Micro Bio
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I.1. Cintique de la biomasse Lors de leur division les cellules bactriennes s'allongent puis se divisent en deux. On peut ainsi dfinir : Le nombre de gnration : n : le nombre de gnration double chaque gnration ; si N0 est le nombre de bactries au dpart.
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aprs n gnration, on a :
temps 0 n 2n 3n
Le temps de gnration : G : C'est le temps que dure un cycle de croissance = temps de doublement de la population Si une gnration (n) dure un temps (t), alors G = t/n Par exemple pour E. coli, G = 20 min dans les conditions optimales de croissance L'ge des bactries : l'ge d'une bactrie est compris entre 0 et G.
Cas d'une population en croissance Dans une population en croissance deux situations extrmes peuvent se prsenter : Premire situation : toutes les bactries ont le mme ge : c'est le cas des cultures synchrones ( tout moment, toutes les bactries formant la population se trouvent un mme stade de croissance). C'est ces cultures que peut s'appliquer N = N0 * 2n Deuxime situation : aucune bactrie n'a le mme ge : c'est
La quantification de la biomasse 1 : Mthode optique : Turbidimtrie ou nphlmtrie 2 : Mthode gravimtrique : Dtermination de la masse par pese selon un protocole prcis
mcaniquement ) ou air lift (fermenteur agitation pneumatique) Acide citrique : acidulant (boisson, confiture,
roqueforti : fromages
Remarque: Ces fermentations sont les plus anciennes et les plus utilises l'chelle industrielle. Le but est d'obtenir une concentration en produits ou 9 en
tude de la biomasse tude des phases de la croissance : Ln A = f(t) Les paramtres d'tat ou variables d'tat
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La courbe Ln A600 = f(t) permet de distinguer diffrentes phases lors de cultures asynchrones a : Phase de latence : Priode d'adaptation, au cours de laquelle la cellule synthtise les enzymes et permases ... qui lui seront ncessaires pour mtaboliser les nutriments prsents dans le milieu de culture. Durant cette premire phase, il n'y a pas de reproduction cellulaire : A =A0 b : Phase d'acclration : Dmarrage de la croissance, la reproduction cellulaire commence. A600 augmente, lentement puis de plus en plus vite. c : Phase exponentielle de croissance : Durant cette phase, la vitesse de reproduction cellulaire est au maximum. Cette phase varie d'un micro-organisme l'autre et pour un mme micro-organisme. En effet, elle est fonction des conditions de culture : milieu de culture, temprature, 02, pH etc... d : Phase de ralentissement ou dclration : Durant cette phase, il y a puisement du milieu de culture en nutriments ncessaires la croissance, et accumulation de produits inhibiteurs rsultant du mtabolisme. e : Phase stationnaire : A600 est son maximum, la croissance s'arrte. Cet arrt est du une carence nutritionnelle et / ou des variations physico-chimiques du milieux (forte acidification ou alcalinisation). Les cellules y demeurent vivantes grce leur produits de rserve ou au dveloppement de formes de rsistance (ex : spore). Rq : Cette phase est de dure variable : de quelques heures plusieurs jours. f : Phase de dclin : Les cellules se lysent et meurent (autolysines).
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de latence,
b : x augmente pendant la phase d'acclration,
c : x maximal et constant
pendant la phase exponentielle, d : x diminue pendant la phase de dclration
e : x =0 pendant la phase
stationnaire.
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Le papier semi log fait la conversion des A600, N ou X en log de A600, N ou X , sans utiliser de calculatrice, c'est le quadrillage de la feuille qui ralise automatiquement cette conversion. Ce papier reste trs utilis, car il permet une saisie et un trac immdiat en cours de croissance. Il faut choisir priori ces caractristiques c'est dire le nombre de modules ncessaire au trac (un module correspond une puissance de 10. Souvent deux trois modules suffisent pour la dure des TP. Mthode de travail : Positionner les points Reprer la phase exponentielle Choisir les points X1 et X2 = 2X1 Dterminer graphiquement G Calculer
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tude de la croissance Objectifs Matriser l'utilisation des courbes de croissance Exercice : Dtermination des phases de la croissance Exercice : Travail sur les paramtres d'tat
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0,0186 0,0204 0,0282 0,0366 0,0474 0,0630 0,0840 0,0990 0,1170 0,129
Tracer la courbe de croissance permettant de dterminer les diffrentes phases de la croissance. Dterminer les phases de la croissance. Les dfinir et calculer
tude des substrats Introduction tude du suivi des substrats Les rendements de croissance Influence du substrat sur la croissance :
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tude du suivi des substrats Elles sont dfinies de la mme faon que celles gouvernant la
croissance
microbienne
vitesse
volumique
et
vitesse
spcifiques qui permettent pour ces dernires de comparer des expriences o les concentrations en biomasse sont diffrentes car on ramne l'unit de biomasse le calcul de la vitesse. Remarque : il n'est pas toujours possible de tracer fidlement la courbe S= f(t), donc on approxime la vitesse volumique de consommation par une vitesse globale de consommation rSglobale = S/t entre deux points choisis, ce type de calcul
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Les vitesses Noms & dfinitions vitesse volumique de consommation Formules Units
r'''S = dS/dt
g.L-1.h-1
Qs = S = dS/dt. 1/X
(g de substrat.g-1de biomasse).h-1
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La dtermination graphique se fait par la mesure du coefficient directeur dS/dt et de la lecture de X un mme instant (t), respectivement sur les courbes S = f(t) et X = f(t) Sur l'outil informatique (tableur) soit :
moyenne des X)
on travaille sur trois points : au temps tn : QS = (Sn+1-Sn+1)/ (tn+1 -tn1)/Xn
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Noms
Dfinitions (mthodes)
Formules
Rapport entre la biomasse RX/S = (Xt-Xo)/(St-So) forme et le substrat Xt et St : valeurs un instant t consomm un instant t Rapport entre la biomasse RX/S = (Xf-Xo)/(Sf-So) totale forme et le substrat consomm Xf et Sf finaux, Xo et So sur l'ensemble de la initiaux en g de masse sche/L croissance
Rapport des vitesses Rendement de croissance instantan volumiques de croissance et YX/S = dX/dS = (dX/dt).(dS/dt) (rendement partiel) de consommation
Y : Yield = rendement en anglais
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croissance molaire)
Mthode:Dterminations : La dtermination du rendement instantan se fait partir des courbes X = f(t) et S = f(t).
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tn+1
L'volution de YX/S en fonction du temps pourra tre reprsente sur une courbe en reportant les points ainsi : YX/S = (X2 -X1) / (S1
source varie.
Les phases stationnaires de croissance se situent des niveaux diffrents de concentration en substrat. Le rendement de
Rq: le substrat peut devenir limitant forte concentration. Importance de la nature de l'aliment :
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Les vitesses
Elles sont dfinies de la mme faon que celles gouvernant la croissance microbienne : vitesse volumique et vitesse spcifiques qui permettent pour ces dernires de comparer des expriences o les concentrations en biomasse sont diffrentes car on ramne
Formules
Units g.L-1.h-1
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Mthode:Vitesse spcifique de production "d'un produit" La dtermination graphique se fait par la mesure du coefficient
R = (Pt-Po)/(St-So) Rapport entre le produit P/S Rendement de production form et le substrat Xt et St : valeurs un global consomm un instant t instant t R = (Pf-Po)/(Sf-So) Rapport entre le produit P/S form et le substrat de Pf et Sf finaux, Po et So consomm sur l'ensemble de la initiaux en g de masse sche/L croissance
Rendement production
total
Rendement de production Rapport des vitesses Y = dP/dS instantan (rendement volumiques de production P/S (dP/dt).(dS/dt) partiel) et de consommation
Y : Yield = rendement en anglais
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Dterminations :
coefficients.
Sur le tableur, on travaille sur deux points conscutifs en faisant les rapports(Pn+1-Pn)/ (Sn-Sn+1) en choisissant
arbitrairement tn ou tn+1
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sur une courbe en reportant les points ainsi : YP/S = (P2 -P1) / (S1
- S2) = f(tmoyen) en posant tmoyen = (t1+t2)/2 au niveau de chaque intervalle. tude des productivits Les productivits sont les paramtres d'tat visualiss sur les courbes de production : X= f(t) dans le cas d'une production de biomasse (SCP : single Cell Protein, Levure...), elles dterminent le dimensionnement d'une installation de fermentation et
Productivit volumique horaire maximale : en g.L-1.h-1 (pente la plus forte (orange), on relie l'origine au point (Xm,tm)) Pour obtenir cette productivit, on suppose l'arrt du procd au bout du temps tm, alors que la concentration cellulaire ou la quantit de produit n'a pas atteint sa valeur maximale, d'o une perte de substrat non mtabolis et une diminution du rendement.
Ces
comparaison entre des fermentations ralises dans des fermenteurs de volumes diffrents.
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Dfinition:
Ce sont les paramtres qui influencent les cintiques
microbiennes et donc qui font varier les paramtres d'tat de ces cintiques. Nature de ces facteurs Qualitatif : nature de source de carbone ou d'azote ... Quantitatif : temprature, concentration en substrat ... Rles de ces facteurs
La temprature :
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Cf figure 1 : Trois catgories de micro-organismes : psychrophiles, msophiles et thermophiles. (Cf cours nutrition). Cf figure 2 : Dans les zones ou la temprature n'a pas d'effets nocifs pour la plupart des bactries suit sensiblement la loi d'Arrhenius.
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Ingnierie des bioracteurs de laboratoire L'unit de fermentation Les bioracteurs du LVC Aration et agitation Les diffrents type de bioracteurs
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L'unit de fermentation
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Objectifs
Identifier les diffrentes parties d'un bioracteur S'approprier le vocabulaire spcifique Ensemble d'exercices d'identification, s'appuyant sur le cours fait en STS1 lors du TP d'initiation au gnie fermentaire.
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Vous allez prsent effectuer une srie d'exercices d'auto-valuation. Une synthse vous sera prsente la fin de cette srie de d'exercices.
Aration et agitation Introduction Les systmes d'aration Agitation Les mobiles d'agitation
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Introduction Ces paramtres sont troitement lis car la rpartition des gaz dans le milieu dpend la fois de la diffusion (diffrence de pression voir cours sur le transfert de matire) et des
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Les systmes d'aration Les gaz sont introduits dans le milieu par l'air sparger ou bulleur ou diffuseur. Il en existe diffrentes formes qui vont du tuyau
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Agitation
Dfinition:
L'agitation se dfinit comme l'opration qui cre ou acclre le contact entre deux ou plusieurs phases : particulaire (biotique), gazeuse et liquidienne (abiotiques). L'agitation a donc pour but d'assurer :
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Remarque:
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parfois
un
mme
moteur
alimente
plusieurs
fermenteurs
(couplage indirect)
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Les diffrents type de bioracteurs Les bioracteurs agitation mcanique Les bioracteurs agitation pneumatique
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Les bioracteurs agitation mcanique Il s'agit de fermenteurs en verre renforc (ex : borosilicate) ou acier inoxydable (outre sa rsistance, il limite l'adhsion des
centaines de m3.
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Ces fermenteurs sont les plus frquent car ils diminuent le cot
des fermentations. Il s'agit de fermenteurs en acier qui ne possdent pas de mobiles d'agitation. L'agitation est assure par les mouvements d'air dans le fermenteur (double emploi de l'air).
Il s'agit de modle simple de fermenteur agitation
pneumatique qui de principe sont trs proches desracteurs lit fluidis simple : il s'agit fine d'une et
colonne
Un flux d'air est ralis la base du fermenteur. Le mouvement se cre tout d'abord par la vitesse de l'arrive d'air (= la turbulence) mais surtout par le fait que le milieu la base du fermenteur se trouve tre plus riche en air que celui prsent dans la partie haute du fermenteur. Par cet cart de densit, il se cre un
Les fermenteurs jets : "tubular loop" Pour ces fermenteurs, l'agitation est provoque par des injections importantes de milieu dans le fermenteur. Ces quantits sont prleves la base du fermenteur par une pompe aspirante / refoulante particulire de type WORTHINGTON qui permet de limiter les phnomnes de cavitation (cration de bulles de gaz donc possibilit d'explosion) conscutifs la prsence de bulles de gaz dans le milieu. De plus, le conduit d'injection est particulier dans la mesure o il est plus fin sa base qu'au sommet, ce qui tend acclrer la vitesse d'coulement du fluide l'intrieur. (fluide incompressible dbit constant donc la vitesse augmente) Pour certaines cultures qui ncessitent une oxygnation, on alimente le milieu en gaz par injection d'air dans la partie suprieure du fermenteur qui se trouve aspir par le fluide car sa vitesse s'acclre (phnomne de VENTURI). Le gaz contribue ainsi l'agitation ( comme la vitesse est plus rapide, la pression est plus faible que la pression atm et donc il aspire l'air : principe de la trompe vide) Quand le fluide arrive dans le milieu, il passe d'un coulement laminaire un coulement turbulent, ce qui permet une meilleure homognisation. Selon les circuits d'coulement du milieu, il est possible de distinguer des fermenteur de type DEEP-JET (un seul circuit) et DEEP-SHAFT (plusieurs circuits). Ce sont les fermenteurs les plus conomiques (plus faible cot de transfert en oxygne). Ils sont gnralement utiliss pour la production de POU (protine d'organisme cellulaire) = SCP (single cell protein)
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