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    VALTEK DIAGNOSTICS

    Phone: + (562) 238 2860


    FAX: + (562) 238 0128
    Las Dalias 1900 - uoa
    Santiago CHILE
    E-mail: [email protected] WEB site: http:/ / www.valtekdiagnostics.com
    BILIRRUBINA TOTAL - DMSO
    Set de reactivos para la determinacin colorimtrica de bilirrubina total en suero o plasma
    segn Walters y Gerarde.
    Para uso en el diagnstico in vitro.
    SIGNIFICANCIA CLINICA
    La bilirrubina es producto de la degradacin de la
    hemoglobina en el sistema retculo endotelial, la cual es
    transportada al hgado unida a albmina. Esta bilirrubina,
    conocida como bilirrubina indirecta o libre, es insoluble en
    agua y es conjugada en el hgado con cido glucurnico,
    siendo excretada hacia el intestino por va biliar, donde es
    metabolizada por la flora bacteriana. La bilirrubina total
    corresponde a la suma de la bilirrubina indirecta o libre, y la
    bilirrubina conjugada o directa. Un aumento en la bilirrubina
    total es producto de una obstruccin en la va biliar; hepatitis;
    cirrosis; enfermedad hemoltica y algunas deficiencias
    enzimaticas hereditarias. La bilirrubina indirecta o libre, se
    encuentra elevada por causas pre-hepticas, tales como
    enfermedades hemliticas, o bien problemas metablicos
    intra-hepticos que involucran el proceso de conjugacin. En
    neonatos es importante el control de la bilirrubinemia, ya que
    la bilirrubina indirecta o libre es neurotxica.
    FUNDAMENTOS DEL METODO
    La mayora de los mtodos utilizados para la determinacin
    de bilirrubina utilizan cido sulfanlico diazotizado,
    formndose azobilirrubina coloreada. En medio acuoso slo
    reacciona la bilirrubina conjugada o directa; para medir la
    bilirrubina total es necesario la incorporacin de un
    acelerador, inicialmente se utiliz metanol (Malloy-Evelyn), y
    posteriormente benzoato de sodio (Jendrassic-Grof). El
    metodo VALTEK se basa en la modificacin propuesta por
    Walters y Gerarde, en la cual se utiliza como acelerador
    DMSO. La azobilirrubina formada es medida
    fotomtricamente entre 540 y 600 nm, siendo la intensidad
    del color formado directamente proporcional a la cantidad de
    bilirrubina directa o total presente en la muestra.
    REACTIVOS
    Conservados entre 2 y 8 C., estables hasta la fecha de
    caducidad indicada en la etiqueta.
    Preparacin reactivo de trabajo : Agregar al momento de
    utilizar, por cada 10 ml. de reactivo DMSO, 1 gota de
    reactivo nitrito de sodio ( o 0.05 ml.), mezclar. Estable por 24
    horas protegido de la luz.
    Composicin reactivo de trabajo:
    Acido sulfanlico 30 mM
    HCl 165 mM
    DMSO 5000 mM
    Nitrito de sodio 0.50 mM
    MUESTRAS
    Utilizar suero o plasma libre de hemlisis. Realizar el ensayo
    dentro de un plazo no mayor a las 2 horas, en caso contrario
    refrigerar la muestra entre 2 y 8 C., o bien congelar a -20
    C. para perodos mas largos. Conservar protegidas de la luz.
    EQUIPO REQUERIDO
    Espectrofotmetro o fotocolormetro de filtros capaz de medir
    absorbancias a 560 nm (rango 540-600 nm); timer, pipetas y
    bao termorregulado a 37 C.
    TECNICA
    Desconocido Blanco reactivo
    Muestra (ml) 0.10 ----
    Reactivo trabajo (ml) 1.00 1.00
    Agua destilada (ml) ---- 0.10
    Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente o 6
    minutos a 37 C., llevando a cero el instrumento con el
    blanco reactivo. El color resultante es estable por 30
    minutos.
    CALCULOS
    Para obtener las concentraciones de bilirrubina total, debe
    realizarse una curva de calibracin o bien utilizar un standard
    de concentracin conocida (con el cual se procede en la
    forma descrita para las muestras en la tcnica de bilirrubina
    total). El factor o la curva obtenidos con el reactivo para
    determinacin de bilirrubina total son vlidos para la
    determinacin de bilirrubina directa, y se recomienda verificar
    su validez con cada nuevo kit de bilirrubina total.
    FACTOR = Concentracion Standard
    Abs.Standard
    Concentracion muestra (mg%) = FACTOR x Abs. Muestra
    OBSERVACIONES
    La reaccin es lineal hasta 20 mg%
    Para muestras peditricas, el volumen de muestra
    puede ser disminudo a la quinta parte. El resultado
    obtenido se multiplica por 5.
    Es recomendable el realizar un blanco para cada
    muestra, en tal caso se utiliza solamente reactivo
    DMSO.
    RANGOS DE REFERENCIA
    Bilirrubina Total : 0.1 a 1.2 mg%
    BIBLIOGRAFIA
    1. Malloy H.T. & Evelyn K.A., J.Biol.Chem.119(481),1937.
    2. Jendrassic L. & Grof P., Biochem Z. 291(81),1938.
    3. Walters M. I. & Gerarde H. W., Microchem J.15(231)1970.

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