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* Instituto Clodomiro Picado, Facultad de Microbiologa, Universidad de Costa Rica. ** Laboratorio Clnico, Seccin de Inmunologa, Hospital Nacional de Nios Dr. Carlos Senz Herrera ***Seccin de Laboratorio Clnico, Oficina de Salud, Universidad de Costa Rica.
troforesis en cohete permite obtener los resultados en pocas horas (entre 3 y 6), aunque al igual que la tcnica anteriormente descrita, requiere de un equipo relativamente costoso. Por ltimo, la inmunodifusin radial (IDR) se basa en la difusin libre de la muestra en un gel que contiene los anticuerpos contra la Ig que se desea cuantificar, lo que da lugar a la formacin de un anillo o crculo de precipitacin alrededor del punto de aplicacin, cuya rea guarda proporcionalidad con la concentracin de antgeno en la muestra. Esta tcnica se puede efectuar de dos formas. La primera, llamada de difusin completa o de Mancini, permite la difusin total de la muestra (lo que implica un tiempo de 48-72 horas para la lectura) y permite obtener una lnea recta al graficar el dimetro del anillo precipitado elevado al cuadrado contra la concentracin de lg (24). La segunda, denominada de difusin parcial o de Fahey, utiliza un tiempo de difusin restringido (4-18 horas) y proporciona una relacin lineal al graficar el dimetro del precipitado contra el logaritmo de la concentracin de lg (11). A pesar de que es un mtodo ms rpido que el descrito por Mancini, su precisin es menor al compararla con el mtodo de difusin completa (22, 25, 26). Debido a su simplicidad y a que no requiere de equipo complejo, la IDR se ha convertido en la tcnica ms utilizada para la cuantificacin de lgs (14, 23), y varias compaas comerciales ofrecen placas listas para su uso (16, 17, 18). La principal desventaja de la IDR radica en el largo tiempo de lectura y en los problemas que ocasionan las Igs polimricas, cuya velocidad de difusin en el gel depende del tamao molecular (26). La cuantificacin de las lgs sricas tiene inters tanto desde el punto de vista clnico como de investigacin (9). Sus principales indicaciones clnicas son: a) En el estudio por inmunodeficiencia, ya sea primaria o secundaria, sugerida por infecciones frecuentes y/o debidas a microorganis mos de baja virulencia. b) En la vigilancia de pacientes que sufren formas graves de hipogammaglobulinemia y que reciben terapia de sustitucin con preparaciones de lgs. c) Para distinguir las gammapatas mono clonales idiopticas benignas de las paraproteinemias causadas por mielomas. d) Para ayudar al diagnstico de infecciones congnitas, la determinacin de IgM en sangre de cordn de recin nacidos, (26). En
otras condiciones patolgicas esta determinacin posee actualmente muy poco valor diagnstico y su realizacin obedece ms bien a fines de investigacin (26). Para una adecuada interpretacin de los resul tados se requiere de una amplia preparacin en conceptos inmunolgicos y metodolgicos bsicos (35) y adems, de la existencia de valores de referencia que reflejan lo mejor posible la realidad propia de cada poblacin particular (6, 29). El presente estudio constituye la primera parte de una investigacin tendiente a precisar los niveles de lgs sricas en nuestra poblacin, en este caso, en el adulto joven normal. MATERIAL Y METODOS Se utiliz 49 muestras de suero de estudiantes universitarios normales de ambos sexos, con edades entre los 18 y los 25 aos, quienes acudieron a la Seccin de Laboratorio Clnico de la Oficina de Salud de la Universidad de Costa Rica, para la realizacin de diversos exmenes de la ficha mdica estudiantil. Debido a lo limitado de la muestra estudiada no se analiz dife rencias de sexo u otros factores. Se obtuvo muestras de suero por puncin venosa, en ayuno, las cuales se congelaron a -30C hasta su anlisis (aproximadamente 2 meses). La cuantificacin de lgG, lgA e lgM se realiz empleando placas comerciales de IDR (Hyland Diagnostics , Illinois) por el mtodo de difusin completa de Mancini (24). Las curvas de referencia se establecieron con tres sueros estndar incluidos en los juegos de reactivos comerciales, los cuales estn calibrados respecto al Patrn Internacional de Referencia 67/86 de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS.). Dichos estndares fueron probados por duplicado junto con las muestras, las cuales se analizaron todas simultneamente y utilizando el mismo lote de reactivos. El procedimiento seguido fue bsica mente el recomendado por el fabricante (16). Las muestras (3 ul) se aplicaron con micropipeta Hamilton mecnica (Hamilton Co., Nevada), y las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 50 horas en cmara hmeda (Gelman Co., Ann Arbor, Michigan). La lectura se realiz iluminando indirectamente los geles con un visor de placas (Hyland Diagnostics, Illinois) y midiendo el dimetro del crculo de precipitacin con una regla con divisiones de 0,5 mm (Behring, Frankfurt, Main). Se grafic el dimetro al cuadrado (mm2) contra la concentracin (mg/dl) de cada estndar y se interpol grficamente los resultados de las muestras. Los resultados
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en mg/dl fueron convertidos adems a UI/ml multiplicando por los factores de conversin corres pondientes a los estndares empleados (0,124 para lgG, 0,704 para IgA y 1,180 para lgM). En total se analiz 49 muestras para IgG, 47 para IgA y 47 para IgM. RESULTADOS Las curvas de referencia obtenidas para las tres Igs, dieron puntos completamente colineales por lo que no hubo necesidad de trazar lneas de mejor ajuste. La 2 interseccin de la recta con el eje de ordenadas (d ) se mantuvo dentro del lmite esperado de 11 3,5 2 mm en los tres casos. La dis tribucin de los valores obtenidos se observa en la Fig. 1. En el caso de IgA e IgM dicha distribucin fue bastante simtrica alrededor del promedio, a diferencia de lo observado para IgG (Fig. 1). En el Cuadro 1 se observa los datos de concentracin de g l s del grupo estudiado y su variacin. Una de las muestras present un valor de IgA extremadamente bajo, no medible con la tcnica empleada, por lo que no se pudo incluir en la estadstica; lo mismo sucedi en dos casos con IgM. DISCUSION La expresin de los resultados en la cuantificacin de Igs ha sido difcil de estandarizar a nivel internacional. Inicialmente, los resultados se expresaban en trminos absolutos de concentracin, fundamentalmente en mg/dl (33, 34). Sin embargo, a partir de 1970, los estudios colaborativos realizados en el Centro de Referencia para Inmunoglobulinas de la O.M.S. por Rowe y colaboradores (30, 31), demostraron que la expresin de los resultados en unidades absolutas es muy imprecisa, ya que an laboratorios especializad os difirieron mucho al analizar con sus propios estndares seis muestras codificadas. Por otro lado, los mismos estudios demos traron que se lograba una reproducibilidad muy superior entre dichos laboratorios al utilizar un estndar de referencia nico, al cual se le haba asignado unidades arbitrarias de potencia para representar los valores desconocidos de lgG, IgA e IgM (28, 30, 31). Esto motiv a la preparacin de un estndar internacional de referencia para dichas lgs por parte de la OMS. y la adopcin de unidades arbitrarias designadas como Unidades Internacionales. (UI), cuyo uso fue recomendado por dicha entidad (30). Sin embargo, el nuevo sistema de unidades arbitrarias caus controversia y no tuvo una aceptacin
amplia en el campo clnico, fundamentalmente por razones de costumbre (28). Ante tal situacin, los comits internacionales de expertos propusieron el uso de factores de conversin basados en las mejores determinacion es absolutas disponibles (2, 15). Por las anteriores consideraciones, se ha expresado los resultados del presente estudio con los dos tipos de unidades. Debe destacarse que los factores de conversin a unidades de masa es tn sujetos a una gran incertidumbre, ya que los mtodos de purificacin de las Igs no permiten una recuperacin cuantitativa y al mismo tiempo de alta homogeneidad de cada protena (28, 31). Es por esto que cada fabricante de placas comerciales para la determinacin de Igs, proporciona sus factores de conversin a unidades de masa, con ligeras variaciones entre ellos (28), a pesar de que los estndares comerciales son patrones secundarios calibrados respecto al estndar internacional de referencia, en UI/ml (28). Al comparar nuestros resultados con los descritos para otros pases (Cuadro 1) llama la atencin el nivel de IgG, cuyo promedio y lmite superior del mbito son mayores, exceptuando solamente los datos correspondientes a Nigeria (29) y a Surinam (37). El promedio de IgG es muy similar al hallado en poblacin indgena de Guatemala (8, 20). Los niveles de IgA y de lgM, en general, son similares a la mayora de los descritos. Al respecto, se ha indicado que los niveles normales de Igs sricas en la poblacin de algunos pases s ubdesarrollados tienden a ser mayores que los de pases desarrollados (23, 29, 37). En el presente caso, slo el nivel de lgG es consistentemente mayor. Esta dife rencia ejemplifica la importancia de estudiar dis tintos parmetros inmunolgicos de nuestra poblacin para una interpretacin adecuada de los resultados de laboratorio. El hallazgo de una muestra con nivel muy bajo de IgA y dos muestras con baja IgM no es sorprendente, ya que algunos investigadores han encontrado el mismo fenmeno en poblacin normal, sin que se pueda asociar a patologa (26, 29). En este estudio preliminar no se ha considerado ciertos factores de importancia como el sexo y el grupo tnico, que influyen significativamente en los niveles de Igs sricas (3, 5, 6, 7, 9, 22, 34, 37). Es necesario realizar ms estudios en nuestra poblacin para investigar la importancia de dichos factores, as como determinar los niveles normales o de referencia, de las Igs sricas en otros grupos de edad diferentes al analizado, principalmente e n infantes y seniles. 185
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AGRADECIMIENTOS Agradecemos a nuestros colegas Luis Cerdas y Jos Mara Gutirrez por la revisin de este manuscrito. A la Srta. Roco Monge por su excelente trabajo secretarial, y a la Vicerrectora de Investigacin de la Universidad de Costa Rica por su apoyo econmico. ABSTRACT Serum concentrations of lgG, IgA and IgM were determined in 49 healthy university students, aged 18 to 25, by radial irnmunodiffusion, using commercially available plates. Results were compared to normal values reported in the literature. It was found that lgG levels in our sample were slightly higher, whereas IgA and lgM levels were similar to those reported in other countries. A brief discussion of current techniques for immunoglobulin quantitation is included, as well as some comments on international efforts to standardize this determination. BIBLIOGRAFIA
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