Les Colorations Histologiques
Les Colorations Histologiques
Les Colorations Histologiques
Julie Hinsinger
Plateforme dHistologie _ IRIC
LES ETAPES
depuis le prlvement jusquau bloc
Le plus souvent, le matriel histologique est fix,
inclus, coup et color afin de pouvoir lobserver
au microscope. Le matriel peut tre prlev par
biopsie ou provenir dune pice opratoire ou
dune autopsie.
La fixation a pour buts la conservation des
structures et le durcissement des tissus.
Elle doit se faire immdiatement aprs le
prlvement, par immersion du matriel dans du
fixateur (gnralement le formaldhyde = formol).
Linclusion a pour but la ralisation de coupes
histologiques. Le milieu dinclusion le plus utilis
est la paraffine.
Comme la paraffine est hydrophobe, le
prlvement doit dabord subir une dshydratation
(par immersion dans des bains dalcool), puis est
immerg dans des bains de tolune puis est infiltr
par la paraffine fondue par chauffage (circulation)
avant dtre coul dans un moule contenant de la
paraffine fondue (inclusion).
Aprs refroidissement, on obtient dun bloc de
paraffine, dur, lintrieur duquel la pice prleve
est incluse.
LES ETAPES
depuis le prlvement jusquau bloc
Circulation du tissu
imprgnation la paraffine
tapes
Ractifs
Fixateur
200
< 40
thanol 50%
20
45
thanol
30
45
thanol
40
45
thanol
40
45
thanol
50
45
thanol 100%
50
45
Tolune
45
45
Tolune
45
45
10
Tolune
45
45
11
Paraffine
60
60
12
Paraffine
60
60
13
Paraffine
60
60
LES ETAPES
depuis le bloc jusqu la lame colore
Dpartements de
Pathologie
Poumon
Rein
Polymorphonuclaire
Plasmocytes
Muqueuse colique
Colorant /
Solvant
Xylne
Xylne
ABS ETOH
ABS ETOH
ABS ETOH
Lavage
Lavage
Hmatoxyline
Lavage
Lavage
Bicarbonate
Sodium 0.5%
Lavage
Lavage
osine
ETOH 95%
ABS ETOH
ABS ETHO
Xylne
Xylne
Xylne
Temps
500
500
200
200
200
020
100
055
020
020
020
015
330
045
030
040
240
200
200
200
Hmatoxyline osine
Colorant /
Solvant
Xylne
Xylne
ABS ETOH
ABS ETOH
ABS ETOH
Lavage
Lavage
Hmatoxyline
Lavage
Bicarbonate
Sodium 0.5%
Lavage
Lavage
Phloxine
Lavage
ETOH 95%
ABS ETOH
ABS ETHO
Safran
ABS ETOH
ABS ETHO
ABS ETOH
Xylne
Xylne
Xylne
Temps
300
300
200
200
200
010
040
050
025
012
015
300
015
018
030
030
045
500
045
045
045
045
045
100
Artre
Rsultats:
Noyaux, chromatine et nuclole.....bleu fonc noir
Cytoplasmerouge
Globules rouges..rouge
CollagneBleu
Dparaffiner et rhydrater
Mordancer au Bouin 1H 56C
Refroidir et laver 20mn
Hematox. Weigert filtre
Laver
Biebrich scarlet fuchsine acide 2mn
Laver
Ac. Phosphomolibdique-phosphotungstique 10mn
Bleu aniline 30-40 sec
Rincer
Acide actique 1%
Dshydrater, monter
MOVATT
Noyaux .bleu noir
Cytoplasme rouge
Muscle...rouge
Collagne et fibres rticulaires...jaune verdtre
Fibrine rouge intense
Mucine et substance de fond..bleu limette
Peau
Coloration de Verhoeff
Elle met en vidence le rseau de fibres lastiques.
Cette coloration est utile dans le cadre des diagnostics de
lsions dgnratives congnitales ou acquises
(vergetures, lastose solaire), de vasculite (peut tre
demande pour mettre en vidence la limitante
lastique des vaisseaux), dartrite temporale.
Cette mthode est base sur la coloration des fibres
lastiques par lhmatine combine liode et au
chlorure ferrique.
Rsultats:
Noyaux....gris noir
Fibres lastiques..noir
Cytoplasme..selon contre-coloration
Globules rouges selon contre-coloration
Collagneselon contre-coloration
Dparaffiner et rhydrater
Hmatine Verhoeff 30mn coupes noir
Rincer leau distille pls fois
Diffrencier au chlorure ferrique 2%
Laver rapidement
ETOH 95%
Rincer
Colorer au Van Gieson ou osine
Dshydrater, monter
Coloration de Verhoeff
Elle met en vidence le rseau de fibres lastiques.
Cette coloration est utile dans le cadre des diagnostics de
lsions dgnratives congnitales ou acquises
(vergetures, lastose solaire), de vasculite (peut tre
demande pour mettre en vidence la limitante
lastique des vaisseaux), dartrite temporale.
Cette mthode est base sur la coloration des fibres
lastiques par lhmatine combine liode et au
chlorure ferrique.
Rsultats:
Noyaux....gris noir
Fibres lastiques....noir
Cytoplasme..selon contre-coloration
Globules rouges selon contre-coloration
Collagneselon contre-coloration
vaisseau
Poumon
Plvre
La Rticuline
Cette coloration marque les fibres rticuliniques du
stroma et permet de prciser l'architecture des tumeurs
(exemple : architecture folliculaire).
Elle est trs utile dans les cas o la tumeur est ncrose.
C'est une coloration cl dans ltude des lsions qui
touchent les organes dont la trame est riche en rticuline
comme le foie (fibrose, montre le collagne plus jeune),
la rate et les ganglions lymphatiques (trame rticulinique
constituant le squelette), la moelle osseuse
(mylofibrose).
Rsultats:
Fibres de rticuline...noir
Dparaffiner et rhydrater
Rincer leau distille
Ac. Priodique 0.25% mordancer 15mn
Eau distille
Solution Hortega 10-15mn 40C
Eau distille + Ammoniaque 1% agiter
Formol 1%
Rincer
Chlorure or 0.2%
Rincer
Thiosulfate de sodium 5% 1mn
Laver
Contre-colorer rouge nuclaire ou phloxine
(0.1% alum sulfate) 5mn
Dshydrater, monter
La Rticuline
Cette coloration marque les fibres rticuliniques du
stroma et permet de prciser l'architecture des tumeurs
(exemple : architecture folliculaire).
Elle est trs utile dans les cas o la tumeur est ncrose.
C'est une coloration cl dans ltude des lsions qui
touchent les organes dont la trame est riche en rticuline
comme le foie (fibrose, montre le collagne plus jeune),
la rate et les ganglions lymphatiques (trame rticulinique
constituant le squelette), la moelle osseuse
(mylofibrose).
Rsultats:
Fibres de rticuline...noir
Rein
Dparaffiner et rhydrater
Laver
Ac. Priodique 1% 10mn
Eau distille
Ractif de Schiff 30mn
Laver
Hmatox. Harris + Ac. Actique 30sec
Laver
0.5% HCl / ETOH 70% 15 sec
Laver
0.5% Carbonate de Sodium 1mn
Laver 10mn
Dshydrater, monter
Le PAS
La coloration PAS (pour Periodic Acid Shiff) met en
vidence les mucines (pith. bordures en brosse), les
membranes basales, le glycogne ainsi que les filaments
et spores mycliens.
La raction lacide priodique de Schiff correspond
loxydation de certains polysaccharides par lacide
priodique, rvle par une coloration rouge (fixation de
la leucofuchsine de Schiff).
Le PAS est couramment associ la diastase (PASdiastase) qui digre le glycogne mais laisse persister la
coloration rose des mucines intra ou extracellulaires.
Dans les tumeurs indiffrencies, cette coloration est utile
pour orienter le diagnostic vers une origine glandulaire
(adnocarcinome). Elle est demande dans le diagnostic
de pathologies du foie et rein.
Rein
Dparaffiner et rhydrater
Ac. Actique 3% 5mn
Bleu alcian pH 2.8 30mn
Rincer Ac. Actique 3%
Eau distille
Carbonate de sodium 0.3% 30mn
Laver
Ac. Priodique 0.5% 5mn
Eau distille
Coleman 15mn
Laver 10mn
Hmatox. Harris 1mn
Diffrencier alcool acide 1% 3sec
Laver
Dshydrater, monter
Mucopolysaccharides faiblement acides: bleu
Noyaux: Bleu
Glycogne : rose intense
Dparaffiner et rhydrater
Ac. Priodique 15mn
Rincer
Mthanamine-nitrate argent 2H 55C
Rincer
Chlorure or 0.2% 2mn
Laver
Thiosulfate de sodium 3% 2mn
Laver
Nuclear Fast Red 5mn
Dshydrater, monter
Glomrules : noir
Fond : rose
Von Kossa
Les sels de calcium sont transforms en sels dargent
rduit ensuite en forme mtallique, indiquant les sites de
calcification. Pe calcifications du sein (dystrophiques)
Corps vtbx embryon souris
Rouge alizarin
Met en vidence le calcium tissulaire. Le calcium est
impliqu dans la formation dune laque.
Von Kossa
Les sels de calcium sont transforms en sels dargent
rduit ensuite en forme mtallique, indiquant les sites de
calcification. Pe calcifications du sein (dystrophiques)
Dparaffiner et rhydrater
Rouge alizarin 2% pH 4.1 2mn
Rincer
Contre-colorer Fast Green
Dshydrater, monter
Sels calcium: orange-rouge
Fond: vert
Rouge alizarin
Met en vidence le calcium tissulaire. Le calcium est
impliqu dans la formation dune laque.
RsultatS
Amyloide..rose rouge
NoyauxBleu
La coloration de Ziehl
Cette coloration est utilise pour la recherche de
Bacilles Acido-Alcoolo-Rsistants . Elle est requise
en cas de suspicion clinique ou histologique de
tuberculose, dinfections par mycobactries
atypiques chez des sujets atteints de SIDA
(bacilles incurvs et perls).
Dparaffiner et rhydrater
Carbol fuchsine sur lame 30mn
Laver
Dcolorer ac. Sulfurique rose
Laver 8mn
Contrecolorer bleu de mthyl 30sec
Laver
Dshydrater, monter
Rsultats
Bacilles acido-alcoolo-rsistants..rouge
Gl. Rougesjaune
Fond....Bleu ple
Dparaffiner et rhydrater
Ac. Chromique 1H
Laver
Bisulfite de sodium 1% 1mn
Laver
Eau distille 3X
Mthanamine nitrate argent 60C 1H
Eau distille
Chlorure or 2-5mn
Rincer
Thio. Sodium 2% 2-5mn
Laver 3mn
Vert lumire 0.03% 30sec
Dshydrater, monter
Champignons: noir
Myclium : vieux rose
Mucine : gris
Fond: vert
Dparaffiner et rhydrater
Rincer
Violet de gentiane 1mn
Rincer
Gram Iodine 1mn
Rincer et scher
Dcolorer thyle ther actone
Fuchsine 1mn
Laver et scher
Tremper dans Actone, puis actone picrique
jaune ros
Rincer lactone puis actone-xylne
Dshydrater, monter
Gram + : bleu
Gram - : rouge
Foie
Dparaffiner et rhydrater
2% potassium ferrocyanide +2% HCl (mme
volume)
Laver
Nuclear Fast Red 3mn
Eau distille
Dshydrater, monter
La coloration de Perls
Elle tudie le mtabolisme du fer. Met en vidence les
complexes insolubles contenant du fer: hmosidrine,
mitochondries surcharges en fer.
Elle est utile dans certaines hmatopathologies
(mylodysplasie) ou les pathologies hpatiques.
Caractrise danciennes cicatrices.
Le bleu de Prusse ou le bleu de Turnbull peuvent
galement mettre en vidence le fer.
Rsultats
Sels ferriques (Hmosidrine)..Bleu
Noyaux et cytoplasme..Ros
http://www.humpath.com/Acute-inflammation
http://www.qualite-pathologie.com/fr/accueil/accueil.html
http://www.bristol.ac.uk/vetpath/cpl/histmeth.htm#Top
WarthinStarry stain
(spirochetes)
http://library.med.utah.edu/WebPath/webpath.html#MENU
http://webapps.fundp.ac.be/umdb/histohuma/histohuma/color/index.php
http://www.hoslink.com/histo/histo_recipes_index.htm
http://www.sigmaaldrich.com/life-science/cell-biology/hematology-andhistology/learning-center/stain-expert.html
http://www.histo.iric.ca
Julie Hinsinger
Plateforme dHistologie _ IRIC