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III. Protocolo para realizar pruebas pretransfusionales

José Luis Alcaraz-López*

Según el diccionario de la Lengua Española, Compatibilidad: Prueba menor: 2 volúmenes de plasma del donante
proviene del latín compatibilis = compadecerse. Que frente a un volumen de eritrocitos lavados del receptor.
puede unirse o existir armónicamente con otra cosa o Auto testigo: Eritrocitos más suero del paciente.5
persona en un mismo lugar o tiempo. Definición acorde
con la finalidad de las pruebas de compatibilidad sanguínea
en donde buscamos una coexistencia armónica entre el Interpretación de resultados en Pruebas Cruzadas
producto sanguíneo transfundido y su receptor.
Historia: el primer reporte escrito de la transfusión Algunos de los factores más importantes que afectan la
sanguínea fue realizado en animales, por J. Denis en sobrevida de los eritrocitos son: la clase y subclase de
Francia en junio de 1667. J. Blundell realiza los primeros inmunoglobulinas que se producen frente a sangre
intentos de transfusión en humanos en 1824. En 1901 incompatible; la capacidad del anticuerpo para activar el
Landsteiner descubre el Sistema AB0. En 1914 Hustin complemento; la cantidad de anticuerpos presentes en el
empieza a utilizar el Citrato como anticoagulante. Moreschi plasma del paciente y la avidez por su correspondiente
en 1908 experimenta con animales inyectándoles IgG antígeno eritrocitario; el número de sitios antigénicos que
humana, trabajo que más tarde Coombs continúa y tenga la sangre incompatible circulando en el organismo
realiza su publicación en 1945 poniendo las bases de la del paciente transfundido, el margen térmico de acción del
prueba más generalizada y valiosa de nuestro tiempo que anticuerpo implicado, la cantidad de eritrocitos transfundidos,
conocemos como Prueba de Coombs. Dacie en 1957 la presencia de substancias solubles de grupo en el
publica su trabajo sobre IgG contra el complemento receptor secretor y la actividad del sistema fagocítico
humano (fracción C4).1,4 mononuclear del paciente transfundido.7
En el transcurso de los últimos 70 años se ha trabajado
con diferentes sustancias que aceleran y modifican la
reacción antígeno–anticuerpo: albúmina humana, bovina, Evaluación de la prueba cruzada
bovina polimerizada a 19%, 22%, 30%. Enzimas como la
bromelina, fisina, papaína y tripsina, L.I.S.S. (Low ionic Prueba mayor positiva: en prueba rápida: corroborar el
strength saline/solución salina de baja fuerza iónica), grupo ABO del donador. En técnica a 37º C o en Coombs
columnas de gel, polietileno glicol (PEG), polibreno,2,6 realizar búsqueda de anticuerpos irregulares para determinar
La prueba de compatibilidad sanguínea es un ensayo la especificad del anticuerpo. Cruzar toda la sangre
in vitro de lo que puede suceder en el paciente al recibir compatible por sistema ABO con que se cuente en el
la transfusión de un componente sanguíneo. De acuerdo banco y transfundir las compatibles en situación de peligro
a lo establecido internacionalmente la secuencia de inminente de muerte por la anemia. Cuando sea posible,
actividades son: solicitud del producto y datos relevantes realizar fenotipo eritrocítico con sueros comerciales.7
del receptor. Identificación y colección de las muestras Pruebas mayor y menor positivas: cuando es detectado
sanguíneas del receptor. Estudios y pruebas del donador. en salina rápida, corroborar el grupo del sistema ABO
Determinación del grupo AB0 y Rho(D) del receptor. tanto al paciente como al donador. Si se detecta en 37º
Detección de anticuerpos irregulares. Selección de C y/o en Coombs realizar en el donador Coombs directo
componentes AB0 y Rho(D) apropiados para el receptor. e investigación de anticuerpos.
Comparación entre resultados actuales y el historial de Prueba menor positiva: si se detecta en salina rápida,
las pruebas pretransfusionales previas.3,4 corroborar el grupo ABO al donador, sobre todo cuando se
va a transfundir plaquetas o plasma. Si se detecta a 37º
C y/o en Coombs, realizar Coombs directo en el donador.
Prueba Cruzada Auto testigo positivo: si el paciente ha sido transfundido
recientemente (menos de 3 meses) es muy probable que
Prueba mayor: 2 volúmenes del suero del paciente frente esa aglutinación se deba a los anticuerpos del paciente que
a un volumen de eritrocitos lavados del donador. están pegados a los eritrocitos de la sangre transfundida. Si

* Banco Central de Sangre. Centro Médico Nacional Siglo XXI. IMSS. México, D.F.

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fue transfundido en los días previos con plasma o plaquetas, la salina formando un remolino suficiente para que todos
la aglutinación se puede deber al paso de anticuerpos del las células queden resuspendidas homogéneamente en
donador que se pegaron a los eritrocitos del paciente. Si el toda la barra de la salina agregada, de no ser posible esto
paciente nunca ha sido transfundido o tuvo transfusiones por falta de práctica, es recomendable tapar la boca del
hace más de cuatro meses, es probable que estemos frente tubo con parafilm para agitar por inversión. Lo anterior
a un auto anticuerpo como puede suceder en las A.H.A.I. o también es válido para todos los lavados que se realizan
en pacientes inmunocomprometidos como en el S.I.D.A. para llevar a prueba final de Coombs (salina-Coombs,
Técnicas de detección de anticuerpos antieritrocitos: Albúmina-Coombs, etc.).
la detección de anticuerpos antieritrocitos libres en el Otro punto importante es la concentración final de
suero se realiza enfrentando el suero y como segunda eritrocitos a la que se trabajará: 2.5 – 4.0%. Después de
opción, plasma del paciente en estudio contra eritrocitos lavar todas las células, corroborar su concentración para
de fenotipo conocido que sean representativos de la que cada una de ellas tenga la misma concentración, una
población del paciente. variación entre cada tubo darán resultados diferentes al
Los eritrocitos de fenotipo conocido se denominan enfrentarlas a los anticuerpos en estudio.
PANEL, que puede constar de 6, 10, 12 o 15 células que Una concentración final muy baja de eritrocitos nos
abarcan la mayoría de los antígenos raros de una población dificultará ver las aglutinaciones; una concentración muy
(K, Dia, Lea, Kpa, Lua, etc) y la ausencia de los antígenos alta volverá negativa la prueba en investigación de
que son frecuentes en la misma, o sea que hay sangres anticuerpos de poca concentración porque estos tendrán
negativas a: s, P1, Fya, Fyb, k, Jka, Jkb, Lub, Dib, Kpb que repartirse entre los eritrocitos presentes y no
. Muchas veces no es posible conseguir todo esto en un alcanzarán para todos, obteniéndose una prueba negativa
número tan bajo de donadores y se procura armar el panel al agregar el Coombs en lugar de positiva débil o incluso
con las sangres más representativas de la población que en las de mediana aglutinación podrían volverse negativas.
se tiene en ese momento. Las temperaturas de incubación y sus tiempos deben
Para obtener buenos resultados en la investigación de ser los adecuados para cada técnica.
anticuerpos es necesario tener bajo control todos los
procesos porque cada etapa influirá en el fin que es la
detección del anticuerpo. Procedimientos
Lavado de material: realizarlo con detergente neutro
apropiado para laboratorio, debe ser exclusivo y no mezclarse 1. Marcar tubos de 10x75 de la siguiente manera: 4
con el material de otras secciones del laboratorio porque los hileras marcadas según el número de células con
residuos de álcalis y ácidos potentes neutralizan la reacción que cuenta el panel en uso. A la primera marcarlos
antígeno–anticuerpo, actúan sobre la superficie del eritrocito con una S (técnica salina), el segundo con A
eliminando ácido siálico o incluso destruyendo los glóbulos (albúmina), tercero con B (Bromelina) y cuarto con L
rojos llegándose a confundir con una reacción hemolítica en (L.I.S.S.).
donde no la hay. 2. A los 3 primeros paneles: S, A, B ponerles 2 gotas
Separar los tubos nuevos de los rayados y deteriorados de suero problema y una de eritrocitos de panel
usando los primeros para realizar cualquier prueba que correspondiente y mezclar.
utilice suero de Coombs y dejando los segundos para
pruebas de grupo AB0 y Rho(D). Salina: centrifugar los tubos 30 seg. Leer aglutinación,
Lavado de eritrocitos: siempre que se utilicen eritrocitos incubar 30 minutos a 22º C. Centrifugar, regresar los tubos
para cualquier estudio en Banco de Sangre deben ser a 22º C. Leer aglutinaciones, pasarlos a 37º C una hora,
lavados tres veces para ser enfrentados a los anticuerpos, centrifugar, regresarlos al baño, leer aglutinaciones, lavar
ya sean de pacientes o monoclonales, excepto en la 3 veces los tubos, resuspendiendo muy bien los eritrocitos
prueba de Grupo AB0 y Rho(D) de rutina, aquí deberán ser antes de agregar de nuevo la salina isotónica; en el último
lavados cuando se demuestren incongruencias en las lavado retirar toda la salina remanente, agregar 2 gotas de
pruebas directa e inversa o que se detecte algún autotestigo suero de Coombs poliespecífico, centrifugar, leer las
positivo. aglutinaciones, anotar resultados en hoja de trabajo.
La relación de células/solución salina isotónica óptima Albúmina: agregar tres gotas de albúmina al 22 % (o
será de 1/60 volúmenes repartidos en 3 lavados 2 gotas de 30%), mezclar y centrifugar 90 seg., leer
consecutivos. aglutinación e incubar durante 60 minutos a 37º C
Algo muy importante y que tiene vital importancia en el centrifugar 90 seg. Regresar a 37º C y leer aglutinación;
resultado final, es que en cada lavado los eritrocitos deben lavar 4 veces y llevar a Coombs.
ser removidos totalmente de la pared del tubo por agitaciones Bromelina: agregar una gota de Bromelina, incubar a
suaves para evitar su deterioro y posteriormente agregarles 22º C durante 10 minutos, centrifugar, regresar al baño las

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muestras y leer. Pasar a 37º C por 15 minutos, centrifugar, Despegado por Tricloroetileno – Cloroformo
regresar a 37º C, leer, lavar 3 veces y llevarlos a Coombs.
Bromelina en 2 fases: numerar los tubos según el 1. En un tubo de 13x100 poner volumen a volumen con
número de células del panel, poner una gota de Bromelina solución salina los eritrocitos lavados, agregar igual
en cada tubo mas una gota de eritrocitos correspondientes, volumen del reactivo, tapar el tubo, incubar a 37º C
mezclar e incubar por 5 minutos a 37º C. Lavar 3 veces, durante 5 a 10 minutos rotando constantemente con
agregar 2 gotas de suero problema, mezclar, incubar a una inclinación de 45 grados hasta que se observe la
22º por 10 minutos, centrifugar, leer a 22º C, incubar a 37º hemólisis total.
C por 15 minutos, centrifugar, leer a 37º C, lavar 3 veces 2. Centrifugar 5 minutos, con pipeta pasteure recuperar
los tubos en estudio, agregar suero de Coombs, centrifugar el sobrenadante procurando no tocar la interfase ni el
y leer. Interpretar resultados. reactivo porque entonces todo se hemolizará.
LISS: poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar 3. Centrifugar nuevamente por 2 minutos, decantar y
una gota de eritrocitos lavados y al 3 - 5%, según el número realizar el estudio de anticuerpos.
de tubo correspondiente, mezclar y centrifugar un minuto,
decantar el sobrenadante a sequedad, poner nuevamente Estudio de anemia hemolítica autoinmune (AHAI), está
1 gota de LISS, resuspender por agitación, agregar 2 gotas caracterizada por un grupo de trastornos que llevan a la
de suero problema y dos gotas mas de LISS, mezclar, destrucción de eritrocitos con acortamiento en su vida
centrifugar 30 seg., leer aglutinaciones, incubar 15 minutos media debido a la presencia de autoanticuerpos dirigidos
a 37º C. Lavar 3 veces las células, agregar suero de contra sitios antigénicos en dichas células. Puede
Coombs, centrifugar 30 seg. Leer aglutinaciones y anotar presentarse como una forma primaria (ideopática), puede
resultados en hoja de trabajo. coexistir con otra enfermedad: Lupus eritematoso sistémico,
Interpretar los resultados encontrados en cada técnica Anemia perniciosa, artritis reumatoide, padecimientos
y a cada temperatura, observar si hay diferencias y malignos como Leucemia linfocítica crónica, linfoma no
similitudes entre las técnicas realizadas Hodgkin y enfermedad de Hodgkin; o bien presentarse
posterior a la administración de algún fármaco: alfa metil
dopa, penicilina, etc.
Despegado por calor En más de 80 % de los casos de anemia hemolítica
auto inmune (AHAI) aparece un anticuerpo que reacciona
1. Preparar albúmina bovina al 6 % con solución salina. a 37º C. La prueba directa de la antiglobulina es casi
2. En un tubo de 13x100 poner volumen a volumen la siempre positiva, y la indirecta en algunas ocasiones
solución anterior y los eritrocitos lavados. puede ser negativa. En más del 80% de los casos se
3. Incubar a 56º C por 10 min. Agitar vigorosamente detecta IgG en los eritrocitos, casi un 50% de éstos
cada 2 minutos. revelan la presencia de complemento y cerca del 10%
4. Centrifugar 2 minutos, regresar el tubo a 56 grados y pueden demostrar solo complemento.
separar el sobrenadante. Recentrifugar y decantar En inmunohematología, el término auto anticuerpo se
en tubo limpio, realizar con esto la investigación de aplica a cualquier anticuerpo que reacciona frente al
anticuerpos. correspondiente antígeno presente en los propios eritrocitos
del paciente, incluso si la reacción ocurre solo in Vitro, y
Despegado por Cloroformo tanto si causa efectos patológicos in vivo como si no los
produce. Generalmente puede reaccionar contra todas
1. Preparar una solución de albúmina al 6% con solución las muestras de eritrocitos a los que se enfrente, así
salina. como con los propios del sujeto, si bien al realizar pruebas
2. En un tubo de 13x100, poner volumen a volumen la con los eritrocitos adecuados se observa que posee,
solución anterior y el paquete de eritrocitos lavados. como mínimo, un grado de especificidad.
Agregar un volumen equivalente de cloroformo. La mayor parte de los autoanticuerpos eritrocitarios
3. Tapar con tapón de caucho, mezclar vigorosamente pueden clasificarse en “fríos” y “calientes”. Los fríos
por 15 seg., mezclar por inversión durante un minuto. reaccionan más intensamente por debajo de los 22º C. Y
Destapar con mucho cuidado para que no se proyecte a su vez se pueden subdividir en inocuos y en nocivos
el contenido. Poner el tubo a 56º C durante 5 minutos asociados con anemia hemolítica y/o con trastornos
exactos; mezclando constantemente con un aplicador vasculares por exposición al frío. La especificidad de
(pipeta pasteure). Centrifugar 5 minutos, pasar el éstos generalmente es del sistema Ii.
sobrenadante a un tubo de 12x75, centrifugar 2 Los autoanticuerpos calientes reaccionan más inten-
minutos, decantar el sobrenadante y realizar con él samente a 37º C. Y pueden clasificarse en nocivos o
la investigación de anticuerpos. inocuos según se hallen o no asociados a una destrucción

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de los eritrocitos., la malignidad no está relacionada con para evitar la molestia de hacerlo cada día.
su intervalo térmico, sino más bien depende de las En casos complejos de dos o más anticuerpos en un
propiedades biológicas de las moléculas IgG específicas mismo suero se debe realizar absorciones y elusiones a
que componen el anticuerpo, así como del número y 37º C. para poder separarlos.
distribución de los correspondientes lugares antigénicos.7,9 La técnica de absorción-elusión servirá para dilucidar
si en las aglutinaciones observadas se tienen un solo
anticuerpo o si dentro de este está oculto uno o más. Es
Laboratorio. Información previa necesaria muy buena para determinar en las panaglutinaciones con
auto testigo negativo si ésta se debe a un solo anticuerpo
Historia Clínica del Paciente: o varios mezclados.
Historia Transfusional, gíneco-obstétrica (en muje- En las AHAI., sirve para separar los alo de los
res). autoanticuerpos.8 Con todo lo mencionado podemos darnos
Pruebas de laboratorio: hemoglobina, hematocrito, cuenta de la importancia que tiene para dar una sangre
cuenta de reticulocitos, bilirrubinas, DHL. compatible: El diagnóstico del paciente, su historia
Estudios en banco de sangre: grupo AB0 y Rho(D). transfusional, el conocimiento profundo de los principios
Resolución de discrepancias. y las técnicas empleadas así como de la interpretación y
Investigación de anticuerpos antieritrocitos libres en síntesis adecuados de todo ello.
el suero usando diferentes técnicas: salina, hiperproteica,
enzimática.
Referencias
Titulación de los anticuerpos detectados en el suero
utilizando sangres R1R1, R2R2, rr, y en pacientes con 1. Murphy MF. Pamphilon DH. Practical Transfusion Medicine.
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Edition. UK. 1992.

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