Asociación

Mexicana de
Medicina
Transfusional, A. C.

Taller de
Inmunohematología
CD y AT positivos en el laboratorio
1. QFB Javier Bautista Juárez, Unidad de Terapia Celular y Banco de Sangre del Centro Médico “American
British Cowdray” (ABC). Vocal de Comunicación de la AMMTac. [email protected]
2. QFB Catalina Arévalo Hernández, Química Adscrita al Laboratorio de Inmunohematología del Banco
Central de Sangre del CMN SXXI IMSS. [email protected]
3. QFB Rocío Castillo Trigueros. Subdirector Técnico de Instituto LICON. [email protected]

Objetivo tos del paciente. Esta reacción se puede detectar de

manera directa, es decir, sin incubar las muestras, o
Los talleres en el área de inmunohematología tie-
mediante la inducción de la reacción anticuerpo-an-
nen la función de actualizar tanto la práctica como la
tígeno haciendo una incubación por tiempos prees-
teoría para los congresistas, por lo que es necesario
tablecidos y temperaturas especificas dependiendo
dejar plasmada la información para su consulta. En
del anticuerpo que se desea encontrar.
este resumen, el tema es el entendimiento y resolu-
La prueba de Coombs directa (CD) o prueba de
ción de casos que en la práctica presentan resulta-
antiglobulina directa (PAD) se remonta a la década
dos positivos en las pruebas de Coombs directo o el
de 1940, cuando a los recién nacidos con ictericia
AutoTestigo positivo, por lo que es de vital importan-
cia relacionar estos dos puntos (CD y AT) y aclarar se les tomaba una muestra que se lavaba y ponía en
sus similitudes y diferencias. contacto con el suero de Coombs (recién descubier-
Los profesores de este taller les presentamos la to en ese tiempo) para detectar anticuerpos pegados
información teórica de dichas situaciones, casos clí- al eritrocito durante el tiempo de gestación.
nicos representativos de estos problemas, así como El Coombs indirecto, en aquellos años, se realiza-
algunas técnicas accesibles para la elución de la re- ba poniendo en contacto (indirectamente para saber
acción Antígeno-Anticuerpo y posterior identificación el pronóstico del feto) el suero de la madre y eritroci-
del anticuerpo presente que se puede realizar en cual- tos del padre, con el fin de predecir la EHRN. Hay que
quier laboratorio de inmunohematología, con lo que recordar que en aquellos años no existían los paneles
se busca facilitar y hacer más accesible la práctica. de células con lo que en la actualidad se dispone para
la búsqueda de anticuerpos, por lo que esta práctica era
común para un pronóstico de probable inmunización.
Antecedentes Por otro lado, sabemos que se denominan anti-
La prueba de AutoTestigo (AT) se entiende como la cuerpos incompletos a aquellos que no aglutinan los
prueba del laboratorio en la cual se agrega suero del eritrocitos suspendidos en medio salino. Coombs
paciente y eritrocitos extraídos de él mismo con el introdujo a la práctica clínica la prueba de la antiglo-
fin de detectar autoanticuerpos, anticuerpos contra bulina directa para detectar la sensibilización de eri-
la sangre transfundida y aquellos que se encuentren trocitos in vivo (como en la enfermedad hemolítica del
mezclados con los del paciente, o como en la enfer- recién nacido), reacciones transfusionales y/o inmuni-
medad hemolítica del recién nacido (EHRN), buscar zación por medicamentos. Cabe mencionar, que los
anticuerpos transferidos por la madre contra eritroci- diferentes reactivos de antiglobulina que existen en

16 Rev Mex Med Tran, Año 7, Núm. 1 • Enero - Abril, 2014

la Inmunohematología son de utilidad para poner de
manifiesto anticuerpos IgG, IgA e IgM sobre los eritro- Los tipos de AHAI se pueden clasificar, según los estu-
citos, y para detectar distintos componentes del com- dios de laboratorio, en:
plemento (C4c, C4d, C3c, C3d, C5 y C6) que sirvan
de modo mono-específico o poli-específico (mezcla). • AHAI causada por anticuerpos calientes (IgG)
De algunos años a la fecha, es posible emplear • AHAI causada por anticuerpos fríos (IgM)
estos sueros incluso en tarjetas con gel con una bue- • AHAI causada por anticuerpos mixtos (IgG e IgM)
na sensibilidad. • AHAI causada por hemoglobinuria paroxística a frigore
Para detectar aloanticuerpos mediante la prueba
indirecta de antiglobulina, es indispensable dispo-
ner de anti-IgG, en concentración de 20ug/mL; la • La AHAI causada por anticuerpos calientes es
presencia de anti-IgM o anti-IgA no es estrictamente mediada por autoanticuerpos que reaccionan de
necesaria. Se han descrito también, muchos casos forma óptima a 37°, la mayoría son IgG1 o IgG3 y
de anticuerpos que podrían detectarse sólo con anti- es raro que estén implicados los IgM o IgA capa-
complemento, en especial por medio de uso de anti- ces de reaccionar a 37°. Lo habitual es que se pro-
C3d a una concentración de 3ug/mL. duzca una hemólisis extravascular en el sistema
Es raro que se requiera de anti-IgA junto al anti- retículo endotelial.
IgG para detectar la anemia hemolítica autoinmune
(AHAI) por medio de la prueba directa de antiglobu- • La AHAI causada por anticuerpos fríos es me-
lina. Los principales componentes del complemen- diada por autoanticuerpos que reaccionan a tem-
to que encontramos en estos pacientes son C3d y peraturas bajas, idealmente a 4°C. El grado de
C4d, por lo que se hace más accesible tener en el anemia depende del grado de exposición al frío.
laboratorio anti-IgG + anti-C3d. En la práctica habi- En estos casos, las muestras de sangre pueden
tual el anti-C3d sólo es suficiente para comprobar la presentar auto aglutinación a temperatura am-
presencia de complemento en los eritrocitos in vivo biente (22 a 25°C), lo cual dificulta la realización de
en los cuales se sospecha de una reacción reciente. frotis o conteos celulares. La autoaglutinación se
intensifica a 4°C y se revierte al calentar la muestra
Técnica de las pruebas de antiglobulina a 37°C. En la mayoría de los pacientes, los anti-
En la prueba directa (PAD o CD), los eritrocitos recién cuerpos encontrados son IgM que inducen a la
obtenidos del paciente se lavan y ponen en contacto fijación del complemento sobre los eritrocitos.
con un reactivo antiglobulina y/o anticomplemento
con el fin de observar si existió una reacción recien- • La AHAI mixta es causada tanto por IgG como por
te en el individuo en estudio. Es importante recalcar IgM, además de complemento pegado al eritrocito
que la prueba debe realizarse lo más pronto posible del propio paciente. Los anticuerpos IgM suelen
para evitar la destrucción de los eritrocitos por la re- presentar un título de hasta 1:64 a 4°C. El Coom-
acción y activación del complemento. bs directo (poli-específico) es positivo para IgG y
En la prueba indirecta (PAI o CI) de antiglobulina, C3d, y en el extracto se encuentra el autoanticuer-
los eritrocitos se incuban con suero para facilitar la po IgG esperado.
fijación del anticuerpo y en algunos casos del com-
plemento durante un tiempo y temperatura adecua- • En el caso de la hemoglobinuria paroxística a
dos para el anticuerpo que se desea detectar. Acto frigore, la cual representa menos del 1% de los
seguido, se lavan y estudian con un reactivo antiglo- casos de AHAI, los auto-anticuerpos relacionados
bulina y/o anticomplemento, con posterior control de son IgG que reaccionan con los eritrocitos en las
la prueba con eritrocitos sensibilizados. zonas más frías del organismo, lo que provoca la
fijación del complemento, y se disocian a tempera-
turas más elevadas. El anticuerpo principalmente
Anemias hemolíticas
involucrado es el anti-P.
En cuanto a la AHAI, se trata de un tipo de anemia ad-
quirida producida por la acción de los anticuerpos que La AH por medicamentos, puede ser causada por
reaccionan contra los propios eritrocitos del paciente diferentes vías, las tres principales que se han identi-
(autoanticuerpos), lo que conduce a su destrucción. ficado en el laboratorio son:

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Adsorción del medicamento, la cual se podrá 1) Inmunológicas inmediatas: hemolíticas, febril no
detectar con la prueba de Coombs directo IgG hemolítica, alérgicas (urticaria y anafiláctica) y daño
acompañado, algunas veces, de C3. Los más pulmonar agudo asociado a la transfusión.
representativos de los medicamentos implicados 2) Inmunológicas tardías: hemolíticas, enfermedad
esta vía de activación de inmunización son las injerto contra hospedero, púrpura postransfusional,
penicilinas y las cefalosporinas. La suspensión del inmunomodulación por transfusión y aloinmunización
contacto con el medicamento elimina la producción contra antígenos eritrocitarios, leucocitarios,
del anticuerpo. plaquetarios y a proteínas plasmáticas. Dentro de
estas, las que más dan resultados de AutoTestigo
Complejo inmune, en cuyo caso, en la prueba de positivo o una prueba de Coombs directo positivo son:
Coombs directo normalmente se detecta C3, y en
algunas ocasiones, también IgG. Los medicamentos La hemólisis intravascular, se caracteriza por sig-
representativos de esta vía de inmunización son las nos y síntomas como: ansiedad, sensación de muer-
fenacetinas, quinidinas y cefalosporinas de tercera te inminente, dolor retroesternal, lumbar o en el sitio
generación. La eliminación del medicamento hace de la venopunción, fiebre, calofríos, náusea, vómito,
que desaparezca la producción del anticuerpo. hipertensión inicial, hipotensión, taquicardia, disnea,
coluria, anuria y choque. En el paciente anestesiado
Autoinmunidad, en donde, lo habitual es encontrar con sangrado en capa (en lecho quirúrgico y en si-
en la prueba de Coombs directo solo IgG pegado tios de venopunción) suele ocurrir oliguria, coluria e
a la membrana del eritrocito, y rara vez C3. Los hipotensión. La etiología más común es la incompa-
medicamentos que con mayor frecuencia causan tibilidad ABO; sin embargo, pueden estar involucra-
esta inmunización son alfa-metildopa (aldomet) y dos otros sistemas como Kidd, Duffy y P.
procainamida. En estos pacientes, aunque se deje
La hemólisis intravascular es mediada por an-
de administrar el medicamento, el organismo sigue
ticuerpos de las clases IgM y/o IgG fijadores de
produciendo los autoanticuerpos.
complemento hasta C9. En cuanto a la hemólisis ex-
travascular, los signos y síntomas más comunes son:
Hablando ahora de la enfermedad hemolítica del re-
ictericia, fiebre, transfusión inefectiva, ocasionalmen-
cién nacido o de la eritroblastosis fetal, es importante
te calofríos, y coluria que puede pasar inadvertida.
recalcar que los anticuerpos involucrados son única-
La etiología de la incompatibilidad es la presencia de
mente los IgG, y en específico IgG1 e IgG3, que son
anticuerpos de los sistemas Rh, Kidd, Duffy, Diego,
los que pueden atravesar la placenta. No se encuentra
Kell y otros diferentes al ABO, y está mediada por an-
otra clase de anticuerpos ni presencia de complemen-
ticuerpos clase IgG fijadores o no fijadores de com-
to. Habitualmente, el Coombs directo es positivo débil,
plemento hasta C3.
por lo que es importante realizar la prueba inmediata-
mente después del alumbramiento del recién nacido,
pues el retraso arrojará resultados falsos negativos. Casos clínicos
Sin lugar a dudas, los casos clínicos son un ejercicio
Los anticuerpos encontrados son muy variados en que ayuda a establecer la correlación entre lo teórico
cuanto su especificidad, hallándose sobre todo el y lo práctico, por lo que en esta ocasión se presen-
anti-D y en segundo plano anti-E, anti-c, anti-e, anti- tarán varios de ellos, los cuales son representativos
K, anti-Jk, anti-Fy y otros, dependiendo de la zona de cada etiología mencionada y que causan “des-
geográfica o frecuencia en el país. Sin embargo, es concierto” en el laboratorio, aunque una vez que se
bueno recordar que la inmunización puede ser cau- analizan a fondo son de fácil resolución.
sada por cualquier grupo sanguíneo de los 33 siste-
mas que se encuentran en los eritrocitos.

Reacciones transfusionales
En cuanto a las reacciones transfusionales, las que
más interesan son las de tipo inmunológico, como
las siguientes:

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 Tabla 1. Resultados del caso clínico 1
Caso clínico 1
Paciente femenino de 45 años de edad, con ante- Estudio Resultado
cedentes de enfermedad renal crónica (ERC) de 15 Grupo sanguíneo O positivo
años de evolución, en actual tratamiento con diáli-
Positivo, título 1:2,
sis peritoneal automatizada (DPA), antecedente de Coombs directo (PAD)
12 puntos, clase IgG
trasplante renal de donador vivo relacionado hace
15 años, sin complicaciones inmediatas, hasta Búsqueda de Probable anti-e detectado
hace dos años que presentó disfunción renal. anticuerpos irregulares en tarjeta de gel-Coombs
Cuenta también con antecedente de sangra- ccDEE (R2R2) MNSs
dos menstruales desde hace seis meses, con ci- Pb. fenotipo P(pos)Fy(a+b-)kkJK(a+b-)
clos cada 30 días, los cuales fueron aumentando Le(a-b-)Dia-
en número, duración y volumen, con presencia de
Compatible por prueba
coágulos. Fue tratada con manejo farmacológico y Resultado de
cruzada mayor y por
cauterización. La paciente presenta astenia, adina- prueba cruzada
fenotipo e(neg)
mia, debilidad generalizada sin compromiso car-
diopulmonar; abdomen con presencia de catéter
de diálisis con cojinete externo visible, extremida-
des íntegras sin edema. Resultados de laboratorio:
Hb=5.82 g/dL, Hto=37.1, VCM=105, HCM= 36,
Leuc=6x103/mm3, plaquetas= 322,000/mm3. Se
cruzan paquetes globulares y se reportan pruebas
inco diabetes mellitus mpatibles. Se solicita transfu- Imagen 1. Caso 1. Búsqueda de anticuerpos irregulares en suero.
sión sanguínea con productos fenotipificados. Técnica DGgel-Coombs. Panel Identisera Lote:11256F, cad.
04/05/2013

Caso clínico 2 Tabla 2. Resultados del caso clínico 2

Se trata de paciente femenino de 81 años de Estudio Resultado
edad, con antecedentes transfusionales interro- Grupo sanguíneo O positivo
gados y negados, diabetes mellitus tipo 2, gine-
coobstétricos, G-11, P-10, A-1, C-0, sin indicar Positivo, título SP, 8 puntos,
Coombs directo
complicaciones. En la interconsulta con el hema- Clase IgG
tólogo se informó el diagnóstico de una anemia Probable anti-Fyb
macrocítica normocrómica con neutropenia y Búsqueda de detectado en salina-
linfopenia, sugiriendo que puede tratarse de una anticuerpos irregulares Coombs y
anemia megaloblástica. bromelina-Coombs
En los estudios de laboratorio se encuentra una
Eluído, anticuerpos
hemoglobina de 6.4 g/dL y hematocrito de 20.6%.
despegados de los Pb. Anti-C
Considerando la edad de la paciente y el riesgo de
eritrocitos
cardiopatía isquémica, se sugiere transfundir de
dos a tres concentrados eritrocitarios para alcanzar ccDEe (R2r) MMSS P(pos)
un hematocrito de 30%, la cual se realizó sin éxito, Pb. fenotipo Fy(a+b-)JK(a+b+)
ya que tras varios cruces se reporta incompatible. Le(a-b+)Dia-
Por lo anterior, se solicita apoyo al Banco Central Compatible por prueba
de Sangre Centro Médico Nacional SXXI para la Resultado de prueba cruzada mayor y por
realización de más pruebas. cruzada fenotipo
C (neg) y Fyb(neg)

Rev Mex Med Tran, Año 7, Núm. 1 • Enero - Abril, 2014 19

 Tabla 3. Resultados del caso clínico 3
Estudio Resultado
Grupo sanguíneo B positivo
Caso clínico 3 Positivo, título 64,64 puntos, clase IgG
Coombs directo
Paciente femenino de 60 años de más complemento
edad. Ingresa con astenia, adina- Probable auto-anti-I activo a 22°C y que
mia, tinte ictérico. Fue tratada en un Búsqueda de
fija complemento, técnica salina-Coombs
servicio particular como hepatitis. anticuerpos irregulares
y técnica en gel Coombs
Diagnóstico de anemia hemolítica
hace 13 años; tratada con esteroi- Eluído, anticuerpos despegados
Pb. auto anti-Sistema Rh-Hr
des (prednisona). Antecedentes de los eritrocitos
ginecoobstétricos G-1, P-1 A-0, sin ccDEe (R2r) MMSS P(pos)Fy(a+b-)
EHRN. Se desconocen sus ante- Pb. fenotipo
JK(a+b+) Le(a-b+)Dia-
cedentes transfusionales. Exáme-
Fenotipo no concluyente
nes de laboratorio: Hb 4.7 g/dL;
por observar doble población
leucocitos 15 900/mm3, DHL 1112,
Genotipo Er. tratados con elución ácida
bilirrubina total 11g/dL, bilirrubina
ccDEE (R2R2) Ss P(pos)Fy(a+b+)
indirecta 7.31 g/dL, en la uresis se
JK(a+/-b+/-)Dia-
presenta coluria, AST 106, ALT 76.
Compatible por prueba cruzada
Resultado de prueba cruzada mayor y por genotipo
C(neg) Jka(neg)

Imagen 2. Caso 3. Búsqueda de anticuerpos irregulares en suero. Técnica DG gel Coombs

Caso clínico 4 hemólisis. El control de las bilirrubinas a las 24 horas fue

Femenino de 26 años, grupo sanguíneo O Rh (D) positivo; de 28.3 mg/dL, a las 23 horas era de 23.1 mg/dL y hema-
G-3, C-2, embarazo gemelar previo. No hay antecedentes tocrito de 39%. No se realizó exanguinotransfusión por no
de transfusión. No ha presentado enfermedad hemolítica encontrar sangre compatible en su hospital de proceden-
de recién nacido en sus partos anteriores. La hija recién cia. Se envía el caso al Banco Central de Sangre Centro
nacida, de seis días de vida, cuenta con grupo O Rh (D) Médico Nacional Siglo XXI. Se determinó la presencia de
positivo, presenta hiperbilirrubinemia desde el segundo anticuerpos anti-c y anti-E en el suero de la madre y pe-
día de vida (23.7 mg/dL de bilirrubina indirecta y bilirrubina gados en los eritrocitos de la recién nacido.
total de 24.1 mg/dL), hemoglobina de 15 g/dL, hemato- Con frecuencia se estudian las exanguineotransfusio-
crito de 45%, plaquetas 345,000/mm3, Coombs directo nes e hiperbilirrubinemias en recién nacidos cuyas ma-
positivo. Se inicia tratamiento con fototerapia. dres son Rh(D) negativo; no obstante, en este caso se
nota la importancia del control y rastreo de anticuerpos
Se requiere sangre para realizar exanguinotransfusión; en la madre durante el periodo prenatal, de manera inde-
sin embargo, el servicio informa que no existen datos de pendiente al Rh(D) que esté presente.

20 Rev Mex Med Tran, Año 7, Núm. 1 • Enero - Abril, 2014

 Tabla 4. Resultados del caso clínico 4
Estudio Resultado
Madre Hija Padre
Grupo sanguíneo O positivo O positivo O positivo
Positivo, título 1:128,
Coombs directo Negativo Negativo
clase IgG
Probable mezcla de anti-E
Búsqueda de
y anti-c, técnica salina-
anticuerpos irregulares
Coombs
Eluído, anticuerpos Probable mezcla de anti-E
despegados de los y anti-c, técnica salina-
eritrocitos Coombs
CCDee(R1R1) NNSsP(pos)
CcDEe(R2R2) Fy(a+b-)
Pb. fenotipo Fy(a+b+)kk JK(a+b+)
JK(a+b)Le(a-b+) Dia-
Le(a+b+) Dia-

Caso clínico 5 Tabla 5. Resultados del caso clínico 5

Paciente masculino de 79 años Estudio Resultado
de edad diagnosticado con Grupo sanguíneo B positivo con AT positivo
macroglobulinemia, provenien-
Coombs directo Negativo
te del Servicio de Hematología
en el Hospital de Oncología. El Búsqueda de
Negativa en salina-Coombs y en gel-Coombs
expediente refiere cinco años anticuerpos irregulares
de evolución con macroglobuli- No concluyente por observar
nemia, tratado con talidomida y doble población
fluconazol y transfusiones positi- Pb. fenotipo
CCDee (R1R1) MMss P(pos)Fy(a+b+/-)
vas FUT el 21 de noviembre de JK(a+b+/-)Le(a-b+)Dia-
2012. Los resultados de labora-
Compatible por prueba cruzada
torio informan: prueba de auto-
Resultado de prueba cruzada mayor y por fenotipo
testigo positivo.
R1R1, Fyb(neg)

Imagen 3. Caso 5. Búsqueda de anticuerpos irregulares en suero. Técnica DG gel-Coombs.

Rev Mex Med Tran, Año 7, Núm. 1 • Enero - Abril, 2014 21

 Caso clínico 6 ficados Dib positivo obtenidos de su hermano, la cual se
Paciente de 26 años de edad, originaria del Distrito Fede- caracteriza por fiebre, hipertensión e ictericia.
ral. Inicia hace 10 años con molestias en articulaciones
de tobillos y manos, presenta mialgias, disnea y caída de En abril de 2013, por segunda ocasión presenta reacción
cabello. Fue tratada y diagnosticada en Denver, Estados transfusional de concentrado eritrocitario compatible por
Unidos, por Lupus Eritematoso Sistémico (LES) y su ma- fenotipo e incompatible por autoanticuerpos. Se anexa
nejo fue a base de esteroides. También es diagnosticada estudio realizado en el año 2008 cuando previamente se
con síndrome de anticuerpos antifosfolípidos (SAAF). En le detectó anti-Dib, estudio que probablemente se reali-
enero de 2008 ingresa al Hospital de Especialidades en zó en los Estados Unidos. En México no contamos con
estado de coma, a cargo del servicio de Reumatología. antisuero para detectar el antígeno en los eritrocitos, ni
Presenta reacción postransfusional a eritrocitos fenotipi- reportes de su frecuencia en nuestra población.

Tabla 6. Resultados del caso clínico 6

Estudio Resultado
PRE POST
Grupo sanguíneo A1 Rh positivo A1 Rh positivo
Positivo,
Coombs directo Positivo, clase IgG
clase IgG
Búsqueda de
No definida. Técnica gel Coombs No definida. Técnica gel Coombs
anticuerpos irregulares
Eluído, anticuerpos
No definido. Eluído-Coombs
despegados de los eritrocitos
Se observa doble población
Pb. fenotipo CCDee(R1R1) MMS(+/-) s P(pos)
Fy(a+b+/- JK(a+b-)Le(a+b+) Dia-
Hermana con LES
CCDee (R1R1) MNssFy (a+b-)
kkJka+Jkb- Dia+b-
Fenotipos Reportados en 2008
Hermano (donador)
CCDee (R1R1) MNssFy (a+b-)
kkJka+Jkb- Dia+b+

Imagen 4. Caso 6. Búsqueda de anticuerpos irregulares en suero. Técnica DG gel-Coombs.

Búsqueda de anticuerpos pretransfusión. Panel Panocell

Búsqueda de anticuerpos postransfusión. Panel Identisera

22 Rev Mex Med Tran, Año 7, Núm. 1 • Enero - Abril, 2014

Para resolver estos casos, el eluído, técnica que nos forma ideal a temperaturas bajas, entre 4 y 27ºC,
ayuda a despegar los anticuerpos pegados en los mientras que los anticuerpos IgG lo hacen mejor
eritrocitos en estudio para su posterior análisis, re- a 37ºC. Esta regla se rompe con algunos anticuer-
sulta en una herramienta muy importante. Estas téc- pos que pueden presentar reactividad con su co-
nicas pueden ser comerciales, o bien, realizadas con rrespondiente antígeno tanto a 4ºC como a 37ºC.
el uso de reactivos comunes en el laboratorio, y así
tener un fácil control de ellas una vez que se estable- c) Fuerza iónica. Cuando los eritrocitos se encuen-
cen de rutina: tran suspendidos en solución salina, los iones
de Na+ y Cl- neutralizan parcialmente las cargas
opuestas entre el antígeno y el anticuerpo, por lo
Técnicas de elución que el aumento o la disminución de la cantidad de
Las técnicas de elución resultan de gran ayuda en iones en el medio favorece o disocia la reacción
el laboratorio de Inmunohematología, pues son una antígeno-anticuerpo.
herramienta para la resolución de problemas en este
campo. Cuando nos enfrentamos a muestras con un En las técnicas de elución se modifica alguna de las
Coombs directo positivo y necesitamos saber cuál es variables antes mencionadas para disociar las inmu-
el anticuerpo que se ha unido al eritrocito, o cuando noglobulinas fijadas a la membrana eritrocitaria, con
necesitamos conocer el fenotipo de eritrocitos que lo que se rompen los enlaces no covalentes.
están cubiertos por anticuerpos, es necesario reali-
zar alguna técnica de elución, mediante las cuales se Existen dos diferentes tipos de elución:
pueden despegar moléculas de anticuerpos unidos 1) Elución para estudiar antígenos
a la membrana eritrocitaria, las cuales impiden la de- 2) Elución para estudiar anticuerpos
terminación adecuada de grupo AB0-Rh. A continuación detallaremos algunos puntos de
Asimismo, con ellas es posible la fenotipificación cada una.
de los diferentes sistemas sanguíneos en pacientes
con Coombs directo positivo. Además, con los elu- Elución para estudiar antígenos.- Cuando los glóbu-
díos es posible identificar los anticuerpos unidos con los rojos se encuentran recubiertos con inmunoglo-
el fin de hacer una adecuada selección del concen- bulinas pueden aglutinarse de forma espontánea, lo
trado eritrocitario que deba transfundirse. que suele dar origen a resultados falsos positivos en
su tipificación, en especial cuando se requiere hacer
Para estas técnicas se hacen modificaciones fisi- la prueba de D débil o la fenotipificación de ciertos
coquímicas al medio de reacción, de esta manera antígenos en las que los eritrocitos deben llevarse
se realiza la separación de los anticuerpos con sus hasta la prueba de Coombs. El tipo de elución no
correspondientes antígenos. Dicha reacción antíge- debe dañar la membrana eritrocitaria, de tal manera
no-anticuerpo es firme pero reversible, pues los en- que una vez que hemos hecho el procedimiento, el
laces que mantienen unidas a estas dos estructuras anticuerpo del eritrocito pueda ser fenotipificado sin
son relativamente débiles: enlaces iónicos, puentes riesgo mayor de resultados falsos positivos.
de hidrógeno, fuerzas de Van der Waals y enlaces
hidrofóbicos. Este tipo de enlaces se pueden rom-
per con las variaciones en el medio, entre las que
se encuentran:

a) Cambios de pH. Desde 1964, Hughes-Jones y

colaboradores comprobaron que el pH ideal para
que se lleve a cabo la reacción antígeno-anticuer-
po es entre 6.5 y 7. Sin embargo, es importante Eritrocitos Coombs
destacar que algunos anticuerpos como el Anti-M directo Positivo
o el Anti-I reaccionan mejor en un pH ácido.
De igual manera, para realizar una autoadsorción (en
b) Temperatura. De manera general, se puede de- pacientes que no han sido recientemente transfun-
cir que los anticuerpos de tipo IgM reaccionan de didos), y los eritrocitos autólogos tienen un Coombs

Rev Mex Med Tran, Año 7, Núm. 1 • Enero - Abril, 2014 23

directo positivo, se requiere hacer este tipo de elu- tivamente rápidas (aproximadamente 30 minutos)
ción con el fin de dejar la membrana eritrocitaria con el resultado final de la identificación de anticuer-
sus sitios de unión libres para que se adsorban los pos se obtiene en dos horas +/- 20 minutos.
autoanticuerpos del suero. b) Elución ácida o elución EDTA-glicina ácida. Si
bien aún no está completamente definido por qué
De este tipo de elución existen los siguientes métodos: se despegan los anticuerpos a pH bajo, se piensa
que se debe a la disociación de uniones electros-
a) Calor. Se utiliza cuando los eritrocitos están re- táticas en las proteínas y al cambio que sufren és-
cubiertos por IgG. Los glóbulos rojos deben ser tas en su estructura terciaria. Al igual que con los
incubados a 45ºC durante 10 min. disolventes orgánicos, éste es un buen método
b) Difosfato de cloroquina. Para la disociación de para la recuperación de autoanticuerpos y aloan-
IgG de la membrana eritrocitaria. Por la eficacia ticuerpos de tipo IgG. El tiempo para obtener el
de este método así como por el volumen de célu- resultado de la especificidad del anticuerpo pre-
las que se pueden trabajar, es una buena opción sente en la muestra estudiada es de aproximada-
para realizar técnicas de autoadsorción aunque mente 30-40 minutos.
también se utiliza para tipificar los diferentes sis- c) Elución por calor. Este tipo de elución se reco-
temas sanguíneos. Es importante mencionar que mienda cuando el anticuerpo involucrado es de
los antígenos del sistema Rh, Jka y Jkb pueden tipo IgM o cuando se trata de anticuerpos del sis-
expresar cierto debilitamiento o desnaturalización. tema AB0 causantes de enfermedad hemolítica
El tiempo máximo de tratamiento es de dos horas. perinatal. El resultado final de la identificación de
c) EDTA-glicina ácida. Es un método rápido para la anticuerpos lo tenemos en 2 horas +/- 20 minutos.
disociación de IgG. En un tiempo máximo de cin-
co minutos, los eritrocitos que inicialmente tenían Saber utilizar estas técnicas de elución en el momen-
un Coombs directo positivo, pueden usarse para to adecuado y con las muestras adecuadas es una
realizar autoadsoción y/o tipificación sanguínea. gran ayuda para el personal de laboratorio para to-
Por este método se desnaturalizan los antígenos mar la decisión más apropiada sobre el concentrado
del sistema Kelly, Vg. y Er. eritrocitario que se debe transfundir a un paciente.

Elución para estudiar anticuerpos.- El objetivo de Bibliografía

este tipo de elución es separar los anticuerpos unidos 1. Manual Técnico de la AABB. Ed. aabb17º Edición. 2012
a la membrana eritrocitaria sin que sean dañados, de 2. Manual Técnico de la AABB. Ed. aabb12º Edición. 1997
tal modo que el eluído (también llamado eluato) per- 3. Serologic Problem Solving. Sally V. RudmannEd. aabb1ª Edi-
mita el estudio y así definir cuál es la especificidad ción.2005
del anticuerpo. La membrana puede ser dañada físi- 4. Trabajo Diario de muestras de pacientes del Banco Central de
camente por calor, ultrasonido, congelamiento-des- Sangre del CMN SXXI IMSS
congelamiento, detergentes o solventes orgánicos; 5. Aplicación y práctica de la Medicina transfusional. Primera edi-
los enlaces de los complejos antígeno-anticuerpo se ción. 2013.
pueden romper por variaciones en el pH. 6. Petz LD, Garraty G. Immune Hemolytic anemias, 2nd ed. New-
York: Churchill Livingstone. 2004:61-115
Al igual que en la elución para estudiar antígenos, 7. Inmunohematología. Recomendaciones de expertos de la
Asociación Mexicana de Medicina Transfusional A.C. 2010
existen diferentes métodos de elución para estudiar
anticuerpos, de los cuales describiremos solo algu-
nos de los que actualmente se utilizan más.

a) Disolventes orgánicos. Este tipo de elución es

adecuado para las pruebas de antiglobulina direc-
ta positiva por autoanticuerpos calientes o aloan-
ticuerpos calientes (IgG). La temperatura a la que
se trabaje la técnica depende del tipo de disolven-
te orgánico que se utilice y será de 37ºC o 56ºC.
A pesar de que estas técnicas de elución son rela-

24 Rev Mex Med Tran, Año 7, Núm. 1 • Enero - Abril, 2014