Práctica 3 HEMA_Panóptico rápido y RDL

FICHA MEMORIA DE PRÁCTICAS Y CONTROL DE
MATERIAL Y USO DEL LABORATORIO

CICLO FORMATIVO: MÓDULO: UNIDAD:
Laboratorio Clínico y Biomédico Técnicas de Análisis Hematológico UD2
PROFESOR: DURACIÓN: FECHA:
Susana Martin – Paco Santiago 2 horas Primer trimestre
NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Panóptico rápido y RDL
OBJETIVO GENERAL
Los objetivos de esta práctica son los siguientes:

● Efectuar correctamente una extensión de sangre periférica.
● Realizar una tinción con panóptico rápido.
● Reconocer los componentes formes de la sangre.
● Realizar un Recuento Diferencial Leucocitario (RDL)
METODOLOGÍA
Metodología Tinción con Panóptico Rápido:
1. Realizar 2 extensiones correctas, siguiendo lo aprendido en las prácticas anteriores.

2. Disponer 3 frascos de polipropileno (duquesitas) para muestras rotulados como 1, 2 y 3.
3. Rotular también las tapas.
4. Colocar en estos frascos una cantidad suficiente como para sumergir un portaobjetos 3/4 partes.
5. Disponerlos, en orden, dentro de una bandeja o sobre varios papeles de filtro.
6. Una vez las extensiones sanguíneas estén completamente secas, realizar la tinción:
PANÓPTICO RÁPIDO
En 3 cubetas de tinción:
• Solución nº1: Fijador
• 5 segundos o sumergir 5 veces
→ Escurrir bien el exceso de colorante.
• Solución nº2: solución ácida (eosina)

• Solución nº3: solución básica (azul de metileno)

7. Lavar con agua destilada por inmersión en un cristalizador o con un frasco lavador.
8. Dejar secar en posición vertical.
9. Observar al microscopio (Figura1).
Figura 1. Células de la sangre teñidas con panóptico rápido.
Metodología Recuento Diferencial Leucocitos (RDL):
1. Localizar con el objetivo x10 y x40 una región donde los eritrocitos no estén superpuestos.
2. enfocar con el objetivo x100 (inmersión) realizando un recorrido en forma de almena.
3. Contar al menos 100 leucocitos, clasificando el tipo de célula encontrada.
RDL Número de células %
Cayado
Segmentado
Linfocito
Basófilo
Monocito
Eosinófilo
Basófilo
MATERIALES UTILIZADOS
- Microscopio
- Sangre EDTA.
- Portaobjetos.
- Set de tinción Panóptico o Wright.
- Pipetas automáticas o Pasteur.
- Agitador de tubos.
- Aceite de inmersión.
OBSERVACIONES
Diferenciar distintas estructuras celulares según se tiñan con colorante ácido, básico o con la mezcla de ambos.
Para conseguir diferenciar y clasificar los elementos celulares sanguíneos.
Eritrocitos: rosa asalmonado.
Plaquetas; violetas.
Neutrófilos:
Núcleo: azul violeta
Citoplasma: rosa
Gránulos: violeta rojizo
Eosinófilos:
Núcleo: azul violeta
Citoplasma: azul
Gránulos: rojo anaranjado
Monocitos y Linfocitos:
Núcleo: violeta
Citoplasma: azul, más claro en el monocito
Basófilos:
Núcleo: purpura
Gránulos: azul oscuro
El panóptico rápido es un método de tinción diferencial, que une:

• La policromía y la calidad que proporcionan los métodos clásicos (Giemsa y Wright)
• Con una gran rapidez de ejecución.
• Es un método de inmersión.
• Colorantes:
• Básico: azul de metileno
• Ácido: eosina
• Obtendremos una tinción diferencial:
• Permite diferenciar distintas estructuras celulares según se tiñan con colorante ácido, básico
o con la mezcla de ambos,
Recuento Diferencial Leucocitario:

La fórmula leucocitaria, también llamada Recuento diferencial, mide el % presente de cada tipo de leucocitos.
Los analizadores hematológicos se basan en:

- Morfología y tamaño de los leucocitos.
- Citometría de flujo.
- Reacciones citoquímicas para reconocer las subpoblaciones.
• Tener precaución en el lavado, no aplicar mucha presión para evitar desprender la extensión.
• Los botes en especial el Nº1 deben estar tapados para evitar que se evapore.
• Se debe elaborar un PNT para filtrar y/o desechar los colorantes según el uso.
• Los restos de colorantes se eliminan en el contendor de residuos químicos.
Utilidad clínica:
- La modificación del porcentaje de leucocitos puede orientar al diagnóstico de enfermedades.
- Screening de leucocitosis, leucopenias, infecciones.
- Evaluación de infección, inflamación, intoxicación, anemia, colagenosis, leucemia, desórdenes
mielo y linfoproliferativos, tumores, inmunosupresión de médula ósea, leucocitosis, leucopenias.
Valores normales:
- Hay una pequeña variación con la edad.
- En recién nacidos y niños puede estar aumentado debido a la maduración que experimenta el
sistema inmune.
• El recuento de leucocitos se puede realizar utilizando una aplicación gratuita tanto para android como
para IOs, llamada WBC counter.
COMPETENCIAS
En esta práctica se cubren las siguientes competencias especificadas en:
• Real Decreto 771/2014, de 12 de septiembre, por el que se establece el título de Técnico Superior en
Laboratorio Clínico y Biomédico y se fijan sus enseñanzas mínimas. Las competencias recomendadas
para el módulo de Técnicas de análisis hematológico:
o Realizar técnicas de análisis hematológico, siguiendo los protocolos establecidos.
o Asegurar el cumplimiento de las normas y medidas de protección ambiental y personal,
identificando la normativa aplicable.
o Adaptarse a las nuevas situaciones laborales, manteniendo actualizados los conocimientos
científicos, técnicos y tecnológicos relativos a su entorno profesional, gestionando su
formación y los recursos existentes en el aprendizaje a lo largo de la vida y utilizando las
tecnologías de la información y la comunicación.
o Resolver situaciones, problemas o contingencias con iniciativa y autonomía en el ámbito de
su competencia, con creatividad, innovación y espíritu de mejora en el trabajo personal y en
el de los miembros del equipo.
JUSTIFICACIÓN
La tinción de panóptico rápido es un método de tinción diferencial que permite la observación de las células
sanguíneas. Debido a la interacción entre los colorantes se pueden diferenciar los núcleos y los gránulos de
color violeta. Se trata de una modificación de la tinción de Romanowsky.
A diferencia de otras tinciones usadas en hematología como Wright o May GrundWal, en 15 segundos se ha
completado todo el proceso de tinción.
La experiencia nos dice que es posible alargar el tiempo de tinción a 10 o 20 segundos en los reactivos 2 y 3,
mejorando sensiblemente el contraste y la visualización de las células. El proceso de tinción del frotis sanguíneo
es imprescindible para identificar cada uno de los componentes de la sangre. Resulta interesante comparar el
resultado obtenido con la tinción supravital de azul de metileno y la de esta tinción.
BIBLIOGRAFÍA
La bibliografía empleada para la práctica es la siguiente:
• Conn, H. J.: Darrow M. A. (1965). Staining procedures. Williams and Wilkins, Co., Baltimore.
• John P Greer. (2014). Wintrobe's clinical hematology. Pennsylvania: Lippincott Williams & Wilkins
(LWW).
• Muñoz Serrano J. (2005) Fundamentos y Técnicas de análisis hematológicos y citológicos. MASSON.
2005.
CUESTIONARIO
Responde brevemente a las preguntas:
1.- Qué tipo de tinción es el panóptico rápido. Cita las ventajas e inconveniente de esta tinción.
2.- Explica como se hace el recuento de leucocitos en cámara de Neubauer. Porqué diluimos la muestra y se
utiliza líquido de Türk, ¿podemos utilizar otros diluyentes? Justifica la respuesta.
3.- Que tipo de muestra podemos utilizar para hacer la determinación del RDL, ventajas e inconvenientes de las
mismas.
4.- En qué zona de extensión hacemos el RDL y porqué
5.- Qué resultados has obtenido, explícalos.

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MATERIAL Y USO DEL LABORATORIO

Los objetivos de esta práctica son los siguientes:

Metodología Tinción con Panóptico Rápido:

1. Realizar 2 extensiones correctas, siguiendo lo aprendido en las prácticas anteriores.

• Solución nº2: solución ácida (eosina)

• Solución nº3: solución básica (azul de metileno)

Metodología Recuento Diferencial Leucocitos (RDL):

RDL Número de células %

El panóptico rápido es un método de tinción diferencial, que une:

Recuento Diferencial Leucocitario:

Los analizadores hematológicos se basan en:

La bibliografía empleada para la práctica es la siguiente:

4.- En qué zona de extensión hacemos el RDL y porqué

5.- Qué resultados has obtenido, explícalos.

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