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    Laminila, Coloración

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    Jazmín Méndez
    El documento proporciona información sobre los requisitos y procedimientos de un laboratorio de citología. De acuerdo con la OMS, un laboratorio debe procesar al menos 15,000-25,000 citologías por año. La tinción de Papanicolaou es el método estándar utilizado, que involucra la tinción del núcleo con hematoxilina y el citoplasma con Orange G y eosina. El procedimiento completo incluye la fijación, tinción, aclarado y montaje de las láminas para su análisis.

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    Laminila, Coloración

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    El documento proporciona información sobre los requisitos y procedimientos de un laboratorio de citología. De acuerdo con la OMS, un laboratorio debe procesar al menos 15,000-25,000 citologías por año. La tinción de Papanicolaou es el método estándar utilizado, que involucra la tinción del núcleo con hematoxilina y el citoplasma con Orange G y eosina. El procedimiento completo incluye la fijación, tinción, aclarado y montaje de las láminas para su análisis.

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    El documento proporciona información sobre los requisitos y procedimientos de un laboratorio de citología. De acuerdo con la OMS, un laboratorio debe procesar al menos 15,000-25,000 citologías por año. La tinción de Papanicolaou es el método estándar utilizado, que involucra la tinción del núcleo con hematoxilina y el citoplasma con Orange G y eosina. El procedimiento completo incluye la fijación, tinción, aclarado y montaje de las láminas para su análisis.

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    El documento proporciona información sobre los requisitos y procedimientos de un laboratorio de citología. De acuerdo con la OMS, un laboratorio debe procesar al menos 15,000-25,000 citologías por año. La tinción de Papanicolaou es el método estándar utilizado, que involucra la tinción del núcleo con hematoxilina y el citoplasma con Orange G y eosina. El procedimiento completo incluye la fijación, tinción, aclarado y montaje de las láminas para su análisis.

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    CITOTECNOLO

    GÍA
    4TO 8VA.
    Prof.: Lilian Ríos
    • De acuerdo con la Organización
    Mundial de la Salud (OMS, 2002), un
    laboratorio de citología debería
    procesar un mínimo de 15 a 25 mil
    citologías por año o cincuenta
    laminillas por citólogo en una jornada
    de ocho horas diarias. El tiempo
    estimado para la interpretación de una
    laminilla es de aproximadamente seis
    minutos, cinco para la lectura y uno
    para escribir el reporte.

    •El laboratorio de citología

    RECONOCIMIENTO debe garantizar niveles de alta


    calidad, por lo que es
    recomendable que sus servicios
    DEL LABORATORIO se encuentren centralizados
    LÁMINA
    Definición: Una lámina es una
    plancha o un objeto muy
    delgado, que contiene
    material biológico.
    Posee un área esmerilada
    donde se debe colocar datos
    de la paciente y numeración
    de estudio.
    Su tamaño es de 25x75mm
    • Laminillas Cubre objeto:
    • Lámina delgada
    transparente,
    generalmente de cristal,
    que se coloca sobre
    una preparación
    microscópica para
    protegerla y facilitar su
    observación.
    • Tamaño 24x60mm
    FASE PRE-
    ANALITICA
    Reactivos:
    Sustancia que se usa en pruebas de
    laboratorio. Los reactivos se usan en
    una reacción química para detectar,
    medir, o elaborar otras sustancias.
    • Recepción de Muestras: Uno de los
    objetivos de la recepción es lograr que las
    muestras del examen de Papanicolaou sean
    representativas de las pacientes,
    adecuadamente recolectadas, preservadas,
    etiquetadas, transportadas y que los
    formatos de solicitud y reporte de resultados
    sean legibles y contengan toda la
    información definida como necesaria.
    • Si queremos que la recepción de muestras
    tenga éxito, se deberá realizar lo siguiente: •
    El flujo de muestras - solicitud recibidas en
    cuanto a volumen y calendario, se deberá
    ajustar a la programación establecida.
    • Toda muestra - solicitud que llegue al
    laboratorio debe cumplir con cada uno
    de los requisitos para ser aceptada en el
    laboratorio. • Todas las muestras -
    solicitud deberán ser identificadas con
    un número único correlativo, en el
    laboratorio, manteniendo la
    correspondencia entre ambas (muestra
    solicitud). 
    •  La recepción e identificación de
    muestras–solicitud, deberá quedar
    debidamente documentada en el
    sistema de información del laboratorio.
    Procedimiento para la Tinción y Montaje de Laminillas
    de las Muestras de Citología Cérvico Uterina
    • Fijación
    • Características ideales de un fijador citológico: 
    • Cubrir y penetrar a la célula rápidamente.
    • Mantener la morfología celular íntegra
    • Inactivar la autolisis enzimática
    • Permitir la permeabilidad de la tinción a través de la membrana plasmática 
    • Permitir la adhesión de las células al porta objeto
    • Ser bactericida
    • Más usados: 
    • Alcohol etílico 96%
    • Citospray (alcohol y polietilenglicol- Carbowax).
    • Mezclas: alcohol-éter, es muy volátil, no se recomienda
    • Una muestra de citología cervical
    debe ser fijada inmediatamente
    después de realizado el  extendido.
    La lámina citológica debe llegar al
    laboratorio fijada por la persona
    encargada de  obtener la muestra
    cervical, ya que una muestra sin
    fijar pierde capacidad o afinidad
    tintorial que se traduce en pérdida
    de tonalidades en la tinción de
    Papanicolaou 
    • La tinción de Papanicolaou es un método
    de tinción policromática que consta de una
    tinción  nuclear y un contraste
    citoplasmático. Tiene como ventaja una
    Tinción de buena definición del detalle  nuclear,
    evidenciando el patrón de cromatina de las
    Papanicolao células, un aspecto transparente de los 
    citoplasmas y una diferenciación celular, que

    u
    permite apreciar grados de maduración celular
    y  actividad metabólica, todo esto debido al
    uso de tres colorantes; la Hematoxilina que
    tiñe  selectivamente los núcleos y el
    Orange G y la eosina Alcohol (EA) que
    tiñen los citoplasmas
    • La tinción de Papanicolaou tiene 4
    pasos principales:
    • 1.- Fijación realizada en el momento
    de tomar la muestra.
    • 2.- Tinción del núcleo con
    Hematoxilina
    • 3.- Tinción del citoplasma con Orange
    G y EA
    • 4.- Aclaramiento
    1- Tinción del Núcleo
    • La hematoxilina de Harris tiene una afinidad por las
    estructuras ácidas, específicamente por
    la cromatina. Después de la hematoxilina las
    láminas se lavan en agua (Viraje), puede ser agua
    corriente.
    Extendido
    con orange
    2- Tinción del
    Citoplasma
    • El Orange G es una tinción monocromática
    que colorea la queratina de un naranja
    brillante y penetra rápidamente al
    citoplasma. La queratina no se encuentra
    en condiciones normales en el epitelio
    cervical y vaginal, y si se encuentra en
    carcinomas queratinizados. Por lo tanto, la
    presencia de citoplasma orangeofílico
    brillante es significativa.
    • La Eosina alcohol (EA) es una tinción policromatica compuesta de eosina, verde
    luz y café Bismark  (pardo) en la fórmula original (Puede variar la cantidad verde
    luz en las diferentes fórmulas de EA), 
    • Y su fundamento es el siguiente: 
    • La Eosina tiñe el citoplasma de las células escamosas maduras, nucléolos y cilios.
    • El Verde luz tiñe las células que son metabólicamente activas, como las células 
    parabasales, intermedias y columnares.
    • Las células superficiales se tiñen rosadas con la eosina, y por eso se describen como 
    • eosinofílicas.
    • Las células parabasales e intermedias se tiñen verde o azul, dependiendo del tiempo de
    la tinción EA y se llaman cianofílicas.
      3) Aclaramiento:
    • El aclarado es el paso final de la tinción
    de Papanicolaou y produce la
    transparencia celular. Se suele usar el
    Xilol como solución aclaradora
    • 4) Montaje de las Láminas:
    • El montaje es una unión entre el
    portaobjeto y el cubreobjeto, mediante
    una sustancia, con el fin de obtener una
    muestra cubierta y protegida contra el
    secado y arrugamiento del material
    celular y sellada para evitar la oxidación
    de la muestra.
    Problemas

    Coloración nuclear demasiado pálida: 

    Frotis se desecaron antes de ser fijados 


    Tiempo de tinción insuficiente con
    hematoxilina
    Hematoxilina muy diluida con agua.
    • Coloración nuclear demasiado oscura:
    Muestras fueron sobre teñidas en la tinción de Harris.
    Exceso de hematoxilina no fue removido adecuadamente por la diferenciación
    debido a baja concentración o inmersiones insuficientes en ácido.

    • Citoplasma pálido:
    • Láminas después de Orange G y EA sometidas mucho tiempo a muchas
    inmersiones en alcohol que remueve el color del citoplasma y lo deja muy
    pálido.
    • Falta de colores citoplasmáticos contrastantes: Colorantes Orange G y EA
    están agotados.
    • Color del citoplasma no consistente:
    • Frotis secado al aire antes de la fijación.
    • Niveles de las soluciones insuficientes en
    una o más cubetas

    • Citoplasma rojizo o rosado sin


    diferenciación:
    • Frotis se secó antes de ser fijado
    • Presencia de bacterias cocáceas en el frotis
    • Colorante agotado que debe reemplazarse.
    • Lámina irregularmente teñida
    Fijador con aerosol mal agitado antes de usar, lo que
    determina una mezcla inadecuada del contenido. La
    fijación es irregular 
    • Contaminación cruzada de las láminas:
    Consiste en grupos celulares o células aisladas
    desprendidas de un frotis, se adhieren a  otro cuando
    quedan suspendidas en el líquido de alguna cubeta de la
    batería de tinción. Se reconoce al microscopio ya que se
    observa en un plano visual diferente o porque  presentan
    una coloración distinta y acentuada
    Anexos

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