032 0.008 -2.307 1 25 -57.68 171.837
100 0.421 0.420 0.415 0.419 0.561 0.419 25.416 25.416 0.143 0.032 0.008 4.225 1 25 105.63 196.729
150 0.339 0.349 0.347 0.345 0.561 0.345 38.539 38.539 0.216 0.032 0.008 6.542 1 25 163.55 194.607
200 0.293 0.270 0.298 0.287 0.561 0.287 48.872 48.872 0.274 0.032 0.008 8.366 1 25 209.15 204.617
250 0.251 0.251 0.248 0.250 0.561 0.250 55.463 55.463 0.311 0.032 0.008 9.529 1 25 238.23 225.375
300 0.217 0.212 0.210 0.213 0.561 0.213 62.055 62.055 0.348 0.032 0.008 10.693 1 25 267.32 241.722
350 0.184 0.180 0.185 0.183 0.561 0.183 67.399 67.399 0.378 0.032 0.008 11.636 1 25 290.91 259.648
400 0.167 0.169 0.170 0.169 0.561 0.169 69.952 69.952 0.393 0.032 0.008 12.087 1 25 302.18 285.908
450 0.146 0.150 0.150 0.149 0.561 0.149 73.515 73.515 0.413 0.032 0.008 12.716 1 25 317.90 306.058
500 0.150 0.153 0.155 0.153 0.561 0.153 72.803 72.803 0.409 0.032 0.008 12.590 1 25 314.75 343.393
204.62 0.28 0.56 0.28 50.00 50.00 0.28 0.03 0.01 8.56 1.00 50.00 428.25 42.82 204.617
195.43 0.281 0.556 1.730 0.000 0.000 195.429
Muestra de Fermentación con solución – secado natural con bandeja

galvanizada (FS-SNBG)
(0) cacao g
0 0.557 0.555 0.555 0.556 0.556 0.556 0.000 0.000 0.000 0.032 0.008 0.000 1 21 0.00 0.000
50 0.436 0.489 0.453 0.459 0.556 0.459 17.337 17.337 0.096 0.032 0.008 -2.768 1 21 -58.14 144.204
100 0.380 0.375 0.373 0.376 0.556 0.376 32.334 32.334 0.180 0.032 0.008 5.389 1 21 113.17 154.638
150 0.294 0.295 0.242 0.277 0.556 0.277 50.150 50.150 0.279 0.032 0.008 8.502 1 21 178.54 149.551
200 0.214 0.220 0.216 0.217 0.556 0.217 61.008 61.008 0.339 0.032 0.008 10.399 1 21 218.39 163.913
250 0.156 0.138 0.141 0.145 0.556 0.145 73.905 73.905 0.411 0.032 0.008 12.653 1 21 265.71 169.136
300 0.099 0.100 0.100 0.100 0.556 0.100 82.064 82.064 0.456 0.032 0.008 14.079 1 21 295.65 182.785
350 0.066 0.066 0.059 0.064 0.556 0.064 88.542 88.542 0.492 0.032 0.008 15.211 1 21 319.42 197.646
400 0.049 0.048 0.048 0.048 0.556 0.048 91.302 91.302 0.507 0.032 0.008 15.693 1 21 329.55 219.054
450 0.044 0.044 0.043 0.044 0.556 0.044 92.142 92.142 0.512 0.032 0.008 15.840 1 21 332.63 244.189
500 0.043 0.043 0.043 0.043 0.556 0.043 92.262 92.262 0.513 0.032 0.008 15.861 1 21 333.07 270.969
149.55 0.28 0.56 0.28 50.00 50.00 0.28 0.03 0.01 8.48 1.00 50.00 423.79 42.37 149.551
149.55 0.278 0.556 1.730 0.000 0.000 197.357
Muestra de Fermentación con solución – secado artificial (FS-SA)

(0) cacao g
0 0.548 0.547 0.546 0.547 0.547 0.547 0.000 0.000 0.000 0.032 0.008 0.000 1 20 0.00 0.000
50 0.468 0.476 0.475 0.473 0.547 0.473 13.528 13.528 0.074 0.032 0.008 -2.066 1 20 -41.32 184.797
100 0.349 0.347 0.389 0.362 0.547 0.362 33.882 33.882 0.185 0.032 0.008 5.567 1 20 111.34 147.572
150 0.320 0.317 0.319 0.319 0.547 0.319 41.743 41.743 0.228 0.032 0.008 6.919 1 20 138.39 179.672
200 0.242 0.255 0.255 0.251 0.547 0.251 54.174 54.174 0.296 0.032 0.008 9.058 1 20 181.15 184.589
250 0.182 0.149 0.175 0.169 0.547 0.169 69.165 69.165 0.378 0.032 0.008 11.636 1 20 232.73 180.727
300 0.117 0.111 0.120 0.116 0.547 0.116 78.793 78.793 0.431 0.032 0.008 13.292 1 20 265.85 190.371
350 0.083 0.079 0.069 0.077 0.547 0.077 85.923 85.923 0.470 0.032 0.008 14.519 1 20 290.38 203.670
400 0.056 0.054 0.055 0.055 0.547 0.055 89.945 89.945 0.492 0.032 0.008 15.211 1 20 304.21 222.358
450 0.051 0.054 0.055 0.053 0.547 0.053 90.250 90.250 0.494 0.032 0.008 15.263 1 20 305.26 249.308
500 0.051 0.049 0.051 0.050 0.547 0.050 90.798 90.798 0.497 0.032 0.008 15.357 1 20 307.15 275.336
184.59 0.27 0.55 0.27 50.00 50.00 0.27 0.03 0.01 8.34 1.00 50.00 416.98 41.69 184.589
149.55 0.274 0.547 1.730 0.000 0.000 200.345

135
Anexo 4: Galeria de fotos.
Figura 1: Trabajo de campo. Figura 2: Trabajo de campo

Previo agrícola Recolección del fruto
Fuente: Elaboración propia (2015). Fuente: Elaboración propia (2015).
Figura 3: Área de fermentación. Figura 4: Área de secado.

Figura 5: Secada artificial (Estufa) Figura 6: Semillas secas.

136
Figura 7: Secado natural en Figura 8: Secado natural en

bandeja de madera. bandeja galvanizada.
Figura 9: Medición de la temperatura Figura 10: Remoción de la

del fermentación fermentación
Figura 11: Preparación de la Figura 12: Determinando la

muestra de pulpa acidez de las
y cotiledón. muestras.

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“Madre de Dios, Capital de la Biodiversidad”

UNIVERSIDAD NACIONAL AMAZÓNICA DE MADRE DE DIOS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

“EVALUACIÓN DE LOS MÉTODOS DE FERMENTACIÓN Y

Bach. ALEX VICTOR ROJAS CORRALES

Bach. JUANA VILLAGRA HALANOCCA

Para optar el título profesional de:

PUERTO MALDONADO – PERU

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

“EVALUACIÓN DE LOS MÉTODOS DE FERMENTACIÓN Y

Bach. ALEX VICTOR ROJAS CORRALES

Bach. JUANA VILLAGRA HALANOCCA

Para optar el título profesional de:

PUERTO MALDONADO – PERU

Ing. Pedro Saúl Montalván Apolaya Dra. Roxana Madueño Portilla

PUERTO MALDONADO - PERÚ

A Dios por guiarme en mi caminar, para

A mis padres y hermanos por todo su

Asimismo, el presente trabajo está dedicado a

Alex Víctor Rojas Corrales

Son muchas las personas especiales a las que me

Juana Villagra Halanocca

Deseo especialmente agradecer:

A la Universidad Nacional Amazónica de Madre de Dios, especialmente a la Escuela

A toda mi familia por su apoyo permanente y desinteresado, especialmente a mis

Alex Víctor Rojas Corrales

Juana Villagra Halanocca

El trabajo de investigación consta de tres capítulos, estructurados de la siguiente

Capítulo I: Marco teórico, donde se consignan todos los antecedentes de la

Capítulo II: Materiales y Métodos, donde se consignan las generalidades de la

Capítulo III: Resultados y discusiones, donde se consignan los reportes obtenidos,

INDICE DE TABLA vii

INDICE DE CUADRO viii

CAPITULO I: MARCO TEORICO 1

1.1. Antecedentes de estudios realizados 1

CAPITULO II: MATERIALES Y METODOS 22

2.1. Lugar de ejecución 22

2.2. Materiales, equipos e infraestructura 22

2.3.3. Beneficio y obtención de pasta de chocolate natural de copoazu 26

2.3.4. Método de análisis 39

CAPITULO III: RESULTADOS Y DISCUSIONES 47

3.1. Caracterización Físicas de la semilla de Copoazú 47

3.2. Caracterización fisicoquímica del cotiledón y pulpa de copoazú 48

3.3. Análisis de los resultados de la semilla de copoazu, durante el proceso de

Comportamiento de los dos métodos de fermentación 49

3.3.1. Perfil de temperatura 50

3.3.2. Comportamiento del pH de la pulpa y cotiledón 54

3.3.3. Comportamiento de la acidez en la pulpa y cotiledón 59

3.3.4. Comportamiento de solidos solubles de la pulpa 66

3.3.5. Comportamiento de la humedad del cotiledón 70

3.3.6. Comportamiento del cambio en la pigmentación del cotiledón 73

3.4. Análisis de los resultados de la semilla de copoazu, durante el proceso de

3.4.2. Comportamiento del secado artificial (estufa) 81

3.5. Porcentaje de índice físico de fermentación: Prueba de corte 82

3.6. Comportamiento de los resultados de la capacidad antioxidante y los compuestos

3.6.1. Resultado de perfil de cromatografico de los estándares utilizados 85

3.6.2. Resultado de perfil de compuesto fenólico por HPLC-DAD 87

3.7. Determinación de la capacidad antioxidante de las seis muestras de pasta de

3.7.1. Curva de calibración del estándar del Trolox 119