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    Practica 10

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    Este documento describe una práctica de laboratorio para determinar la cantidad de proteínas en una muestra mediante un método colorimétrico. Se explican los materiales, la metodología y los cálculos para obtener los resultados en g/dL. La práctica tuvo que repetirse debido a problemas con el espectrofotómetro. El resultado de la muestra indicó un nivel bajo de proteínas.

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    2022

    CENTRO DE ESTUDIOS TECNOLÓGICOS Y


    UNIVERSITARIOS DEL GOLFO A.C.

    LINCENCIATURA DE MEDICO CIRUJANO

    BIOQUIMICA MEDICA 2

    PRACTICA 10

    DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE PROTEINAS IVD

    EQUIPO 1

    DOCENTE: CARLOS XOTLANIHUA SOTO

    INTEGRANTES: JENNYETH RUIZ GONZALEZ, LORETO


    A. GARCIA ALVAREZ Y DANIA LÓPEZ MONTERROSAS

    08/MAYO/2023
    GENERALIDADES
    En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta azulado en presencia
    de sales de cobre; contiene yoduro como antioxidante. La intensidad del color
    formado es proporcional a la concentración de proteína total en la muestra
    ensayada.

    Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente


    distribuidos en el organismo. Actúan como elementos estructurales y de transporte.
    Se dividen en dos fracciones, albúmina y globulinas. Su determinación es útil en la
    detección de: - Hiperproteinemia producida por hemoconcentración, deshidratación
    o aumento en la concentración de proteínas específicas. -Hipoproteinemia por
    hemodilución debida a un defecto en la síntesis proteica, pérdidas excesivas
    (hemorragias) o catabolismo proteico excesivo . El diagnóstico clínico debe
    realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

    La sangre es el medio de transporte y distribución del cuerpo. Proporciona


    nutrientes esenciales a los tejidos y elimina los productos de desecho. Es una
    solución acuosa que contiene moléculas de diferentes tamaños, y una serie de
    elementos celulares. Algunos de
    los componentes de la sangre desempeñan papeles importantes en la defensa del
    cuerpo contra insulto externo y en la reparación de tejidos dañados. Para un clínico,
    el plasma es también una "ventana" importante en el metabolismo. Debido a que es
    fácil de recoger, la mayoría de las pruebas de laboratorio de diagnóstico en
    bioquímica, hematología e inmunología se realizan en muestras de plasma.
    Las proteínas plasmáticas pueden clasificarse ampliamente en dos grupos: los que
    incluyen la albúmina, que son sintetizados por el hígado, y las inmunoglobulinas,
    que son producidas por las células plasmáticas de la médula ósea, usualmente
    como parte de la respuesta inmune.
    Varias proteínas plasmáticas tienen la capacidad de unir ciertas moléculas (sus
    ligandos) con una alta afinidad y especificidad. Estas proteínas pueden actuar
    entonces como un reservorio para el ligando y ayudar a controlar su distribución y
    disponibilidad transportándolo a los tejidos. La unión a una proteína también puede
    hacer que una sustancia tóxica sea menos dañina para los tejidos.
    La albúmina es la proteína plasmática predominante. Juega un papel crítico en el
    mantenimiento de la presión osmótica coloide del plasma; puede unirse (y así
    solubilizar) una gama de sustancias que incluyen los ácidos grasos de cadena larga,
    esteroles y varios
    compuestos sintéticos.
    Las inmunoglobulinas (anticuerpos) son secretadas por los linfocitos B. Han definido
    la especificidad de las sustancias extrañas que estimulan su síntesis. No todas las
    sustancias extrañas que entran en el cuerpo pueden provocar esta respuesta, sin
    embargo; Los que lo hacen se llaman inmunógenos, mientras que cualquier agente
    que puede estar unido por un anticuerpo se denomina antígeno.
    El fibrinógeno es una proteína que se encuentra fuertemente relacionada con la
    hemostasia, por lo tanto, es importante para una buena coagulación sanguínea.
    (Universidad Autonoma de Guerrero, s.f.)

    MATERIAL:
    ✓ Espectrofotometro o analizador para lecturas a 492nm (490 o 500).
    ✓ Cubetas de 1cm de paso de luz.
    ✓ Pipetas.
    ✓ Balanza.
    ✓ Perillas.

    METODOLOGÍA:
    ➢ Muestra:
    o Suero o plasma.
    o Estabilidad de la muestra: 1 mes de 2-8°C
    ➢ Procedimiento:
    1. Condiciones del ensayo:
    • Longitud de onda: 540nm (530-550)
    • Cubeta: 1cm paso de luz.
    • Temperatura: 37°C/ 15-25°C
    2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
    3. Pipetear en una cubeta.
    Blanco. Patrón. Muestra.
    R(mL) 1.0 1.0 1.0
    Patrón (µL) .. 25 ..
    Muestra (µL) .. .. 25

    4. Mezclar e incubar 5 min a 37°C o 10 min a temperatura a 15-25°C.


    5. Leer la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente al blanco de
    reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.

    ➢ Cálculos:
    (𝐴)𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎−(𝐴)𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
    (𝐴)𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛−(𝐴)𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
    𝑥7 (𝑐𝑜𝑛𝑐. 𝑝𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛)= g/dL de proteínas totales.
    RESULTADOS:
    La practica la tuvimos que volver a realizar, dado a que en la primera vez no
    obtuvimos los resultados correctos por fallas de la lectura del espectrofotómetro.

    Los resultados obtenidos en la segunda vez que realizamos la lectura fueron:

    ✓ Blanco: 0.140
    ✓ Patrón: 0.193
    ✓ Muestra: 0.133

    (𝐴)𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎−(𝐴)𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
    (𝐴)𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛−(𝐴)𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
    𝑥7 (𝑐𝑜𝑛𝑐. 𝑝𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛)= g/dL de proteínas totales.

    0.133−0.140
    0.193−0.140
    𝑥7 𝑥 2= 1.82

    Valores de referencia:

    ✓ Adultos: 6.6 – 8.3 g/dL


    ✓ Recién nacidos: 5.2 – 9.1 g/dL

    La muestra nos indica que a la persona a la que le corresponde la muestra refleja


    que tiene un valor bajo de proteínas.
    OBSERVACIONES:
    LORETO: El espectrofotómetro hay que calibrarlo con tiempo, porque puede arrojar
    resultados anormales.

    DANIA: Se tiene que calibrar de manera correcta ya que de lo contrario nos va a dar
    valores erróneos lo que fue lo que paso en la realización de la práctica.

    JENNY: En esta práctica pudimos saber y observar el cómo se calcula el nivel de


    proteína, pero para esto nuestro espectrofotómetro no estaba calibrado y esto
    perjudica a nuestro resultado ya que nos puede dar un falso positivo.

    EVALUACIÓN DE EQUIPO:
    Después de llevar a cabo dicha práctica pudimos constatar que dicho resultado se
    encontraba un tanto elevado. El aumento de dicho resultado no es de gran
    relevancia y pudo alterarse por un mal manejo de reactivos o probablemente porque
    la muestra fuera inconclusa en dado caso que sea un falso positivo. En general las
    integrantes del equipo trabajaron de manera correcta y eficaz.

    Bibliografía
    Universidad Autonoma de Guerrero. (s.f.). Studocu. Obtenido de Studocu:
    https://www.studocu.com/es-mx/document/universidad-autonoma-de-
    guerrero/bioquimica-y-laboratorio/practica-no-2-determinacion-de-proteinas-totales-en-
    suero/3321306

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