LOS ENZIMA PROTEICOS

LOS ENZIMAS: DEFINICIÄN Y ESPECIFICIDAD

Las reacciones qu€micas en los sistemas biol•gicos, ocurren rara vez en ausencia de
catalizadores. Estos catalizadores son prote€nas espec€ficos llamados ENZIMAS. Las
caracter€sticas sorprendentes de todos los enzimas son su poder catal€tico y su especificidad.
Adem‚s, como veremos m‚s adelante, la actividad de muchos enzimas es regulable.

Se puede considerar que todos los enzimas son prote€nas aunque, recientemente, se ha
descubierto el poder catal€tico que tienen ciertos ARN en el proceso de s€ntesis de prote€nas en
los ribosomas.

Los enzimas aceleran las reacciones multiplicando su velocidad por un mill•n de veces o
m‚s. De hecho, la mayor€a de las reacciones de los sistemas biol•gicos no tienen lugar a
velocidades perceptibles en ausencia de enzimas. Incluso una reacci•n tan sencilla como la
hidrataci•n del di•xido de carbono, viene catalizada por un enzima:

CO2 + H2O  H2CO3

De otro modo la transferencia del CO2 desde los tejidos a la sangre y desde ƒsta al aire
alveolar, ser€a incompleta. La anhidrasa carbÄnica, el enzima que cataliza esta reacci•n, es
uno de los m‚s r‚pidos que se conocen. Cada molƒcula enzim‚tica puede hidratar hasta 105
molƒculas de CO2 en un segundo. Esta reacci•n, catalizada, es 107 veces m‚s r‚pida que la
misma reacci•n no catalizada.

Los enzimas son altamente especÅficos tanto en la reacci•n que catalizan como en su
selecci•n de sustancias reaccionantes, denominadas SUSTRATOS (=molƒcula que transforma
el enzima). Normalmente, un enzima cataliza una sola reacci•n qu€mica o grupo de reacciones
estrechamente relacionadas. El grado de especificidad del sustrato es normalmente elevado y,
a veces, pr‚cticamente absoluto. Un ejemplo del alto grado de especificidad de los enzimas es
el demostrado por la ADN-polimerasa I. Este enzima sintetiza ADN uniendo las cuatro clases
de nucle•tidos. La secuencia de nucle•tidos en el ADN que se est‚ sintetizando viene
determinada por la secuencia de nucle•tidos de la otra hebra de ADN que sirve como molde.

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Tan s•lo se inserta un nucle•tido equivocado en el filamento nuevo de ADN menos de una vez
en un mill•n de inserciones.

COFACTORES
Los cofactores son molƒculas que se unen al enzima y realizan, o bien colaboran a realizar,
la reacci•n al sustrato. En un principio se piensa que el enzima es quien reconoce al sustrato y
el cofactor quien se encarga de que la reacci•n se lleve a tƒrmino. La mayor€a de los enzimas
requieren la ayuda de cofactores, sin embargo algunos efect„an ellos mismos el
reconocimiento del sustrato y la reacci•n sobre ƒste.

Tipos
Existen dos tipos de cofactores:
 Activadores inorgÅnicos, como iones met‚licos Fe2+ , Cu2+, Mn2+,etc. Cuando se usa el
tƒrmino cofactor se suele referir generalmente a ƒstos, ya que el otro tipo tiene
nombre propio.
 MolÇculas orgÅnicas complejas, llamadas COENZIMAS. Los coenzimas son
molƒculas de tipo org‚nico que se unen al enzima dando lugar a la molƒcula activa.
Esta molƒcula activa es una heteroprote€na y se denomina HOLOENZIMA, su grupo
prostƒtico es el COENZIMA y su grupo proteico es el que ahora se denomina
APOENZIMA.

HOLOENZIMA = APOENZIMA + COENZIMA

Los coenzimas no son, en general, espec€ficos de un

„nico tipo de apoenzima; incluso determinados coenzimas
pueden unirse a m‚s de 100 tipos de apoenzimas
diferentes, cada uno de los cuales con una funcinalidad
distinta. A menudo se alteran durante las reacciones
enzim‚ticas, pero una vez ƒstas han acabado, se regeneran
r‚pidamente para volver a ser funcionales.

CINÇTICA ENZIMÉTICA
La cinƒtica enzim‚tica trata sobre c•mo se producen las reacciones en las que intervienen
los enzimas y a quƒ velocidad.

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 Parece l•gico pensar que un proceso que pasa de un estado de elevada energ€a a otro de
menor nivel energƒtico, se tendr€a que producir de un modo espont‚neo. Por lo tanto un
sustrato con una energ€a mayor que la de sus productos, deber€a producir ƒstos
espont‚neamente. Sin embargo no es as€.

Una reacci•n qu€mica A  B transcurre a travƒs de un ESTADO DE TRANSICIÄN que tien

una energ€a mayor que la de A y la de B. La velocidad de una reacci•n qu€mica depende de la
temperatura (en general, a mayor temperatura mayor velocidad de reacci•n) y de la diferencia
de energ€a entre el sustrato (reaccionante – A) y el estado de transici•n. A esta diferencia de
energ€a se le ha enominado EnergÄa libre de activaciÅn de Gibbs y se simboliza como G. Por
lo tanto para que la reacci•n bioqu€mica se lleva a cabo, el sustrato deber‚ alcanzar el estado
de transici•n, por lo que deber‚ consumir energ€a.

†C•mo act„an entonces los enzimas?. Los enzimas aceleran las reacciones qu€micas
porque disminuyen la energÅa libre de activaciÑn. La combinaci•n del sustrato con el enzima
crea una nueva v€a de reacci•n que tiene un estado de transici•n de menor energ€a de la que
tendr€a en ausencia del enzima. Por consiguiente, en presencia del enzima la reacci•n se
realizar‚ m‚s f‚cilmente.

ETAPAS DE LAS REACCIÄN ENZIMÉTICA

Antes de producir los productos, el enzima debe unirse al sustrato. Por lo tanto, cualquier
formaci•n o rotura de un enlace qu€mico por un enzima viene precedida por la formaci•n de un

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complejo enzima-sustrato (ES). El sustrato queda ligado a una regi•n espec€fica del enzima
que se denomina complejo enzima-sustrato.

El sustrato queda ligado a una regi•n espec€fica del enzima que se denomina CENTRO
ACTIVO. La mayor€a de los enzimas son altamente selectivos en su uni•n con los sustratos
que deben encajar espacialmente con el centro activo del enzima. Y dado que cada enzima
tiene una forma diferente para su centro activo esto implica que, por regla general, en el centro
activo de un enzima tan s•lo pueda encajar un sustrato o alguno similar a ƒl. Tambiƒn en esta
etapa de formaci•n del complejo enzima-sustrato, se produce gran parte del control de la
actividad catal€tica.

El centro activo de un enzima es la

regi•n que se une al sustrato. Aunque
los enzimas difieren ampliamente en
estructura, especificidad y modo de
cat‚lisis, se puede establecer un n„mero de generalizaciones respecto a sus centros activos.
1‡) El centro activo supone una porci•n relativamente pequeˆa del volumen total del enzima.
Muchos de los residuos amino‚cidos de un enzima no est‚n en contacto con el sustrato.
Esto plantea la pregunta intrigante de porquƒ los enzimas son tan grandes. Casi todos
los enzimas est‚n constituidos por m‚s de 100 residuos de amino‚cidos, lo que les da
una masa mayor de 10 kilodaltons y un di‚metro mayor de 25 €.
2‡) El centro activo es una entidad tridimensional.
El centro activo de un enzima no es un punto, una l€nea, ni tan siquiera un plano. Es una
forma tridimensional compleja, compuesta de grupos que proceden de diferentes partes
de la secuencia lineal de amino‚cidos. En el caso de la LISOZIMA, un enzima que ataca
la pared celular de las bacterias, los residuos (=amino‚cidos) que forman el centro activo
tridimensional son los n„meros 35, 52, 62, 63 y 101 de la secuencia lineal de 129
amino‚cidos.
3‡) Los sustratos se unen a los enzimas por fuerzas relativamente dƒbiles.
4‡) Los centros activos son hoyos o hendiduras.
5‡) La especificidad del enlace entre el enzima y el sustrato depende de la disposici•n
exactamente definida de los ‚tomos del centro activo.
Un sustrato debe tener una forma adecuada para introducirse en el centro. La met‚fora
establecida en 1890 por Emil Fischer sobre el encaje del sustrato en el enzima como una
llave en su cerrado fue bastante acertado, aunque hoy se acepta m‚s el modelo de
conformaciÑn inducida. Este modelo describe la uni•n enzima-sustrato como una mano

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 cuando se mete en un guante: se necesita una forma previa adecuada, pero la
conformaci•n final es fruto de la interacci•n de la mano (sustrato) y el guante (enzima).

Una vez unido el sustrato al centro activo del enzima, act„a este „ltimo y se obtienen los
productos quedando el enzima libre e inalterado, listo para actuar de nuevo.

EL MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
Se observ• que a medida que se aumentaba la concentraci•n de sustrato (siempre a
concentraci•n de enzima constante) aumentaba la velocidad de reacci•n.

No obstante se llegaba a una concentraci•n de sustrato para la cual la velocidad ya no

aumentaba m‚s. Hab€a llegado a un m‚ximo imposible de superar. A esta velocidad se la
denomin• Velocidad mÖxima (Vm) para esa reacci•n enzim‚tica. A este fen•meno se le
denomina saturaci•n por el sustrato, efecto que no aparece en las reacciones no catalizadas.

En 1913, Leonor Michaelis interpret• la velocidad m‚xima de una reacci•n catalizada por un
enzima en tƒrminos de la formaci•n de un complejo ES. A concentraciones de sustrato
suficientemente elevadas, los centros catal€ticos est‚n ocupados por ƒl y, por lo tanto, la
velocidad de reacci•n alcanza un m‚ximo. Ese mismo aˆo y junto con Maud Menten
propusieron un sencillo modelo matem‚tico que da cuenta de estas caracter€sticas cinƒticas:

Vm  S
V
S  Km

en donde Km es una constante que equivale a la concentraci•n de sustrato a la cual la

velocidad de reacci•n se hace la mitad de su valor m‚ximo. La ecuaci•n de Michaelis-Menten
queda reflejada en la siguiente gr‚fica:

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INHIBICIÄN ENZIMÉTICA
La inhibici•n de la actividad
enzim‚tica por molƒculas
espec€ficas y por iones es
importante porque constituye uno
de los principales controles de los
sistema biol•gicos. Tambiƒn,
muchos f‚rmacos y agentes t•xicos
act„an inhibiendo enzimas. Es m‚s,
la inhibici•n enzim‚tica puede
suministrar una idea acerca del mecanismo de la acci•n enzim‚tica.

La inhibici•n irreversible se da cuando el inhibidor queda covalentemente unido al enzima de

tal manera que la disociaci•n es pr‚cticamente nula. Por el contrario, la inhibici•n reversible se
caracteriza por un r‚pido equilibrio entre el inhibidor y el enzima. Existen tres tipos de inhibici•n
reversible:

INHIBICI‰N COMPETITIVA
Es el tipo m‚s sencillo de inhibici•n reversible. En este caso, el inhibidor se parece al sustrato
y se une al centro activo del enzima. As€, el sustrato compite con el inhibidor por el enzima
libre. Un inhibidor competitivo reacciona reversiblemente con el enzima para formar un
complejo enzima-inhibidor (EI), an‚logo al complejo enzima-sustrato:

E + I  EI

La molƒcula de inhibidor no resulta qu€micamente alterada por el enzima.

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 INHIBICIÄN NO COMPETITIVA
Tambiƒn es reversible.
El inhibidor y el sustrato pueden
unirse simult‚neamente a una
molƒcula de enzima, interfiriendo la
acci•n de ƒste. Los inhibidores no
competitivos se unen a un centro del
enzima distinto del centro activo, a
menudo para deformar al enzima, de
modo que no pueda formarse el
complejo ES a su velocidad normal y
que una vez formado no se
descomponga a su velocidad habitual
para liberar los productos de la
reacci•n.

En la inhibici•n no competitiva la
reacci•n con el inhibidor produce dos
formas inactivas: EI y ESI.

E + I  EI

ES + I  ESI

INHIBICIÄN INCOMPETITIVA
(ACOMPETITIVA)
En este tipo de inhibici•n, cuya
designaci•n no es muy adecuada, el
inhibidor no se combina con el enzima
libre ni afecta a la reacci•n con el
sustrato normal; sin embargo, el inhibidor se combina con el complejo enzima-sustrato para
formar el complejo enzima-sustrato-inhibidor, el cual no experimenta su transformaci•n
posterior en el producto habitual de la reacci•n:

ES + I  ESI

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 FACTORES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD ENZIMÉTICA

I) La temperatura
la actividad enzim‚tica desaparece si se producen cambios notables de temperatura.
Elev‚ndola, la actividad disminuye e incluso desaparece por desnaturalizaci•n de la
prote€na enzim‚tica. Por el contrario, al descender la temperatura, disminuye la actividad,
pero el enzima no se destruye , y el proceso es reversible.

II) El pH
Existe un pH •ptimo tal que al alejarse de ƒl, disminuye la velocidad. III). La concentraci•n
de sustrato
Al aumentar la concentraci•n a TŠ y pH constantes aumenta la actividad hasta cierto l€mite,
a partir del cual el enzima se satura.

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IV) Activadores
Algunos enzimas necesitan la presencia de determinados iones(cofactores) para que sean
activos.

V) Inhibidores
Como acabamos de ver son sustancias que impiden de distintas maneras la actuaci•n del
enzima.

NOMENCLATURA Y CLASIFICACIÄN DE LOS ENZIMAS

Antiguamente se denominaba fermentos a los enzimas. Para la nomenclatura del enzima, se
usa el sufijo -ASA y el nombre del sustrato sobre el cual act„an y el tipo de reacci•n que
catalizan. Se clasifican en los siguientes grupos:

A) OXIDORREDUCTASAS : catalizan reacciones de oxido-reducci•n, es decir, son capaces de

transferir hidr•genos y electrones.
Son los responsables de la producci•n de energ€a en los
seres vivos:

A3+ + B2+  A2+ + B3+

B) TRANSFERASAS: son enzimas que transfieren un radicar desde una molƒcula a otra, sin
que se pierda en el medio.

A-X+B A+B–X

C) HIDROLASAS. son enzimas que rompen

enlaces introduciendo una molƒcula de agua.

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 A - B + H2O  A + B

D) LIASAS : son enzimas que rompen enlaces, sin introducir una molƒcula de agua, peri s€
otros radicales:

A-B + X-Y  X-A-B-Y

E) ISOMERASAS : son enzimas que act„an produciendo

reordenaciones dentro de la molƒcula o transfiriendo radicales
en la misma molƒcula. Son responsables de la formaci•n de
is•meros:

A-B-X  X-A-B

D) LIGASAS O SINTETASAS : son enzimas que unen molƒculas pero en presencia de

energ€a. Esta energ€a es proporcionada por el ATP que se hidroliza en ADP + Pi.

A + B + ATP  A - B + ADP + Pi

ENNZIMAS ALOSTÇRICOS
A veces puede resultar „til contemplar a una cƒlula como a una f‚brica. Ninguna f‚brica
operar‚ de manera eficiente si cada m‚quina est‚ funcionando con su velocidad m‚xima.
Pronto se producir‚n problemas.

Los enzimas alostÜricos, son enzimas con una gran susceptibilidad de ser reguladas.
Son prote€nas oligomƒricas, es decir, con varias subunidades cada una con un centro activo y
con un centro regulador o alostÜrico. A este lugar se puede unir otra molƒcula denominada
efector o modulador (“alostƒrico” significa “otro lugar”). La interacci•n del modulador con el
centro alostƒrico es tan espec€fica como lo es la interacci•n del sustrato con el centro activo y

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tambiƒn est‚ basada en la complementariedad espacial. Estos moduladores pueden ser
positivos o activadores o negativos o inhibidores.

Estos enzimas tambiƒn presentan un fen•meno que se explic• en la hemoglobina que

es el de la cooperatividad. Si la cooperatividad se presenta por la uni•n del sustrato, recibe el
nombre de homoalosterismo. Si la cooperatividad es producida por activadores o inhibidores
diferentes al sustrato, recibe el nombre de heteroalosterismo.

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 Las unidades de los enzimas alostƒricos presentan dos conformaciones: la
conformaci•n R, o conformaci•n con mucha afinidad por el sustrato y la conformaci•n T (tensa)
con muy poca afinidad por el sustrato.
Cuando un activador (o sustrato en
un caso de homoalosterismo) se une al
enzima provoca el paso de las subunidades
a la conformaci•n R. As€ se produce el
efecto de cooperatividad ya que las
subunidades aumentan la afinidad por el
sustrato en la conformaci•n R. Por el
contrario, cuando se une el inhibidor, la
conformaci•n para a ser T, y el enzima
alostƒrico se vuelve incapaz de unirse al sustrato por lo que la reacci•n que cataliza se
interrumpe.

La cinƒtica de las reacciones catalizadas por enzimas alostƒricos es diferente a la de

los enzimas que siguen la cinƒtica de Michaelis-Menten. Su gr‚fica presenta una sigmoide que
indica que en un momento determinado, al ir aumentando la concentraci•n de sustrato,
aumenta de repente la velocidad de reacci•n. Esto es debido al fen•meno de la cooperatividad.
Los enzimas alostƒricos tambiƒn presentan saturaci•n por el sustrato.

Muchos enzimas alostƒricos se encuentran al principio de v€as metab•licas. Estos

enzimas suelen tener como inhibidor al producto de final de dicha ruta metab•lica. De esta

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manera cuando la concentraci•n del producto final de la ruta metab•lica alcanza un valor
determinado, la acci•n del enzima queda inhibida y se paraliza dicha ruta. De este modo se
garantiza que cuando la cƒlula haya conseguido la cantidad de producto suficiente, se paraliza
su producci•n. A este sistema de regulaci•n se le denomina REGULACIÄN POR PRODUCTO
FINAL o retroalimentaciÑn negativa.

Otro modo en el que la actividad de los enzimas puede regularse es por los
CIMÄGENOS. Los cim•genos son enzimas que se sintetizan inactivos y que requieren un
cambio posterior para ser activos. Si no se produce este cambio o se encuentran los agentes
que los producen, el enzima no pasar‚ a su forma activa. Este sistema es muy utilizado por
cƒlulas que fabrican productos que, en su forma activa, podr€an daˆarlas. Por ejemplo, las
cƒlulas principales de la mucosa g‚strica fabrican un enzima que digiere las prote€nas (hidroliza
los enlaces pept€dicos). Si el enzima estuviese activo en el interior de la cƒlula, digerir€a las

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prote€nas de la cƒlula provocando su muerte. Por eso, las cƒlulas principales fabrican
pepsin•geno, un precursor inactivo de la pepsina. El pepsin•geno es un ejemplo de cim•geno.
Cuando el pepsin•geno llega al est•mago, es atacado por el HCl (H+ ) y se transforma en
pepsina, el enzima activo mediante un sistema autocatal€tico.

Otros ejemplos de este mismo fen•meno son el tripsin•geno y el quimiotripsin•geno

(para dar tripsina y quimiotripsina en el duodeno) que se fabrican en los acinos pancre‚ticos.
Recuerde tambiƒn el paso de procol‚geno a tropocol‚geno.
Los cim•genos se acumulan en el interior de las cƒlulas antes de su exocitosis en
forma de gr‚nulos.

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