Constituição do M.O.C.

Todos os seres vivos são constituídos por células. Dadas as suas reduzidas
dimensões para estudar as células usa-se o MOC.
Ocular
 
Revólver

Tubo ou canhão

Objetiva
Coluna ou braço
Mesa ou platina

Parafuso Condensador e
micrométrico diafragma

Base ou pé Fonte de luz

Parte mecânica Parte ótica

 Constituição do Microscópio ótico composto (M.O.C.)

Parte Ótica Parte Mecânica

Sistema de Sistema de Sistema de Sistema de

Ampliação Iluminação Focagem Suporte

- Objetiva - Fonte de iluminação - Parafuso macrométrico - Base ou Pé

- Ocular - Diafragma - Parafuso micrométrico - Coluna ou Braço
- Condensador - Canhão ou Tubo
- Revólver
- Platina
- Pinças
Constituição do Microscópio ótico composto (M.O.C.)
Parte mecânica Função

Base ou Pé Suporte do MOC

Peça fixa à base na qual estão aplicados os

Coluna ou Braço outros elementos.
Sistema de suporte

Placa onde se colocam as preparações a

observar.
Platina Janela - permite a passagem da luz que
ilumina a preparação
Parafusos dentados - deslocação da platina
Suporta os sistemas de lentes; Na
Canhão ou Tubo extremidade superior suporta as oculares
Na parte inferior suporta o revólver
Revólver Suporte giratório das objetivas- permite a
troca de objetivas.
Sistema de focagem

Permite movimentos verticais de grande

Parafuso macrométrico
amplitude. Focagem rápida.

Permite movimentos verticais de pequena

Parafuso micrométrico amplitude. Otimiza a focagem.
Constituição do Microscópio ótico composto (M.O.C.)

Parte ótica Função

Face plana – luz natural indireta

Espelho Face côncava – luz artificial
Fonte
Sistema de iluminação

luminosa
Lâmpada Intensidade variável

Concentra os raios emitidos pela fonte luminosa,

Condensador fazendo-os incidir na preparação

Regula a intensidade luminosa por variação do

Diafragma diâmetro de abertura.
Cada objetiva é um sistema de lentes convergentes –
Sistema de ampliação

Objetivas (situam-se no frontal (próxima da platina) e corretoras

revólver)
Ampliam a imagem do objeto a ser observado e
projeta-a em direção à ocular. (imagem real)
Ocular(situam-se na
parte superior do Amplia a imagem fornecida pela objetiva (imagem
canhão) virtual)
 Poder de ampliação
A ampliação é o aumento da imagem em relação ao objeto.
Resulta do produto entre o poder de ampliação da ocular e o
poder de ampliação da objetiva;
A ampliação deve ser acompanhada de um aumento do poder
de resolução.

Ampliação total = ampliação objetiva X ampliação ocular

 Objetivas
As objetivas apresentam diversa informação…

Ampliação Cores
4X ou 5X Vermelho
10X Amarelo
40 X Azul claro
100X Branco
Imersão – óleo
 Utilização do M.O.C.
Cuidados Gerais:
Transporte-o sempre com o máximo cuidado (com ambas as mãos, uma
mão sob a base e outra segurando o braço);
Coloque-o na mesa sempre bem afastado dos rebordos desta;
Proteja-o relativamente a líquidos, humidades e vapores de reagentes;
 não deixar que a lente frontal das objetivas toque na lamela ou na lâmina
das preparações.
 Se durante a observação tiver utilizado óleo de imersão (só no caso de
utilizar a objetiva de imersão - 100 X deve limpar a objetiva e a lamela.) 

Antes de o arrumar no armário:

 desligue a fonte luminosa;
 desça completamente a platina e retire a preparação;
coloque a objetiva de menor ampliação em posição de observação.
 certifique-se que o microscópio fica limpo e tape-o com a sua proteção
7
 Utilização do M.O.C.
Posição do Observador:
O observador deve estar sentado;
Se o M.O.C. possuir uma ocular, deve olhar por ela com o olho esquerdo,
mantendo os dois olhos abertos;
Se o M.O.C. tiver duas oculares, deve olhar por ambas.

Iluminação:
 Verificar se as lentes e o espelho estão limpos.
 Confirmar se a objetiva de menor ampliação está no prolongamento do
tubo.
 Verificar se o diafragma está aberto. No entanto, este deve ser usado de
acordo com o objeto a observar, de forma a obter-se a melhor imagem.
 Iluminar o campo do microscópio – ligar a luz
 Utilização do M.O.C.

Focagem:
1. Coloque na platina a preparação, fixando-a com as pinças.
2. Desloque a preparação de forma a que o objeto a observar fique centrado na “janela” da
platina;
3. Verifique que tem colocada em posição de observação a objetiva de menor ampliação.
Observe lateralmente, e rodando o parafuso macrométrico, aproxime a platina da objetiva.
4. Observando pela ocular, rode lentamente o parafuso macrométrico para afastar a platina
da objetiva até obter a primeira imagem;
5. Utilize o parafuso micrométrico para obter uma imagem focada.
6. Utilize o diafragma para ajustar a intensidade luminosa.
7. Rode o revolver de forma a colocar a objetiva de ampliação imediatamente superior.
8. Ajuste a focagem apenas como parafuso micrométrico (os movimentos devem ser feitos
de forma cuidadosa, qualquer erro pode levar a partir a preparação e a causar danos na
objetiva).
9. Ajuste a iluminação com o diafragma e condensador.
10. Se pretender aumentar mais a imagem, repita os passos 7, 8 e 9, usando objetivas com
maior poder de ampliação.
9
 Utilização do M.O.C.

Registo das observações:

O registo das observações é feito a lápis em papel branco, onde devem ser
colocados os seguintes dados:

 Desenho do material
 identificação do material que está a ser observado.
 ampliação total utilizada (ampliação da objetiva x ampliação da ocular)
 meio de montagem utilizado.

10
 Poder de Resolução

O poder de resolução ou poder resolvente é a

capacidade que as lentes têm de fornecer imagens
separadas de objetos próximos (ex.: dois pontos).

A distância mínima a que devem estar dois pontos

para que sejam observados separadamente
designa-se limite de resolução.

O olho humano tem um limite de resolução de 0,1mm = 100um

 Limite de resolução do MOC

Metro (m) = 1
Milímetro (mm) = 10-3m
Micrómetro (μm) = 10-6m
A menor distância que separa dois pontos designa-se limite de Nanómetro (nm) = 10-9m
resolução. Angstrom (A) = 10-10m
NOTA: É importante salientar a diferença entre poder de resolução que permite
maior nitidez da imagem e poder de aumento isto é ampliação.

Se ampliar várias vezes uma mesma fotografia comum, a imagem aumenta, mas
os pontos separados por menos de 100 µm, 0,1 mm, continuarão a aparecer como
um ponto só, borrado, pouco nítido. É possível, portanto, aumentar a ampliação,
sem contudo melhorar a resolução.

Os microscópios permitiram ao homem observar imagens

com ampliação maior e maior resolução.

13
Como se faz uma preparação temporária?

2. Montagem de preparações

Deitar com um conta-gotas

uma gota de água no centro de
uma lâmina limpa;
 Colocar sobre a gota de água
o objeto a observar;
 Encostar a lamela,
obliquamente à lâmina, de modo
a fazer um ângulo de 45°;
 Deixar cair, lentamente, a
lamela apoiada a uma agulha de
dissecação;
 Retirar o excesso de água com
auxílio de papel de filtro;
 Fazer uma pequena pressão
para eliminar as bolhas de ar.
 Tarefa 2
Material: papel de revista ou jornal, material de microscopia e microscópio.
Procedimento:

1. Recorte a letra F de um pedaço de jornal ou revista e coloque-a numa lâmina.

2. Deite uma gota de água sobre a letra.
3. Cubra com uma lamela, seguindo a técnica adequada.
4. Proceda à focagem, começando por utilizar a objetiva de menor ampliação.
5. Desloque a preparação em diferentes sentidos.
6. Continue a observação na objetiva 10x e de 40X.
7. Faça um esquema da imagem observada na objetiva de 4X, 10 e 40X e compare-a
com o objeto (letra F recortada) quanto à dimensão e posição.
8. Desloque a preparação em diferentes sentidos. Regista o que observas.
9. Tira uma conclusões.
 No círculo da figura 2, desenhar a imagem
da letra ao microscópio.
Desenhar, na figura 1, a letra na posição em que se
encontra na platina

Figura 1- Preparação.

Figura 2. Imagem obtida ao microscópio

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 Desenho na objetiva de 4X 10X e 40X

Discussão:
A imagem microscópica é ampliada, duplamente invertida (ou simétrica e invertida) e

virtual.
A imagem desloca-se em sentido inverso à preparação microscópica.
(Dado que a imagem é invertida, deve movimentar-se a preparação no sentido contrário aquele
em que desejamos movimentar a imagem).
A área de observação da preparação (campo do MOC) é inversamente proporcional à ampliação
utilizada. 18
 Características da imagem do MOC
Ampliada - primeiro pela objetiva e depois pela
ocular;
 Virtual – fornecida pela objetiva à ocular e desta
ao observador;
 Simétrica
 Duplamente invertida –De cima para baixo e da
direita para a esquerda
Por este motivo deve movimentar-se a preparação
no sentido contrário àquele que desejamos
movimentar a imagem.
 Medida do campo do MOC

Campo do MOC - é inversamente proporcional à ampliação utilizada.

Quanto maior a ampliação utilizada menor a área observada , mas maior o pormenor
 Tarefa 3
Material: dois cabelos, material de microscopia e microscópio.
Procedimento:
1. Sobre uma lâmina, cruze os cabelos.
2. Observe ao microscópio e foque utilizando objectivas com diferentes
poderes de ampliação.
3. Observa nitidamente os 2 cabelos ao mesmo tempo?
4. Compare o que observa em pequena, média e grande ampliação.

Discussão:
Quando utilizámos a objetiva de menor ampliação (4x), tivemos a oportunidade de
focar com sucesso os dois fios, ajustando o parafuso micrométrico.

No entanto, quando utilizámos a objetiva de ampliação intermédia (10x) e 40X já não nos
foi possível focar os dois fios, uma vez que eles se encontravam em planos diferentes.

A profundidade do campo diminui à medida que se aumenta a ampliação.

 Técnicas de microscopia ótica
Técnicas de microscopia ótica
As células, além das suas pequenas dimensões, não apresentam contraste
entre os seus constituintes (hialinas);
A observação microscópica exige a aplicação de diversas técnicas de
preparação e coloração do material biológico que permitem uma melhor
visualização dos seus componentes;
O material deve estar imerso num líquido – meio de montagem.

2 tipos de preparações:
Temporárias Definitivas

Observação de material vivo Observação de material não vivo

Curto período de tempo Duradouras

Destruição por evaporação do meio de

Técnicas complexas, são mais caras
montagem e degradação das células
Como se faz uma preparação temporária?

2. Montagem de preparações

Deitar com um conta-gotas

uma gota de água no centro de
uma lâmina limpa;
 Colocar sobre a gota de água
o objeto a observar;
 Encostar a lamela,
obliquamente à lâmina, de modo
a fazer um ângulo de 45°;
 Deixar cair, lentamente, a
lamela apoiada a uma agulha de
dissecação;
 Retirar o excesso de água com
auxílio de papel de filtro;
 Fazer uma pequena pressão
para eliminar as bolhas de ar.
Técnicas de preparação de material biológico
Meio de Montagem:
Meio liquido onde o material biológico está imerso;

Técnicas de preparação do material biológico:

Objetivo: obter uma camada fina de material para ser observado

Técnica do esmagamento
Utiliza-se quando existe uma fraca aderência entre as células do tecido a
observar;
1. Coloca-se um pequeno fragmento do tecido entre a lâmina e a lamela
2. Pressiona-se com o polegar.
3. O tecido espalha-se, formando uma camada fina que é facilmente
atravessada pela luz.
Técnicas de preparação de material biológico
Esmagamento

27
Técnicas de preparação de material biológico

Técnica de dissociação
Permite isolar os diferentes elementos morfológicos que constituem os
tecidos ou órgãos.
Pode ser mecânica, por intermédio de agulhas de dissecção, ou química, por
intermédio de reagentes.
Técnicas de preparação de material biológico
Técnica do esfregaço
Utiliza-se quando as células a observar estão
em meio líquido;
1. Coloca-se uma gota do material biológico
na extremidade de uma lâmina limpa e
seca;
2. Encosta-se ao material o bordo de uma
lâmina, com a inclinação de 45°;
3. Desloca-se ao longo da lâmina horizontal.
Técnicas de preparação de material biológico

Técnicas de coloração

Quando há necessidade de pôr em evidência certas estruturas celulares do

aspeto uniforme em que o citoplasma se apresenta;

Os corantes utilizados em preparações temporárias são denominados

corantes vitais, pois em baixa concentração não matam a célula, podendo ser
utilizados em células vivas.

Corante Estrutura
Água iodada Ou Núcleo; parede celular,
soluto de lugol amido
Azul-de-metileno Núcleo
Vermelho neutro Vacúolos
Eosina Citoplasma
Orceína acética Cromossomas
 Técnicas de preparação de material biológico
Os corantes podem ser aplicados por 2 técnicas:

Coloração por imersão Coloração por irrigação

O corante é utilizado como meio de Utilizada quando se pretende substituir o

montagem. meio de montagem de uma preparação
O material fica imerso durante temporária sem a desmontar.
alguns minutos no corante
1.Coloca-se uma gota do corante num dos
selecionado bordos da lamela.
2.Aspira-se do lado oposto, com papel de
31
filtro.
Técnicas citológicas utilizadas na obtenção de preparações definitivas

Sequência de técnicas complexas

1. Colheita – Obtenção do material que se pretende observar
2. Fixação – Paragem rápida de toda a atividade celular vital para estabilizar a
estrutura celular.
utilização de agentes físicos (calor ou frio) e químicos (álcool, ácido acético)
3. Desidratação – Eliminação da água dos tecidos
imersão em soluções de álcool de concentração crescente;
4. Inclusão – introdução do material em parafina que penetra nas células e as endurece
para facilitar o corte;
Técnicas citológicas utilizadas na obtenção de preparações definitivas

5. Corte – O bloco de parafina é cortado

num micrótomo- cortes muito finos.
6. Colagem – os cortes são colados numa
lâmina.
7. Desparafinação - remoção da parafina
através de banhos de xilol
8. Coloração - através de corantes para
diferenciar os constituintes celulares.
9. Montagem – colocação sobre o corte de
um meio de montagem (resinas) e lamela.
 Microscópio óptico composto (MOC)

Células da epiderme do bolbo da cebola:

 Microscópio óptico composto (MOC)

Células de elódia:
 Microscópio óptico composto (MOC)

Células da mucosa bucal:

 Microscópio óptico composto (MOC)
Seres vivos de uma infusão: