Exposé

Introduction:
ELISA est un test immunoenzymatique permettant de mettre en évidence la présence

d’anticorps, d’antigènes, de protéines et de glycoprotéines dans les échantillons
biologiques. Cette technique est très largement utilisée pour des tests de diagnostic
rapides tels que le diagnostic de l’infection au VIH, des tests de grossesse ou encore la
détection d’allergènes alimentaires.
Le principe de cette technique repose sur l’utilisation d’une enzyme conjuguée à un

anticorps qui en réagissant avec un substrat incolore donne un produit de réaction coloré
et qui est donc détectable. On parle alors de substrat chromogène. Différentes enzymes
sont utilisées pour les tests ELISA dont la phosphatase alcaline, la peroxydase de raifort ou
encore la bêta-galactosidase. De nombreuses variations de la technique ELISA ont été
développées:
Antigens:
Antigène, antigène ou antigène Une substance qui déclenche une réponse immunitaire. Il
peut s'agir d'un germe ou d'un virus qui a pénétré dans l'organisme ; Le corps commence à
"générer" des particules et des substances spéciales contre lui pour l'éliminer afin de
protéger le corps. Le corps humain et animal est doté d'un système immunitaire qui le
protège de l'invasion de microbes et de virus pouvant entraîner sa mort
Antibodys:
En immunologie, une immunoglobuline, un anticorps, une immunoglobuline ou une

immunoglobuline, est une protéine en forme de Y présente dans le sang et d'autres fluides
corporels des vertébrés. Elle est utilisée par le système immunitaire pour reconnaître et
neutraliser les corps étrangers tels que les bactéries et les virus.
ELISA directe :
L'ELISA direct convient à la détection d'antigènes protéiniques et peut nécessiter une pré-
purification de l'échantillon. L'ELISA direct peut être réalisé lorsque l'anticorps souhaité est
disponible dans un état pré-conjugué (fluorométrique, colorimétrique, enzymatique).
Technique ELISA directe
Protocole ELISA:
Plaque à puits avec 8 bandes verticales et 12 horizontales pour inclure 96 compartiments

ou trous (à l'intérieur desquels la réaction a lieu)
Antigène
Anticorps
Solutions de couleur
solutions pour stopper la réaction
L'une de ses conditions est que l'expédition se fasse dans un emballage froid et sous
forme de couches.
Forme du panneau : Les panneaux s'utilisent à plat constitués de 96 parois constituées en

polystyrène ou polychlorure de vinyle en très grande majorité
Caractéristiques des plaques : Il est important d'utiliser des plaques destinées à ELISA car
elles sont fabriquées pour maintenir l'adhérence, minimiser les effets de bord et fournir
des conditions optiques optimales pour toutes les données.
Tampons ELISA standard : plusieurs tampons différents sont utilisés pendant l'ELISA, un
pour l'ensemencement, un pour le blocage, un pour le lavage et un autre pour le séchage
des échantillons et des anticorps.
Méthode de travaille:
Pour la détection directe, l'antigène recouvert d'une plaque est détecté par un anticorps
qui a été directement conjugué à une enzyme, et l'ELISA de gravure est recouvert par
l'anticorps.
Cette méthode de détection est un bon choix s'il n'y a pas de kits ELISA disponibles dans le
commerce pour la protéine cible.
Lorsqu'il est nécessaire de détecter l'antigène et de mesurer sa concentration dans

l'échantillon, dans ce cas :
L'antigène dans l'échantillon se lie à l'anticorps.
La plaque est lavée pour éliminer les anticorps non liés.
Ensuite, d'autres anticorps sont ajoutés et ces anticorps sont liés à une enzyme.
La plaque est également lavée avec des anticorps non liés.
Ensuite, le matériau de base de l'enzyme est ajouté et la quantité d'antigène est .

calculée en mesurant la quantité de produit de réaction.
Avantages de l'ELISA direct
C'est rapide car un seul anticorps est utilisé et moins d'étapes sont franchies.
La réactivité croisée des anticorps secondaires est éliminée.
Inconvénients de l'ELISA direct
L'immunoréactivité de l'anticorps primaire peut être affectée négativement par le

marquage enzymatique ou autrement.
La classification des anticorps primaires pour chaque système ELISA spécifique prend du
temps et coûte cher.
Il n'y a aucune flexibilité dans le processus de marquage des anticorps primaires d'une
expérience à l'autre.
Amplification minimale du signal.

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ELISA est un test immunoenzymatique permettant de mettre en évidence la présence

Le principe de cette technique repose sur l’utilisation d’une enzyme conjuguée à un

En immunologie, une immunoglobuline, un anticorps, une immunoglobuline ou une

Technique ELISA directe

Plaque à puits avec 8 bandes verticales et 12 horizontales pour inclure 96 compartiments

solutions pour stopper la réaction

Forme du panneau : Les panneaux s'utilisent à plat constitués de 96 parois constituées en

Lorsqu'il est nécessaire de détecter l'antigène et de mesurer sa concentration dans

L'antigène dans l'échantillon se lie à l'anticorps.

La plaque est lavée pour éliminer les anticorps non liés.

La plaque est également lavée avec des anticorps non liés.

Ensuite, le matériau de base de l'enzyme est ajouté et la quantité d'antigène est .

Avantages de l'ELISA direct

La réactivité croisée des anticorps secondaires est éliminée.

Inconvénients de l'ELISA direct

L'immunoréactivité de l'anticorps primaire peut être affectée négativement par le

Amplification minimale du signal.

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