Produção de Enzimas Por Processos Fermentativos

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE
CENTRO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLOGIA

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA E
QUMICA INDUSTRIAL
Produo de Enzimas por Processos

Fermentativos
Isaac de Araujo Matos
07 de Abril de 2015
So Cristvo-SE
Bibliografia recomendada
Biotecnologia Industrial
Processos
Fermentativos e
Enzimticos
,Vol 3, Editora Edgard
Blcher LTDA
Enzimas em Biotecnologia
Produo, Aplicao e Mercado,
Editora Intercincia
ENZIMAS
Definio - so protenas com atividade cataltica

Geraldo Lippel SantAnna Jr
Ribozima RNA com

atividade cataltica
Nobel de Qumica-1968
Sidney Altman
Thomas Cech
Enzimas (natureza proteica)
Funo - Catalisar reaes

Energia de Ativao
COMO?
Estrutura
Gly-Ala-Leu-Ile-Pro-Phe-Gly-Ala
Ligao
Peptdica
Estrutura
APLICAES
Produo de Alimentos
Para que produzir

Enzimas?
Anlises Clnicas
Frmacos
Cosmticas
Industria de papel e
celulose
Biodiesel
Produo Industrial de enzimas

Fermentao
Semi-slida
Submersa
Superfcie do
substrato
Em meio ao
substrato
> risco contaminao

> espao
< rendimentos
Beneficiou-se
Instrumentao
Controle
Fermentao Submersa
Os processos que empregam fermentao submersa
podem sem divididos em duas classes:
UPSTREAM
(a montante)
DOWNSTREAM
(a jusante)
Fermentao
Cultura estoque
Crescimento em
frascos agitados
Pr-inculo
em
fermentador
UPSTREAM
Preparo do meio
Esterilizao
Fermentador
principal
Separao
DOWNSTREAM
Concentrao
Purificao
Acabamento
Fluxograma simplificado do processo fermentativo submerso
Processos upstream
Cultura estoque
Qual enzima ser
produzida?
Quais microrganismo
disponveis?
FUNGO
BACTRIA
LEVEDURA
Aspergillus niger
Micrococcus luteus
Catalase
Aminoptidase
Glicoamilase
Catalase
Saccharomyces
cerevisiae
Invertase
Origem do Microrganismo
Linhagem
Selvagem
Solo
gua
Ar
Vegetais
Fezes
Modificada
Gentica
Clssica
Biologia
Molecular
Cultura estoque
Caratersticas dos microrganismo
produo de enzimas:
necessrias
Seguro do ponto de vista biolgico.

Elevada capacidade biossinttica e excretora de
enzimas.
Ser adaptado presso osmtica, temperatura e fora
inica do meio.
Ser tolervel a substncias do meio.
Cultura estoque
Crescimento em
frascos agitados
Pr-inculo
em
fermentador
UPSTREAM
Preparo do meio
Esterilizao
Fermentador
principal
Separao
DOWNSTREAM
Concentrao
Purificao
Acabamento
Cultura
estoque
Crescimento em
frascos agitados
Pr-inculo em
fermentador
B1
B1
Inoculao com a
cultura estoque
B2
Preparo do Meio
Fornecer os nutrientes e condies necessrias
fermentao.
Fonte de carbono
Fonte de nitrognio
Acares
(NH4)2SO4
Glicose
NaNO3
Sacarose
Uria
Amilceos
Extrato de levedura
Lignocelulsicas
Preparo do Meio
pH
Crescimento celular
Elevado rendimento
No Deteriorar a enzima
As concentraes de nutrientes e o pH devem ser
otimizadas por mtodos estatstico
Cultura estoque
Crescimento em
frascos agitados
Pr-inculo
em
fermentador
UPSTREAM
Preparo do meio
Esterilizao
Fermentador
principal
Separao
DOWNSTREAM
Concentrao
Purificao
Acabamento
Esterilizao
Maioria dos processos empregam cultura pura.
Condies estreis.
Substratos para a
confeco do meio
Cmeras
Temperatura
Meios Lquidos
Biorreator
Tempo
Vasos separados
Esterilizao
Esterilizao no prprio fermentador.
Vapor
Saturado
Serpentinas ou
camisas
Indireto
Difusor com
agitao
Direto
Diluio
Esterilizao
A temperatura de esterilizao 121C.
Nutrientes termossensveis
Cuidados
Reao de Maillard
Esterilizao
Descontnua
(batelada)
Tempo grande
Contnua
Aquecimento e esfriamento
praticamente instantneo
Para processos aerbios o ar deve ser esterilizado antes

de adentrar no biorreator
Cultura estoque
Crescimento em
frascos agitados
Pr-inculo
em
fermentador
UPSTREAM
Preparo do meio
Esterilizao
Fermentador
principal
Separao
DOWNSTREAM
Concentrao
Purificao
Acabamento
Fermentador principal
100 a 500L
50000 L
Durante etapas de transferncia observar:
Contaminao (bactrias, fungos)
Infeco por bacterifagos
Mutantes de menor eficincia
O menor nmero possvel de transferncias
Quantidade de inculo de 1 a 5%
Sistema de Agitao
Tubulao para
meio de cultura
Compressor
Tanque Reator
Sistema de
Monitorao
Sondas Sensoras
Camisa Trmica
20 a 300 m2
Aerador Submerso
Ao Inoxidvel
Vantagens da Fermentao submersa

Facilidade no controle de variveis fsico-qumicas
Eficincia na absoro de nutrientes e metablitos
Tempo do processo
Produtividade
Desvantagem
Custo devido a agitao e aerao
Principalmente em meios viscosos e de
reologia complexa
Operao da Fermentao Submersa

Batelada simples
Problemas de inibio pelo

substrato ou produto ou metablitos
Batelada alimentada
Cultura contnua
Vantagens
Longos Perodos de operao
Inexistncia de tempos improdutivos
Tempo de
durao 30 a 150
horas
Desvantagens
Baixa concentrao da enzima
Alto risco de contaminao
Degenerao da linhagem microbina
Parmetros de Controle
pH
Temperatura
[O2]
Garantir condies
timas
Microrganismo
Enzima
Processos Aerados
Aerao Natural
O2 provem do ar ambiente
(fermentao semi-slida)
Aerao Natural
O2 introduzido
borbulhando-se ar, O2, ou
uma mistura de ambos
Aumento
rendimento (TM)
Cultura estoque
Crescimento em
frascos agitados
Pr-inculo
em
fermentador
UPSTREAM
Preparo do meio
Esterilizao
Fermentador
principal
Separao
DOWNSTREAM
Concentrao
Purificao
Acabamento
Processos upstream
Separao
Aps a fermentao temos uma
mistura de clulas e o meio de cultura
As enzimas podem ser
intra ou extracelulares
A maioria so extracelulares
Porm existem enzimas extracelulares de
grande importncia industrial
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Para processos aerbios o ar deve ser esterilizado antes

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Problemas de inibio pelo

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