REPLUBLIQUE DU CAMEROUN REPUBLIC OF CAMEROON

************ ************
PAIX-TRAVAIL-PATRIE PEACE –WORK- FATHERLAND
************** ************
MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT MINISTRY OF HIGHER EDUCATION
SUPERIEUR *************
************* THE UNIVERSITY OF MAROUA
UNIVERSITE DE MAROUA *************
************* FACULTY OF SCIENCE
FACULTE DES SCIENCES *************
*********** DEPARTMENT OF BIOLOGICAL
DEPARTEMENT DES SCIENCES SCIENCE
BIOLOGIQUES

LICENCE PROFESSIONNELLE EN ANALYSES BIOLOGIQUES ET BIOCHIMIQUES

UNITE D’ENSEIGNEMENT : BIOCHIMIE CLINIQUE (ABB242)
TRAVAIL PERSONNEL DE L’ÉTUDIANT

THEME 11 :
Intérêts ET LIMITES DES METHODES
ELISA DANS L’EXPLORATION EN BIOCHIMIE
CLINIQUE

Membres du groupe :
N° Noms et prénoms Matricules
1 ROGER ABAI ESAIE FOULNA 21A0083FS
2 ROMNOBA OUANCHEBE SOSTHENE 21A0053FS
3 SALEH TATA HAMAR 21A0086FS
4 SOUSSEE ODETTE 21A0057FS
5 TAPSYA ZEOUNA NICANOR 21A0067FS
6 TEADOUM FLORENT NGAKOUTOU 21A1810FS
7 TOUPOURI JEAN PIERRE 22A1176FS

Enseignante : Mme NGWA

ANNÉE ACADÉMIQUE : 2022-2023

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 Sommaire

INTRODUCTION

I. METHODE ELISA DE TYPE DIRECT

1. Principe
2. Avantage/ inconvénient
3. Limite
4. interférence
II. METHODE ELISA DE TYPE INDIRECT
1. Principe
2. Avantage/ inconvénient
3. Limite
4. interférence
III. METHODE ELISA DE TYPE SANDWICH
1. SANDWICH DIRECT
a. Principe
b. Avantage/ inconvénient
c. Limites
d. interférence
2. SANDWICH INDIRECT
i. Principe
ii. Avantage/inconvénient
iii. Limites
iv. interférences
IV. METHODE ELISA DE TYPE COMPETITION
1. COMPETITION DIRECTE
a) principe
b) avantages et inconvénients
c) limites
d) interférences
2. COMPETITION INDIRECTE
a) principe
b) avantages et inconvénients
c) limites
d) interférences
CONCLUSION

2
 INTRODUCTION

Les dosages immuno-enzymatiques sont relativement récents. Engwall et Van Weeman

réalisent les premiers ELISA (enzyme linked immuno sorbent assay) en 1971. Il s'agit d'un
dosage dans lequel un des réactifs (l'antigène ou l'anticorps à doser) est immobilisé (adsorbé) sur
une plaque (puis). La révélation de la réaction antigène-anticorps est possible grâce au marquage
du réactif libre anticorps par une enzyme (= une enzyme est fixée de façon covalente à
l'anticorps libre, on dit que l'anticorps libre est conjugué à une enzyme). L'activité de cette
enzyme conjuguée est mise en évidence par des substrats. Plusieurs modalités de dosage sont
possibles, soit par compétition, soit par révélation directe ou indirecte ou par la technique de
sandwich.

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 I. METHODE ELISA DE TYPE DIRECT

1. Principe

La méthode ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) de type direct est une

technique immunologique utilisée pour détecter la présence d'un antigène ou un anticorps dans
un échantillon. Dans le cas de la méthode ELISA de type direct, une plaque de microtitration est
recouverte d'un anticorps spécifique, puis un échantillon biologique contenant des antigènes
dirigés contre cet anticorps est ajouté à la plaque. Si les antigènes sont présents dans
l'échantillon, ils se lient à l'anticorps immobilisé sur la plaque.
Ensuite, un anticorps conjugué à une enzyme est ajouté à la plaque. Cet anticorps reconnaît
une autre partie de l'antigène et se lie à celui-ci. L'enzyme conjuguée à l'anticorps permet de
détecter la présence de l'anticorps dans l'échantillon.
Enfin, un substrat est ajouté à la plaque, qui est converti en un produit coloré par l'enzyme si
l'antigène est présent dans l'échantillon. La quantité de produit coloré est mesurée et est
proportionnelle à la quantité d'antigène présente dans l'échantillon.
En résumé, la méthode ELISA de type direct utilise des anticorps pour détecter la présence
d'un antigène ou un anticorps dans un échantillon biologique en utilisant une plaque de
microtitration, un anticorps conjugué à une enzyme et un substrat.
2. Avantages et inconvénients

La méthode ELISA de type direct présente plusieurs avantages et inconvénients.

 Avantages:
 Rapide et simple : La méthode ELISA de type direct est simple à réaliser et ne nécessite pas
beaucoup de temps pour obtenir des résultats.
 Coût : la méthode ELISA de type direct est peu coûteuse par rapport à d'autres techniques
d'analyse immunologiques.
 Inconvénients:
 Cette méthode peut être sensible aux interférences, telles que la présence d'autres protéines dans
l'échantillon qui peuvent se lier à l'anticorps de détection.
 Elle est moins sensible et spécifique que les autres types.

3. Les limites de la méthode ELISA de type direct

4
 La méthode ELISA de type direct présente certaines limites, notamment :
 Sensibilité limitée : bien que la méthode ELISA de type direct peut ne pas être
suffisamment sensible pour détecter des quantités très faibles d'antigènes ou d'anticorps.
Dans ces cas, d'autres techniques d'analyse plus sensibles peuvent être nécessaires.
 Spécificité limitée : si l'anticorps utilisé ne reconnaît pas uniquement l'antigène cible,
mais également d'autres antigènes non spécifiques. Cela peut entraîner des résultats
faussement positifs ou faussement négatifs.

4. Les interférences

La méthode ELISA de type direct peut être sensible aux interférences, qui peuvent
conduire à des résultats faussement positifs ou faussement négatifs. Les interférences sont des
facteurs qui peuvent affecter la réaction antigène-anticorps et perturber la mesure du signal.
Voici quelques exemples d'interférences courantes dans la méthode ELISA de type direct :

 Les interférences causées par des réactions croisées. Parfois, l'anticorps de détection peut se lier à
des antigènes non spécifiques qui se trouvent dans l'échantillon, ce qui entraîne un signal
faussement positif.
 Les résultats de la méthode ELISA de type direct peuvent être influencés par les variations dans
les conditions de l'expérience, telles que la température et le pH. Ces variations peuvent entraîner
des résultats inexacts ou des faux positifs/faux négatifs
II. METHODE ELISA DE TYPE INDIRECT
1) Principe
La méthode ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) de type indirect est une
technique immunologique utilisée pour détecter la présence d'anticorps ou d’antigène dans un
échantillon.
Dans le cas de la méthode ELISA de type indirect, une plaque de microtitration est
recouverte de l'antigène de référence correspondant à l'anticorps recherché. Ensuite, l'échantillon
biologique est ajouté à la plaque. Si l'anticorps est présent dans l'échantillon, il se lie à l'antigène
immobilisé sur la plaque.
Ensuite, un anticorps secondaire conjugué à une enzyme est ajouté à la plaque. Cet anticorps
reconnaît l'anticorps primaire présent dans l'échantillon et se lie à celui-ci. L'enzyme conjuguée à
l'anticorps secondaire permet de détecter la présence de l'anticorps primaire dans l'échantillon.

5
 Enfin, un substrat est ajouté à la plaque, qui est converti en un produit coloré par l'enzyme si
l'anticorps est présent dans l'échantillon. La quantité de produit coloré est mesurée et est
proportionnelle à la quantité d'anticorps présente dans l'échantillon.
En résumé, la méthode ELISA de type indirect utilise des anticorps pour détecter la présence
d'anticorps spécifiques dans un échantillon biologique en utilisant une plaque de microtitration,
un anticorps secondaire conjugué à une enzyme et un substrat.
2) Avantages et inconvénients
La méthode ELISA de type indirect présente plusieurs avantages et inconvénients.
 Avantage:
 La méthode ELISA de type indirect est très sensible et peut détecter des quantités très
faibles d'anticorps ou d'antigènes.
 Cette méthode est très spécifique, ce qui signifie qu'elle ne détecte que l'anticorps ou
l'antigène cible et pas d'autres composants de l'échantillon.
 Cette méthode est facilement automatisable, ce qui permet l'analyse de grands nombres
d'échantillons en peu de temps.
 Inconvénients:
 La méthode ELISA de type indirect nécessite plus de temps et d'efforts pour réaliser
l'analyse car elle nécessite une étape supplémentaire d'ajout d'un anticorps secondaire.
 Cette méthode peut être sensible aux interférences, telles que la présence d'autres
protéines dans l'échantillon qui peuvent se lier à l'anticorps de détection ou à l'anticorps
secondaire.
 Cette méthode peut nécessiter l'utilisation d'anticorps secondaires spécifiques pour
chaque type d'anticorps primaire, ce qui peut être coûteux et nécessiter plus de travail de
préparation.
En résumé, la méthode ELISA de type indirect est une méthode très sensible et spécifique pour
la détection d'anticorps ou d'antigènes, mais elle nécessite plus de temps et d'efforts pour réaliser
l'analyse et peut être sensible aux interférences.
3) Limites
Les limites de la méthode ELISA de type indirect
La méthode ELISA de type indirect présente certaines limites, notamment :

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  Sensibilité : Bien que la méthode ELISA de type indirect soit très sensible, elle peut ne
pas être capable de détecter des niveaux très faibles d'anticorps ou d'antigènes, ce qui
peut conduire à des résultats faux négatifs.
 Spécificité : Bien que la méthode ELISA de type indirect soit très spécifique, elle peut
parfois donner des résultats faux positifs si l'anticorps secondaire se lie à des protéines
non spécifiques dans l'échantillon.
 Interférences : La méthode ELISA de type indirect peut être sensible aux interférences,
telles que la présence d'autres protéines dans l'échantillon qui peuvent se lier à l'anticorps
de détection ou à l'anticorps secondaire.
 Complexité de l'analyse : La méthode ELISA de type indirect nécessite plusieurs étapes
pour la détection des anticorps ou des antigènes, ce qui peut augmenter le temps
nécessaire pour réaliser l'analyse et augmenter les risques d'erreurs.
En résumé, la méthode ELISA de type indirect est une méthode fiable et couramment utilisée
pour la détection d'anticorps ou d'antigènes, mais elle a ses limites en termes de sensibilité, de
spécificité, d'interférences, de complexité de l'analyse et de coûts.
4) Interférences
Les interférences dans la méthode ELISA de type indirect peuvent être dues à plusieurs facteurs,
tels que la présence d'autres protéines dans l'échantillon qui peuvent se lier à l'anticorps de
détection ou à l'anticorps secondaire. Les interférences peuvent conduire à des résultats
faussement positifs ou négatifs, ce qui peut affecter la fiabilité de l'analyse.

Voici quelques d'interférences qui peuvent survenir dans la méthode ELISA de type indirect :
 Interférences liées aux protéines : Les protéines présentes dans l'échantillon peuvent se
lier à l'anticorps de détection ou à l'anticorps secondaire et interférer avec l'analyse. Par
exemple, des protéines non spécifiques peuvent se lier à l'anticorps secondaire et générer
des résultats faussement positifs.
 Interférences liées aux substances chimiques : Les substances chimiques présentes dans
l'échantillon peuvent également interférer avec l'analyse ELISA. Par exemple, certains
produits chimiques peuvent inhiber la réaction enzymatique utilisée dans la méthode
ELISA et conduire à des résultats faussement négatifs.

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  Interférences liées aux anticorps : Les anticorps utilisés dans la méthode ELISA peuvent
également être source d'interférences. Par exemple, des anticorps de détection qui ne sont
pas suffisamment spécifiques peuvent se lier à des antigènes non ciblés et générer des
résultats faussement positifs.
 Les résultats de la méthode ELISA de type indirect peuvent être influencés par les
variations dans les conditions de l'expérience, telles que la température, le temps
d'incubation, le pH et la concentration des réactifs. Ces variations peuvent entraîner des
résultats inexacts ou des faux positifs/faux négatifs

III.
Méthode Elisa de type sandwich
1. Sandwich direct
a) Principe
La méthode ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) de type sandwich direct est une
technique immunologique utilisée pour détecter la présence d'un antigène dans un échantillon.Le
principe de la méthode ELISA de type sandwich direct repose sur la capacité d'une paire
d'anticorps à se lier de manière spécifique à un antigène. Dans cette méthode, une plaque de
microtitration est recouverte d'un anticorps spécifique qui se lie à l'antigène recherché.
Ensuite, l'échantillon biologique est ajouté à la plaque. Si l'antigène est présent dans
l'échantillon, il se lie à l'anticorps immobilisé sur la plaque. Ensuite, un deuxième anticorps
spécifique qui se lie à une autre partie de l'antigène est ajouté à la plaque. Cet anticorps est
conjugué à une enzyme pour permettre la détection.
Enfin, un substrat est ajouté à la plaque, qui est converti en un produit coloré par l'enzyme si
l'antigène est présent dans l'échantillon. La quantité de produit coloré est mesurée et est
proportionnelle à la quantité d'antigène présente dans l'échantillon.
En résumé, la méthode ELISA de type sandwich direct utilise une paire d'anticorps pour
détecter la présence d'un antigène spécifique dans un échantillon biologique en utilisant une
plaque de microtitration, deux anticorps spécifiques, dont l'un est conjugué à une enzyme et, et
un substrat.
b) Avantages et inconvénients
La méthode ELISA de type sandwich direct est une technique couramment utilisée pour détecter
la présence d'une protéine spécifique dans un échantillon. Voici quelques avantages et
inconvénients de cette méthode :

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  Avantages :
- La méthode ELISA de type sandwich direct est très sensible et peut détecter des quantités très
faibles de protéines dans un échantillon.
- Cette méthode est relativement simple et rapide à effectuer, ce qui la rend pratique pour les
tests en laboratoire.
- Elle peut être utilisée pour détecter des protéines spécifiques dans une grande variété
d'échantillons biologiques.
 Inconvénients :
- Bien que la méthode ELISA de type sandwich direct soit sensible, elle peut parfois donner des
résultats faux positifs ou faux négatifs, ce qui peut être problématique pour les diagnostics
médicaux ou les tests de qualité des aliments.
- Cette méthode ne permet pas de déterminer la structure ou la fonction de la protéine détectée,
elle ne fournit que des informations sur sa présence ou son absence.
- Elle nécessite souvent l'utilisation d'anticorps spécifiques pour la protéine cible, ce qui peut être
coûteux et restrictif en termes de disponibilité des réactifs.
c) Limites
Bien que la méthode ELISA de type sandwich direct soit très utile pour détecter la présence
d’antigène spécifique dans un échantillon, elle présente également certaines limites, notamment :
- La méthode ELISA de type sandwich direct est sujette aux interférences de diverses substances
présentes dans l'échantillon, telles que des protéines non cibles, des anticorps non spécifiques et
des réactifs en excès. Ces interférences peuvent entraîner des résultats inexacts.
- Cette méthode ne permet pas d'identifier la structure ou la fonction de la protéine détectée. Elle
ne fournit que des informations sur sa présence ou son absence.
- La méthode ELISA de type sandwich direct peut être affectée par la qualité des réactifs utilisés,
tels que les anticorps et les substrats, qui peuvent se dégrader avec le temps ou être contaminés,
ce qui peut affecter la précision des résultats.
d) Interférences
Comme pour toute méthode de détection de protéines, la méthode ELISA de type sandwich
direct peut être sujette aux interférences. Ces interférences peuvent être causées par diverses
substances présentes dans l'échantillon, telles que des protéines non cibles, des anticorps non
spécifiques et des réactifs en excès.

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 Les interférences peuvent affecter les résultats de la méthode ELISA de type sandwich
direct en entraînant des résultats inexactes, des faux positifs ou des faux négatifs. Les
interférences les plus courantes sont :
- Les interférences dues à la matrice de l'échantillon : Les échantillons biologiques, tels que le
sang, la salive ou l'urine, peuvent contenir une grande quantité de protéines non cibles, qui
peuvent se lier aux anticorps utilisés pour détecter la protéine cible. Cela peut entraîner des
résultats inexacts ou des faux positifs.
- Les interférences dues à la présence d'anticorps non spécifiques : Des anticorps non spécifiques
peuvent se lier aux réactifs de l'ELISA, ce qui peut entraîner des résultats inexacts ou des faux
positifs.
- Les résultats de la méthode ELISA de type sandwich direct peuvent être influencés par les
variations dans les conditions de l'expérience, telles que la température, le temps d'incubation, le
pH et la concentration des réactifs. Ces variations peuvent entraîner des résultats inexacts ou des
faux positifs/faux négatifs.

2. SANDWICH INDIRECT
i. Principe
La méthode ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) de type sandwich indirect est une
technique immunologique utilisée pour détecter la présence d'un antigène dans un échantillon
biologique, tels que le sang, la salive ou l'urine. Cette méthode est souvent utilisée pour détecter
des antigènes de faible affinité ou de basse concentration.
Le principe de la méthode ELISA de type sandwich indirect repose sur la capacité d'une paire
d'anticorps à se lier de manière spécifique à un antigène. Dans cette méthode, une plaque de
microtitration est recouverte de l'anticorps de référence correspondant à l'antigène recherché.
Ensuite, l'échantillon biologique est ajouté à la plaque. Si l'antigène est présent dans
l'échantillon, il se lie à l'anticorps immobilisé sur la plaque. Ensuite, un deuxième anticorps
spécifique est ajouté à la plaque. Cet anticorps est dirigé contre une autre partie de l'anticorps
primaire et est conjugué à une enzyme pour permettre la détection.
Enfin, un substrat est ajouté à la plaque, qui est converti en un produit coloré par l'enzyme si
l'antigène est présent dans l'échantillon. La quantité de produit coloré est mesurée et est
proportionnelle à la quantité d'anticorps présente dans l'échantillon.

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 ii. Avantages et inconvénients
La méthode ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) de type SANDWICH indirect est
une technique couramment utilisée en immunologie pour détecter et quantifier la présence d'un
antigène spécifique dans un échantillon. Voici quelques avantages et inconvénients de cette
méthode :
 Avantage :
- Sensibilité élevée : la méthode ELISA de type SANDWICH indirect est capable de détecter des
niveaux très faibles d'antigènes dans un échantillon, ce qui en fait une méthode très sensible.
- Sélectivité : la méthode ELISA de type SANDWICH indirect permet de détecter un antigène
spécifique dans un échantillon, ce qui permet de l'utiliser pour diagnostiquer des maladies ou
pour surveiller des infections virales ou bactériennes.
- Facilité d'utilisation : la méthode ELISA de type SANDWICH indirect est relativement simple
à mettre en œuvre, ce qui en fait une méthode pratique pour les laboratoires de diagnostic.
 Inconvénients :
- Spécificité croisée : la méthode ELISA de type SANDWICH indirect peut être affectée par la
présence d'autres protéines similaires dans l'échantillon, ce qui peut donner lieu à des résultats
faussement positifs ou négatifs.
- Temps d'exécution : la méthode ELISA de type SANDWICH indirect peut prendre plusieurs
heures à exécuter, ce qui peut être un inconvénient pour les laboratoires qui ont besoin de
résultats rapides.
- Coût : la méthode ELISA de type SANDWICH indirect est relativement coûteuse par rapport à
d'autres méthodes de détection d'antigènes, ce qui peut limiter son utilisation dans certains
contextes.
iii. Limites
La méthode ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) de type SANDWICH indirect est
une méthode couramment utilisée en immunologie pour détecter et quantifier la présence d'un
antigène spécifique dans un échantillon. Cependant, cette méthode présente également certaines
limites, qui incluent :
 Sensibilité limitée : bien que la méthode ELISA de type SANDWICH indirect soit très
sensible, elle peut parfois ne pas détecter des niveaux très faibles d'antigènes dans un
échantillon. Cela peut être dû à des facteurs tels que la qualité de l'échantillon ou la durée
de stockage.
 Spécificité limitée : la méthode ELISA de type SANDWICH indirect peut être affectée
par la présence d'autres protéines similaires dans l'échantillon, ce qui peut donner lieu à
des résultats faussement positifs ou négatifs. Cela peut être particulièrement

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 problématique lorsque l'on cherche à détecter des antigènes très semblables à d'autres
protéines présentes dans l'échantillon.
 Coûts : comme mentionné précédemment, la méthode ELISA de type SANDWICH
indirect peut être relativement coûteuse, ce qui peut limiter son utilisation dans certains
contextes.

iv. Interférence
La méthode ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) de type SANDWICH indirect
est une technique couramment utilisée en immunologie pour détecter et quantifier la présence
d'un antigène spécifique dans un échantillon. Cependant, cette méthode peut être affectée par
divers types d'interférences, qui peuvent donner lieu à des résultats faussement positifs ou
négatifs. Voici quelques exemples d'interférences courantes de la méthode ELISA de type
SANDWICH indirect :

 Interférences liées aux réactifs : les réactifs utilisés dans la réaction ELISA, tels que les
anticorps ou les enzymes, peuvent être affectés par des facteurs tels que la température ou
le pH, ce qui peut entraîner des résultats faussement positifs ou négatifs.
 Interférences liées à la spécificité : la méthode ELISA de type SANDWICH indirect peut
être affectée par la présence d'autres protéines similaires dans l'échantillon, ce qui peut
donner lieu à des résultats faussement positifs ou négatifs.
 Interférences liées à la contamination : la contamination de l'échantillon par une
substance étrangère peut également affecter les résultats de la réaction ELISA, entraînant
des résultats faussement positifs ou négatifs.
 Les résultats peuvent être influencés par les variations dans les conditions de l'expérience,
telles que la température, le temps d'incubation, le pH et la concentration des réactifs. Ces
variations peuvent entraîner des résultats inexacts ou des faux positifs/faux négatifs

IV. METHODE ELISA DE TYPE COMPETITION

1. COMPETITION DIRECTE
a) Principe

La méthode ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) de type compétitif direct est une
technique immunologique utilisée pour détecter la présence d'un antigène dans un échantillon
biologique. Cette méthode est particulièrement utile pour la détection de petites molécules, telles
que les hormones stéroïdes.

Le principe de la méthode ELISA de type compétitif direct repose sur la compétition entre
l'antigène présent dans l'échantillon et un antigène marqué pour les sites de liaison des anticorps
spécifiques sur une plaque de microtitration. Les étapes de la méthode ELISA de type compétitif
direct sont les suivantes :

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1. Une plaque de microtitration est recouverte d'un anticorps spécifique qui se lie à l'antigène
recherché.

2. Un antigène marqué est ajouté à la plaque, ce qui permet de lier les anticorps spécifiques. Cet
antigène marqué est similaire à l'antigène recherché, mais il est marqué avec une enzyme pour
permettre la détection.

3. L'échantillon biologique est ajouté à la plaque. Si l'antigène est présent dans l'échantillon, il va
se lier aux anticorps spécifiques sur la plaque, ce qui réduit le nombre de sites de liaison
disponibles pour l'antigène marqué.

4. Un substrat est ajouté à la plaque, qui est converti en un produit coloré par l'enzyme si
l'antigène marqué est présent dans la plaque. La quantité de produit coloré est mesurée et est
inversement proportionnelle à la quantité d'antigène présent dans l'échantillon.

En résumé, la méthode ELISA de type compétitif direct utilise un antigène marqué en

compétition avec l'antigène présent dans l'échantillon pour détecter la présence d'un antigène
spécifique dans un échantillon biologique en utilisant une plaque de microtitration, un anticorps
spécifique, un antigène marqué et un substrat.

b) Avantages et inconvénients

La méthode ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) de type compétitif direct est une
technique couramment utilisée pour détecter la présence d'antigènes ou d'anticorps dans un
échantillon biologique. Voici quelques avantages et inconvénients de cette méthode :

Avantages :

- La méthode ELISA de type compétitif direct est relativement simple et rapide à réaliser, avec
des résultats généralement disponibles en quelques heures.

- Cette méthode est très sensible et spécifique, ce qui signifie qu'elle peut détecter même de
faibles concentrations d'antigènes ou d'anticorps dans un échantillon biologique.

- Elle est aussi relativement peu coûteuse par rapport à d'autres techniques de détection.

Inconvénients :

- La méthode ELISA de type compétitif direct peut parfois donner des résultats faussement
positifs ou négatifs en raison de la présence d'interférences dans l'échantillon biologique.

- Elle nécessite souvent des contrôles de qualité stricts pour garantir la fiabilité des résultats.

13
- Cette méthode ne permet pas de quantifier précisément la concentration d'antigènes ou
d'anticorps dans l'échantillon biologique ; elle fournit seulement une indication de la présence ou
de l'absence de ces molécules.

Il est important de noter que les avantages et inconvénients de la méthode ELISA de type
compétitif direct peuvent varier en fonction de l'application spécifique de la technique et des
conditions de l'expérience.

c) Limites

En plus des interférences, la méthode ELISA de type compétitif direct présente également
d'autres limites qui peuvent affecter sa fiabilité et sa précision. Voici quelques exemples de
limites courantes :

- Sensibilité : La méthode ELISA de type compétitif direct peut ne pas être assez sensible pour
détecter de faibles concentrations d'analytes. Dans certains cas, il peut être nécessaire d'utiliser
d'autres méthodes plus sensibles, telles que la PCR quantitative, pour obtenir des résultats précis.

- Spécificité : Bien que la méthode ELISA de type compétitif direct soit très spécifique, elle peut
parfois réagir avec des molécules qui sont structurellement similaires à l'analyte d'intérêt, ce qui
peut entraîner des résultats faussement positifs ou négatifs.

- Quantification : La méthode ELISA de type compétitif direct ne permet pas de quantifier

précisément la concentration d'analytes dans l'échantillon biologique. Si une quantification
précise est nécessaire, d'autres techniques telles que la méthode ELISA de type sandwich ou la
PCR quantitative peuvent être plus appropriées.

- Complexité de l'échantillon : Les échantillons biologiques peuvent être très complexes et

contenir de nombreux composants différents, ce qui peut rendre la détection de l'analyte d'intérêt
plus difficile. Dans certains cas, il peut être nécessaire de purifier l'échantillon ou d'utiliser
d'autres méthodes de détection plus spécifiques pour obtenir des résultats précis.

- Temps de traitement : Bien que la méthode ELISA de type compétitif direct soit relativement
rapide, elle peut prendre plusieurs heures ou même plusieurs jours pour obtenir des résultats
précis. Si des résultats rapides sont nécessaires, d'autres méthodes de détection, telles que les
tests rapides ou les tests de détection de la fluorescence, peuvent être plus appropriées.

En résumé, bien que la méthode ELISA de type compétitif direct soit une technique de détection
très utile, il est important de prendre en compte ses limites lors de sa mise en œuvre et de choisir
la technique la plus appropriée en fonction de l'application spécifique et des exigences de
performance.

d) Interférences

14
La méthode ELISA de type compétitif direct est sensible à plusieurs types d'interférences qui
peuvent affecter la précision et la fiabilité des résultats. Voici quelques exemples d'interférences
courantes :

- Interférences de fond : Certaines substances présentes dans l'échantillon biologique peuvent

réagir avec les réactifs d'ELISA et générer un signal de fond, qui peut donner des résultats
faussement positifs ou négatifs. Les taux élevés de lipides, de protéines ou de sels peuvent
également interférer avec la réaction d'ELISA.

- Interférences de matrice : Les échantillons biologiques peuvent contenir des composants qui
peuvent interférer avec la réaction d'ELISA. Par exemple, les échantillons de sang peuvent
contenir des facteurs de coagulation ou des anticorps naturels qui peuvent interférer avec la
liaison antigène-anticorps.

- Interférences de médicaments : Certains médicaments peuvent interférer avec les résultats de

l'ELISA en raison de leur structure chimique ou de leur interaction avec les réactifs d'ELISA.
Les médicaments immunosuppresseurs, par exemple, peuvent inhiber la production d'anticorps et
donner des résultats faussement négatifs.

- Interférences d'anticorps : Les échantillons biologiques peuvent contenir des anticorps

spécifiques qui peuvent interférer avec la réaction d'ELISA. Les anticorps dirigés contre les
réactifs d'ELISA, par exemple, peuvent donner des résultats faussement négatifs ou faussement
positifs.

2. COMPETITION INDIRECTE
a) Principe

 Les anticorps sont fixé au fond du puits ;

 On introduit les 2 indigènes différents (les antigènes du patient et les antigènes synthétisés ou
marqués de même nature) ;
 Incuber et on lave 3-5 fois ;
 On ajoute les anticorps primaires qui viendront se fixés sur les antigènes marqués ou synthétisés ;
 On incube et on lave 3-5 fois ;
 On ajoute les anticorps conjugués qui viendront se fixés sur les anticorps primaires ;
 Puis on Incube et on lave 3-5 fois ;
 On ajoute les substrats qui va réagir avec les enzymes qui se traduit par l'expression de la couleur ;

b) Avantages et inconvénients

La méthode ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) de type compétitif indirect est une
technique couramment utilisée pour détecter la présence d'anticorps dans un échantillon
biologique. Voici quelques avantages et inconvénients de cette méthode :

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 Avantages.

- Cette méthode est très sensible et spécifique, ce qui signifie qu'elle peut détecter même de
faibles concentrations d'anticorps dans un échantillon biologique.

- Elle est aussi relativement peu coûteuse par rapport à d'autres techniques de détection.

- Cette méthode permet de quantifier la concentration d'anticorps dans l'échantillon biologique,

ce qui est utile pour suivre l'évolution de la réponse immunitaire.

Inconvénients :

- La méthode ELISA de type compétitif indirect peut parfois donner des résultats faussement
positifs ou négatifs en raison de la présence d'interférences dans l'échantillon biologique.

- Elle nécessite souvent des contrôles de qualité stricts pour garantir la fiabilité des résultats.

- Cette méthode ne permet pas de détecter la présence d'antigènes, mais seulement la présence
d'anticorps dirigés contre ces antigènes.

Il est important de noter que les avantages et inconvénients de la méthode ELISA de type
compétitif indirect peuvent varier en fonction de l'application spécifique de la technique et des
conditions de l'expérience.

c) Limites

: La méthode ELISA de type compétitif indirecte présente également certaines limites qu'il est
important de prendre en compte. Voici quelques exemples de limites courantes :

- Sensibilité : La méthode ELISA de type compétitif indirecte peut ne pas être assez sensible
pour détecter de faibles concentrations d'anticorps. Dans certains cas, il peut être nécessaire
d'utiliser d'autres méthodes plus sensibles, telles que la méthode ELISA de type sandwich, pour
obtenir des résultats précis.

- Spécificité : Bien que la méthode ELISA de type compétitif indirecte soit très spécifique, elle
peut parfois réagir avec des molécules qui sont structurellement similaires aux anticorps d'intérêt,
ce qui peut entraîner des résultats faussement positifs ou négatifs.

- Interférences : Comme pour la méthode ELISA de type compétitif direct, la méthode ELISA de
type compétitif indirecte peut être affectée par des interférences dans l'échantillon biologique.
Des composants tels que des inhibiteurs enzymatiques, des interférences de fond ou des anticorps
non spécifiques peuvent affecter la réaction d'ELISA et donner des résultats incorrects.

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- Temps de traitement : Bien que la méthode ELISA de type compétitif indirecte soit
relativement rapide, elle peut prendre plusieurs heures ou même plusieurs jours pour obtenir des
résultats précis. Si des résultats rapides sont nécessaires, d'autres méthodes de détection, telles
que les tests rapides ou les tests de détection de la fluorescence, peuvent être plus appropriées.

d) Interférences

La méthode ELISA de type compétitif indirecte est sensible à plusieurs types d'interférences
qui peuvent affecter la précision et la fiabilité des résultats. Voici quelques exemples
d'interférences courantes dans cette méthode :

- Interférences non spécifiques : Les échantillons biologiques peuvent contenir des composants
qui peuvent interférer avec la réaction d'ELISA. Par exemple, des protéines non spécifiques, des
lipides ou des sels peuvent affecter la liaison antigène-anticorps et donner des résultats
incorrects.

- Interférences de fond : Certaines substances présentes dans l'échantillon biologique peuvent

réagir avec les réactifs d'ELISA et générer un signal de fond, qui peut donner des faux positifs ou
faux négatifs.

- Interférences d'anticorps : Les échantillons biologiques peuvent contenir des anticorps

spécifiques qui peuvent interférer avec la réaction d'ELISA. Les anticorps dirigés contre les
réactifs d'ELISA, par exemple, peuvent donner des résultats faussement négatifs ou faussement
positifs.

- Interférences de matrice : Les échantillons biologiques peuvent contenir des composants qui
peuvent interférer avec la réaction d'ELISA. Par exemple, les échantillons de sang peuvent
contenir des facteurs de coagulation ou des anticorps naturels qui peuvent interférer avec la
liaison antigène-anticorps.

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 CONCLUSION

En définitif, La technique ELISA est une technique immuno-enzymatique de détection

qui permet de visualiser une réaction antigène-anticorps grâce à une réaction colorée produite par
l'action sur un substrat d'une enzyme préalablement fixée à l'anticorps. Notons aussi que la
méthode ELISA pocède quatre types : indirect, direct, sandwich et type par compétition.

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