Croissance bactérienne (3)

COURS DE MICROBIOLOGIE GÉNÉRALE
Préparé par : Pr. Aicha AIT ALLA
Section SV4
Chapitre V. CROISSANCE BACTERIENNE
Définition )1
* La croissance = développement ordonné des composants d'un

organisme (accroissement de taille et de volume.)
* Chez les bactéries, la croissance se traduit par une augmentation du

nombre d'individus. L'accroissement est donc synonyme de multiplication
cellulaire.
* cet accroissement s’accompagne par :
- une diminution de la quantité de matières nutritives disponibles
- une augmentation des déchets dans le milieu
- modification de certains paramètres du milieu (le pH, le potentiel

d'oxydo-réduction, la conductivité, la pression osmotique,
Donc pour se multiplier, une bactérie doit être cultivée sur

Des Milieux de culture
Cycle cellulaire bactérien
Un cycle cellulaire bactérien se

décompose en trois étapes :
- l'initiation (B),
- la réplication de l'ADN
chromosomique (C)
- la division cellulaire (D)
C ne débute qu'à la fin de la

période B et D ne débute que
lorsque la réplication de l'ADN
chromosomique est terminée.
Chez Escherichia coli,

* C dure environ 40 min
* D dure environ 20 min.
* B a une durée variable selon
les conditions de culture
2) Méthodes de mesure de la croissance.
* Les techniques permettant l'étude de la croissance sont nombreuses
ce qui montre qu'aucune n'est parfaite.
* Sur un milieu solide, l'étude de la croissance est rendue difficile en
raison de l'agrégation des cellules les unes aux autres.
* En milieu liquide, les cellules sont dispersées ce qui permet des prises
faciles d'échantillons. La croissance peut alors être appréciée en se
basant sur le nombre de cellules ou sur la biomasse bactérienne.

A. Mesure du nombre de bactéries
Lecture au microscope (dénombrement direct) )1
• Le microscope permet une numération totale des cellules
• Elle ne permet pas de distinguer facilement les cellules vivantes
des cellules mortes.
• Le comptage des cellules se fait en utilisant un hématimètre
(cellules de Thoma, de Malassez…)

Cellule de Malassez
Vue de profil
Vue de face
Dénombrement après culture (dénombrement indirect) )2
• Il permet de compter les bactéries viables et cultivables
* c’est la méthode la plus utilisée, elle se fait de différentes façons
• Culture en boite de Pétri
• Méthode du nombre le plus probable (NPP)
• Méthode de filtration sur membrane

a) La Numération sur Gélose en boite de Pétri
incubation
Après incubation on compte le nombre des colonies (choisir les boites

contenant entre 30 et 300 colonies). Comme une colonie provient d’une seule
cellule ou d’un amas de cellules, on exprime le résultat en UFC/ volume de
l'échantillon. (ne pas oublier le facteur de dilution).
b) La Numération par la méthode du nombre le plus probable (NPP)
* Ce dénombrement se fait en milieu liquide
• Le calcul du nombre le plus probable utilise des dilutions de
l'échantillon et pour l'interprétation fait appel à des calculs de
probabilité
* La précision de cette méthode est nettement inférieure à la précédente

c) Méthode de filtration sur membrane
• Méthode classique de dénombrement
• Elle consiste à filtrer un volume déterminé d’une suspension sur
une membrane filtrante de cellulose qui est ensuite déposée sur un
Milieu de culture solide.
entonnoir stérile (250 ml) : 1

2 : membrane (0,45gm de porosité)
3 : support en acier
4 : levier (pour casser le vide)
5 : vanne à vide
Appareil de filtration
Membrane de Appareil de filtration
filtration
Dépôt de la membrane
filtrante sur le support
Stérilisation de la surface de en acier de l'appareil de Positionnement de l'entonnoir
l'appareil de filtration filtration sur l'appareil de filtration
L'échantillon est versé dans Récupération de Dépôt de la membrane sur un milieu

l'entonnoir La membrane solide
1 2 3
4
5 6 7
B. Mesure de la biomasse des bactéries
a) Mesure du trouble (ou absorbance)
• Cette méthode consiste à suivre l’évolution de la population bactérienne en

mesurant l’absorbance du milieu de culture grâce à un spectrophotomètre.
• C’est la méthode la plus utilisée pour évaluer la masse microbienne
Principe
C’est une méthode optique fondée sur la propriété que présente toute
suspension de diffracter une partie de l’intensité d’un faisceau de lumière
Qui la traverse en ligne droite.
• Il existe une relation exponentielle entre la quantité de substance
absorbant la lumière et la quantité de lumière absorbée.
• La quantité de substance absorbante dépend de l’épaisseur de la

solution traversée et de la concentration.
* La loi de Beer-Lambert exprime cette relation à travers

la formule suivante :
I0 = intensité de la lumière incidente ;
I = lumière transmise ;
I = I0.10-Klc l = épaisseur traversée (soit souvent 1 cm) ;
K = une constante caractéristique de
la substance
c = la concentration en substance.
On appelle absorbance ou densité optique (DO)

il suffit de mesurer la DO pour en
DO = log(I/ I0) = K’.c déduire la concentration c connaissant
K’
b) Mesure du poids sec
• Les bactéries d’une suspension sont récoltées par centrifugation ou par
filtration sur membrane.
• Après le culot ou le filtre est desséché à 100-110°C jusqu’à poids
Constant et on fait une pesée
* Le poids est généralement exprimé en grammes de matière sèche par litre

3) Croissance et expression mathématique de la croissance.
• A partir d'une unique cellule, on obtient deux cellules filles qui vont
chacune donner à leur tour deux autres cellules et ainsi de suite, selon
une progression géométrique :
1 cellule ---> 2 cellules ---> 4 cellules ---> 8 cellules ---> 16 cellules --->...
* La croissance d’une bactérie placée dans des conditions favorables
est définie par deux paramètres :
@ Le taux de croissance (µ) = nombre de divisions par unité de
temps µ = n/t = 1/G

@ Le temps de génération (G) = temps qui sépare deux
divisions successives G = t/n

Expression mathématique de la croissance *
- Une population bactérienne qui contient un nombre initial de Bactéries X0
- Après une génération X1 = 2 X 0
-Après deux générations X2 = 2 X1 = 2x2 X0 = 22 X0
- Après trois générations

X3 = 2 X2 = 2x2x2 X0 = 23 X0
.
.
. n = nombre de
divisions
- Après n générations
Xn = 2n X0
- La forme logarithmique de cette équation est :
log2 Xn = log2 n + log2 X0

log2 Xn = log2 n + log2 X0
-Le taux de croissance : µ = n/t
-Donc : n = µt
- l’équation devient :
log2 Xn = log2 µt + log2 X0
: Ainsi µ = (log2 Xn - log2 X0) / (t n – t0)
• C’est l’expression mathématique du taux de croissance

• Cette équation permet de déterminer µ expérimentalement
Courbe de croissance en milieu non renouvelé *
Phases de la croissance *
Phase de latence I :
* le taux de croissance nul (µ = 0).
* Sa durée dépend de l'âge des bactéries, du taux
d’inoculum et de la composition du milieu.
* C'est le temps nécessaire à la bactérie pour
synthétiser les enzymes adaptées au nouveau
substrat (pas de phase de latence si repiquage sur
milieu identique au précédent).

Phase d'accélération II : il se produit une augmentation de la vitesse de
croissance.
Phase exponentielle III :
* le taux de croissance atteint un maximum (µ=max). Il est
influencé par certains facteurs appelés paramètres d’action de la
croissance (pH, température, la nature et la concentration des
nutriments)
* Cette phase dure tant que la vitesse de croissance est constante.
* Le temps de doublement des bactéries est le plus court.
* La masse cellulaire est représentée par des cellules viables
(mortalité nulle).
Phase de ralentissement IV :
* la vitesse de croissance régresse.
* Il y a un épuisement du milieu de culture et une
accumulation des déchets.
* Il existe un début d'autolyse des bactéries.
Phase stationnaire :V :
* le taux de croissance devient nul (µ = 0).
* Les bactéries qui se multiplient compensent celles
qui meurent.
Phase de déclin VI :
* le taux de croissance est négatif (µ < 0).
* Toutes les ressources nutritives sont épuisées.
* Il y a accumulation de métabolites toxiques.
* Il se produit une diminution d'organismes viables et une
lyse cellulaire sous l'action des enzymes protéolytiques
endogènes.

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* La croissance = développement ordonné des composants d'un

* Chez les bactéries, la croissance se traduit par une augmentation du

* cet accroissement s’accompagne par :

- une diminution de la quantité de matières nutritives disponibles

- une augmentation des déchets dans le milieu

- modification de certains paramètres du milieu (le pH, le potentiel

Donc pour se multiplier, une bactérie doit être cultivée sur

Un cycle cellulaire bactérien se

- la division cellulaire (D)

C ne débute qu'à la fin de la

Chez Escherichia coli,

* Les techniques permettant l'étude de la croissance sont nombreuses

ce qui montre qu'aucune n'est parfaite.

* Sur un milieu solide, l'étude de la croissance est rendue difficile en

raison de l'agrégation des cellules les unes aux autres.

faciles d'échantillons. La croissance peut alors être appréciée en se

basant sur le nombre de cellules ou sur la biomasse bactérienne.

Lecture au microscope (dénombrement direct) )1

• Le microscope permet une numération totale des cellules

• Elle ne permet pas de distinguer facilement les cellules vivantes

des cellules mortes.

• Le comptage des cellules se fait en utilisant un hématimètre

(cellules de Thoma, de Malassez…)

• Il permet de compter les bactéries viables et cultivables

* c’est la méthode la plus utilisée, elle se fait de différentes façons

• Culture en boite de Pétri

• Méthode du nombre le plus probable (NPP)

• Méthode de filtration sur membrane

Après incubation on compte le nombre des colonies (choisir les boites

* Ce dénombrement se fait en milieu liquide

• Le calcul du nombre le plus probable utilise des dilutions de

l'échantillon et pour l'interprétation fait appel à des calculs de

* La précision de cette méthode est nettement inférieure à la précédente

• Méthode classique de dénombrement

• Elle consiste à filtrer un volume déterminé d’une suspension sur

une membrane filtrante de cellulose qui est ensuite déposée sur un

Milieu de culture solide.

entonnoir stérile (250 ml) : 1

L'échantillon est versé dans Récupération de Dépôt de la membrane sur un milieu

• Cette méthode consiste à suivre l’évolution de la population bactérienne en

• C’est la méthode la plus utilisée pour évaluer la masse microbienne

• La quantité de substance absorbante dépend de l’épaisseur de la

* La loi de Beer-Lambert exprime cette relation à travers

On appelle absorbance ou densité optique (DO)

• Les bactéries d’une suspension sont récoltées par centrifugation ou par

filtration sur membrane.

• Après le culot ou le filtre est desséché à 100-110°C jusqu’à poids

Constant et on fait une pesée

* Le poids est généralement exprimé en grammes de matière sèche par litre

une progression géométrique :

* La croissance d’une bactérie placée dans des conditions favorables

est définie par deux paramètres :

@ Le taux de croissance (µ) = nombre de divisions par unité de

temps µ = n/t = 1/G

divisions successives G = t/n

- Une population bactérienne qui contient un nombre initial de Bactéries X0

- Après une génération X1 = 2 X 0

-Après deux générations X2 = 2 X1 = 2x2 X0 = 22 X0