Morfología celular y técnicas de

tinción en cortes histológicos

Dr. Javier García.

 Objetivo terminal.
Una vez finalizada la Unidad, los estudiantes estarán en capacidad de: describir la morfología celular mediante el
uso de técnicas de tinción en cortes histológicos, enmarcado en un contexto de responsabilidad y ética

Objetivos específicos:
 1. Describir cada uno de los pasos en la técnica de coloración con hematoxilina/eosina.
 2. Explicar los procesos físicos y químicos de fijación y tinción en cortes histológicos para
microscopio óptico.
 3. Identificar la presencia de compuestos químicos en láminas histológicas.
 4. Describir células humanas en cortes histológicos.
 5. Comparar la estructura de las células procariotas y eucariotas.
Limitaciones para el estudio de las células
y tejidos

Tamaño
Incoloras
Translúcidas en su mayoría
Limitaciones para el estudio de las células
y tejidos
¿Tamaño?

MO MF ME
Limitaciones para el estudio de las células
y tejidos
Incoloras
Translúcidas en su mayoría
Limitaciones para el estudio de las células
y tejidos
Técnicas Histológicas
 Técnicas para el estudio de las células
1. Técnicas de observación 2. Cultivos celulares (no se colorean)
directa de células vivas
“Técnicas vitales” “técnicas supravitales”
2. Extendidos celulares
Raspado de la mucosa bucal
 Técnicas Histológicas

DEFINICIÓN:
La serie de procedimientos que permiten disponer de una preparación histológica para ser examinada en el M.O.
o en el M.E

OBJETIVO:

Preservar la estructura y organización de las células y los tejidos para que su observación nos brinde datos
cercanos a su comportamiento vital.
Técnicas Histológicas

Fijación

Inclusión

Corte

Tinción ó
Coloración

Montaje
 Técnicas Histológicas

Fijación
1. Definición: Es el proceso destinado a preservar la estructura y composición
química de la célula, lo más cercano a su estado vivo.

2. Propósito: Proteger las estructuras celulares contra daños que se puedan ocasionar
en los procedimientos posteriores.
 Técnicas Histológicas

Fijación
Mecanismo de acción de los fijadores: Precipitar las proteínas lo más fino posible, para que el aspecto celular
NO se modifique. Ejemplo: la Formalina (Formol).

Formol (H-C=O)

H
 Técnicas Histológicas
Fijación
Características de un fijador:

• PH……………………… ¿Qué Preservar

deseamos la estructura y
• Osmolaridad…………. obtener? organización de las células y los tejidos

• Costo

• Estabilidad en el tiempo

• Facilidad de manejo
 Fijación

Formas de
aplicación del
fijador

Inmersión Perfusión

Cortar en Sumergir en Inyectar la

Extraer el pedacitos la solución solución
tejido pequeños fijadora fijadora
 Fijadores

M.O. M.E

Formaldehido
Alcohol etílico Glutaraldehido
Ácido acético Tetraóxido de osmio
Ácido pícrico Paraformaldehido
HgCl2 KMnO4
 Técnicas Histológicas

Inclusión

Procedimiento mediante el cual se introducen tejidos previamente fijados y

deshidratados en medios líquidos o semifluidos que, al solidificarse, proporcionan al
tejido una consistencia tal, que permite ser cortado en laminas finas
 Inclusión

MO ME

+- 10 micras de +- 60 nm
grosor de grosor
 Medios de
Inclusión

MO ME

Parafina
Insoluble en agua y
alcoholes
EPON
 DESHIDRATACIÓN

Alcohol al Alcohol al Alcohol al Alcohol al Alcohol al

60% 70% 80% 95% 100%

¿?
 INCLUSIÓN

Parafina

Parafina

Bloque o
“Taco”
 Técnicas Histológicas

Corte

MO ME

+- 10 micras de +- 60 nm
grosor de grosor
Microtomo
 Corte

Bloque o
“Taco”
Técnicas Histológicas

Tinción

Coloración
 Técnicas Histológicas

Tinción o Coloración

Objetivo:
Aumentar el contraste de las estructuras celulares mediante la adición
de compuestos coloreados que poseen propiedades selectivas por
determinadas zonas de la célula o del tejido.
 Técnicas Histológicas
¿Cuáles estructuras celulares?

Colorante
ADN
básico

Basófilas
 Técnicas Histológicas
¿Cuáles estructuras celulares?

ARN Colorante
básico

Basófilas
Técnicas Histológicas

bases

Colorante
ácido

bases

Acidófila
NEURONA
 Estómago. 400X
Células
principales

Células parietales
 Coloraciones

De rutina Especificas
 Colorantes
“afinidad electro-químicas”

 Haematoxylum campechianum
 Espectro Electromagnético

de alta energía

Azul de Ácido
toluidina Pícrico
 Colorantes

Según su modo de
Según su Según su actuar sobre los
origen Según su afinidad tejidos
naturaleza histológica
química

Básicos Ácidos
Ozoicos
Catiónicos Aniónicos
Naturales Sintéticos Antraquinona,
Acridina
Talocianinas
 Colorantes

Auxócromo Benceno
Cromóforo

Básicos Ácidos
Catiónicos Aniónicos
 HEMATOXILINA –
EOSINA
H-E

Hematoxilina Eosina

Componente
básico Componente ácido
Técnica de Hematoxilina/Eosina
Técnica de Hematoxilina/Eosina
Técnica histológica de rutina: Hematoxilina - Eosina

1 2 3 4

Toma de muestra Fijación Deshidratación Clarificación

Técnica histológica de rutina: Hematoxilina - Eosina

5 6 7 8

Montaje del corte

Inclusión en
Microtomía sobre un Desparafinación
parafina
portaobjeto
Técnica histológica de rutina: Hematoxilina - Eosina

9 10 11 12

Montaje del
Coloración Deshidratación Clarificación
cubreobjetos
 Etapas Fundamento/precauciones Producto/instrumento
Toma de la muestra Pequeño tamaño (2-3mm) Bisturí, hoja de afeitar

Fijación Detiene procesos vitales, evita la autolisis Formol 10%,12-24h,vol.40/l

Deshidratación Facilita la filtración del solvente Etanol en graduación ascendente

Aclaración Favorece la filtración de la parafina Xilol, benzol

Inclusión en parafina Otorga dureza para poder realizar cortes Parafina (45 a 6°C, estufa

Preparación del taco Soporte para el montaje en el micrótomo Bloque de madera o plástico

Corte Permite la visualización de estructuras pequeñas Micrótomo

Montaje del corte sobre un portaobjetos Soporte para su observación al microscopio Portaobjetos

Desparafinación Facilita la filtración del alcohol Xilol, benzol

Hidratación Permite la filtración al tejido de colorantes acuosos Etanol en graduación descendente

hasta el agua destilada.

Coloración Otorga colores diferentes a la muestra Hematoxilina/eosina

Deshidratación Facilita el montaje con medios hidrofóbicos Etanol en graduación ascendente.

Aclaración Otorga transparencia a los tejidos Xilol, benzol

Montaje de cubreobjetos Permite obtener una preparación permanente Cubreobjetos mas resina
 Esófago. 100X

Epitelio plano estratificado

no cornificado
Esófago. 400X HE
 Susta Color Papan
ncias acion icolau
quími es
cas tisula
que res
se
encue
ntran
en el
• Elásticas
citopl
asma colágenas
• PÁS • Fibras • Papanicolaou
Especificas De rutina
Coloraciones
 Frotis de cuello uterino. 400X

•Papanicolaou

Células
Superficiales
Células
Basales
Células
Intermedias
Impregnación Argéntica. 400X

Fibras de
reticulina
Reacción de P.A.S. 600X

Fibras de
reticulina
Reacción de P.A.S. 1000X
 Carmín de Best. 400X

Hepatocitos

Depósitos de
glucógeno
  Células HeLa
Teñidas con Hoechst 33258 Fluorescencia multifotónica
 ¿Por qué es importante conocer el tamaño y
dimensiones de las células y sus estructuras?
Morfología
celular
 Aspectos considerados para la descripción de las
células al microscopio óptico
1. Límite celular
2. Forma de la célula
3. Presencia o ausencia de núcleo
4. Número de núcleos
5. Clasificación de la célula según el número de núcleos
6. Forma del núcleo
7. Ubicación del núcleo
8. Clasificación de los núcleos de acuerdo al tipo de cromatina.
9. Presencia o ausencia de nucléolo
10. Naturaleza química del núcleo
11. Naturaleza química del citoplasma
12. Afinidad del citoplasma por el colorante
13. Afinidad del núcleo por el colorante
Límite / Tamaño

Núcleo

Citoplasma
Límite / Tamaño
 Límite /
Tamaño

Límite Tamaño

¿Cuánto mide y
Definido Indefinido en qué
dimensión?
 µ

NEURONA

Límite
 µ

NEURONA

Tamaño

7,5 micras
 Sangre. 400X

Linfocito

Neutrófilos
 Sangre. 400X

Eosinófilo

Monocito

Basófilo
Maxilar fetal. 400X

Osteoclasto

Aumento total: 400X

Piel. 400X Adipocitos
Piel. 400X Adipocitos
Núcleo
 Núcleo
Forma

Número 0 1 MUCHOS

Ubicación en la célula: ¿central? ¿periférica? ¿Excéntricas?

Tipo de cromatina: eucromatina /Heterocromatina

Nucléolos: visibles? Si o no. ¿Cuántos?

Núcleo

PREGUNTAS

NÚCLEO 1.¿Hay Núcleo?

2. Si, hay: ¿Cuántos?

3. Si hay ¿Qué forma tiene?

4. Si hay ¿Dónde se ubica en

la célula?

5. Si hay ¿Qué tipo de

cromatina tiene?
Núcleo

PREGUNTAS

1.¿Hay Núcleo?

2. Si, hay: ¿Cuántos?

3. Si hay ¿Qué forma tiene?

4. Si hay ¿Dónde se ubica en

la célula?

5. Si hay ¿Qué tipo de

cromatina tiene?
 Núcleo

PREGUNTAS

1.¿Hay Núcleo?

2. Si, hay: ¿Cuántos?

NÚCLEO 3. Si hay ¿Qué forma tiene?

4. Si hay ¿Dónde se ubica en

la célula?

5. Si hay ¿Qué tipo de

cromatina tiene?
Citoplasma
 Citoplasma

Afinidad tintorial Visualización de

con HE inclusiones
citoplasmáticas

Basófilo Acidófila ?
 µ

NEURONA

Afinidad
tintorial
¿Afinidad tintorial?
 Estómago. 400X

¿Afinidad
tintorial?
 Sangre. 400X

Eosinófilo

Monocito

Basófilo
 Las Células
PROCARIONT EUCARIONTE
E
Célula procariota y eucariota
SEMEJANZAS

ADN

En su Citosol se realizan:
• Síntesis de proteínas
• Glicólisis anaerobia
 DIFERENCIAS
Parámetro Eucariota Procariota
Envoltura Nuclear Presente Ausente
Organelas membranosas Presente Ausente

Molécula de ADN Lineal Circular

Citoesqueleto Presente Ausente

División celular Mitosis Amitosis

Dimensiones 10 a 100 micras de < 1 micra de longitud

longitud
 Las Células
PROCARIOTA EUCARIOTA

Comprenden todos los miembros del Comprenden todos los miembros del

• reino animal
• Bacterias
• vegetal,
• Algas azules
• fungi (hongos) y

• los protozoarios