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Artemisa
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III. Protocolo para realizar pruebas pretransfusionales

Jos Luis Alcaraz-Lpez*
Segn el diccionario de la Lengua Espaola, Compatibilidad:
proviene del latn compatibilis = compadecerse. Que
puede unirse o existir armnicamente con otra cosa o
persona en un mismo lugar o tiempo. Definicin acorde
con la finalidad de las pruebas de compatibilidad sangunea
en donde buscamos una coexistencia armnica entre el
producto sanguneo transfundido y su receptor.
Historia: el primer reporte escrito de la transfusin
sangunea fue realizado en animales, por J. Denis en
Francia en junio de 1667. J. Blundell realiza los primeros
intentos de transfusin en humanos en 1824. En 1901
Landsteiner descubre el Sistema AB0. En 1914 Hustin
empieza a utilizar el Citrato como anticoagulante. Moreschi
en 1908 experimenta con animales inyectndoles IgG
humana, trabajo que ms tarde Coombs contina y
realiza su publicacin en 1945 poniendo las bases de la
prueba ms generalizada y valiosa de nuestro tiempo que
conocemos como Prueba de Coombs. Dacie en 1957
publica su trabajo sobre IgG contra el complemento
humano (fraccin C4).1,4
En el transcurso de los ltimos 70 aos se ha trabajado
con diferentes sustancias que aceleran y modifican la
reaccin antgenoanticuerpo: albmina humana, bovina,
bovina polimerizada a 19%, 22%, 30%. Enzimas como la
bromelina, fisina, papana y tripsina, L.I.S.S. (Low ionic
strength saline/solucin salina de baja fuerza inica),
columnas de gel, polietileno glicol (PEG), polibreno,2,6
La prueba de compatibilidad sangunea es un ensayo
in vitro de lo que puede suceder en el paciente al recibir
la transfusin de un componente sanguneo. De acuerdo
a lo establecido internacionalmente la secuencia de
actividades son: solicitud del producto y datos relevantes
del receptor. Identificacin y coleccin de las muestras
sanguneas del receptor. Estudios y pruebas del donador.
Determinacin del grupo AB0 y Rho(D) del receptor.
Deteccin de anticuerpos irregulares. Seleccin de
componentes AB0 y Rho(D) apropiados para el receptor.
Comparacin entre resultados actuales y el historial de
las pruebas pretransfusionales previas.3,4

Prueba Cruzada
Prueba mayor: 2 volmenes del suero del paciente frente
a un volumen de eritrocitos lavados del donador.

Prueba menor: 2 volmenes de plasma del donante

frente a un volumen de eritrocitos lavados del receptor.
Auto testigo: Eritrocitos ms suero del paciente.5

Interpretacin de resultados en Pruebas Cruzadas

Algunos de los factores ms importantes que afectan la
sobrevida de los eritrocitos son: la clase y subclase de
inmunoglobulinas que se producen frente a sangre
incompatible; la capacidad del anticuerpo para activar el
complemento; la cantidad de anticuerpos presentes en el
plasma del paciente y la avidez por su correspondiente
antgeno eritrocitario; el nmero de sitios antignicos que
tenga la sangre incompatible circulando en el organismo
del paciente transfundido, el margen trmico de accin del
anticuerpo implicado, la cantidad de eritrocitos transfundidos,
la presencia de substancias solubles de grupo en el
receptor secretor y la actividad del sistema fagoctico
mononuclear del paciente transfundido.7

Evaluacin de la prueba cruzada

Prueba mayor positiva: en prueba rpida: corroborar el
grupo ABO del donador. En tcnica a 37 C o en Coombs
realizar bsqueda de anticuerpos irregulares para determinar
la especificad del anticuerpo. Cruzar toda la sangre
compatible por sistema ABO con que se cuente en el
banco y transfundir las compatibles en situacin de peligro
inminente de muerte por la anemia. Cuando sea posible,
realizar fenotipo eritroctico con sueros comerciales.7
Pruebas mayor y menor positivas: cuando es detectado
en salina rpida, corroborar el grupo del sistema ABO
tanto al paciente como al donador. Si se detecta en 37
C y/o en Coombs realizar en el donador Coombs directo
e investigacin de anticuerpos.
Prueba menor positiva: si se detecta en salina rpida,
corroborar el grupo ABO al donador, sobre todo cuando se
va a transfundir plaquetas o plasma. Si se detecta a 37
C y/o en Coombs, realizar Coombs directo en el donador.
Auto testigo positivo: si el paciente ha sido transfundido
recientemente (menos de 3 meses) es muy probable que
esa aglutinacin se deba a los anticuerpos del paciente que
estn pegados a los eritrocitos de la sangre transfundida. Si

* Banco Central de Sangre. Centro Mdico Nacional Siglo XXI. IMSS. Mxico, D.F.

Gac Md Mx Vol. 140, Suplemento No. 3, 2004

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fue transfundido en los das previos con plasma o plaquetas,

la aglutinacin se puede deber al paso de anticuerpos del
donador que se pegaron a los eritrocitos del paciente. Si el
paciente nunca ha sido transfundido o tuvo transfusiones
hace ms de cuatro meses, es probable que estemos frente
a un auto anticuerpo como puede suceder en las A.H.A.I. o
en pacientes inmunocomprometidos como en el S.I.D.A.
Tcnicas de deteccin de anticuerpos antieritrocitos:
la deteccin de anticuerpos antieritrocitos libres en el
suero se realiza enfrentando el suero y como segunda
opcin, plasma del paciente en estudio contra eritrocitos
de fenotipo conocido que sean representativos de la
poblacin del paciente.
Los eritrocitos de fenotipo conocido se denominan
PANEL, que puede constar de 6, 10, 12 o 15 clulas que
abarcan la mayora de los antgenos raros de una poblacin
(K, Dia, Lea, Kpa, Lua, etc) y la ausencia de los antgenos
que son frecuentes en la misma, o sea que hay sangres
negativas a: s, P1, Fya, Fyb, k, Jka, Jkb, Lub, Dib, Kpb
. Muchas veces no es posible conseguir todo esto en un
nmero tan bajo de donadores y se procura armar el panel
con las sangres ms representativas de la poblacin que
se tiene en ese momento.
Para obtener buenos resultados en la investigacin de
anticuerpos es necesario tener bajo control todos los
procesos porque cada etapa influir en el fin que es la
deteccin del anticuerpo.
Lavado de material: realizarlo con detergente neutro
apropiado para laboratorio, debe ser exclusivo y no mezclarse
con el material de otras secciones del laboratorio porque los
residuos de lcalis y cidos potentes neutralizan la reaccin
antgenoanticuerpo, actan sobre la superficie del eritrocito
eliminando cido silico o incluso destruyendo los glbulos
rojos llegndose a confundir con una reaccin hemoltica en
donde no la hay.
Separar los tubos nuevos de los rayados y deteriorados
usando los primeros para realizar cualquier prueba que
utilice suero de Coombs y dejando los segundos para
pruebas de grupo AB0 y Rho(D).
Lavado de eritrocitos: siempre que se utilicen eritrocitos
para cualquier estudio en Banco de Sangre deben ser
lavados tres veces para ser enfrentados a los anticuerpos,
ya sean de pacientes o monoclonales, excepto en la
prueba de Grupo AB0 y Rho(D) de rutina, aqu debern ser
lavados cuando se demuestren incongruencias en las
pruebas directa e inversa o que se detecte algn autotestigo
positivo.
La relacin de clulas/solucin salina isotnica ptima
ser de 1/60 volmenes repartidos en 3 lavados
consecutivos.
Algo muy importante y que tiene vital importancia en el
resultado final, es que en cada lavado los eritrocitos deben
ser removidos totalmente de la pared del tubo por agitaciones
suaves para evitar su deterioro y posteriormente agregarles
S 32

la salina formando un remolino suficiente para que todos

las clulas queden resuspendidas homogneamente en
toda la barra de la salina agregada, de no ser posible esto
por falta de prctica, es recomendable tapar la boca del
tubo con parafilm para agitar por inversin. Lo anterior
tambin es vlido para todos los lavados que se realizan
para llevar a prueba final de Coombs (salina-Coombs,
Albmina-Coombs, etc.).
Otro punto importante es la concentracin final de
eritrocitos a la que se trabajar: 2.5 4.0%. Despus de
lavar todas las clulas, corroborar su concentracin para
que cada una de ellas tenga la misma concentracin, una
variacin entre cada tubo darn resultados diferentes al
enfrentarlas a los anticuerpos en estudio.
Una concentracin final muy baja de eritrocitos nos
dificultar ver las aglutinaciones; una concentracin muy
alta volver negativa la prueba en investigacin de
anticuerpos de poca concentracin porque estos tendrn
que repartirse entre los eritrocitos presentes y no
alcanzarn para todos, obtenindose una prueba negativa
al agregar el Coombs en lugar de positiva dbil o incluso
en las de mediana aglutinacin podran volverse negativas.
Las temperaturas de incubacin y sus tiempos deben
ser los adecuados para cada tcnica.

Procedimientos
1.

2.

Marcar tubos de 10x75 de la siguiente manera: 4

hileras marcadas segn el nmero de clulas con
que cuenta el panel en uso. A la primera marcarlos
con una S (tcnica salina), el segundo con A
(albmina), tercero con B (Bromelina) y cuarto con L
(L.I.S.S.).
A los 3 primeros paneles: S, A, B ponerles 2 gotas
de suero problema y una de eritrocitos de panel
correspondiente y mezclar.

Salina: centrifugar los tubos 30 seg. Leer aglutinacin,

incubar 30 minutos a 22 C. Centrifugar, regresar los tubos
a 22 C. Leer aglutinaciones, pasarlos a 37 C una hora,
centrifugar, regresarlos al bao, leer aglutinaciones, lavar
3 veces los tubos, resuspendiendo muy bien los eritrocitos
antes de agregar de nuevo la salina isotnica; en el ltimo
lavado retirar toda la salina remanente, agregar 2 gotas de
suero de Coombs poliespecfico, centrifugar, leer las
aglutinaciones, anotar resultados en hoja de trabajo.
Albmina: agregar tres gotas de albmina al 22 % (o
2 gotas de 30%), mezclar y centrifugar 90 seg., leer
aglutinacin e incubar durante 60 minutos a 37 C
centrifugar 90 seg. Regresar a 37 C y leer aglutinacin;
lavar 4 veces y llevar a Coombs.
Bromelina: agregar una gota de Bromelina, incubar a
22 C durante 10 minutos, centrifugar, regresar al bao las
Gac Md Mx Vol. 140, Suplemento No. 3, 2004

muestras y leer. Pasar a 37 C por 15 minutos, centrifugar,

regresar a 37 C, leer, lavar 3 veces y llevarlos a Coombs.
Bromelina en 2 fases: numerar los tubos segn el
nmero de clulas del panel, poner una gota de Bromelina
en cada tubo mas una gota de eritrocitos correspondientes,
mezclar e incubar por 5 minutos a 37 C. Lavar 3 veces,
agregar 2 gotas de suero problema, mezclar, incubar a
22 por 10 minutos, centrifugar, leer a 22 C, incubar a 37
C por 15 minutos, centrifugar, leer a 37 C, lavar 3 veces
los tubos en estudio, agregar suero de Coombs, centrifugar
y leer. Interpretar resultados.
LISS: poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar
una gota de eritrocitos lavados y al 3 - 5%, segn el nmero
de tubo correspondiente, mezclar y centrifugar un minuto,
decantar el sobrenadante a sequedad, poner nuevamente
1 gota de LISS, resuspender por agitacin, agregar 2 gotas
de suero problema y dos gotas mas de LISS, mezclar,
centrifugar 30 seg., leer aglutinaciones, incubar 15 minutos
a 37 C. Lavar 3 veces las clulas, agregar suero de
Coombs, centrifugar 30 seg. Leer aglutinaciones y anotar
resultados en hoja de trabajo.
Interpretar los resultados encontrados en cada tcnica
y a cada temperatura, observar si hay diferencias y
similitudes entre las tcnicas realizadas

Despegado por calor

1.
2.
3.
4.

Preparar albmina bovina al 6 % con solucin salina.

En un tubo de 13x100 poner volumen a volumen la
solucin anterior y los eritrocitos lavados.
Incubar a 56 C por 10 min. Agitar vigorosamente
cada 2 minutos.
Centrifugar 2 minutos, regresar el tubo a 56 grados y
separar el sobrenadante. Recentrifugar y decantar
en tubo limpio, realizar con esto la investigacin de
anticuerpos.

Despegado por Cloroformo

1.
2.

3.

Preparar una solucin de albmina al 6% con solucin

salina.
En un tubo de 13x100, poner volumen a volumen la
solucin anterior y el paquete de eritrocitos lavados.
Agregar un volumen equivalente de cloroformo.
Tapar con tapn de caucho, mezclar vigorosamente
por 15 seg., mezclar por inversin durante un minuto.
Destapar con mucho cuidado para que no se proyecte
el contenido. Poner el tubo a 56 C durante 5 minutos
exactos; mezclando constantemente con un aplicador
(pipeta pasteure). Centrifugar 5 minutos, pasar el
sobrenadante a un tubo de 12x75, centrifugar 2
minutos, decantar el sobrenadante y realizar con l
la investigacin de anticuerpos.

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Despegado por Tricloroetileno Cloroformo

1.

2.

3.

En un tubo de 13x100 poner volumen a volumen con

solucin salina los eritrocitos lavados, agregar igual
volumen del reactivo, tapar el tubo, incubar a 37 C
durante 5 a 10 minutos rotando constantemente con
una inclinacin de 45 grados hasta que se observe la
hemlisis total.
Centrifugar 5 minutos, con pipeta pasteure recuperar
el sobrenadante procurando no tocar la interfase ni el
reactivo porque entonces todo se hemolizar.
Centrifugar nuevamente por 2 minutos, decantar y
realizar el estudio de anticuerpos.

Estudio de anemia hemoltica autoinmune (AHAI), est

caracterizada por un grupo de trastornos que llevan a la
destruccin de eritrocitos con acortamiento en su vida
media debido a la presencia de autoanticuerpos dirigidos
contra sitios antignicos en dichas clulas. Puede
presentarse como una forma primaria (ideoptica), puede
coexistir con otra enfermedad: Lupus eritematoso sistmico,
Anemia perniciosa, artritis reumatoide, padecimientos
malignos como Leucemia linfoctica crnica, linfoma no
Hodgkin y enfermedad de Hodgkin; o bien presentarse
posterior a la administracin de algn frmaco: alfa metil
dopa, penicilina, etc.
En ms de 80 % de los casos de anemia hemoltica
auto inmune (AHAI) aparece un anticuerpo que reacciona
a 37 C. La prueba directa de la antiglobulina es casi
siempre positiva, y la indirecta en algunas ocasiones
puede ser negativa. En ms del 80% de los casos se
detecta IgG en los eritrocitos, casi un 50% de stos
revelan la presencia de complemento y cerca del 10%
pueden demostrar solo complemento.
En inmunohematologa, el trmino auto anticuerpo se
aplica a cualquier anticuerpo que reacciona frente al
correspondiente antgeno presente en los propios eritrocitos
del paciente, incluso si la reaccin ocurre solo in Vitro, y
tanto si causa efectos patolgicos in vivo como si no los
produce. Generalmente puede reaccionar contra todas
las muestras de eritrocitos a los que se enfrente, as
como con los propios del sujeto, si bien al realizar pruebas
con los eritrocitos adecuados se observa que posee,
como mnimo, un grado de especificidad.
La mayor parte de los autoanticuerpos eritrocitarios
pueden clasificarse en fros y calientes. Los fros
reaccionan ms intensamente por debajo de los 22 C. Y
a su vez se pueden subdividir en inocuos y en nocivos
asociados con anemia hemoltica y/o con trastornos
vasculares por exposicin al fro. La especificidad de
stos generalmente es del sistema Ii.
Los autoanticuerpos calientes reaccionan ms intensamente a 37 C. Y pueden clasificarse en nocivos o
inocuos segn se hallen o no asociados a una destruccin
S 33

de los eritrocitos., la malignidad no est relacionada con

su intervalo trmico, sino ms bien depende de las
propiedades biolgicas de las molculas IgG especficas
que componen el anticuerpo, as como del nmero y
distribucin de los correspondientes lugares antignicos.7,9

Laboratorio. Informacin previa necesaria

Historia Clnica del Paciente:
Historia Transfusional, gneco-obsttrica (en mujeres).
Pruebas de laboratorio: hemoglobina, hematocrito,
cuenta de reticulocitos, bilirrubinas, DHL.
Estudios en banco de sangre: grupo AB0 y Rho(D).
Resolucin de discrepancias.
Investigacin de anticuerpos antieritrocitos libres en
el suero usando diferentes tcnicas: salina, hiperproteica,
enzimtica.
Titulacin de los anticuerpos detectados en el suero
utilizando sangres R1R1, R2R2, rr, y en pacientes con
transfusiones previas: considerar los fenotipos: Fy(ab+), Fy(a+b-) Jk(a-b+), Jk(a+b-), fenotipos poco frecuentes
para diferenciar los autoanticuerpos de posibles
aloanticuerpos.
Coombs directo: titulacin y especificidad (IgG, IgA,
IgM, C3, C4)
Despegado de anticuerpos de los eritrocitos (eluido):
titulacin usando los fenotipos ya mencionados
anteriormente.
Fenotipos eritrocitarios con clulas tratadas a pH
cido para eliminar los anticuerpos pegados. Fenotipos
diferenciales en pacientes con transfusiones recientes
(menos de 4 meses)
Siempre que se trabaja con el panel mestizo mexicano,
las clulas deben ser lavadas tres veces o prepararlas en
alsever y antibiticos (Cloranfenicol ms eritromicina),

S 34

para evitar la molestia de hacerlo cada da.

En casos complejos de dos o ms anticuerpos en un
mismo suero se debe realizar absorciones y elusiones a
37 C. para poder separarlos.
La tcnica de absorcin-elusin servir para dilucidar
si en las aglutinaciones observadas se tienen un solo
anticuerpo o si dentro de este est oculto uno o ms. Es
muy buena para determinar en las panaglutinaciones con
auto testigo negativo si sta se debe a un solo anticuerpo
o varios mezclados.
En las AHAI., sirve para separar los alo de los
autoanticuerpos.8 Con todo lo mencionado podemos darnos
cuenta de la importancia que tiene para dar una sangre
compatible: El diagnstico del paciente, su historia
transfusional, el conocimiento profundo de los principios
y las tcnicas empleadas as como de la interpretacin y
sntesis adecuados de todo ello.
Referencias
1.
2.
3.

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