Les colorations histologiques:

colorations de routine et colorations spéciales

Aperçu des principales colorations histologiques Julie Hinsinger

Plateforme d’Histologie _ IRIC
et intérêt pour le pathologiste
 LES ETAPES
depuis le prélèvement jusqu’au bloc

Le plus souvent, le matériel histologique est fixé,

inclus, coupé et coloré afin de pouvoir l’observer
au microscope. Le matériel peut être prélevé par
biopsie ou provenir d’une pièce opératoire ou
d’une autopsie.

La fixation a pour buts la conservation des

structures et le durcissement des tissus.
Elle doit se faire immédiatement après le
prélèvement, par immersion du matériel dans du
fixateur (généralement le formaldéhyde = formol).

L’inclusion a pour but la réalisation de coupes

histologiques. Le milieu d’inclusion le plus utilisé
est la paraffine.
Comme la paraffine est hydrophobe, le
prélèvement doit d’abord subir une déshydratation
(par immersion dans des bains d’alcool), puis est
immergé dans des bains de toluène puis est infiltré
par la paraffine fondue par chauffage (circulation)
avant d’être coulé dans un moule contenant de la
paraffine fondue (inclusion).
Après refroidissement, on obtient d’un bloc de
paraffine, dur, à l’intérieur duquel la pièce prélevée
est incluse.
 LES ETAPES
depuis le prélèvement jusqu’au bloc

Circulation du tissu
imprégnation à la paraffine

Étapes Réactifs Durée (min) Température (ºC)

1 Fixateur 200 < 40
2 Éthanol 50% 20 45
3 Éthanol 30 45
4 Éthanol 40 45
5 Éthanol 40 45
6 Éthanol 50 45
7 Éthanol 100% 50 45
8 Toluène 45 45
9 Toluène 45 45
10 Toluène 45 45
11 Paraffine 60 60
12 Paraffine 60 60
13 Paraffine 60 60
 LES ETAPES
depuis le bloc jusqu’à la lame colorée

Les coupes du bloc de paraffine sont réalisées avec un microtome

permettant d’obtenir des sections (coupes histologiques) de 3 à 5
microns d’épaisseur.
Les coupes sont recueillies sur des lames de verre et mises à sécher (sur
la nuit à 40-45°C ou 1H max 60°C).

- La plupart des tissus sont transparents

 Les colorations réalisées sur lames, accentuent les contrastes pour
pouvoir reconnaître différents éléments du tissu.
 LES ETAPES DE LA COLORATION

- Déparaffinage (toluène / xylène - éthanol)

- Hydratation

- Coloration à proprement dit (routine ou spéciale)

- Déshydratation (éthanol)

- Éclaircissement (toluène / xylène)

La paraffine est insoluble dans l’eau et l’alcool, mais

soluble dans les hydrocarbures tels que le toluène,
xylène.
 Le pathologiste et le choix des colorations

Dans l’hôpital, le pathologiste joue un rôle important

car c’est à partir de son diagnostic que le traitement
sera institué.

La coloration de routine permet au pathologiste de

se faire une idée de la pathologie présente et d’avoir
une vision globale de la morphologie des tissus
(noyau, cytoplasme et collagène).

Il peut ensuite demander à revoir le même tissu mais

cette fois avec un élément tissulaire particulier qui
aura été mis en évidence de façon spécifique.
On parle dans ce cas de colorations spéciales.
 Départements de
Pathologie

Ayez les bons outils de

travail !!!
Seule une bonne
utilisation de contrôles
adéquats permet
d’obtenir des résultats
explicables et
reproductibles en
histologie.
 Facteurs influant la distribution des colorants
dans les tissus et la qualité de la lame en général

Fixateur (pH, VOLUME, TEMPS), colorants (concentration, pureté

(ACS_American Chemical Society), filtration, changement régulier
des bains), l’épaisseur de coupe du tissu (trimming adéquat).
Chaque étape (en amont ) est importante pour l’obtention du
matériel d’analyse.
 Les colorations de routine (topographiques)
H&E

Les solutions d’hématoxyline contiennent de l’hématéïne

et un mordant métallique (sels d'aluminium ou de fer).
Ce mordant est responsable de la coloration. L’éosine
colore les cytoplasmes en rose et les fibres dans une
gamme de roses plus ou moins vifs selon l’acidophilie des
différents éléments.

collagène ................................................... rose pâle

muscle ..................................................... rose foncé
Poumon cytoplasme acidophile ..................................... rouge
basophiles .................................................... pourpre
noyaux ............................................................... bleu
érythrocytes .......................................... rouge cerise

Rein
 Les colorations de routine (topographiques)
Polymorphonucléaire H&E

-La chromatine devrait être bleue pourpre et bien

distincte.

Plasmocytes -Les Nucleoles devraient être violacés.

Microscopic Quality Control of Hematoxylin and Eosin

http://www.dako.com/08066_12may10_webchapter15.pdf

Muqueuse colique
 Les colorations de routine (topographiques)
HPS

Hématoxyline Phloxine Safran (milieu francophone)

collagène ............................................ Jaune orangé

muscle ............................................................... rose
cytoplasme……………...................................... rose
noyaux ............................................................... bleu
érythrocytes.................................................... Rouge

JGH, HMR, Sacré Cœur bien que francophones

demandent le HE.
 Colorant / Temps Colorant / Temps
Solvant Solvant
Xylène 5’00’’ Xylène 3’00’’
Xylène 5’00’’ Xylène 3’00’’
ABS ETOH 2’00’’ ABS ETOH 2’00’’
ABS ETOH 2’00’’ ABS ETOH 2’00’’
ABS ETOH 2’00’’ ABS ETOH 2’00’’
Lavage 0’20’’ Lavage 0’10’’
Lavage 1’00’’ Lavage 0’40’’
Hématoxyline 0’55’’ Hématoxyline 0’50’’
Lavage 0’20’’ Lavage 0’25’’
Lavage 0’20’’ Bicarbonate 0’12’’
Bicarbonate 0’20’’ Sodium 0.5%
Sodium 0.5% Lavage 0’15’’
Lavage 0’15’’ Lavage 3’00’’
Lavage 3’30’’ Phloxine 0’15’’
Éosine 0’45’’ Lavage 0’18’’
ETOH 95% 0’30’’ ETOH 95% 0’30’’
ABS ETOH 0’40’’ ABS ETOH 0’30’’
ABS ETHO 2’40’’ ABS ETHO 0’45’’
Xylène 2’00’’ Safran 5’00’’
Xylène 2’00’’ ABS ETOH 0’45’’
Xylène 2’00’’ ABS ETHO 0’45’’
ABS ETOH 0’45’’
Hématoxyline – Éosine
Xylène 0’45’’
Xylène 0’45’’
Xylène 1’00’’
Hématoxyline – Phloxine – Safran
 Les colorations spéciales

Les colorations spéciales sont réalisées pour préciser des

structures ou substances suspectées par le pathologiste
lors de son analyse initiale sur les coupes de technique
standard.

Les techniques histochimiques sont basées sur des

réactions biochimiques qui permettent de mettre en
évidence in situ (= dans les tissus), différents constituants
(lipides, glucides, protéines, acides nucléiques, métaux,
etc).
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des fibres conjonctives

Les fibres conjonctives comprennent les fibres de

collagène, de réticuline et les fibres élastiques.

Les fibres de collagène sont les plus abondantes des 3.

On en trouve partout dans l’organisme sauf dans le
système nerveux central.
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des fibres conjonctives

Trichrome de Masson
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Cette méthode est très populaire. Utile dans
l’étude de la pathologie du cœur (infarctus), foie
(cirrhose ) , rein (fibrose glomérulaire)

La plupart des recettes colore en rouge la kératine et les

fibres musculaires, en bleu ou vert le collagène et l’os, en
rouge-clair ou rose les cytoplasmes, et en noir les noyaux
de cellules.

Résultats:
Noyaux, chromatine et nucléole…..…..….bleu foncé à noir
Cytoplasme……………………………………………………………rouge
Artère Globules rouges……………………………………………………..rouge
Collagène…………………………………………………………………Bleu
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des fibres conjonctives

Trichrome de Masson
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Cette méthode est très populaire. Utile dans
l’étude de la pathologie du cœur (infarctus), foie
(cirrhose ) , rein (fibrose glomérulaire)

La plupart des recettes colore en rouge la kératine et les

Déparaffiner et réhydrater fibres musculaires, en bleu ou vert le collagène et l’os, en
Mordancer au Bouin 1H 56°C
Refroidir et laver 20mn rouge-clair ou rose les cytoplasmes, et en noir les noyaux
Hematox. Weigert filtrée de cellules.
Laver
Biebrich scarlet fuchsine acide 2mn
Laver Résultats:
Ac. Phosphomolibdique-phosphotungstique 10mn
Bleu aniline 30-40 sec Noyaux, chromatine et nucléole……….….bleu foncé à noir
Rincer Cytoplasme……………………………………………………………rouge
Acide acétique 1%
Déshydrater, monter Globules rouges……………………………………………………..rouge
Collagène…………………………………………………………………Bleu
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des fibres conjonctives

Cette coloration met en évidence les fibres de

collagènes. Elle est parfois demandée en pathologie
cardiovasculaire.

MOVATT

Noyaux ………………………………………………………….bleu à noir

Cytoplasme ……………………………………………………………rouge
Muscle…………………………………………………………………...rouge
Collagène et fibres réticulaires-………………..jaune verdatre
Fibrine ………………………………………………………rouge intense
Mucine et substance de fond……….…………….bleu limette
Os
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des fibres conjonctives

Cette coloration met en évidence les fibres de

collagènes. Elle est parfois demandée en pathologie
cardiovasculaire.
Déparaffiner et réhydrater
Bleu Alcian 15mn MOVATT
Laver 5mn
Alcool alcalin 1H
Laver 15mn et rincer Noyaux ………………………………………………………….bleu à noir
Hématoxyline 12-15 mn Cytoplasme ……………………………………………………………rouge
Rincer et différencier dans chlorure de fer 2% 30s
Thiosulfate sodium 1mn Muscle…………………………………………………………………...rouge
Laver Collagène et fibres réticulaires.………………..jaune verdâtre
Crocéine scarlet – ac. Fuchsine 2mn
Rincer à l’eau distillée pls fois Fibrine ………………………………………………………rouge intense
Rincer Acide acétique 0.5% Mucine et substance de fond……….…………….bleu limette
5% Ac. Phosphotungstique aqueux 2X 5mn
Rincer Acide acétique 0.5%
Rincer ds 3 bains ETOH abs.
Safran 10mn
Déshydrater, monter
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des fibres conjonctives

Coloration de Verhoeff
Elle met en évidence le réseau de fibres élastiques.
Cette coloration est utile dans le cadre des diagnostics de
lésions dégénératives congénitales ou acquises
(vergetures, élastose solaire), de vasculite (peut être
demandée pour mettre en évidence la limitante
élastique des vaisseaux), d’artérite temporale.
Cette méthode est basée sur la coloration des fibres
élastiques par l’hématéine combinée à l’iode et au
Peau chlorure ferrique.

Résultats:
Noyaux………………………………………………………...….gris à noir
Fibres élastiques……………………………………………………..noir
Cytoplasme……………………………..…selon contre-coloration
Globules rouges………………………… selon contre-coloration
Collagène……………………………………selon contre-coloration
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des fibres conjonctives

Coloration de Verhoeff
Elle met en évidence le réseau de fibres élastiques.
Cette coloration est utile dans le cadre des diagnostics de
lésions dégénératives congénitales ou acquises
(vergetures, élastose solaire), de vasculite (peut être
demandée pour mettre en évidence la limitante
Déparaffiner et réhydrater
Hématéine Verhoeff 30mn coupes noir élastique des vaisseaux), d’artérite temporale.
Rincer à l’eau distillée pls fois Cette méthode est basée sur la coloration des fibres
Différencier au chlorure ferrique 2%
Laver rapidement élastiques par l’hématéine combinée à l’iode et au
ETOH 95% chlorure ferrique.
Rincer
Colorer au Van Gieson ou Éosine
Déshydrater, monter Résultats:
Noyaux………………………………………………………...….gris à noir
Fibres élastiques………..……………………………………………..noir
Cytoplasme……………………………..…selon contre-coloration
Globules rouges………………………… selon contre-coloration
Collagène……………………………………selon contre-coloration
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des fibres conjonctives

La Réticuline
Cette coloration marque les fibres réticuliniques du
stroma et permet de préciser l'architecture des tumeurs
(exemple : architecture folliculaire).
vaisseau Elle est très utile dans les cas où la tumeur est nécrosée.
C'est une coloration clé dans l’étude des lésions qui
touchent les organes dont la trame est riche en réticuline
comme le foie (fibrose, montre le collagène plus jeune),
la rate et les ganglions lymphatiques (trame réticulinique
constituant le squelette), la moelle osseuse
Poumon (myélofibrose).

Plèvre
Résultats:
Fibres de réticuline…………………………………………………...noir
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des fibres conjonctives

La Réticuline
Cette coloration marque les fibres réticuliniques du
stroma et permet de préciser l'architecture des tumeurs
(exemple : architecture folliculaire).
Déparaffiner et réhydrater
Rincer à l’eau distillée
Elle est très utile dans les cas où la tumeur est nécrosée.
Ac. Périodique 0.25% mordancer 15mn C'est une coloration clé dans l’étude des lésions qui
Eau distillée
Solution Hortega 10-15mn 40°C
touchent les organes dont la trame est riche en réticuline
Eau distillée + Ammoniaque 1% agiter comme le foie (fibrose, montre le collagène plus jeune),
Formol 1%
Rincer
la rate et les ganglions lymphatiques (trame réticulinique
Chlorure or 0.2% constituant le squelette), la moelle osseuse
Rincer
Thiosulfate de sodium 5% 1mn
(myélofibrose).
Laver
Contre-colorer rouge nucléaire ou phloxine
(0.1% alum sulfate) 5mn
Résultats:
Déshydrater, monter Fibres de réticuline…………………………………………………...noir
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des glucides

Le PAS
La coloration PAS (pour Periodic Acid Shiff) met en
évidence les mucines (épith. à bordures en brosse), les
membranes basales, le glycogène ainsi que les filaments
et spores mycéliens.
La réaction à l’acide périodique de Schiff correspond à
l’oxydation de certains polysaccharides par l’acide
périodique, révélée par une coloration rouge.

Le PAS est couramment associé à la diastase (PAS-

diastase) qui digère le glycogène mais laisse persister la
coloration rosée des mucines intra ou extracellulaires.

Dans les tumeurs indifférenciées, cette coloration est utile

pour orienter le diagnostic vers une origine glandulaire
Rein (adénocarcinome). Elle est demandée dans le diagnostic
de pathologies du foie et rein.
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des glucides

Le PAS
La coloration PAS (pour Periodic Acid Shiff) met en
évidence les mucines (épith. à bordures en brosse), les
membranes basales, le glycogène ainsi que les filaments
et spores mycéliens.
La réaction à l’acide périodique de Schiff correspond à
l’oxydation de certains polysaccharides par l’acide
Déparaffiner et réhydrater
Laver périodique, révélée par une coloration rouge (fixation de
Ac. Périodique 1% 10mn la leucofuchsine de Schiff).
Eau distillée
Réactif de Schiff 30mn
Laver Le PAS est couramment associé à la diastase (PAS-
Hématox. Harris + Ac. Acétique 30sec
Laver diastase) qui digère le glycogène mais laisse persister la
0.5% HCl / ETOH 70% 15 sec coloration rosée des mucines intra ou extracellulaires.
Laver
0.5% Carbonate de Sodium 1mn
Laver 10mn Dans les tumeurs indifférenciées, cette coloration est utile
Déshydrater, monter
pour orienter le diagnostic vers une origine glandulaire
(adénocarcinome). Elle est demandée dans le diagnostic
de pathologies du foie et rein.
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des glucides

Le Bleu Alcian
Cette coloration est souvent demandée en complément
au PAS, PAS-diastase car il révèle les mucines acides.

Glandes à mucus Résultats: les mucosubstances acides deviennent bleues

sur fond rosé

Le PASM
Le PASM (Methanamine Argent) met en évidence les
membranes basales (glycolipides), en particulier celles
des glomérules et tubules rénaux.
Rein
Déparaffiner et réhydrater
Ac. Acétique 3% 5mn
Bleu alcian pH 2.8 30mn
Rincer Ac. Acétique 3%
Eau distillée
Les colorations spéciales
Carbonate de sodium 0.3% 30mn
Laver
Ac. Périodique 0.5% 5mn Mise en évidence des glucides
Eau distillée
Coleman 15mn
Laver 10mn
Le Bleu Alcian
Hématox. Harris 1mn Cette coloration est souvent demandée en complément
Différencier alcool acide 1% 3sec
Laver
au PAS, PAS-diastase car il révèle les mucines acides.
Déshydrater, monter

Mucopolysaccharides faiblement acides: bleu

Résultats: les mucosubstances acides deviennent bleues
Noyaux: Bleu sur fond rosé
Glycogène : rose intense

Déparaffiner et réhydrater
Ac. Périodique 15mn Le PASM
Rincer
Méthanamine-nitrate argent 2H 55°C
Le PASM (Methanamine Argent) met en évidence les
Rincer membranes basales (glycolipides), en particulier celles
Chlorure or 0.2% 2mn
Laver
des glomérules et tubules rénaux.
Thiosulfate de sodium 3% 2mn
Laver
Nuclear Fast Red 5mn
Déshydrater, monter

Glomérules : noir
Fond : rose
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des lipides

L’huile rouge ou Oil RedO

Se fait sur les coupes à congélation.
Montage aqueux.
Elle est surtout demandée pour les pathologies de la
glande parathyroïde renfermant des acini et des vacuoles
graisseuses. Ou encore pour visualiser les adénomes ou le
stroma graisseux tend à réduire donc est ORO -

Résultats
Lipides liquides et semi-liquides………………………………rouge
Noyaux………………………………………………………………………Bleu
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des lipides

L’huile rouge ou Oil RedO

Se fait sur les coupes à congélation.
Montage aqueux.
Elle est surtout demandée pour les pathologies de la
glande parathyroïde renfermant des acini et des vacuoles
Fixer Formaline Tamp 10% graisseuses. Ou encore pour visualiser les adénomes ou le
Eau distillée stroma graisseux tend à réduire donc est ORO -
Propylène Glycol 2X 5mn
ORO 7mn (agiter)
85% propylène Glycol 3mn Résultats
Eau distillée
Hématoxyline 1mn Lipides liquides et semi-liquides………………………………rouge
Laver Noyaux………………………………………………………………………Bleu
Bicarb. Sodium
Rincer
Montage aqueux
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des dépôts de calcium

Von Kossa
Les sels de calcium sont transformés en sels d’argent
réduit ensuite en forme métallique, indiquant les sites de
calcification. Pe calcifications du sein (dystrophiques)
Corps vtbx embryon souris

Rouge alizarin
Met en évidence le calcium tissulaire. Le calcium est
impliqué dans la formation d’une laque.
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des dépôts de calcium

Déparaffiner et réhydrater
Nitrate d’argent 60mn (papier aluminium sous
lampe à 8po de la solution)
Laver
Thiosulfate de sodium 2mn
Von Kossa
Eau distillée Les sels de calcium sont transformés en sels d’argent
Contre-colorer Hématox ou rouge nucléaire
Rincer
réduit ensuite en forme métallique, indiquant les sites de
Déshydrater, monter calcification. Pe calcifications du sein (dystrophiques)
Sels calcium: noir
Noyaux: rouge ou bleu

Déparaffiner et réhydrater
Rouge alizarin 2% pH 4.1 2mn Rouge alizarin
Rincer Met en évidence le calcium tissulaire. Le calcium est
Contre-colorer Fast Green
Déshydrater, monter impliqué dans la formation d’une laque.
Sels calcium: orange-rouge
Fond: vert
 Les colorations spéciales

Mise en évidence de l’amyloide

Le Rouge Congo

Cette coloration marque en rouge les dépôts

d'amylose. Il présente une biréfringence rouge-verte
en lumière polarisée.
Ces dépôts sont souvent présents dans les carcinomes
médullaires de la thyroïde et parfois dans les
plasmocytomes et myélomes.

Les tissus le plus souvent touchés par l’amyloidose sont

le cœur (défaut de contractibilité), la paroi des
vaisseaux, les reins, la rate, le foie et les surrénales.
(accumulation extracellulaire)
Coeur
RésultatS
Amyloide………………………………..rose à rouge
Noyaux……………………………………………Bleu
 Les colorations spéciales

Mise en évidence de l’amyloide

Le Rouge Congo

Cette coloration marque en rouge les dépôts

d'amylose. Il présente une biréfringence rouge-verte
en lumière polarisée.
Ces dépôts sont souvent présents dans les carcinomes
médullaires de la thyroïde et parfois dans les
plasmocytomes et myélomes.
Déparaffiner et réhydrater
Rouge congo 45-60mn
Rincer 2-3X
Les tissus le plus souvent touchés par l’amyloidose sont
Différencier à l’alcool alcalin 3sec le cœur (défaut de contractibilité), la paroi des
Rincer
Contrecolorer Hématoxyline 3mn
vaisseaux, les reins, la rate, le foie et les surrénales.
Laver (accumulation extracellulaire)
Déshydrater, monter

RésultatS
Amyloide………………………………..rose à rouge
Noyaux……………………………………………Bleu
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des micro-organismes

La coloration de Ziehl
Cette coloration est utilisée pour la recherche de
Bacilles Acido-Alcoolo-Résistants . Elle est requise
en cas de suspicion clinique ou histologique de
tuberculose, d’infections par mycobactéries
atypiques chez des sujets atteints de SIDA
(bacilles incurvés et perlés).
Déparaffiner et réhydrater
Carbol fuchsine sur lame 30mn
Laver Résultats
Décolorer à ac. Sulfurique  rose
Laver 8mn Bacilles acido-alcoolo-résistants……………..rouge
Contrecolorer bleu de méthyl 30sec Gl. Rouges……………………………………jaune
Laver
Déshydrater, monter Fond……………………………………....Bleu pâle
 Les colorations spéciales
Mise en évidence des micro-organismes

Le Grocott
Cette coloration met en évidence les micro-organismes
soit les levures ou champignons (C. Albicans) et
parasites. Les glucides de la paroi des champignons sont
transformés en aldéhydes par oxydation.

Gram
Très utilisée en bactériologie médicale; elle permet de
colorer les bactéries et de les distinguer par leur aptitude
à fixer le violet de gentiane Gram + ou la fuchsine Gram -.

La coloration de Gram est fondée sur l'action successive d'un

colorant d'aniline, le cristal violet, d'iode puis d'un mélange
d'alcool et d'acétone. Dans un premier temps, le colorant
pénètre dans la paroi et le cytoplasme. Dans un second temps,
l'iode réagit avec le colorant et le rend insoluble. La perméabilité
plus grande des bactéries à Gram négatif à l'alcool permet la
décoloration. Les bactéries à Gram positif restent colorées en
violet ou mauve. Une contre-coloration (par exemple en rose)
permet de visualiser à nouveau, les corps cellulaires des
bactéries à Gram négatif.
Déparaffiner et réhydrater Les colorations spéciales
Ac. Chromique 1H
Laver
Bisulfite de sodium 1% 1mn Mise en évidence des micro-organismes
Laver
Eau distillée 3X Le Grocott
Méthanamine nitrate argent 60°C 1H
Eau distillée Cette coloration met en évidence les micro-organismes
Chlorure or 2-5mn soit les levures ou champignons (C. Albicans) et
Rincer
Thio. Sodium 2% 2-5mn parasites. Les glucides de la paroi des champignons sont
Laver 3mn transformés en aldéhydes par oxydation.
Vert lumière 0.03% 30sec
Déshydrater, monter
Gram
Champignons: noir
Mycélium : vieux rose Très utilisée en bactériologie médicale; elle permet de
Mucine : gris colorer les bactéries et de les distinguer par leur aptitude
Fond: vert
à fixer le violet de gentiane Gram + ou la fuchsine Gram -.
Déparaffiner et réhydrater
Rincer
Violet de gentiane 1mn La coloration de Gram est fondée sur l'action successive d'un
Rincer colorant d'aniline, le cristal violet, d'iode puis d'un mélange
Gram Iodine 1mn d'alcool et d'acétone. Dans un premier temps, le colorant
Rincer et sécher
Décolorer Éthyle éther acétone pénètre dans la paroi et le cytoplasme. Dans un second temps,
Fuchsine 1mn l'iode réagit avec le colorant et le rend insoluble. La perméabilité
Laver et sécher plus grande des bactéries à Gram négatif à l'alcool permet la
Tremper dans Acétone, puis acétone picrique
 jaune rosé décoloration. Les bactéries à Gram positif restent colorées en
Rincer à l’acétone puis acétone-xylène violet ou mauve. Une contre-coloration (par exemple en rose)
Déshydrater, monter permet de visualiser à nouveau, les corps cellulaires des
Gram + : bleu bactéries à Gram négatif.
Gram - : rouge
 Les colorations spéciales

Mise en évidence des pigments et précipités

La coloration de Perls
Elle étudie le métabolisme du fer. Met en évidence les
complexes insolubles contenant du fer: hémosidérine,
mitochondries surchargées en fer.
Foie Elle est utile dans certaines hématopathologies
(myélodysplasie) ou les pathologies hépatiques.
Caractérise d’anciennes cicatrices.
Déparaffiner et réhydrater
2% potassium ferrocyanide +2% HCl (même
volume)
Le bleu de Prusse ou le bleu de Turnbull peuvent
Laver également mettre en évidence le fer.
Nuclear Fast Red 3mn
Eau distillée
Déshydrater, monter Résultats
Sels ferriques (Hémosidérine)……………..……………………Bleu
Noyaux et cytoplasme……………………………..………………Rosé
Seule une bonne
utilisation de contrôles
adéquats permet
d’obtenir des résultats
explicables et
reproductibles en
histologie.
http://www.humpath.com/Acute-inflammation
http://www.qualite-pathologie.com/fr/accueil/accueil.html
http://www.bristol.ac.uk/vetpath/cpl/histmeth.htm#Top

Warthin–Starry stain
(spirochetes)
http://library.med.utah.edu/WebPath/webpath.html#MENU
http://webapps.fundp.ac.be/umdb/histohuma/histohuma/color/index.php
http://www.hoslink.com/histo/histo_recipes_index.htm
http://www.sigmaaldrich.com/life-science/cell-biology/hematology-and-
histology/learning-center/stain-expert.html
http://www.histo.iric.ca
Aperçu des principales colorations Julie Hinsinger
Plateforme d’Histologie _ IRIC
histologiques et intérêt pour le pathologiste