PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD

Las pruebas de compatibilidad son una serie deensayos realizados sobre la

sangre del presuntodonante y del presunto receptor de una
transfusinsangunea que tiene por objeto detectar
cualquierincompatibilidad existente entre ambas.
menor. En la mayor seenfrentan los G.R. de donante con el suero
delreceptor, y en la prueba cruzada menor se hacereaccionar el suero del
donante con los G.R. delreceptor.

El propsito de las pruebas de compatibilidad es prevenir la transfusin de
sangre incompatible.Estas pruebas tienen como objetivos:
a)Garantizar que los G.R. a transfundir sean ABO yRH compatibles con el
receptor.
b)Detectar anticuerpos en el suero del receptor queestn dirigidos contra
antgenos de los G.R. deldonante.

PROCEDIMIENTOS
1.Clasificacin del receptor:
*Determinar los grupos ABO / Rh. Si haydiscrepancias deben resolverse
antes de iniciar las pruebas cruzadas.
*Realizar la prueba de coombs directa en los G.R.del receptor para detectar
auto-sensibilizacineritroctica Si es positiva, facilita el dx. del caso,si es
negativa, no habr necesidad del empleo delautocontrol en la Prueba
cruzada.
*Investigar en el suero la presencia de anticuerposirregulares, empleando
clulas detectoras o clulas pantallas .

2)Seleccin de la sangre adecuada para la transfusin
*Del refrigerador seleccionar la unidad de sangre atransfundir de acuerdo al
grupo ABO y Rh del paciente.
*Separar uno de los segmentos sellados integrado ala unidad de sangre y
colocarlo en un tubo de vidrio eidentificarlos.
*En esta muestra, verificar los antgenos ABO y Rh.
No es necesario determinar sub-grupos u otrosantgenos, a menos que el
receptor contengaanticuerpos irregulares.

3)Realizacin de la
Prueba cruzada
En la prueba cruzada mayor, se pretende detectar la presencia, en el suero
del receptor, Ac dirigidoscontra los G.R. del posible donante, lo cual
producira una destruccin prematura de stos y, almenos un descenso del
rendimiento de la perfusinhemtica.Vale sealar que si la prueba cruzada
mayor esimportante para la transfusin, no menos lo es la prueba de
deteccin de anticuerpos, que algunosautores la emplean como parte de la
rutina delestudio de compatibilidad.
PRUEBAS CRUZADAS
Las pruebas cruzadas pretransfusionales intentan detectar reacciones Ag-Ac
potenciales antes de que la sangre sea transfundida.

Cada unidad de sangre extraida debe ser examinada y clasificada de forma
individual para descartar incompatibilidades entre el donante y el receptor, a
fin de que la transfusin se realice con las mximas garantas.

Las pruebas de compatibilidad se realizan antes de transfundir la sangre
para asegurarse de que los hemates del donante son compatibles con el
paciente. Comprende las siguientes determinaciones:
Tipaje de grupo ABO y Rh del receptor.
Deteccin e identificacin de Acs en el suero del receptor.
Tipaje correcto de grupo ABO y Rh del donante.
Deteccin de Acs en el donante.
Pruebas cruzadas (compatibilidad pretransfusional).
Las posibilidades de incompatibilidad se reducen mucho si el paciente y el
donante, presentan pruebas negativas de screening de Ac. La prueba
cruzada debe ser lo ms completa posible, a fin de proteger al paciente.
Las pruebas cruzadas se denominan: Mayor y menor.
PRUEBA CRUZADA MAYOR
Consiste en enfrentar suero del receptor con hemates del donante bajo
condiciones ptimas para la actividad de los Ac en el laboratorio. Adems se
realiza un escrutinio de anticuerpos irregulares en el receptor.

Los hemates y el suero han de ser incubados el tiempo suficiente para que
puedan reaccionar incluso los Ac muy poco potentes; por lo que es
necesario aadir suero antiglobulina despus de la incubacin para detectar
los Ac que recubren a los hemates pero que no llegan a aglutinarlos. La
prueba debe comprobarse mediante controles.

Para preparar la suspensin de hemates del donante se utiliza la sangre
contenida en los segmentos de la bolsa (macarrones).

Para realizar la prueba se rotulan dos tubos, en cada uno se coloca 1 gota de
suspensin al 5% de hemates del donante en S.S, y 2 gotas de suero del
receptor.
- En el tubo "1":
* Aadir 2 gotas de albmina al 22-30%. Mezclar.
* Incubar a 37C /30-45 min.
* Centrifugar y leer.
* Lavar los hemates 3-4 veces con solucin salina.
* Aadir dos gotas de antiglobulina. Agitar.
* Centrifugar y examinar los resultados.
* Adicionar hemates de control de Coombs.
- En el tubo "2":
* Dejar en reposo a T ambiente de 3-5 min.
* Centrifugar y observar.
* Dejar de nuevo a T ambiente 15 min.
* Centrifugar de nuevo y observar la presencia de aglutinacin.

INTERPRETACIN.

PRUEBA POSITIVA:
La aglutinacin indica incompatibilidad ya que significa que algn Ac del
suero del receptor se ha unido a los hemates del donante.
La valoracin se puede hacer con cruces, o bien se puede hacer una prueba
cruzada titulada empleando diluciones dobles progresivas.
Para diferenciar aloAc de los autoAc se debe disponer de un autocontrol, y
cuando ste es negativo se sospecha la existencia de aloAc en una prueba
cruzada incompatible.
Los Ac se deben identificar antes de que el paciente reciba la transfusin.
Si el autocontrol es positivo se sospecha la presencia de autoAc.
Los aloAc producen reacciones transfusionales ms graves que los autoAc.
PRUEBA NEGATIVA:
La prueba cruzada es compatible si no hay aglutinacin, ya que indica que
no existen aloAc eritrocitarios en el suero del receptor.
No obstante hay que tener en cuenta que todas las pruebas de la
antiglobulina negativas deben ser comprobadas para asegurar que la tcnica
se ha realizado correctamente. Para ello, se aaden hemates sensibilizados
y lavados (GR control) a todos los tubos que contienen resultado negativo.
Si los resultados son correctos los hemates control deben ser aglutinados.
En cambio si no se observa aglutinacin, la prueba no es vlida y debe
repetirse.

PRUEBA CRUZADA MENOR

En ella el suero del donante se enfrenta con hemates del paciente. (Se llama
menor porque el plasma del donante sufre una dilucin rpida al entrar en el
torrente sanguneo del receptor, lo que hace que los problemas debidos a
los Ac transfundidos sean menores en el peor de los casos).
Actualmente se utiliza poco, debido al uso generalizado de los concentrados
de hemates y a la deteccin habitual de los Ac en la sangre del donante. Sin
embargo cuando se utilice un gran volumen de plasma si est aconsejada su
realizacin.
Esta prueba puede, tambien, poner de manifiesto la presencia de Ac del
donante contra Ag de baja frecuencia.




PRUEBA DE COMPATIBILIDAD DE COOWBS

OBJ ETIVOS

Determinar la existencia de glbulos rojos recubiertos con inmunoglobulinas
y/o complemento in vivo, en particular IgG y C3d (Coombs directo)

Determinar la presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor
(Coombs indirecto)

Determinar la compatibilidad entre la sangre del donante y el receptor a
Transfundir (Coombs cruzado).
DESARROLLO

Alcance

El Coombs directo se realiza a pacientes en los primeros momentos de una
reaccin hemoltica y en el diagnstico de anemias hemolticas auto
Inmunes, hemlisis inducidas por drogas, y enfermedad hemoltica del
recin nacido.
-El Coombs indirecto se realiza a pacientes poli transfundidos, embarazadas,
multparas.
El Coombs cruzado es una variante del Coombs indirecto y se realiza a
Pacientes poli transfundidos, pacientes con antecedentes de reaccin post
Transfusional hemoltica y a multparas para escoger sangre compatible.
Responsabilidades

Es responsabilidad de la Direccin del Banco garantizar los recursos
Indispensables para la realizacin de ste procedimiento

Es responsabilidad del Jefe de Departamento implantar esta GP.

Es responsabilidad del tcnico el cumplimiento de lo establecido en el
Presente documento.

Es responsabilidad de aseguramiento de la calidad velar por el cumplimiento
de lo establecido en este documento mediante inspecciones y auditorias.

Condiciones de seguridad

Use bata sanitaria y guantes de cirujano.
Equipamiento, locales, materiales y reactivos

Centrfuga para tubos de mesa
Neveras de conservacin de sangre 4-6C
Aglutinoscopio.
Tubos de ensayo de13x100
Gradillas para tubos de ensayo
Jeringuillas de 10 o 20 mL
Agujas 20 o 21
Torundas
Ligaduras
Aplicadores de madera.
Anticoagulante EDTA o heparina
Alcohol al 70% o hibitane alcohlico
Suero de Coombs poliespecfico
Suero de Coombs monoespecfico anti IgG y anti C3d.
Solucin salina
Operaciones preliminares

Prepare el rea de trabajo con el material y reactivos que van a ser
utilizados.
Tome muestra de sangre del paciente compuesta de un tubo anticoagulado
(con EDTA o heparina) y un tubo seco debidamente identificado y que no
Exceda las 72 horas de extrada


Coombs directo

Lave tres veces los hemates del paciente con solucin salina fisiolgica.
Haga una suspensin de hemates lavados al 2-5 %.
Aada en un tubo debidamente rotulado dos gotas de la suspensin.
Aada dos gotas de Suero de Coombs poliespecfico.
Centrifugue un minuto a 1000 rpm.
Coombs indirecto y cruzado

Centrifugue la muestra de sangre 10 min a 3 000 rpm para obtener el
suero y decntelo en un tubo debidamente identificado.
Prepare una suspensin al 2-5 % con la mezcla de hemates O y en el
caso del Coombs cruzado utilice una muestra de la sangre a transfundir
para preparar la suspensin.
En un tubo debidamente rotulado aada dos gotas del suero y dos gotas
de la suspensin y mezcle bien.
Prepare un tubo control rotulado C+ (control positivo) y aada en l dos
gotas de la suspensin de hemates O y dos de suero hemoclasificador
Anti-D y mezcle bien
Incube ambos tubos en un Bao de Mara a 37C por 30 minutos
Lave tres veces con solucin salina escurriendo totalmente el
Sobrenadante del ltimo lavado.

Aada dos gotas de suero de Coombs poliespecfico a cada tubo.
Centrifugue 1minuto a 1000 rpm.
Lea desprendiendo suavemente el botn en la lmpara aglutinoscopio.
Interpretacin de los resultados

Si en la prueba de Coombs directo observa aglutinacin esto indica
Presencia de anticuerpos y /o complemento unidos a los hemates in vivo,
repita nuevamente el procedimiento pero utilizando los reactivos
Mono especficos anti-IgG y anti-C3d.


Patrones de reaccin
Reactivos mono especficos 1 2 3 4
_____________________________________________________
Anti Ig G + + - -
Anti C3 - + + -

Si en la prueba de Coombs indirecto se observa aglutinacin significa que
Estamos en presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor
Por lo que debe proceder al estudio e identificacin de l o los anticuerpos
Adquiridos.

Si en la prueba de Coombs cruzado se observa aglutinacin indica que
estamos en presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor
por lo que las unidades de sangre estudiadas que presenten este resultado
no deben ser transfundidas al paciente en estudio.
Controles

El jefe tcnico controlar que en todos los casos se trabaje con muestra
Extrada con no ms de 72 horas para lo que mantendr la nevera donde
se almacenan las mismas libre de muestras vencidas.

El jefe tcnico controlar que no ocurra en ningn caso omisin alguna de
Los pasos descritos anteriormente.

El tcnico que realiza el proceder debe verificar que el tubo control que se
Monta en paralelo muestre aglutinacin lo cual garantiza que el reactivo de
Coombs empleado mantiene su actividad biolgica.