UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA

CENTRO DE CIÊNCIAS NATURAIS E EXATAS

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM AGROBIOLOGIA

GABRIEL STRECK BORTOLIN

ESTUDO DA PROMOÇÃO DA GERMINAÇÃO DE SEMENTES E

DESENVOLVIMENTO INICIAL EM Paspalum regnellii Mez.

Santa Maria, RS
2016
 GABRIEL STRECK BORTOLIN

ESTUDO DA PROMOÇÃO DA GERMINAÇÃO DE SEMENTES E

DESENVOLVIMENTO INICIAL EM Paspalum regnellii Mez

Dissertação apresentada ao Curso de Mestrado do

Programa de Pós-Graduação em Agrobiologia,
Área de Concentração em Agrobiologia, da
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM, RS)
como requisito parcial para obtenção do grau de
Mestre em Agrobiologia

Orientador: Prof. Dr. Antonio Carlos Ferreira da Silva

Santa Maria, RS
2016
 GABRIEL STRECK BORTOLIN

ESTUDO DA PROMOÇÃO DA GERMINAÇÃO DE SEMENTES E

DESENVOLVIMENTO INICIAL EM Paspalum regnellii Mez

Dissertação apresentada ao Curso de Mestrado do

Programa de Pós-Graduação em Agrobiologia,
Área de Concentração em Agrobiologia, da
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM,
RS) como requisito parcial para obtenção do grau
de Mestre em Agrobiologia

Aprovado em 08 de março de 2016

_________________________________________________
Antonio Carlos Ferreira da Silva, Dr.
(Presidente/Orientador)

__________________________________________________
Raquel Stefanello, Dra.
(UFSM)

__________________________________________________
Mauricio Marini Köpp, Dr.
(Embrapa CPPSul)

Santa Maria, RS
2016
 A minha avó,
Emília Martini Bortolin
(in memorian)

Dedico
 AGRADECIMENTOS

A Deus por tudo.

Aos meus pais, Leandro e Janice, e meu irmão Eduardo, por terem me dado todas as
condições para trilhar este caminho, tendo-me apoiado em todos os momentos.

Ao meu orientador Professor Dr. Antonio Carlos Ferreira da Silva, pela contribuição na minha
formação, por sua orientação, paciência e disponibilidade na realização deste trabalho.

Ao Dr. João Carlos Pinto Oliveira, por ter incentivado-me a continuar os estudos, pela sua
coorientação durante o Mestrado e por seus ensinamentos desde os tempos de graduação.

Aos professores e colegas do PPG Agrobiologia, em especial a Maria Medianeira Saccol

Wiethan, pela ajuda incondicional em todas as etapas desse trabalho e pela amizade e
companheirismo demonstrada durante esses anos.

A Embrapa Pecuária Sul pelo fornecimento das sementes e também pela disponibilidade dos
equipamentos do Laboratório de Análise de Sementes (LABSEM).

A empresa Koppert LTDA pelo fornecimento e disponibilidade das informações a respeito

dos produtos biológicos.

Ao Departamento de Solos da Universidade Federal de Santa Maria, pela concessão da

bancada utilizada em casa de vegetação para instalação do experimento.

A CAPES, pela concessão da bolsa de Mestrado.

A todos aqueles amigos que de alguma forma contribuíram para a realização desse trabalho.

Muito Obrigado!
 "Há homens que lutam um dia e são bons.
Há outros que lutam um ano e são melhores.
Há os que lutam muitos anos e são muito bons.
Porém, há os que lutam toda a vida.
Esses são os imprescindíveis."

(Bertolt Brecht)
 RESUMO

ESTUDO DA PROMOÇÃO DA GERMINAÇÃO DE SEMENTES E

DESENVOLVIMENTO INICIAL EM Paspalum regnellii Mez.

AUTOR: GABRIEL STRECK BORTOLIN

ORIENTADOR: ANTONIO CARLOS FERREIRA DA SILVA

Conhecido vulgarmente por macega do banhado, Paspalum regnellii Mez. é uma gramínea nativa dos
campos sul-brasileiros de ciclo perene, caracterizada como uma forrageira de grande potencial para
alimentação animal. Entretanto, mesmo apresentando-se como um recurso forrageiro de qualidade,
esta espécie ainda apresenta limitantes considerados comuns para espécies forrageiras nativas,
principalmente para os processos de germinação e crescimento inicial. A fim de avaliar a influência do
armazenamento e do peso na qualidade das sementes, foi realizada a separação por peso de dois lotes
de sementes de P. regnellii provenientes de duas coletas (2013 e 2014), resultando em quatro classes
de densidade para cada lote (extra leves, leves, médias e pesadas). Após este processo, as sementes
provenientes de cada classe foram acondicionadas em caixas gerbox e colocadas para germinar em
câmara B.O.D., sendo utilizado delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 2x4. Aos
27 dias após a instalação do teste, foram avaliadas as seguintes variáveis: Primeira contagem, índice
de velocidade, frequência relativa e porcentagem de germinação, bem como a incidência de gêneros
fúngicos. Fez-se também a avaliação da integridade das sementes através do teste de condutividade
elétrica. Com o objetivo de promover o aumento do percentual germinação de P. regnellii, realizou-se
um segundo experimento onde foram avaliadas diferentes metodologias visando à superação da
dormência das sementes. Foram testados três diferentes métodos: Escarificação do tegumento das
sementes com lixa número 180 e embebição em ácido sulfúrico (H2SO4); 2) Embebição das sementes
em água a 60°C; 3) Tratamento com nitrato de potássio (KNO3) e com o bioestimulante Stimulate®.
Após os tratamentos, as sementes foram dispostas em caixas gerbox, e colocadas em câmara B.O.D.,
utilizando-se o delineamento inteiramente casualizado. Foram avaliadas aos 27 dias após a instalação
do experimento as seguintes variáveis: Primeira contagem, índice de velocidade e porcentagem de
germinação. Com o objetivo de avaliar o efeito de Trichoderma na emergência e no crescimento
inicial de P. regnellii, foram testadas crescentes doses de dois produtos biológicos compostos pela
espécie Trichoderma harzianum nas concentrações 2x109 e 5x109 UFC mL-1. O experimento foi
conduzido em casa de vegetação e dividido em duas etapas, sendo a primeira composta por avaliações
de emergência e desenvolvimento inicial de plantas aos 40 dias após a semeadura, e a segunda
composta por avaliações de desenvolvimento de plantas aos 70 dias após a semeadura. A partir dos
resultados obtidos observou-se que as sementes com maior densidade em ambos os lotes (2013 e
2014) apresentaram maior vigor quando comparadas às sementes leves. O nitrato de potássio e o
bioestimulante promoveram aumento nos valores das variáveis primeira contagem, índice de
velocidade e porcentagem de germinação. A partir do tratamento das sementes com trichoderma pode-
se constatar que os dois produtos biológicos avaliados promoveram o desenvolvimento da parte aérea
e do sistema radicular de P. regnellii nas duas etapas de avaliação.

Palavras-chave: Forrageira nativa, Qualidade de sementes, Agentes biológicos.

 ABSTRACT

STUDY OF SEED GERMINATION PROMOTION AND DEVELOPMENT INITIAL

IN Paspalum regnellii Mez.

AUTHOR: GABRIEL STRECK BORTOLIN

ADVISOR: ANTONIO CARLOS FERREIRA DA SILVA

Known commonly by grass waterlogged, Paspalum regnellii Mez it is a native grass of the southern
Brazilian fields of perennial cycle, characterized as a great potential forage feed. However, even
presenting itself as a quality forage resource, this species also presents limiting considered common
for native forage species, especially for the germination and early growth processes. In order to
evaluate the influence of the weight storage and the quality of the seed weight was carried out by
separation of two batches of P. regnellii seed collected from two (2013 and 2014), resulting in four
density grades for each batch (extra light, light, medium and heavy). After this process, the seeds from
each class were placed in gerbox and germinated in B.O.D. chamber being used completely
randomized design in a 2x4 factorial design. At 27 days after the test installation, the following
variables were evaluated: First count, speed index, relative frequency and percentage of germination
as well as the incidence of fungal genera. It is also made to assess the integrity of the seeds through the
electrical conductivity test. In order to promote the increase in the percentage germination of P.
regnellii, there was a second experiment in which we evaluated different methods aimed at
overcoming seed dormancy. Three different methods were tested: scarification of the seed coat seeds
with sandpaper number 180 and soaking in sulfuric acid (H2SO4); 2) Soaking the seeds in water at
60°C; 3) Treatment with potassium nitrate (KNO3) and the biostimulant Stimulate®. After treatment,
the seeds were placed in gerbox and placed in B.O.D. camera, using a completely randomized design.
They were evaluated at 27 days after the experiment installation the following variables: First count,
speed index and percentage of germination. In order to evaluate the effect of Trichoderma on
emergence and early growth of P. regnellii they were tested increasing doses of two biological
products composed by the species Trichoderma harzianum in the 2x109 and 5x109 CFU concentrations
mL-1. The experiment was conducted in a greenhouse and divided into two stages, the first consisting
of reviews of emergence and early development of plants 40 days after sowing, and the second
consisting of plant development assessments at 70 days after sowing . From the results obtained it was
observed that the seeds with the highest density in both batch (2013 to 2014) showed increased vigor
when compared to the seed light. Potassium nitrate and biostimulant promoted increase in the values
of the variables first count, speed index and percentage of germination. From the seed treatment with
Trichoderma can be seen that the two evaluated biological products promoted the development of
shoot and root system of P. regnellii in two stages of evaluation.

Keywords: Native forage, Germination, Biological agents.

 LISTA DE FIGURAS

Artigo 1
Figura 1 - Frequência relativa (%) de germinação de dois lotes de Paspalum regnellii
fracionados nas classes de densidade extra leves, leves, médias e
pesadas............................................................................................................................
29
Figura 2 - Avaliação de condutividade elétrica (CE) em μS.cm-1.g-1 de dois lotes de
Paspalum regnellii (2013 e 2014) fracionados nas classes de densidade extra leves (EL),
leves (L), médias (M) e pesadas (P). Valores representados por letras maiúsculas não
diferem entre as classes, enquanto letras minúsculas não diferem entre os lotes pelo teste
de Tukey a 5%...........................................................................................................
30
Artigo 2
Figura 1 - Resultados de porcentagem (A), primeira contagem (B) e índice de
velocidade de germinação (C) de sementes de Paspalum regnellii Mez escarificadas
através dos métodos físico e químico por períodos de 0, 30, 60, 90 e 120 segundos..........
46
Figura 2 - Resultados de porcentagem (A), primeira contagem (B) e índice de
velocidade de germinação (C) de sementes de Paspalum regnellii Mez embebidas em
água à 60°C por períodos de 0, 30, 60, 90 e 120 segundos..................................................
49
Figura 3 - Resultados de porcentagem (A), primeira contagem (B) e índice de
velocidade de germinação (C) de sementes de Paspalum regnellii Mez em substrato
umedecido com solução composta pelas concentrações de 0, 2,0, 4,0, 6,0, e 8,0 ml.L-1 de
bioestimulante......................................................................................................................
50
Figura 4 - Resultados referentes à porcentagem (A), primeira contagem (B) e índice de
velocidade de germinação (C) de sementes de Paspalum regnellii Mez em substrato
umedecido com solução composta pelas concentrações de 0, 0,2, 0,4, 0,6 e 0,8 g.L-1 de
nitrato de potássio (KNO3)...................................................................................................
52
Artigo 3
Figura 1 - Valores de porcentagem (A) e índice de velocidade de emergência (B) de
Paspalum regnellii aos 30 dias após a emergência provenientes de sementes tratadas
com as doses 0,0; 5,0; 10,0; 15,0 e 20 ml kg-1 de dois produtos biológicos compostos por
Trichoderma harzianum com concentrações de 2x109 e 5x109 UFC mL-1..........................
65
Figura 2 - Valores de massa fresca (A) e seca (B) de parte aérea, fresca (C) e seca (D)
de raiz de Paspalum regnellii aos 40 dias após a emergência provenientes de sementes
tratadas com as doses 0,0; 5,0; 10,0; 15,0 e 20 ml kg-1 de dois produtos biológicos
67
compostos por Trichoderma harzianum com concentrações de 2x109 e 5x109 UFC mL-1.
Figura 3 - Valores de comprimento total (A), área superficial (B), volume (C) e
comprimento de raízes finas (D) de plantas de Paspalum regnellii aos 30 dias após a
emergência sob as doses 0,0; 5,0; 10,0; 15,0 e 20 mL kg-1 de dois produtos biológicos
compostos por Trichoderma harzianum com concentrações de 2x109 e 5x109 UFC mL-1
no tratamento das sementes..................................................................................................
69
Figura 4 - Valores de taxas de aparecimento de folhas (TApF, folhas/perfilho.dia),
alongamento de folhas (TAlF, cm/perfilho.dia), filocrono e taxa de alongamento do
colmo (TAlC, cm/perfilho.dia) de plantas de Paspalum regnellii aos 70 dias após a
emergência sob as doses 0,0; 5,0; 10,0; 15,0 e 20 mL kg-1 de dois produtos biológicos
compostos por Trichoderma harzianum com concentrações de 2x109 e 5x109 UFC mL-1
no tratamento das sementes..................................................................................................
71
Figura 5 - Valores de massa fresca (A) e seca (B) de plantas de Paspalum regnellii aos
60 dias após a emergência sob as doses 0,0; 5,0; 10,0; 15,0 e 20 mL kg-1 de dois
produtos biológicos compostos por Trichoderma harzianum com concentrações de
2x109 e 5x109 UFC mL-1 no tratamento das sementes.........................................................
73
 LISTA DE TABELAS

Artigo 1
Tabela 1 - Peso de mil sementes e porcentagem de umidade de dois lotes de sementes
de Paspalum regnellii Mez (2013 e 2014) fracionadas nas classes de densidade extra
leves, leves, médias e pesadas...................................................................................
23
Tabela 2 - Primeira contagem de germinação (PCG), índice de velocidade de
germinação (IVG) e porcentagem de germinação (PG), de sementes duras (SD) e
mortas (SM) de dois lotes de Paspalum regnellii (2013 e 2014) fracionadas nas classes
de densidade extra leves, leves, médias e pesadas........................................................
24
Tabela 3 - Incidência de gêneros fúngicos (%) associados às classes de densidades de
sementes extra leves (EL), leves (L), médias (M) e pesadas (P) de dois lotes (2013 e
2014) de sementes de Paspalum regnellii germinadas em papel de filtro.......................
26
Tabela 4 - Coeficientes de correlação simples de Pearson (r) entre a densidade das
sementes de Paspalum regnellii com as características avaliadas...................................
27
 SUMÁRIO

INTRODUÇÃO........................................................................................................... 13
REFERÊNCIAS.......................................................................................................... 15
ARTIGO 1: INFLUÊNCIA DO ARMAZENAMENTO E DO PESO
DA SEMENTE SOBRE A QUALIDADE FISIOLÓGICA E
SANITÁRIA DE Paspalum regnellii MEZ......................................................... 18
Resumo............................................................................................................................... 18
Abstract.............................................................................................................................. 19
Introdução.......................................................................................................................... 19
Material e Métodos............................................................................................................ 21
Resultados e Discussão...................................................................................................... 24
Conclusões......................................................................................................................... 34
Literatura citada................................................................................................................. 35
ARTIGO 2: METODOLOGIAS PARA SUPERAÇÃO DE
DORMÊNCIA EM SEMENTES DE Paspalum regnellii
Mez....................................................................................................................... 40
Resumo............................................................................................................................... 40
Abstract.............................................................................................................................. 41
Introdução........................................................................................................................... 42
Material e Métodos............................................................................................................. 43
Resultados e Discussão...................................................................................................... 45
Conclusões.......................................................................................................................... 53
Referências......................................................................................................................... 54
ARTIGO 3: EFEITO DE Trichoderma NA EMERGÊNCIA DE
PLÂNTULAS E DESENVOLVIMENTO INICIAL DE Paspalum
regnellii Mez.................................................................................................. 58
Resumo............................................................................................................................... 58
Abstract............................................................................................................................... 59
Introdução........................................................................................................................... 60
Material e Métodos............................................................................................................. 62
Resultados e Discussão....................................................................................................... 64
Conclusão........................................................................................................................... 74
Literatura citada.................................................................................................................. 74
CONCLUSÃO ............................................................................................................. 80
 INTRODUÇÃO

O bioma Pampa, localizado no sul do Brasil, abrange uma área de aproximadamente

178.243 km2, o que corresponde a 63% do território do estado Rio Grande do Sul,
estendendo-se também por todo o território Uruguaio e pelo nordeste da Argentina
(HASENACK et al., 2007). Apesar de ter um elevado número de famílias e gêneros
compondo a diversidade dos seus campos, as gramíneas são as mais frequentes, sendo o
gênero Paspalum o de maior destaque (BERRETA, 2001).
O gênero Paspalum caracteriza-se por apresentar um grande número de
representantes, com uma ampla variabilidade morfológica e uma extensa distribuição
geográfica (ALISCIONI, 2002), uma vez que, inclui cerca de 400 espécies amplamente
dispersas em regiões tropicais e temperadas. Ocupa lugar de destaque no cone sul da América
do sul, por englobar gramíneas nativas de bom valor forrageiro e com potencial para
melhoramento genético (MACHADO et al., 2005).
Em meio às espécies do gênero Paspalum com bom valor forrageiro, pode-se destacar
os recentes estudos com a espécie Paspalum regnellii Mez, com resultados promissores para
alimentação animal (BATISTA & GODOY, 2004; BORTOLIN, 2013). Trabalhos com esta
espécie sob diferentes manejos de pastoreio apontam um valor de produção de matéria seca
superior a 19.000 kg ha-1 ao ano, esta de boa qualidade, chegando a atingir valores de 17% de
proteína bruta (PRIMAVESI et al., 2008).
Mesmo com excelentes características que a tornam uma alternativa para produção
forrageira, ainda há necessidade de estudos em relação a esta espécie, uma vez que, apresenta
aspectos limitantes à produtividade considerados comuns para espécies forrageiras nativas,
principalmente no que envolve os processos de germinação, estabelecimento e
desenvolvimento inicial (KÖNIG et al., 2014). Pode-se observar que grande parte dos
progressos alcançados no setor de tecnologia de sementes encontra-se restrita a espécies
cultivadas, limitando assim a produção de sementes forrageiras nativas de qualidade
(GARCIA & BASSEGIO, 1999).
Visto como uma importante etapa no processo de beneficiamento das sementes, o
armazenamento tem como objetivo manter a qualidade das sementes durante o período em
que ficam armazenadas (FERREIRA & BORGHETTI, 2004). Durante este processo, o
conhecimento do efeito das condições de armazenamento é considerado essencial, uma vez
que, estas influenciam diretamente na intensidade e na velocidade dos processos
degenerativos que se iniciam após a maturação fisiológica (MARCOS FILHO, 2005).
 14

Avaliada como uma estratégia interessante para promover o aumento da qualidade de

um lote de sementes, a classificação por densidade possibilita a seleção de sementes mais
vigorosas, resultando em plântulas com bom desenvolvimento (CARVALHO &
NAKAGAWA, 2012). Segundo Bezerra et al., (2004), a densidade da semente é um
indicativo da sua qualidade fisiológica, uma vez que, em um mesmo lote, as sementes com
menor densidade normalmente demonstram menor desempenho em comparação às sementes
pesadas.
De acordo com Cardoso (2004), a desuniformidade no processo de germinação de
espécies forrageiras nativas pode estar relacionada à dormência das sementes, fenômeno que
pode ser ocasionado por alguma restrição à germinação, proporcionada por um bloqueio
situado na própria semente ou unidade de dispersão. A dormência em sementes de espécies de
gramíneas forrageiras está relacionada principalmente com causas físicas, provavelmente
ocasionadas às restrições impostas pelos envoltórios à entrada de oxigênio, ou proveniente de
causas fisiológicas, presentes em sementes recém-colhidas, progressivamente supridas
durante o armazenamento (BEWLEY & BLACK, 1994).
Visando a superação deste fenômeno, a dormência física proporcionada pelo
tegumento pode ser superada por métodos que utilizam a escarificação destas estruturas,
promovendo o contato do embrião com oxigênio (AGUIAR, 2014). Entre os métodos para
superação da dormência fisiológica das sementes, destacam-se a exposição das sementes em
altas ou baixas temperaturas, o tratamento do substrato com KNO3 e também o aumento da
taxa de oxigênio (BRASIL, 2009).
Com o objetivo de promover o aumento da porcentagem de germinação e o
crescimento de plantas, a utilização de microrganismos indutores de crescimento é
considerada uma alternativa viável e que merece atenção (MACHADO et al., 2012). A
promoção da germinação e o desenvolvimento vegetativo ocasionado por microrganismos do
solo ocorrem devido à ação de vários fatores. Segundo Altomare (1999), espécies de
Trichoderma estão entre os microrganismos mais estudados como agentes de biocontrole de
fitopatógenos e, apresentam também, atividades que induzem a promoção do
desenvolvimento vegetativo em plantas.
A utilização de trichoderma resulta na promoção da porcentagem de germinação e
também a precocidade, além de estimular o aumento na altura de plantas, e o
desenvolvimento das raízes laterais (MELO, 1996). Possíveis explicações para o fenômeno de
promoção de germinação de sementes e do desenvolvimento vegetal por isolados de
trichoderma são o controle de fitopatógenos, auxílio na assimilação de nutrientes e
 15

desenvolvimento mais vigoroso das raízes, secreção de fitohormônios reguladores de

crescimento, aumento da concentração de nutrientes e minerais do solo através da atividade
saprofítica (MELO, 1998).
Levando tais aspectos em consideração, este trabalho teve como objetivo avaliar a
influência do armazenamento e do fracionamento das sementes de P. regnellii em diferentes
classes de densidade e a eficiência de métodos para superação da dormência das sementes,
bem como avaliar o efeito do tratamento das sementes com trichoderma na emergência e no
crescimento inicial de P. regnellii.

REFERÊNCIAS

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 18

1 ARTIGO 1

2 Influência do armazenamento e do peso da semente sobre a qualidade fisiológica e

3 sanitária de Paspalum regnellii Mez.¹

4
5 Resumo: Paspalum regnellii Mez é uma gramínea nativa de ciclo perene conhecida

6 vulgarmente por macega do banhado que apresenta elevado potencial forrageiro e

7 resultados promissores quanto a ganho de peso em bovinos, porém há escassez de

8 informações quanto à qualidade de suas sementes, principalmente por não ser ainda uma

9 espécie comercialmente cultivada. Com o objetivo de verificar a influência do

10 armazenamento e do peso da semente na sua qualidade fisiológica e sanitária, foram

11 avaliadas quatro classes de densidade (extra leves, leves, médias e pesadas) a partir de

12 sementes provenientes de dois anos de coleta (2013 e 2014). Para fins de comparação

13 do potencial fisiológico foram analisadas as variáveis incidência de gêneros fúngicos,

14 primeira contagem, índice de velocidade, frequência e porcentagem de germinação bem

15 como a integridade da semente através do teste de condutividade elétrica. Os resultados

16 obtidos demonstram que o armazenamento promove um acréscimo na porcentagem de

17 germinação de sementes de P. regnellii. Observou-se também que sementes com maior

18 densidade em ambos os anos de coleta apresentaram maior vigor quando comparadas às

19 sementes leves. Verificou-se maior porcentagem de contaminação por fungos em

20 sementes com densidade leve.

21 Palavras chave: Forrageira nativa, germinação, vigor.

22

23 Influence of storage and seed weight on the physiological and sanitary quality of

24 Paspalum regnellii Mez

25

¹
Artigo escrito nas normas da Revista de Engenharia Agrícola e Ambiental (ISSN 1807-1929)
 19

26 Abstract: Paspalum regnellii Mez is a native grass of perennial known cycle

27 commonly by grass waterlogged presenting high forage potential and promising results

28 as in cattle weight gain, but there is limited information about the quality of their seeds,

29 especially for not being a species grown commercially. In order to check the influence

30 of storage and seed weight in their physiological and sanitary quality were evaluated

31 four density classes (extra light, light, medium and heavy) from seeds from both years

32 (2013 and 2014). For the physiological comparison purposes were analyzed variables

33 incidence of fungal genera, first count, speed index, frequency and percentage of

34 germination and seed integrity through the electrical conductivity test. The results show

35 that the storage promotes an increase in the percentage of P. regnellii seed germination.

36 It was also noted that seeds with higher density in both years the collection had higher

37 vigor when compared to light seeds. A higher percentage of fungal contamination in

38 seeds with light density.

39 Keywords: Native grass, germination, vigor.

40

41 INTRODUÇÂO

42 As gramíneas do gênero Paspalum ocupam um lugar destacado em praticamente

43 todas as comunidades herbáceas de distintos ecossistemas do País, englobando um

44 grande número de espécies nativas com potencial forrageiro, além de um elevado

45 potencial para melhoramento genético visando à introdução de pastagens naturais

46 (Strapasson et al., 2000; Costa et al., 2003; Machado et al., 2005).

47 Uma das espécies promissoras deste gênero, o Paspalum regnellii Mez,

48 popularmente denominada de macega do banhado, é descrita como integrante do grupo

49 botânico Virgata que apresenta ciclo perene e hábito cespitoso, podendo atingir até 100

50 cm de altura em crescimento livre (Araújo, 1971). É caracterizada como uma espécie

 20

51 forrageira interessante para a produção animal, chegando a atingir uma produção de

52 32.347 kg ha-1 de massa seca ao ano com teores de até 16,48% de proteína bruta (Batista

53 & Godoy, 2004). De acordo com Meirelles et al., (2006) possui uma boa resposta a

54 ambientes melhorados, como o uso da correção da fertilidade do solo e de irrigação,

55 sendo recomendada para experimentos de avaliação de desempenho animal.

56 Entretanto, apesar dos diversos estudos relacionados ao manejo e a produção de

57 forragem de P. regnellii, ainda são insuficientes as informações referentes à qualidade

58 de sementes desta espécie, já que, a maior parte dos progressos alcançados quanto à

59 produção de sementes estão praticamente restritos a espécies cultivadas. A produção de

60 sementes de uma espécie forrageira, na qual a produção vegetativa representa uma

61 função relevante, é considerada um fator de grande importância, uma vez que, muitas

62 espécies com potencial forrageiro são desconsideradas por falta de informações para a

63 multiplicação comercial de sementes (Boggiano & Zanoniani, 2001).

64 Considerada uma importante etapa durante o processo de beneficiamento, o

65 armazenamento tem como principal objetivo manter a qualidade das sementes durante o

66 período em que ficam armazenadas, visto seu melhoramento não ser possível, mesmo

67 sob condições ideais (Ferreira & Borghetti, 2004). Segundo Marcos Filho (2005), o

68 período de conservação do potencial fisiológico depende, em grande parte, do grau de

69 umidade, da temperatura e das condições do ambiente de armazenamento.

70 Avaliada como uma estratégia para a obtenção de um lote de sementes com

71 maior qualidade, o uso da classificação por densidade é considerada uma prática

72 bastante interessante, já que a variação de peso entre sementes de uma espécie pode

73 ocorrer entre plantas de uma mesma população, de ano para ano e, também, dentro de

74 uma mesma planta (Cruz & Carvalho, 2003). Segundo Carvalho & Nakagawa, (2012), a
 21

75 classificação por densidade possibilita a seleção de sementes mais vigorosas, capazes de

76 originar plântulas com bom desenvolvimento.

77 A partir deste contexto, o presente experimento teve como objetivo verificar a

78 influencia do armazenamento e do peso da semente de P. regnellii na qualidade

79 sanitária por meio da incidência de gêneros fúngicos e também na qualidade fisiológica,

80 através das avaliações de condutividade elétrica e de primeira contagem, índice de

81 velocidade, frequência e porcentagem de germinação.

82

83 MATERIAL E MÉTODOS

84 As avaliações de qualidade das sementes de P. regnellii foram conduzidas no

85 laboratório de Interação Planta-Microrganismos do Centro de Ciências Naturais e

86 Exatas da Universidade Federal de Santa Maria, RS, e no Laboratório de Sementes

87 (LABSEM) da Embrapa Pecuária Sul, município de Bagé, RS. As sementes de P.

88 regnellii utilizadas neste trabalho foram coletadas de plantas pertencentes ao acesso

89 BRA-007382 localizadas em área experimental na Embrapa Pecuária Sul.

90 Para as avaliações foram utilizados dois lotes de sementes provenientes de duas

91 coletas, sendo que no primeiro, as sementes foram coletadas em março de 2013 (lote

92 2013) e o segundo em março de 2014 (lote 2014), sendo que foram utilizadas as

93 mesmas práticas de manejo das plantas nos dois anos avaliados. Após o processo de

94 coleta, as sementes foram submetidas a um processo de limpeza em peneiras manuais

95 eliminando-se as impurezas mais grosseiras, tais como material inerte, sementes de

96 plantas daninhas, sementes de outras espécies e sementes mal formadas. Em sequência a

97 este procedimento, as sementes foram colocadas em sacos plásticos e armazenadas em

98 câmara com temperatura controlada (20 °C), sendo que o lote 2013 foi armazenado pelo
 22

99 período de dezessete meses e o lote 2014 armazenado por cinco meses até a instalação

100 do teste.

101 Após o final do período de armazenagem procedeu-se o fracionamento dos lotes

102 2013 e 2014 pela densidade com o auxílio de um separador pneumático, marca Deleo®,

103 modelo General, através de quatro classes de intensidades de ventilação: 0,0 (extra

104 leves); 2,0 (leves); 4,0 (médias) e 6,0 (pesadas). Os valores de intensidade de ventilação

105 representam a largura da fenda de ventilação em centímetros.

106 Para fins de comparação e diferenciação do potencial fisiológico e sanitário dos

107 lotes e das classes, as sementes foram submetidas às seguintes avaliações:

108 Peso de mil sementes: Pesaram-se oito subamostras de 100 sementes, contadas

109 ao acaso, sendo os valores expressos em gramas e com precisão de 0,001 g (Brasil,

110 2009).

111 Teor de água: Determinado pelo método da estufa a 105 ± 3 °C por 24 h. Foram

112 utilizadas duas repetições com aproximadamente 2 g para cada lote, pesadas em balança

113 com precisão de 0,01 g, e os dados, expressos em porcentagem (Brasil, 2009).

114 Germinação: O teste foi conduzido com seis repetições de 50 sementes

115 distribuídas em caixas gerbox sob papel de germinação (tipo Germitest) umedecido com

116 água equivalente a 2,5 vezes a massa do substrato seco. Posteriormente, as caixas foram

117 mantidas em câmara de germinação em condições de 30°C e luz contínua (Oliveira et

118 al., 2013). A avaliação da porcentagem de germinação consistiu de contagens de

119 sementes germinadas a cada dois dias até o final do teste, sendo considerada como tal

120 àquela que evidenciava a radícula com, no mínimo, 2 a 3,0 mm de comprimento

121 (Gimenez-Sampaio et al., 1997). Contabilizou-se também ao final do teste o número de

122 sementes duras e mortas (Brasil, 2009). Todos os valores foram expressos em

123 porcentagem.
 23

124 Primeira contagem de germinação: Realizada conjuntamente com o teste de

125 germinação, computando-se as porcentagens médias de sementes germinadas após sete

126 dias da instalação do teste (Brasil, 2009).

127 Índice de velocidade de germinação: Determinado conjuntamente com o teste

128 de germinação e calculado com o auxilio da fórmula proposta por Maguire (1962):

129 IVG = G1/N1 + G2/N2 + ...Gn /N,

130 onde G1, G2, Gn = número de sementes germinadas na primeira, segunda e até a última

131 contagem e N1, N2, Nn = número de dias desde a primeira, segunda e até a última

132 contagem realizada.

133 Frequência relativa de germinação: Calculada através da seguinte formula:

134 Fr = ni / Σni

135 onde: Fr = frequência relativa de germinação; ni = número de sementes germinadas por

136 dia; Σni = número total de sementes germinadas (Brasil, 2009).

137 Condutividade elétrica: Realizada com quatro repetições de 25 sementes por

138 tratamento, pesadas com precisão de 0,001 g, e imersas em 50 mL de água deionizada

139 em Becker de vidro (capacidade de 100 mL). As sementes foram mantidas a 25 °C,

140 durante 24 horas em câmaras de germinação. Após este período, foi determinada a

141 condutividade elétrica da solução de embebição, por meio de condutivímetro MCA 150,

142 e os resultados, expressos em μS.cm-1.g-1 (Marcos Filho & Vieira, 2009).

143 Incidência de gêneros fúngicos: Utilizou-se o método do papel de filtro,

144 através de caixas tipo gerbox previamente esterilizadas com hipoclorito de sódio 10%,

145 posteriormente em álcool 70%, sendo colocadas três folhas de papel de filtro

146 previamente esterilizadas em autoclave (120 °C por 40 minutos) umedecidas com água

147 destilada e esterilizada. Após a semeadura, fez-se a incubação por um período de oito

148 dias sob a condição de 30 °C em um regime constante de luz. Para cada classe de
 24

149 densidade foram utilizadas oito repetições constituídas por 25 sementes, totalizando 200

150 sementes por classe. Após este processo, fez-se a observação dos gêneros fúngicos

151 presentes no espermoplano para cada semente, bem como a confecção de lâminas e

152 observação das estruturas fúngicas em microscópio óptico. As identificações dos

153 gêneros foram baseadas nas características morfológicas e na literatura pertinente para

154 confirmação dos resultados (Barnett & Hunter, 2006). Os dados foram transformados

155 em percentuais de incidência para cada gênero de fungo.

156 Para as variáveis envolvendo a qualidade fisiológica e sanitária de sementes de

157 P. regnellii foi utilizado o delineamento inteiramente casualizado e esquema fatorial

158 2x4 (2 lotes x 4 classes de densidade). Fez-se a análise de médias pelo teste de Tukey a

159 5% de probabilidade, bem como a análise de correlação simples de Pearson entre a

160 densidade e as variáveis qualitativas. Todas as análises foram realizadas com o auxílio

161 do programa BioEstat versão 4.0. (Ayres et al., 2005).

162

163 RESULTADOS E DISCUSSÃO

164 Pode-se verificar através da variável peso de mil sementes (Tabela 1) a

165 ocorrência de uma variação significativa de 0,622 e 0,597 para as frações extra leves,

166 chegando a atingir valores de 1,135 e 1,133 para as frações pesadas. É possível

167 constatar que sementes classificadas como pesadas apresentaram um aumento

168 significativo dos valores da variável peso de mil sementes de 82 e 91% nos lotes 2013 e

169 2014, respectivamente, em comparação as sementes da classe extra leve. Observa-se

170 que os valores de peso de mil sementes não foram influenciados significativamente pelo

171 ano de colheita ou pelo período de armazenamento, havendo manutenção de valores

172 semelhantes entre as classes na comparação entre os lotes. Conclui-se também que não
 25

173 houve diferença significativa no percentual de umidade das sementes dos lotes

174 independente da classe avaliada, havendo manutenção de valores próximo a 9%.

175

176 Tabela 1: Peso de mil sementes (PMS) e porcentagem de umidade de dois lotes de

177 sementes de Paspalum regnellii Mez (2013 e 2014) fracionados nas classes de

178 densidade extra leves, leves, médias e pesadas.

PMS Umidade (%)

Classe
2013 2014 2013 2014

Extra leves 0,622 Da* 0,597 Da 8,36 Aa 9,77 Aa

Leves 0,965 Ca 0.964 Ca 8,91 Aa 9,83 Aa

Médias 1,035 Ba 1,055 Ba 8,30 Aa 8,48 Aa

Pesadas 1,135 Aa 1,133 Aa 9,07 Aa 10,24 Aa

*
179 Médias seguidas pela mesma letra maiúscula na coluna e minúscula na linha não diferem entre

180 si em uma mesma variável, pelo teste de Tukey a 5%.

181

182 A diferença observada nos valores de densidade das sementes dentro de um

183 mesmo lote pode estar relacionada com aos fatores ambientais, com destaque para a

184 disponibilidade hídrica. Segundo Nogueira et al. (2010), a diferença na densidade entre

185 as unidades de dispersão pode ser promovida pelas às condições determinadas pelo

186 meio ambiente.

187 Na Tabela 2 estão ilustrados os valores referentes à avaliação da germinação de

188 sementes nos lotes e em suas respectivas frações de densidade através das variáveis

189 porcentagem, primeira contagem e índice de velocidade de germinação. A partir dos

190 resultados obtidos, pode-se constatar que as sementes pertencentes ao lote 2013,

191 armazenadas por período de 17 meses, apresentaram valores superiores em todas as

192 variáveis qualitativas quando comparadas as sementes do lote 2014, armazenado por
 26

193 cinco meses, podendo-se ressaltar que este último lote apresentou um menor valor de

194 porcentagem de germinação em todas as classes de densidade.

195

196 Tabela 2: Primeira contagem de germinação (PCG), índice de velocidade de germinação

197 (IVG) e porcentagem de germinação (PG), de sementes duras (SD) e mortas (SM) de

198 dois lotes de Paspalum regnellii (2013 e 2014) fracionadas nas classes de densidade

199 extra leves, leves, médias e pesadas.

PCG (%) IVG PG (%) SD (%) SM (%)

Classe
2013 2014 2013 2014 2013 2014 2013 2014 2013 2014

Extra leves 29 Ca* 9 Ab 3,1 Ca 1,0 Ab 33 Ba 19 Ab 25 Ab 39 Ba 44 Aa 47 Aa

Leves 47 Ba 11 Ab 7,6 Ba 1,2 Ab 49 Aa 20 Ab 23 ABb 64 Aa 23 Ba 24 Ba

Medias 52 ABa 7 Ab 9,1 ABa 0,7 Ab 57 Aa 17 Ab 12 Cb 62 Aa 26 Ba 28 Ba

Pesadas 55 Aa 8 Ab 9,6 Aa 1,0 Ab 64 Aa 18 Ab 17 BCb 62 Aa 19 Ba 25 Ba

*
200 Médias seguidas pela mesma letra maiúscula na coluna e maiúscula na coluna não diferem

201 entre si em uma mesma variável, pelo teste de Tukey a 5%.

202

203 Apesar de não haver variação significativa entre os lotes 2013 e 2014 para a

204 variável peso de mil sementes, é possível constatar através de todas as variáveis

205 avaliadas uma significativa variação existente entre os dois lotes de sementes. Observa-

206 se que as sementes pertencentes ao lote 2013 e armazenadas por um período superior

207 apresentaram valores superiores nas variáveis relacionadas ao processo de germinação

208 em comparação as sementes de 2014, independente da classe avaliada.

209 Esta diferença observada entre os lotes pode ser justificada pela possível

210 presença do fenômeno dormência nas sementes do lote 2014, o qual é caracterizado

211 como uma condição momentânea da semente que, mesmo estando viável e tendo todas

212 as condições ambientais para germinar, não germinam (Carvalho & Nakagawa, 2012).

213 Segundo Marcos Filho (2005), a dormência é um mecanismo resultante da estratégia

 27

214 evolutiva das espécies frente às variações ambientais. É considerado um fenômeno

215 comumente presente em sementes de espécies forrageiras nativas e há vários estudos

216 com métodos que visam sua superação e promovem a germinação (Carvalho &

217 Carvalho 2009; Glison et al., 2015; Lacerda et al., 2010; Shin et al., 2006).

218 É possível constatar também que as classes com sementes de maior densidade

219 pertencentes ao lote 2013 apresentaram valores superiores para as variáveis

220 porcentagem, primeira contagem e índice de velocidade de germinação em comparação

221 as classes de menor densidade. Segundo Bezerra et al., (2004), a densidade da semente é

222 um indicativo da sua qualidade fisiológica, sendo que, em um mesmo lote, as sementes

223 que apresentam menor densidade normalmente demonstram menor desempenho em

224 comparação as sementes pesadas.

225 Resultados semelhantes aos encontrados neste trabalho foram obtidos por Larsen

226 & Andreasen (2004), onde estes autores observaram um acréscimo na porcentagem de

227 germinação e, ao mesmo tempo, um menor período para este processo com o aumento

228 da densidade das sementes das espécies forrageiras Festuca rubra, Lolium perene e Poa

229 pratensis. Ao avaliar o efeito do peso no vigor das sementes de Bromus auleticus, Silva

230 et al., (2007) constataram através dos testes de envelhecimento acelerado e

231 comprimento de plântulas que sementes maiores apresentaram maior vigor em relação à

232 sementes menores.

233 Os valores obtidos através da porcentagem de sementes duras e sementes mortas

234 (Tabela 2) mostram a ocorrência de uma redução significativa dos valores destas

235 variáveis a partir do aumento da densidade média das sementes através do

236 fracionamento, exceto para o lote 2014, onde o aumento da densidade promoveu

237 acréscimo significativo dos valores de sementes duras.

 28

238 Os valores significativamente superiores de porcentagem de sementes duras

239 encontrados nas classes do lote 2014, quando comparados aos do lote 2013 podem ser

240 atribuídos à presença do fenômeno dormência em forma embrionária que, segundo

241 Carvalho & Nakagawa (2012), é um mecanismo frequente em sementes de espécies

242 cujo produto comercial não é o grão, como no caso das forrageiras. Os valores obtidos

243 neste trabalho podem ser justificados pelo estudo de Simpson (1990), que concluiu que

244 a dormência embrionária é progressivamente suprimida durante o período de

245 armazenamento da semente.

246 Na avaliação da porcentagem de sementes mortas (Tabela 4), pode-se verificar

247 através dos valores obtidos que não houve diferença significativa entre os lotes 2013 e

248 2014. Entretanto, observa-se que a seleção de sementes com maior densidade em ambos

249 os lotes (2013 e 2014) acarretou em uma redução significativa nos valores desta

250 variável, sendo que as menores porcentagens de sementes mortas foram observadas no

251 tratamento da classe de sementes pesadas. De acordo com Popinigis (1985), a densidade

252 da semente em muitas espécies é um indicativo de sua qualidade fisiológica, uma vez

253 que, sementes de densidade inferior em um lote apresentam menor vigor em

254 comparação às sementes de maior densidade. Segundo Carvalho & Nakagawa (2012),

255 as sementes maiores, por serem mais bem nutridas durante o seu desenvolvimento,

256 possuem embriões bem formados e com maior quantidade de reservas, resultando em

257 uma semente mais vigorosa em comparação a uma semente de menor densidade.

258 A partir da avaliação de frequência de germinação é possível verificar que

259 sementes do lote 2013, independente da classe avaliada, apresentaram maior

260 uniformidade na germinação, sendo que o período observado para este processo

261 concentrou-se em um pico inicial durante os primeiros cinco dias após o início do teste.

262 Verifica-se também que, sementes do lote 2014, em todas as classes de densidade
 29

263 avaliadas, apresentaram resultados de frequência de germinação de forma diferenciada

264 em relação às classes do lote 2013, sendo esta verificada até o final do período de

265 avaliações.

266

267 Figura 1: Frequência relativa (%) de germinação de dois lotes de Paspalum regnellii

268 (2013 e 2014) fracionados nas classes de densidade classes de densidade extra leves,

269 leves, médias e pesadas.

270 .
 30

271 Considerados atributos essenciais para um lote de sementes e, observados no

272 lote 2013, a uniformidade e a velocidade do processo de germinação evitam que as

273 sementes permaneçam expostas a fatores que possam vir a afetar sua qualidade, gerando

274 um estande uniforme de plantas a campo (Marcos Filho, 1999). De acordo Gross

275 (1984), sementes que exibem melhor velocidade de germinação permitem um rápido

276 crescimento do sistema radicular e da parte aérea, possibilitando à planta aproveitar

277 rapidamente as reservas nutricionais e hídricas do solo, aumentando a probabilidade do

278 sucesso no estabelecimento da planta.

279 Os valores obtidos através do teste de condutividade das sementes revelam que

280 as classes compostas por sementes de maior densidade, independente do lote (2013 e

281 2014), diferiram significativamente quando comparadas aos valores obtidos de

282 condutividade para as classes de menor densidade.

283

284

285 Figura 2: Avaliação de condutividade elétrica (CE) em μS.cm-1.g-1 de dois lotes de

286 Paspalum regnellii (2013 e 2014) fracionados nas classes de densidade extra leves (EL),

287 leves (L), médias (M) e pesadas (P). Valores representados por letras maiúsculas não

288 diferem entre as classes, enquanto letras minúsculas não diferem entre os lotes pelo teste

289 de Tukey a 5%.

 31

290

291 Observa-se que sementes pertencentes às classes de menor densidade

292 apresentaram um número superior de lixiviados na solução de condutividade quando

293 comparadas as mesmas sementes pesadas. Esta diferença observada ocorreu

294 possivelmente pela maior exposição do lote 2013 ao armazenamento, que segundo

295 Carvalho & Nakagawa (2012), pode vir a reduzir a integridade das membranas da

296 semente através da perda de constituintes celulares.

297 Segundo Villela & Peres (2004), entre as principais alterações envolvidas na

298 deterioração da semente, destacam-se o esgotamento das reservas e a alteração da

299 composição química das membranas celulares, ocasionando a redução da integridade e

300 aumento da permeabilidade. Resultados semelhantes envolvendo a deterioração das

301 sementes foram encontrados por Marchiori et al. (2015) que ao avaliarem o efeito do

302 armazenamento na qualidade de sementes nativas dos campos sulinos constataram uma

303 redução do vigor das mesmas após o período de armazenagem.

304 Também é possível verificar através dos valores obtidos que sementes leves

305 apresentam maior suscetibilidade a deterioração pelo armazenamento em comparação a

306 sementes pesadas, tendo esta ultima classe apresentado uma maior manutenção da

307 integridade das membranas. De acordo com Carvalho & Nakagawa (2012), sementes

308 que apresentam maior densidade, devido sua melhor formação, são capazes de manter a

309 viabilidade durante longos períodos de armazenamento.

310 Os resultados obtidos na avaliação sanitária das sementes (Tabela 3) mostram

311 que as sementes do lote 2013 apresentaram uma maior porcentagem de contaminação

312 quando em comparação as sementes do lote 2014. Da mesma forma, observa-se também

313 que a densidade das sementes influenciou na incidência de gêneros fúngicos associados
 32

314 as sementes, sendo que sementes pertencentes às frações mais leves apresentaram uma

315 maior porcentagem de incidência quando comparadas com as frações mais pesadas.

316

317 Tabela 3. Incidência de gêneros fúngicos (%) associados às classes de densidades de

318 sementes extra leves (EL), leves (L), médias (M) e pesadas (P) de dois lotes (2013 e

319 2014) de sementes de Paspalum regnellii germinadas em papel de filtro

(%) Incidência
Gêneros de
2013 2014
Fungos
EL L M P EL L M P

Aspergillus 22 24 18 15 8 3 - 3

Rhizopus 26 10 4 16 9 4 5 5

Pythium 14 10 3 3 11 23 7 9

Curvularia 1 - - 1 3 - 3 -

Fusarium - - - 1 - - - -

% total de
63 44 25 34 31 30 15 17
incidência

320

321 A maior incidência de gêneros fúngicos nas frações de densidade extra leves e

322 leves de sementes em ambos os lotes (Tabela 3) pode estar associada aos resultados

323 obtidos no teste de condutividade elétrica (Figura 2) onde observou-se uma elevada taxa

324 de lixiviados e, consequentemente uma menor integridade das membranas, o que pode

325 ter favorecido a incidência de fungos. Estes resultados estão de acordo com Butts et al.,

326 (2007) que, segundo estes autores, sementes de qualidade inferior são propicias a

327 contaminação por fungos, o que ocasiona a redução da porcentagem de germinação e do

328 desempenho a campo.

329 Através do método utilizado para o teste de sanidade, foi possível detectar os

330 gêneros Aspergillus, Rhizopus, Pythium, Curvularia e Fusarium. Os fungos no

331 espermoplano podem influenciar negativamente a qualidade fisiológica das sementes e

 33

332 resultar na redução do potencial germinativo. De acordo com Schafer & Kotanen (2003)

333 os fungos fitopatogênicos além de serem prejudiciais à germinação influenciam

334 negativamente no estabelecimento de plantas no campo.

335 Os gêneros Aspergillu e Rhizopus, observados em maior incidência, são

336 considerados importantes fungos de armazenamento, podendo estes causar a

337 deterioração das sementes, reduzindo consequentemente seu potencial fisiológico

338 (Marcos Filho, 2005). Segundo Atayde et al., (2012) a contaminação por fungos de

339 armazenamento é geralmente decorrente do contato com o solo, no momento da

340 colheita, e de condições de armazenamento que favorecem seu desenvolvimento. De

341 acordo com Fessel & Barreto (2000), fungos de armazenamento estão vinculados as

342 operações de beneficiamento devido aos danos mecânicos que favoreceram sua

343 colonização.

344 Pode-se destacar através dos valores obtidos a elevada incidência do gênero

345 Pythium, principalmente para as sementes do lote 2014. De acordo com Krugner &

346 Auer (1997), o Pythium sp. é um dos principais causadores do damping-of, sendo que

347 este ataca sementes em germinação, destruindo-as e plântulas recém-emergidas,

348 atacando tecidos tenros e suculentos, ocasionando a destruição dos mesmos, resultando

349 na morte da plântula a muda. Já os gêneros Curvularia sp. e Fusarium sp, observados

350 em menor incidência nos dois lotes avaliados foram identificados como patogênicos

351 para várias gramíneas (Skadsen & Holn, 2004). Segundo Bevilaqua & Pierobom (1995),

352 apresentam grande frequência de contaminação em sementes de aveia preta da zona sul

353 do Rio Grande do Sul.

354 A partir da análise de correlação simples de Pearson (Tabela 4) é possível

355 verificar que o aumento médio da densidade das sementes do lote 2013 através do

356 fracionamento gerou coeficientes de correlação significativos à 5% para as avaliações

 34

357 que envolvem o processo de germinação. Verifica-se também que o aumento da

358 densidade das sementes proporcionou coeficientes de correlação negativos para as

359 variáveis condutividade elétrica e também sementes mortas, tendo estas apresentado

360 valores significativos a 1% de probabilidade.

361

362 Tabela 4: Coeficientes de correlação simples de Pearson (r) entre a densidade das

363 sementes de Paspalum regnellii com as características avaliadas.

Coeficiente de correlação simples (r)

Características avaliadas
Lote 2013 Lote 2014

Porcentagem de germinação 0.995** - 0.5808

Primeira contagem de germinação 0.994** -0.3109

Índice de velocidade de germinação 0.993** -0.2046

Sementes Duras -0.7826 0.9343

Sementes Mortas -0.9672* -0.9315

Condutividade Elétrica -0.9687* -0.8301

Porcentagem de contaminação -0.9003 -0.7640

364 ** Valores significativos a 5%, *Valores significativos a 1%

365

366 Constata-se também que o aumento da densidade das sementes do lote 2014 não

367 apresentou coeficientes de correlação significativos com as variáveis avaliadas, uma vez

368 que, sementes provenientes deste lote, por estarem armazenadas por um curto período,

369 independente da classe avaliada, ainda apresentam elevada integridade de suas

370 estruturas com manutenção do estado de dormência.

371

372 CONCLUSÕES

373 1. Sementes de P. regnellii apresentam dormência fisiológica, sendo este fenômeno

374 superado através do armazenamento.

 35

375 2. A densidade das sementes influenciou na porcentagem de germinação e no vigor

376 das sementes de P. regnellii,

377 3. Sementes de maior densidade apresentaram maior vigor após o período de

378 armazenamento em relação a sementes leves.

379 4. A incidência de gêneros fúngicos foi maior nas classes de densidade de

380 sementes extra leve e leve para os lotes 2013 e 2014

381

382

383 LITERATURA CITADA

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492 p. 265-281.
 40

1 ARTIGO 2

2 Metodologias para superação de dormência em sementes de Paspalum regnellii Mez

4 RESUMO

5 A desuniformidade no processo de germinação em espécies forrageiras nativas se dá em

6 grande parte ao fenômeno dormência. A germinação de sementes de muitas espécies de

7 gramíneas pode ter seu índice aumentado através da utilização de pré-tratamentos, entretanto

8 não há recomendações específicas para Paspalum regnellii Mez. Este trabalho teve por

9 objetivo avaliar metodologias para superação de dormência em sementes de P. regnellii.

10 Foram testados os três métodos seguintes: 1) Escarificação do tegumento das sementes

11 através do uso de lixa número 180 e embebição em ácido sulfúrico (H2SO4) por crescentes

12 períodos; 2) Tratamento térmico com embebição das sementes em água a 60°C por diferentes

13 períodos; 3) Tratamento com crescentes concentrações de nitrato de potássio (KNO3) e

14 bioestimulante. Cada tratamento foi composto de seis repetições com 50 sementes cada,

15 dispostas para germinar em caixas gerbox. Após a semeadura, as caixas foram acondicionadas

16 em germinador com condições de luminosidade e temperatura controladas. Procederam-se às

17 análises de regressão das variáveis primeira contagem, índice de velocidade e porcentagem de

18 germinação de sementes. Os resultados obtidos mostraram que os métodos físico e químico

19 utilizados para escarificação não promoveram o aumento da germinação de sementes,

20 entretanto o uso do H2SO4 reduziu os valores dos parâmetros porcentagem de germinação,

21 número de plântulas na primeira contagem e índice de velocidade de germinação de P.

22 regnellii em tempo de embebição de 120 segundos e o método físico promoveu o aumento da

23 velocidade de germinação. O uso dos tratamentos com nitrato de potássio e bioestimulante

24 promoveu o aumento dos valores em todos os parâmetros enquanto houve redução dos

25 valores para os mesmos parâmetros com o uso do tratamento térmico.

 41

26 Termos para indexação: Macega do banhado, escarificação, tratamento térmico, KNO3,

27 bioestimulante.

28

29 Methods to overcome dormancy in seeds of Paspalum reginelli Mez

30

31 ABSTRACT

32 The unevenness in the germination process in native forage species occurs in large part to the

33 dormancy phenomenon. The germination of many species of grasses can have their index

34 increased by using pretreatments, however there are no specific recommendations for

35 Paspalum regnellii Mez. This work aimed to evaluate methodologies to overcome dormancy

36 in P. regnellii seeds. Were the three methods tested: 1) scarification of the seed coat of the

37 seed through the use of sandpaper number 180 and soaking in sulfuric acid (H2SO4) for

38 increasing periods; 2) Heat Treatment imbibition in water at 60°C for different periods; 3)

39 Treatment with increasing concentrations of potassium nitrate (KNO3) and biostimulant. Each

40 treatment consisted of six repetitions with 50 seeds each, ready to germinate in gerboxes.

41 After sowing, the boxes were placed in germinator with lighting conditions and controlled

42 temperature. They proceeded to the regression analysis of the first count variable speed index

43 and percentage of germination. The results showed that the chemical and physical methods

44 used for chiseling not promoted increased seed germination, however the use of H2SO4

45 reduced values of germination parameters, number of seedlings in the first count and

46 germination rate index. P. regnellii for soaking time of 120 seconds and the physical method

47 promoted the increase of the germination rate. The use of treatments with potassium nitrate

48 and biostimulant promoted the increase of the values in all parameters as decreased values for

49 the same parameters with the use of heat treatment.

50 Index terms: Grass waterlogged, scarification, heat treatment, KNO3, biostimulant.

 42

51

52 INTRODUÇÃO

53 O gênero Paspalum ocupa um lugar destacado entre as gramíneas brasileiras, pois não

54 só engloba o maior número de espécies nativas, mas também, é considerado o gênero mais

55 importante dentro do grupo de espécies com bom valor forrageiro (Boldrini et al. 2005;

56 Cidade et al. 2013). As espécies deste gênero, além de serem responsáveis por maior parte da

57 forragem disponível em diversas formações vegetais, possuem adaptações ecológicas com

58 potencial para melhoramento genético (Scheffer-Basso et al. 2009).

59 Entre as espécies promissoras que compõe este gênero, destaca-se o Paspalum

60 regnellii Mez, popularmente denominada de macega do banhado que, segundo Araújo (1971)

61 é descrita como uma espécie integrante do grupo botânico Virgata, com ciclo perene, hábito

62 cespitoso e rizomas curtos, podendo atingir a até 100 cm de altura em crescimento livre. Sua

63 qualidade forrageira é comprovada no trabalho de Batista e Godoy (2000), onde os autores

64 destacam que esta espécie apresentou bons resultados quanto à produção de forragem e de

65 ganho de peso em bovinos. Barro et al. (2013) apontam que esta espécie apresenta elevado

66 rendimento em ambientes sombreados, indicando alto potencial para produção em sistemas

67 silvi-pastoris.

68 Embora se tenha conhecimento sobre o potencial de espécies como o P. regnellii, a

69 introdução de gramíneas nativas encontra-se limitada em razão da escassez de informações

70 referentes à qualidade de suas sementes, uma vez que, os progressos alcançados na produção

71 de sementes estão praticamente restritos a espécies cultivadas. O processo de germinação de

72 sementes de gramíneas forrageiras tem sido, de modo geral, um sério problema vivenciado

73 pelo meio interessado na análise e produção das mesmas. As causas do baixo rendimento e

74 baixa qualidade das sementes de gramíneas forrageiras se devem, principalmente, à

75 desuniformidade e demora na emergência (Almeida; Silva, 2004).

 43

76 Segundo Cardoso (2004), a desuniformidade no processo de germinação se dá em

77 grande parte a um fenômeno comum em sementes de espécies forrageiras nativas,

78 denominado dormência, podendo esta ser causada por alguma restrição à germinação,

79 proporcionada por um bloqueio situado na própria semente ou unidade de dispersão. Segundo

80 Carvalho e Nakagawa, (2012), a ocorrência de dormência é considerada um mecanismo

81 frequente em sementes de espécies cujo produto comercial não é o grão, como no caso das

82 forrageiras.

83 Diante deste problema, a germinação de sementes de muitas espécies de gramíneas

84 pode ter seus índices aumentados através da utilização de pré-tratamentos. Nas Regras para

85 Análise de Sementes (Brasil, 2009) são descritas alternativas para a superação da dormência

86 de um número limitado de espécies do gênero Paspalum, não havendo recomendações

87 específicas para P. regnellii. Entre os métodos citados, destaca-se a escarificação mecânica,

88 imersão em solventes, tratamento com ácido sulfúrico, exposição a altas e baixas temperaturas

89 e tratamentos com hormônios como a giberilina e citocinina.

90 Analisando-se a importância e principalmente o fato de a espécie P. regnellii carecer

91 de pesquisas capazes de determinar métodos adequados para a superação de sua dormência,

92 este trabalho teve por objetivo testar os métodos de escarificação física e química, embebição

93 das sementes em água pré-aquecida a 60°C e também uso do nitrato de potássio (KNO3) e

94 bioestimulante na superação da dormência de sementes de P. regnellii.

95

96 MATERIAL E MÉTODOS

97 Os testes de superação de dormência foram conduzidos no laboratório de Interação

98 Planta-Microrganismos do Centro de Ciências Naturais e Exatas da Universidade Federal de

99 Santa Maria, no mês de julho de 2014. As sementes de P. regnellii utilizadas neste trabalho
 44

100 foram coletadas de plantas pertencentes ao acesso BRA-007382 localizadas em área

101 experimental na Embrapa Pecuária Sul, município de Bagé, RS.

102 Após a coleta, as sementes foram submetidas a um processo de limpeza em peneiras

103 manuais eliminando-se as impurezas mais grosseiras, tais como material inerte, sementes de

104 plantas daninhas, sementes de outras espécies e sementes mal formadas. Após procedeu-se a

105 separação por densidade visando à eliminação das sementes denominadas “chochas” que,

106 visualmente, tem aspecto normal, mas que consistem de glumas sem a cariopse desenvolvida

107 no interior. Este procedimento foi realizado em separador pneumático marca Deleo ®, modelo

108 General, em abertura de ventilação 6,0. Após este processo e, previamente a implantação dos

109 tratamentos, fez-se a avaliação da qualidade das sementes utilizadas através do teste de

110 germinação (Brasil, 2009), onde foram constatados os seguintes valores: 64 % de sementes

111 germinadas, 17 % de sementes duras e 19 % de sementes mortas.

112 Na etapa seguinte, fez-se o emprego dos tratamentos para superação da dormência,

113 sendo estes baseados em três metodologias: 1) Escarificação física das sementes com lixa

114 número 180 e escarificação química com ácido sulfúrico concentrado (H2SO4), sendo ambos

115 os métodos empregados por períodos de 0, 30, 60, 90 e 120 segundos, 2) Embebição das

116 sementes em água a 60°C por períodos de 0, 30, 60, 90 e 120 segundos e 3) Tratamento do

117 substrato de germinação com bioestimulante nas concentrações de 0, 2,0, 4,0, 6,0, e 8,0 ml.L-1

118 e tratamento do substrato com nitrato de potássio (KNO3) nas concentrações de 0, 0,2, 0,4, 0,6

119 e 0,8 g.L-1. Para este trabalho, utilizou-se como fonte do bioestimulante o produto comercial

120 Stimulate® (composto por cinetina a 0,009%, ácido giberélico a 0,005% e ácido indolbutírico

121 a 0,005%).

122 Após a aplicação dos tratamentos, fez-se a distribuição das sementes sob papel

123 germitest previamente umedecido com água equivalente a 2,5 vezes a massa do substrato seco

124 para os tratamentos 1 e 2, e para o tratamento 3, o papel germitest foi umedecido 2,5 vezes
 45

125 com as respectivas soluções propostas de nitrato de potássio e de bioestimulante, sendo que

126 para todos os tratamentos o papel foi arranjado em uma caixa do tipo gerbox com capacidade

127 para 50 sementes. Para cada tratamento foram utilizadas seis caixas gerbox, totalizando 300

128 sementes. Após a semeadura, as caixas foram postas em germinadores do tipo B.O.D.

129 (Biological Oxigen Demand), permanecendo por um período de 27 dias, com presença de luz

130 em temperatura de 30°C (Oliveira et al., 2014)

131 A avaliação da porcentagem de germinação consistiu de contagens de sementes

132 germinadas a cada dois dias até o final do teste, sendo considerada como tal àquela que

133 evidenciava a radícula com, no mínimo, 2 a 3 mm de comprimento (Gimenez-Sampaio et al.

134 1997). Além da porcentagem de germinação, também foi avaliado o índice de velocidade de

135 germinação (IVG), com o auxilio da fórmula proposta por Maguire (1962):

136 IVG = G1/N1 + G2/N2 + ...Gn /N,

137 onde G1, G2, Gn = número de sementes germinadas na primeira, segunda e até a última

138 contagem e N1, N2, Nn = número de dias desde a primeira, segunda e até a última contagem

139 realizada.

140 Fez-se também a contabilização de plântulas na primeira contagem (PCG), sendo esta

141 realizada conjuntamente com o teste de germinação, computando-se as porcentagens médias

142 de sementes germinadas, após sete dias da instalação do teste, conforme as Regras para

143 Análise de Sementes (Brasil, 2009). Para a análise estatística, todos os resultados obtidos

144 foram submetidos à análise de regressão com auxilio do programa estatístico BioEstat 4.0

145 (Ayres et al. 2005).

146

147 RESULTADOS E DISCUSSÃO

148 De acordo com os dados observados na Figura 1A, é possível verificar que a

149 escarificação mecânica com lixa por períodos crescentes não influenciou significativamente a
 46

150 porcentagem de germinação das sementes em comparação com a testemunha, havendo a

151 manutenção do percentual de germinação próximo de 65 %.

152

153 Figura 1: Resultados de porcentagem (A), primeira contagem (B) e índice de velocidade de

154 germinação (IVG) (C) de sementes de Paspalum regnellii Mez escarificadas através dos

155 métodos físico e químico por períodos de 0, 30, 60, 90 e 120 segundos.

156

157 Este resultado evidencia que o tegumento das sementes de P. regnellii não se mostrou

158 como um impedimento ao processo de germinação, podendo-se afirmar que a dormência

159 presente nas sementes desta espécie não se encontra na forma física que, segundo Hilhorst

160 (2007), é caracterizada pela impermeabilidade do tegumento, evitando as trocas do embrião

161 com o meio, inibindo desta forma a germinação. Os resultados obtidos através da

162 escarificação física podem estar atrelados à forma com que a dormência está presente na

163 semente. Segundo Cardoso (2004), além da dormência física, há outra forma de dormência
 47

164 comumente encontrada em espécies tropicais, denominada dormência endógena, esta causada

165 por algum bloqueio à germinação relacionado ao próprio embrião, em que, na maioria das

166 vezes, ocorre devido a mecanismos inibitórios envolvendo os processos metabólicos.

167 Embora não tenha promovido acréscimo no percentual de germinação, a escarificação

168 física proporcionou um incremento nos valores de porcentagem de plântulas na primeira

169 contagem e no índice de velocidade de germinação, tendo a análise de regressão apontado um

170 modelo quadrático para estes dois parâmetros (Figura 1B; 1C). Estes resultados estão de

171 acordo com o trabalho de Carvalho e Nakagawa (2012), onde os autores afirmam que o

172 rompimento do tegumento das sementes pela escarificação proporciona uma maior velocidade

173 de absorção de água e gases pelo embrião, além de promover aumento da sensibilidade à luz e

174 à temperatura. Comportamento semelhante foi observado para as sementes das espécies

175 Trifolium riograndense (Suñé; Franke, 2006), Desmodium ovalifolium (Deminicis et al.

176 2006), e Adesmia punctata (Tedesco et al. 2001), que ao serem submetidas ao método de

177 escarificação física do tegumento, apresentaram um acréscimo significativo na velocidade de

178 germinação.

179 Na Figura 1A encontram-se também os dados relativos aos crescentes períodos de

180 escarificação química através da embebição em H2SO4. Seguindo a mesma tendência dos

181 resultados obtidos com a escarificação mecânica, os períodos de embebição em H2SO4 não

182 foram suficientes para promover o aumento da porcentagem de germinação, resultando em

183 valores semelhantes aos obtidos no tratamento testemunha em todos os parâmetros avaliados

184 até o período de 90 segundos de embebição. A partir da embebição em H2SO4 por um período

185 superior a 90 segundos pode-se constatar uma redução nos valores de porcentagem, primeira

186 contagem e índice de velocidade de germinação das sementes, tendo a análise de regressão

187 uma resposta quadrática para estes parâmetros (Figura 1A, 1B e 1C).
 48

188 Segundo Franke e Baseggio (1998) alguns cuidados devem ser tomados quanto à

189 intensidade e forma de aplicação dos tratamentos para superação de dormência, para que as

190 lesões provocadas não causem danos ao embrião, resultando em danos ao vigor das sementes.

191 Comportamento semelhante ao encontrado neste trabalho foi observado em sementes de

192 Panicum maximum, onde o uso da escarificação com H2SO4 reduziu drasticamente a

193 porcentagem de germinação (Dias; Alves, 2008). Ao avaliar o uso de tratamentos para

194 promover a germinação de sementes de Brachiaria dictyoneura, Almeida e Silva (2004)

195 afirmam que, de todos os tratamentos testados, o ácido sulfúrico foi o único a apresentar uma

196 taxa de plântulas anormais estatisticamente superior à testemunha.

197 Estão ilustrados na Figura 2 os valores relativos à porcentagem, primeira contagem e o

198 índice de velocidade de germinação de P. regnellii submetidas a crescentes períodos de

199 embebição em água a 60°C. Pode-se verificar através dos valores obtidos que os períodos

200 crescentes de embebição promoveram um decréscimo na germinação e no vigor de sementes

201 em comparação à testemunha, tendo a análise de regressão apontado um modelo linear para a

202 variável porcentagem de germinação. Corroborando com estes valores, os resultados de

203 primeira contagem e índice de velocidade de germinação (Figura 2B; 2C) foram influenciados

204 negativamente pelo aumento crescente do período de embebição, tendo estas variáveis uma

205 resposta quadrática e linear, respectivamente.

206 O uso de altas temperaturas como forma de escarificação tem como princípio básico a

207 retirada da camada de cera presente no tegumento, diminuindo sua impermeabilidade,

208 permitindo a entrada de água e as trocas gasosas, sendo uma prática bastante utilizada em

209 sementes de espécies florestais (Cardoso, 2004). Apesar de ser uma alternativa prática e de

210 fácil condução, o uso deste método requer atenção especial, já que, a temperatura da água e o

211 tempo de embebição podem vir a reduzir o vigor das sementes (Varela et al. 1991; Matheus e

212 Lopes, 2007; Luz et al. 2008).

 49

213

214 Figura 2: Resultados de porcentagem (A), primeira contagem (B) e índice de velocidade de

215 germinação (C) de sementes de Paspalum regnellii Mez embebidas em água à 60°C por

216 períodos de 0, 30, 60, 90 e 120 segundos.

217

218 Segundo Shimizu et al., 2011, a redução do vigor das sementes expostas a embebição

219 a elevadas temperaturas pode estar atribuída a promoção de lesões nas membranas celulares,

220 provocando assim a desnaturação de enzimas importantes no processo de respiração celular.

221 Embora esta prática tenha reduzido o vigor das sementes de P. regnellii, resultados

222 contraditórios a estes valores foram obtidos por Lacerda et al. (2010), onde o tratamento com

223 água fervente foi efetivo na superação da dormência de sementes de Brachiaria brizantha. Da

224 mesma forma, ao avaliar o uso de tratamentos para superar a dormência de sementes das

225 espécies Adesmia araujoi e Adesmia latifolia, Montardo et al. (2000) afirmaram que a

226 imersão em água quente proporcionou os melhores resultados de porcentagem de germinação.

 50

227 Os valores referentes à porcentagem, primeira contagem e índice de velocidade de

228 germinação de sementes de P. regnellii submetidas a crescentes concentrações de

229 bioestimulante encontram-se ilustrados na Figura 3. Pode-se verificar através da variável

230 porcentagem de germinação que as crescentes concentrações de bioestimulante

231 proporcionaram um incremento no percentual de germinação em comparação a testemunha

232 (Figura 3A), chegando a atingir o valor de 88 % na concentração 8 ml.L-1 de bioestimulante,

233 tendo a análise de regressão apontado um modelo linear para esta variável.

234

235 Figura 3: Resultados de porcentagem (A), primeira contagem (B) e índice de velocidade de

236 germinação (C) de sementes de Paspalum regnellii Mez em substrato umedecido com solução

237 composta pelas concentrações de 0, 2,0, 4,0, 6,0, e 8,0 ml.L-1 de bioestimulante.

238

239 Com comportamento semelhante à porcentagem de germinação, as variáveis primeira

240 contagem e índice de velocidade de germinação foram influenciadas positivamente pelas

 51

241 concentrações de bioestimulante, chegando a atingir o valor de 30 % para plântulas na

242 primeira contagem e 12,31 para o índice de velocidade de germinação em concentrações

243 acima de 6,00 ml.L-1 de bioestimulante (Figura 3B, 3C).

244 Segundo Cardoso (2004), os bioreguladores ou reguladores vegetais exercem um

245 papel primordial na eliminação da dormência das sementes, com destaque para a giberelina

246 (GA3), presente na composição do bioestimulante, que estimula a ação de enzimas hidrolíticas

247 como a alfa-amilase e protease, promovendo hidrólise de reservas armazenadas na semente

248 (Taiz; Zeiger, 2010). Além da giberelina, as citocininas e as auxinas, componentes do

249 bioestimulante, participam em diversos processos fisiológicos de desenvolvimento, incluindo

250 a germinação de sementes e a quebra de dormência das gemas (Croizer et al. 2001).

251 Resultados semelhantes aos observados neste trabalho foram verificados por Silva et

252 al. (2013), onde a utilização de giberelina, componente do bioestimulante, proporcionou um

253 aumento na porcentagem de germinação de sementes de Brachiaria brizantha. Em trabalho

254 semelhante, Dantas et al. (2001) verificaram que sementes de Brachiaria plantaginea

255 escarificadas e mergulhadas em solução contendo giberelina, obtiveram um aumento na

256 emergência de plântulas em relação ao controle. Da mesma forma, Costa et al. (2011)

257 afirmam que o uso de ácido giberélico em sementes de Brachiaria humidicola após a

258 escarificação com ácido sulfúrico (H2SO4 ) durante 15 minutos, reduziu a percentagem da

259 dormência em sementes para menos de 30%.

260 Encontram-se ilustrados na Figura 4 os valores relativos à porcentagem, primeira

261 contagem e índice de velocidade de germinação de sementes de P. regnellii submetidas a

262 crescentes concentrações de nitrato de potássio (KNO3). Pode-se verificar que as crescentes

263 doses proporcionaram um incremento nos valores de porcentagem de germinação (Figura 4A)

264 em comparação ao resultado obtido no tratamento testemunha, podendo-se constatar valores

 52

265 máximos de 86% em concentrações acima de 0,6 g.L-1 de nitrato de potássio, tendo a análise

266 de regressão apontado um modelo linear para esta variável.

267

268 Figura 4: Resultados referentes à porcentagem (A), primeira contagem (B) e índice de

269 velocidade de germinação (C) de sementes de Paspalum regnellii Mez em substrato

270 umedecido com solução composta pelas concentrações de 0, 0,2, 0,4, 0,6 e 0,8 g.L-1 de nitrato

271 de potássio (KNO3).

272

273 Seguindo a mesma tendência encontrada na porcentagem de germinação, os valores de

274 porcentagem de plântulas na primeira contagem e no índice de velocidade de germinação

275 (Figura 4B; 4C) foram influenciados positivamente em todas as concentrações de nitrato de

276 potássio, resultando em valores de 23 % para porcentagem de plântulas na primeira contagem

277 e 10,78 para índice de velocidade de germinação na concentração de 0,2 g.L-1, havendo
 53

278 manutenção destes valores entre as crescentes doses, tendo ambos os parâmetros uma resposta

279 quadrática na análise de regressão.

280 O uso da solução de nitrato de potássio é considerada uma abordagem química

281 adequada para promover a germinação de várias espécies de plantas (Bush et al. 2000). Seu

282 emprego é uma alternativa para superar a dormência de sementes, uma vez que, o NO3-

283 estimula a via pentose fosfato, que depende de oxigênio, dando início a reações metabólicas

284 que culminam no fornecimento de energia e substrato para o crescimento do eixo embrionário

285 (Castro e Alvarenga, 1996).

286 Comportamento semelhante ao encontrado neste trabalho foi observado por Costa et

287 al. (2011), que ao verificar a eficácia de aplicação de substancias promotoras à germinação de

288 sementes de Brachiaria humicola, constataram que o nitrato de potássio foi eficiente na

289 promoção da germinação das sementes desta espécie. Efeitos benéficos também foram

290 encontrados por Shin et al. (2006), onde o uso do nitrato de potássio promoveu acréscimo na

291 porcentagem de germinação de sementes de Paspalum vaginatum Swartz,, bem como uma

292 maior uniformidade deste processo. Ao avaliar diferentes tratamentos para a superação da

293 dormência de sementes de Brachiaria brizantha, Silva et al. (2013) verificaram que o

294 tratamento com nitrato de potássio promoveu aumento significativo na porcentagem de

295 germinação em comparação à testemunha.

296

297 CONCLUSÕES

298 A escarificação com lixa não promove aumento nos parâmetros porcentagem e índice

299 de velocidade de germinação de sementes de P. regnelli, no entanto, promove aumento no

300 número de plântulas na primeira contagem. O ácido sulfúrico não promove o aumento, mas

301 houve um decréscimo no tratamento em embebição por 120s em todos os parâmetros

302 estudados.
 54

303 O tratamento térmico influencia negativamente a germinação, índice de velocidade de

304 germinação e o número de plântulas na primeira contagem.

305 O nitrato de potássio e o biostimulante promovem o aumento da porcentagem de

306 germinação, velocidade e o número de plântulas na primeira contagem, e podem ser utilizados

307 em tratamento para a quebra de dormência de sementes em P. regnellii.

308

309 REFERÊNCIAS

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 58

1 ARTIGO 3

2 Efeito de Trichoderma na emergência de plântulas e desenvolvimento inicial de

3 Paspalum regnellii Mez¹

5 RESUMO

6 Conhecida vulgarmente por macega do banhado, Paspalum regnellii Mez é uma

7 gramínea de ciclo perene, nativa do Bioma Pampa que, embora apresente resultados

8 significativos quanto a ganho de peso em bovinos ainda apresenta limitações no que se refere

9 aos processos de germinação e desenvolvimento inicial. Inseridos neste contexto, fungos do

10 gênero Trichoderma estão entre os microrganismos mais estudados como agentes promotores

11 de germinação e desenvolvimento vegetal. A partir deste contexto, este trabalho teve como

12 objetivo avaliar doses crescentes de dois produtos biológicos compostos por Trichoderma

13 harzianum nas concentrações 2x109 e 5x109 UFC ml-1 e seus efeitos nos processos de

14 emergência e desenvolvimento de P. regnellii. O experimento, dividido em duas etapas, foi

15 conduzido em casa de vegetação, sendo que na primeira etapa avaliou-se a emergência das

16 plântulas a cada dois dias até o 27º dia após a semeadura e a seguir o desenvolvimento inicial

17 das plantas, através da avaliação de parâmetros radiculares e determinação das massas fresca

18 e seca da parte área e raiz, aos 40 dias após a semeadura. Na segunda etapa, verificou-se o

19 desenvolvimento das plantas através de avaliação morfogênica e determinação da massa

20 fresca e seca da parte aérea aos 70 dias após a semeadura. Os resultados obtidos mostraram

21 que os dois produtos biológicos compostos por trichoderma não influenciaram o processo de

22 porcentagem e velocidade de emergência, porém, pode-se constatar que os dois produtos

23 biológicos promoveram o desenvolvimento da parte aérea e do sistema radicular de P.

24 regnellii.

25

¹
Artigo escrito nas normas da revista Pesquisa Agropecuária Tropical (ISSN 1983-4063)
 59

26 PALAVRAS CHAVE: Forrageira nativa, Trichoderma harzianum, produto biológico.

27

28 Trichoderma effect on seedling emergence and early development of Paspalum

29 regnellii Mez

30

31 ABSTRACT

32 Commonly known by the grass waterlogged, Paspalum regnellii Mez is a perennial

33 grassy cycle native biome Pampa that, although having significant results as cattle weight

34 gain also presents limitations in relation to the germination and initial development processes.

35 Inserted in this context, Trichoderma fungi are among the most studied microorganisms as

36 promoters of seed germination and plant growth. From this context, this study aimed to

37 evaluate increasing doses of two biological products consisting of Trichoderma harzianum in

38 the 2x109 and 5x109 CFU concentrations ml-1 and its effects on emergency procedures and

39 development of P. regnellii. The experiment was divided into two stages, it was conducted in

40 a greenhouse, and in the first stage emergency was evaluated seedling every other day until

41 the 27th day after sowing and after the initial development through assessment root

42 parameters and determination of fresh and dry part of the area and root, 40 days after sowing.

43 In the second stage, there was the development of plants through morphogenic evaluation and

44 determination of fresh and dry mass of shoots 70 days after sowing. The results showed that

45 the two biological products consisting of Trichoderma did not influence the process of

46 emergence percentage and speed, however, it can be seen that the two organic products

47 promoted the development of shoot and root system of P. regnellii.

48

49 KEY WORDS: Native Forage, Trichoderma harzianum, biologic product.

50
 60

51 INTRODUÇÃO

52 O gênero Paspalum ocupa um lugar de destaque entre as gramíneas nativas por

53 apresentar um elevado número de espécies representantes, com uma ampla variabilidade

54 morfológica e uma extensa distribuição geográfica (Aliscioni, 2002). Segundo Valls &

55 Pozzobon (1987), este gênero é caracterizado por envolver um grande número de espécies

56 com destacáveis valores forrageiros. Por apresentar elevada qualidade, ocorre um crescente

57 interesse pelo cultivo por espécies deste gênero, devido basicamente à adaptação destas às

58 condições edafoclimáticas de sua região de origem (Maraschin, 1999).

59 A espécie em estudo, o Paspalum regnellii Mez, é caracterizada por Araújo (1971)

60 como uma gramínea nativa de ciclo perene, de estrutura cespitosa e com rizomas curtos.

61 Apresenta características bastante interessantes quanto à produção forrageira, atingindo

62 valores próximos a 30.000 kg ha-1 de massa seca ao ano, esta de boa qualidade, com até 17 %

63 de proteína bruta (Batista & Godoy, 2004). Segundo Meireles et al. (2006) esta espécie é

64 caracterizada por ser uma das constituintes do gênero Paspalum com boa resposta a

65 ambientes melhorados (irrigação e fertilidade do solo), sendo recomendada para uso em

66 experimentos de avaliação animal. Entretanto, mesmo tendo características consideradas

67 promissoras para uma planta forrageira, esta espécie ainda apresenta limitantes à

68 produtividade considerados comuns em espécies forrageiras nativas, principalmente no que

69 envolve os processos de germinação, estabelecimento e desenvolvimento inicial (König et al,

70 2014).

71 Avaliado como uma alternativa para o aumento de rendimento de biomassa e,

72 consequentemente à produção de grãos de culturas, o uso de produtos biológicos apresenta-se

73 como uma tecnologia alternativa no desenvolvimento da agricultura sustentável, uma vez que,

74 promove o desenvolvimento de plantas e ao mesmo tempo reduz o uso excessivo de produtos

75 químicos (Machado et al. 2012). De acordo com Viterbo et al. (2005) entre os principais
 61

76 benefícios proporcionados pela aplicação de produtos biológicos pode-se destacar a proteção

77 contra patógenos, o aumento da taxa de germinação e vigor das sementes, a promoção do

78 crescimento e aumento do rendimento das plantas.

79 Empregados como inoculante em diversas culturas agrícolas, os fungos do gênero

80 Trichoderma spp. são considerados microrganismos de vida livre e estão entre os agentes de

81 biocontrole mais estudados e conhecidos no mundo (Verma, 2007). Os fungos deste gênero

82 são considerados naturais do solo, com desenvolvimento em solos orgânicos, podendo viver

83 saprofiticamente ou parasitando outros fungos (Melo, 1998). Apresentam espécies

84 economicamente importantes por sua atuação no controle biológico além de apresentarem

85 capacidade de produzir antibióticos e enzimas, bem como a produção metabólica com

86 atividades análogas aos hormônios vegetais (Carvajal et al. 2009). De acordo com Almança,

87 (2005), os fungos deste gênero, além de possuírem potencial como biocontroladores e

88 promotores de crescimento vegetal, têm a capacidade de mostrarem competência rizosférica,

89 quando próximo das raízes das plantas. Segundo Harman et al. (2004), podem ser utilizados

90 como formulados em biopesticidas, biofertilizantes e inoculantes de solo.

91 Segundo Kleifeld & Chet (1992), isolados de Trichoderma harzianum são capazes de

92 gerar benefícios nos processos de germinação e no crescimento inicial de plantas através do

93 tratamento da semente e de sua aplicação no solo. De acordo com Machado et al. (2012),

94 diversos trabalhos recentes relatam os benefícios do trichoderma na promoção da germinação,

95 no crescimento e na produtividade em diversas culturas com importância agronômica.

96 A partir deste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do tratamento

97 das sementes utilizando-se o fungo trichoderma, como parte da formulação de dois produtos

98 biológicos, na emergência de plântulas e no desenvolvimento inicial da parte aérea e do

99 sistema radicular de P. regnellii.

100
 62

101 MATERIAL E MÉTODOS

102 O experimento foi conduzido em casa de vegetação do Departamento de Solos da

103 Universidade Federal de Santa Maria, Santa Maria/RS (UFSM). As sementes de P. regnellii

104 utilizadas neste trabalho foram coletadas de plantas pertencentes ao acesso BRA-007382

105 localizadas em área experimental na Embrapa Pecuária Sul, município de Bagé, RS. Como

106 fontes do agente biológico trichoderma foram utilizados dois produtos biológicos fornecidos

107 pela empresa Kopert do Brasil LTDA, sendo o primeiro, o Trichodermil 1306 SC ®, composto

108 pela concentração 2x109 UFC mL-1, e o segundo produto, este ainda não registrado, composto

109 pela concentração de 5x109 UFC mL-1, ambos compostos pela espécie Trichoderma

110 harzianum.

111 Previamente à instalação do experimento em casa de vegetação, realizou-se a

112 determinação dos tratamentos através da inoculação das sementes de P. regnellii com as

113 seguintes doses dos dois produtos biológicos: 0,0; 5,0; 10,0; 15,0 e 20,0 mL para cada kg de

114 semente. O tratamento das sementes foi realizado de acordo com metodologia recomendada

115 por Nunes (2005), em que as doses dos produtos foram colocadas diretamente no fundo de um

116 saco de plástico transparente, com altura de 15 cm, onde logo após foram depositadas as

117 sementes. Após o processo de inoculação, fez-se a instalação do experimento em casa de

118 vegetação, sendo este dividido em duas etapas:

119 Emergência e desenvolvimento inicial de P. regnellii: As sementes inoculadas com

120 as doses crescentes dos produtos biológicos foram semeadas a uma profundidade de 0,5 cm

121 em vasos com capacidades de 1 litro compostos por substrato comercial da marca Plantmax ®.

122 Previamente a semeadura, fez-se a determinação da umidade dos vasos, sendo esta mantida

123 durante as avaliações em 70 % da capacidade de campo. O experimento foi disposto em

124 delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições com 50 sementes cada,

125 totalizando 200 sementes por tratamento.

 63

126 Aos vinte e sete dias após a semeadura, fez-se a contabilização da emergência de P.

127 regnellii, com contagens de plântulas emergidas a cada dois dias a partir da instalação do

128 teste, sendo os resultados expressos em porcentagem. Conjuntamente com o teste de

129 emergência, fez-se a determinação do índice de velocidade de emergência (IVE), calculado

130 com o auxilio da fórmula proposta por Maguire (1962):

131 IVE = E1/N1 + E2/N2 + ...En /N,

132 onde E1, E2, En = número de plântulas emergidas na primeira, segunda e até a última

133 contagem e N1, N2, Nn = número de dias desde a primeira, segunda e até a última contagem

134 realizada.

135 Após a contabilização final de emergência, foi realizado um desbaste, permanecendo

136 após este processo três plantas por vaso. Aos 40 dias após a semeadura fez-se a determinação

137 das variáveis massa fresca e seca da parte aérea e radicular. Para esta avaliação, as plantas

138 foram cortadas na altura do colo e em seguida procedeu-se à pesagem da parte aérea e

139 radicular em balança de precisão 0,001 g. Após a pesagem para determinação de massa fresca,

140 o sistema radicular de cada planta foi escaneado, sendo as imagens obtidas analisadas com o

141 auxílio do software WinRHIZO Pro 2013, onde foram quantificadas as características de

142 morfologia radicular comprimento total (cm), área de superfície total (cm2) volume total (cm3)

143 e número de raízes finas com até 0,6 mm de diâmetro.

144 Em seguida, os materiais provenientes da parte aérea e radicular foram acondicionados

145 em envelopes de papel, devidamente identificados e levados para estufa de secagem com

146 sistema de ventilação forçada, a temperatura de 65ºC. Após atingirem o peso constante fez-se

147 a pesagem novamente para determinação da massa seca.

148 Desenvolvimento de plantas de P. regnellii: As sementes inoculadas foram semeadas

149 a uma profundidade de 0,5 cm em vasos com capacidades de quatro litros, compostos por

150 substrato comercial da marca Plantmax®. Previamente a semeadura, fez-se a determinação da

 64

151 umidade dos vasos, sendo esta mantida em 70 % da capacidade de campo. O experimento foi

152 disposto em delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições contendo 30

153 sementes cada, totalizando 120 sementes por tratamento. Aos quinze dias após a semeadura,

154 fez-se um desbaste, permanecendo após este processo três plantas por vaso.

155 A avaliação das características morfogênicas das plantas foi iniciada aos 30 dias após

156 a semeadura, onde para cada tratamento foram estabelecidas quatro repetições compostas por

157 três perfilhos cada. O monitoramento dos perfilhos foi realizado duas vezes por semana com

158 auxílio de uma régua melimetrada, onde foram calculadas as taxas de aparecimento de folhas

159 (TApF, folhas/perfilho.dia), alongamento de folhas (TAlF, cm/perfilho.dia), filocrono

160 (intervalo de tempo necessário para a emissão de folhas consecutivas) e taxa de alongamento

161 do colmo (TAlC, cm/perfilho.dia). A avaliação das características morfogênicas foi encerrada

162 aos sessenta dias após a semeadura.

163 Aos setenta dias após a semeadura foram determinadas as variáveis massa fresca e

164 seca da parte aérea das plantas. Para esta avaliação, as plantas foram cortadas na altura do

165 colo e em seguida pesadas em balança de precisão 0,001 g. Após este processo, estes

166 materiais foram acondicionados em envelopes de papel e levados para estufa de secagem com

167 sistema de ventilação forçada, a temperatura de 65ºC. Após atingirem o peso constante foi

168 feito a pesagem novamente para determinação da massa seca.

169 Na análise estatística, fez-se a análise de médias para os resultados de emergência

170 através do teste de Tukey a 5 % e a análise de regressão para os demais resultados de

171 desenvolvimento das plantas, ambos com auxílio do programa estatístico BioEstat 4.0 (Ayres

172 et al. 2005).

173

174 RESULTADOS E DISCUSSÃO

 65

175 Pode-se observar através da análise de médias que as doses utilizadas, independente

176 do produto biológico testado, não proporcionaram valores de porcentagem de emergência

177 (Figura 1 A) e de índice de velocidade de emergência (Figura 1 B) diferentes

178 significativamente do tratamento testemunha quando comparados pelo teste de Tukey à 5% de

179 probabilidade. Pode-se constatar também através da análise de médias que não houve

180 diferença significativa entre os produtos testados e suas respectivas doses nas variáveis

181 porcentagem e índice de velocidade de emergência.

182

183

184 Figura 1: Valores de porcentagem (A) e índice de velocidade de emergência (B) de Paspalum

185 regnellii aos 30 dias após a emergência provenientes de sementes tratadas com as doses 0,0;

186 5,0; 10,0; 15,0 e 20 ml kg-1 de dois produtos biológicos compostos por Trichoderma

187 harzianum com concentrações de 2x109 e 5x109 UFC mL-1

188

189 Resultados semelhantes aos deste trabalho, em que o trichoderma não influenciou no

190 processo de germinação também foram encontrados por Martini et al. (2014) na cultura do

191 arroz, onde estes autores verificaram que os valores de porcentagem de germinação não foram

192 influenciados significativamente pelo tratamento das sementes por isolados do fungo

193 trichoderma. Da mesma forma, Ethur et al. (2008) observaram que isolados de T. harzianum
 66

194 não proporcionaram diferença significativa no percentual de germinação e de emergência na

195 cultura do tomateiro.

196 Embora o tratamento das sementes com os produtos biológicos não tenha promovido

197 acréscimo nos valores de porcentagem e de velocidade de emergência, podem ser encontrados

198 na literatura estudos que relatam os efeitos benéficos gerados por isolados de trichoderma no

199 processo de germinação de sementes de diversas culturas. Resultados obtidos por Menezes

200 (1992), nas culturas de feijão e soja, mostraram que o tratamento das sementes com

201 trichoderma promoveu um incremento na porcentagem de germinação, crescimento e

202 desenvolvimento de plantas de feijão, bem como um maior índice de velocidade de

203 germinação em plantas de soja. Resultados semelhantes foram obtidos por Hassan et al.

204 (2013), onde a utilização de Trichoderma viride, na concentração 6x101 UFC ml-1, melhorou

205 significativamente a germinação de sementes de Striga hermonthica em relação ao controle.

206 Em um estudo realizado por Melo (1996), este autor afirma que os benefícios proporcionados

207 por trichoderma no processo de germinação e emergência de plantas estão relacionados

208 principalmente a capacidade deste fungo em produzir hormônios, vitaminas bem como pela

209 conversão de materiais úteis à planta.

210 A partir dos resultados obtidos na avaliação de desenvolvimento inicial de P regnellii

211 aos 40 dias após a emergência (Figura 2), pode-se observar que as doses dos produtos

212 biológicos influenciaram o desenvolvimento inicial das plantas, podendo-se constatar um

213 acréscimo crescente nos valores das variáveis massa seca e fresca da parte aérea (Figura 1 A;

214 B) e do sistema radicular (Figura 1 C; D) em doses de até 15 mL de ambos os produtos

215 biológicos para cada kg de semente, tendo a análise de regressão apresentado uma resposta

216 quadrática para as variáveis avaliadas.

217 Resultados semelhantes aos encontrados neste trabalho foram obtidos por Harman

218 (2004), onde plântulas de milho provenientes de sementes inoculadas com o fungo
 67

219 trichoderma mostraram maior produção de biomassa aos 10 dias após a emergência e, após

220 terem o solo infestado com os fungos fitopatogênicos Pythium ultimum e Colletotrichum

221 graminicola, não foram afetadas com os sintomas severos das doenças.

222

223

224 Figura 2: Valores de massa fresca (A) e seca (B) de parte aérea, fresca (C) e seca (D) de raiz

225 de Paspalum regnellii aos 40 dias após a emergência provenientes de sementes tratadas com

226 as doses 0,0; 5,0; 10,0; 15,0 e 20 ml kg-1 de dois produtos biológicos compostos por

227 Trichoderma harzianum com concentrações de 2x109 e 5x109 UFC mL-1

228

229 Benefícios gerados pelo fungo trichoderma também foram observados por Resende et

230 al. (2004), que constataram um maior acúmulo de matéria seca do sistema radicular em

231 plantas de milho provenientes de sementes inoculadas com trichoderma. Da mesma forma

232 Chacón et al. (2007), verificaram que plantas de tomate inoculadas com T. harzianum

233 apresentaram aumento da proliferação de raízes e consequente aumento na massa foliar das
 68

234 plantas. Segundo Viterbo et al. (2005), as razões para o aumento do desenvolvimento e

235 consequentemente o aumento do rendimento da planta por trichoderma se deve

236 principalmente ao fato da produção de fitohormônios, ocasionando a melhora da assimilação

237 de nutrientes. Ao avaliar os benefícios gerados por trichoderma, Osiewacz (2002) verificou

238 que estirpes deste fungo são capazes de produzir moléculas de citocinina e giberelina, sendo

239 que a produção controlada destes compostos pode melhorar o desenvolvimento da planta.

240 É possível verificar também na Figura 2 que os tratamentos compostos por doses

241 superiores à 15 mL de ambos os produtos biológicos promoveram um decréscimo no

242 desenvolvimento da parte aérea e do sistema radicular em comparação aos valores obtidos em

243 doses inferiores, resultando em valores de massa seca e fresca semelhantes aos obtidos no

244 tratamento testemunha. Este comportamento observado em altas concentrações pode ser

245 justificado pela ocorrência de um processo conhecido por autoinibição, que segundo Hjeljord

246 & Tronsmo (2003), ocorre devido à aplicação de altas concentrações de propágulos de

247 trichoderma, ocasionando desta forma uma considerável inibição da germinação dos próprios

248 conídios.

249 Pode-se verificar através da avaliação do sistema radicular de plantas de P. regnellii

250 aos 40 dias após a semeadura (Figura 3) que as doses crescentes dos produtos biológicos

251 promoveram um incremento do desenvolvimento do sistema radicular das plantas em

252 comparação ao tratamento testemunha, tendo a análise de regressão apresentado uma resposta

253 quadrática para todas as variáveis radiculares. É possível observar através da análise de

254 regressão que as variáveis radiculares apresentaram curvas de desenvolvimento semelhantes

255 às observadas na avaliação do peso de raiz, com destaque para as variáveis que possibilitam

256 uma maior representatividade do sistema radicular área superficial (Figura 3B) e volume total

257 de raiz (Figura 3C), as quais apresentaram um aumento crescente em doses de até 15 ml para

258 os dois produtos biológicos.

 69

259

260 Figura 3: Valores de comprimento total (A), área superficial (B), volume (C) e comprimento

261 de raízes finas (D) de plantas de Paspalum regnellii sob as doses 0,0; 5,0; 10,0; 15,0 e 20 mL

262 kg-1 de dois produtos biológicos compostos por Trichoderma harzianum com concentrações

263 de 2x109 e 5x109 UFC mL-1 no tratamento das sementes.

264

265 De acordo com Benítez et al. (2004), a promoção do desenvolvimento do sistema

266 radicular pelo tratamento das sementes com trichoderma ocorre devido a capacidade do fungo

267 trichoderma em aumentar a superfície total do sistema radicular, possibilitando um maior

268 acesso aos elementos minerais. É possível verificar também na Figura 3 que as doses dos

269 produtos biológicos avaliados promoveram um incremento crescente na expansão do sistema

270 radicular, tendo as variáveis comprimento total (Figura 3A) e comprimento de raízes finas

271 (Figura 3D) uma resposta quadrática para os dois produtos biológicos na análise de regressão.
 70

272 Concordando com os valores obtidos neste trabalho, Mishra & Sinha (2000),

273 concluiram que o tratamento das sementes de arroz com Trichoderma virens e T. harzianum

274 promoveu um aumento considerável no comprimento de raiz, altura e peso seco de plantas.

275 Em concordância com estes resultados, Aguiar et al. (2015) verificaram através do teste de

276 allium cepa que metabólitos produzidos por trichoderma estimularam a divisão celular em

277 pontas de raízes de cebola. A promoção do desenvolvimento radicular por trichoderma

278 também foi constatada no trabalho de Contreras-Cornejo (2009), onde estes autores

279 observaram que sementes de Arabidopsis thaliana inoculadas com T. virens e Trichoderma

280 atroviride promoveram uma maior concentração de auxina em plantas, inferindo em aumento

281 da produção de biomassa e estimulação do desenvolvimento das raízes laterais de menor

282 diâmetro. Avaliada como um hormônio de grande importância para o desenvolvimento

283 radicular da planta, a auxina teve produção observada por Hoyos-Carvajal et al. (2009) em

284 60% das cepas de um total de 101 isolados de Trichoderma spp.

285 As características morfogênicas de plantas de P. regnellii (Figura 4) avaliadas na

286 segunda etapa do experimento mostram a partir dos resultados obtidos que as doses crescentes

287 dos dois produtos biológicos incrementaram o desenvolvimento das plantas de P. regnellii de

288 uma forma semelhante à encontrada na primeira etapa do experimento, tendo a análise de

289 regressão uma resposta quadrática para todas as variáveis morfogênicas avaliadas. Pode-se

290 destacar que, o produto biológico composto pela concentração de 2x109 UFC mL-1

291 proporcionou um aumento crescente das taxas de aparecimento de folhas (Figura 4A) e

292 também uma redução no valor da taxa de filocrono (Figura 4B) em doses até 15 mL para cada

293 kg de semente, sendo que doses superiores a esta promoveram a estabilização do

294 desenvolvimento das plantas de P. regnellii, resultando em valores semelhantes aos

295 encontrados para o tratamento testemunha.

296
 71

297 Figura 4: Valores de taxas de aparecimento de folhas (TApF, folhas/perfilho.dia),

298 alongamento de folhas (TAlF, cm/perfilho.dia), filocrono e taxa de alongamento do colmo

299 (TAlC, cm/perfilho.dia) de plantas de Paspalum regnellii aos 70 dias após a emergência sob

300 as doses 0,0; 5,0; 10,0; 15,0 e 20 mL kg-1 de dois produtos biológicos compostos por

301 Trichoderma harzianum com concentrações de 2x109 e 5x109 UFC mL-1 no tratamento das

302 sementes.

303

304 Resultados semelhantes envolvendo a promoção do desenvolvimento de plantas por

305 trichoderma foram obtidos por Salas-Marina et al. (2011), onde estes autores verificaram que

306 a aplicação de T. atroviride em raiz de Arabidopsis promoveu um incremento nos valores de

307 área foliar e consequentemente um maior desenvolvimento da planta. Em trabalho realizado

308 por Inbar et al. (1994), o isolado T203 de T. harzianum proporcionou um aumento de 96% de

309 área foliar em plântulas de pepino cultivadas em substrato tratado. A promoção do

310 desenvolvimento das plantas pela inoculação com o fungo trichoderma encontra-se
 72

311 relacionada com as modificações no padrão de expressão de proteínas do metabolismo vegetal

312 durante o processo de interação. Em análise do proteoma da interação pepino e Trichoderma

313 asperellum, Shoresh & Harman (2008) observaram que genes e proteínas envolvidas no

314 metabolismo energético e fotossíntese tiveram aumento de expressão, sugerindo o aumento do

315 crescimento da planta.

316 Observa-se também na Figura 4 que os produtos biológicos promoveram um

317 incremento na taxa de alongamento do colmo (Figura 4 D) em plantas de P. regnellii

318 provenientes de sementes tratadas com doses de até 10 mL kg-1. Segundo Gravel et al. (2007)

319 o crescimento por alongamento de caules jovens em plantas que apresentam interação com

320 trichoderma ocorre principalmente pela produção de ácido indolacético. Ao avaliar o efeito do

321 tratamento de sementes de feijão caupi tratadas com T. harzianum, Braga et al. (2003)

322 observaram a ocorrência de maior estatura e maior taxa de crescimento de plantas

323 provenientes de sementes tratadas em comparação a testemunha.

324 Corroborando com os valores observados através das características morfogênicas, é

325 possível constatar que as variáveis massa seca e fresca (Figura 5) de parte aérea de plantas de

326 P. regnellii aos 70 dias foram influenciadas pelas crescentes doses dos produtos biológicos de

327 forma semelhante aos resultados obtidos aos 40 dias após a emergência, tendo a análise de

328 regressão uma resposta quadrática para estas variáveis. É possível verificar que o produto

329 composto pela concentração 2x109 UFC mL-1 proporcionou um incremento na produção de

330 massa fresca e seca de P. regnellii com doses de até 10 mL para cada kg de semente.

331 Entretanto, observa-se para estas mesmas variáveis que doses superiores não promoveram

332 acréscimo no desenvolvimento das plantas, resultando em valores semelhantes aos obtidos no

333 tratamento testemunha.

334
 73

335

336 Figura 5: Valores de massa fresca (A) e seca (B) de plantas de Paspalum regnellii aos 70 dias

337 após a emergência sob as doses 0,0; 5,0; 10,0; 15,0 e 20 ml kg-1 de dois produtos biológicos

338 compostos por Trichoderma harzianum com concentrações de 2x109 e 5x109 UFC/ml-1 no

339 tratamento das sementes.

340

341 Estudando os benefícios à planta gerados por trichoderma, Harman et al. (2012)

342 afirmam que esta interação causa alterações na arquitetura do sistema radicular, possibilitando

343 uma aumento da sua área superficial, alterando em consequência a fisiologia da planta e

344 resultando em um conjunto de benefícios como a resistência à patógenos e eficiência

345 fotossintética. Resultados semelhantes aos observados neste trabalho foram encontrados por

346 Datnoff & Pernezny (2001), onde estes autores constataram que o trichoderma promoveu o

347 aumento do percentual de crescimento, espessura do caule, área foliar, massa fresca e seca de

348 plantas de tomate em casa de vegetação.

349 Embora o produto composto pela concentração de 5x109 UFC mL-1 (Figura 5) tenha

350 promovido o desenvolvimento de plantas através da dose de 5 mL para cada kg de semente,

351 observa-se que doses superiores à esta ocasionaram uma redução dos valores de massa seca e

352 fresca em comparação ao tratamento testemunha. De acordo com Vinale et al. (2008),

353 isolados de trichoderma podem vir a produzir substâncias que possuem efeito inibidor no

354 processo de germinação de sementes e também no desenvolvimento de plantas em elevadas

355 concentrações. Resultados obtidos por Hajieghrari (2010) mostraram que isolados de
 74

356 trichoderma reduziram a porcentagem de emergência de plântulas e uma diminuição do

357 comprimento de raízes de milho em comparação com o tratamento testemunha. Da mesma

358 forma, Wiethan (2015) constatou que doses com concentrações de 10¹¹ de trichoderma

359 promoveram uma redução da porcentagem de emêrgencia, bem como um menor

360 desenvolvimento do sistema aéreo e radicular de plantas de alface.

361

362 CONCLUSÃO

363 Doses crescentes até 20 mL kg-1 dos produtos biológicos com concentrações 2x109 e

364 5x109 UFC mL-1 compostos pelo fungo Trichoderma harzianum não influenciaram o

365 processo de porcentagem e emergência de plântulas de P. regnellii.

366 Os produtos biológicos avaliados promoveram um maior desenvolvimento de P.

367 regnellii nas duas etapas de avaliação (aos 40 e 70 dias), sendo que os maiores benefícios

368 foram observados nas doses de até 15 mL kg-1 para o produto com concentração 2x109 e 5 mL

369 kg-1 para o produto com concentração 5x109.

370

371 LITERATURA CITADA

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CONCLUSÃO

O armazenamento das sementes de P. regnellii por um período prolongado promoveu

a superação da dormência das sementes. A densidade das sementes influenciou na
porcentagem de germinação e no vigor das sementes de P. regnellii, uma vez que, sementes
de maior densidade apresentaram um maior vigor quando comparadas as sementes mais leves.
A partir dos tratamentos de superação de dormência, observou-se que o nitrato de
potássio e o biostimulante promoveram significativamente o aumento na porcentagem de
germinação, índice de velocidade e o número de plântulas na primeira contagem, e podem ser
utilizados em tratamento para a quebra de dormência de sementes em P. regnellii.
Doses crescentes dos produtos compostos por Trichoderma harzianum nas
concentrações 2x109 e 5x109 UFC/ml não influenciaram no processo de porcentagem e
emergência de plântulas de P. regnellii. Porém, pode-se observar que os produtos biológicos
testados proporcionaram acréscimo no crescimento de plantas de P. regnellii avaliadas aos 40
e aos 70 dias após a semeadura. Ambos os produtos proporcionaram o maior crescimento do
sistema aéreo e radicular de P. regnellii em comparação ao tratamento testemunha.