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    Tecnicas Histologicas 2022

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    Kelly Porcel Mitma
    Este documento describe los pasos involucrados en las técnicas histológicas, incluyendo la obtención de muestras, fijación, deshidratación, aclaramiento, inclusión, corte, tinción, montaje y los tipos de colorantes utilizados.

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    Tecnicas Histologicas 2022

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    Este documento describe los pasos involucrados en las técnicas histológicas, incluyendo la obtención de muestras, fijación, deshidratación, aclaramiento, inclusión, corte, tinción, montaje y los tipos de colorantes utilizados.

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    TECNICAS HISTOLOGICAS 2022

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    Dra.

    Pamela Gamboa Ortuño


    QUE SON LAS TECNICAS
    HISTOLOGICAS?

    Son procedimientos que nos


    permiten ver estructuras como en
    el organismo vivo.
    CARACTERISTICAS

     Serie de pasos que tienen el fin de


    mantener el tejido muerto como si
    estuviera vivo.
     A través de Reacciones químicas.

     Visualiza tanto en microscopia Óptica y


    Electrónica.
    QUE PASOS SE DEBEN SEGUIR PARA
    REALIZAR LAS TECNICAS
    HSITOLOGICAS?
    OBTENCION DE MUESTRA

    FIJACION

    DESHIDRATACION

    ACLARAMIENTO

    INCLUSION

    CORTE

    TINCION

    MONTAJE
    OBTENCION DE MATERIAL

    • Autopsias
    • Cadáver
    NECROPSIAS

    • Insicionales ( Parte
    BIOPSIAS del órgano)
    • Escisionales (Órgano )
    • Sujeto con vida
    MUESTRA

     Endoscopia
     Biopsia por congelación

     Sangre

     Citología Exfoliativa
    FIJACION
    - Formol al 10% -
    simples alcohol etílico 96%
    -alcohol metílico

    QUIMICOS

    Liquido de
    Fleming, liquido
    de Helly, liquido
    Compuestos
    de Bouin, liquido
    FIJADORES de Dubodscq-
    brasil

    Desecación
    Calor seco
    FISICOS Calor húmedo
    Frio
    Congelación
    FIJADORES

     Sustanciasquímicas que permite:


     Conservar el Tejido.
     Aumentar su dureza.
     Destruir Bacterias
     Interrumpir procesos de su muerte.
    FIJADORES PARA MICROSCOPIA ÓPTICA

    FIJADORES FIJADORES
    FIJADORES
    QUIMICOS QUIMICOS
    FISICOS
    SIMPLES COMPUESTOS
    • 1 sola sustancia • Varias sustancias • Desecación
    • Formol 10% • Liquido de • Calor seco
    • Alcohol Etílico Fleming • Calor Húmedo
    96% • Liquido de • Frio
    (MICROQUIMICA) Zenker • Congelación
    • Alcohol • Liquido Helly
    Metílico(FROTIS • Liquido de Bouin
    DESECADOS) • Liquido de
    Duboscq -Brasil
    FIJADORES PARA MICROSCOPIA
    ELECTRONICA

    Se usan fijadores químicos como :

     GLUTARALDEHIDO AL 2,5%
     PARAFORMALDEHIDO
     TETROXIDO DE OSMIO
     PERMANGANATO DE POTASIO

    A diferencia de los utilizados por la MO estos fijadores


    permiten preservar su estructura y captar mayor
    detalles.
    DESHIDRATACION ACLARAMIENTO
    Serie gradual de baños Es el tratamiento con :
    con :  XILENO ( solvente
     Alcohol al 50% de la parafina)
     Acetona  Tolueno, Benzol o
    cloroformo.
    INCLUSION

    Medio de inclusión es la:

     Parafina liquida
    60º C y la Gelatina.
     Bloques de
    parafina(TACO)
    SECCION

     Se realiza el corte del


    TACO.
     Cortes de 3 – 10um(MO)
    con Micrótomo.
     Cortes de 25 a 100nm
    (ME) con Micrótomo
    con hoja de diamante.
     Especímenes congelados
    (nitrógeno liquido),
    CRIOSTATO.
    TINCION
    Clases:
    1. Diferencian los
    componentes
    ácidos y básicos
    de la célula.
    2. Diferencian los
    componentes fibroso
    de la matriz
    extracelular.
    3. Precipitación de
    sales metálicas en
    tejidos y forman
    depósitos de
    metales.
    CLASES DE COLORANTES
    MONTAJE

     Se coloca en un portaobjetos
     Resina sintética para su adhesión.
    GRACIAS
    COLORANTES
     Permiten estudiar una variedad de tipos de
    tejidos y órganos.
    COLORANTES ÁCIDOS Y BÁSICOS

    HEMATOXILINA EOSINA

    Es una BASE que Es una ACIDO que


    tiñe los componentes tiñe los componentes
    ACIDOS de la célula BASICOS de la célula
    de color AZUL y se de color ROSADO y
    denominan se denominan
    BASOFILOS. ACIDOFILOS.
    HEMATOXILINA
     Colorante BASICO
     Carga POSITIVA (CATION), que tiene reacción
    con los componentes ANIONICOS y los tiñe de
    color azul – Violeta.
     Componentes anionicos celulares:
     Grupos fosfatos (ADN) – Núcleo - Nucléolo
     Grupos Sulfato de los Glucosaminoglucanos.
     Grupos Carboxilo de las proteínas.
     Matriz del cartílago
     RER
    EOSINA
     Colorante ACIDO.
     Carga NEGATIVA (ANION), que reacciona con
    los componentes CATIONICOS y los tiñe de color
    ROSADO – NARANJA.
     Componentes catiónicos celulares:
     Filamentos citoplasmáticos
     Componentes de la membrana
     Fibras de colágena
     Sustancia fundamental
    METACROMASIA

     Cambio de color de un colorante BASICO (Azul


    de Toluidina) a un color ROJO o PURPURA.
     Debido a la alta cantidad de aniones en el tejido
    POLIANIONES.
     Su aglutinación hacen que sus propiedades
    cambien y con ello cambie su coloración.
     EJEM: Cartílago , Mastocitos, Células
    plasmáticas y Basófilos.
    CLASES DE COLORANTES
    CLASES DE COLORANTES
    HISTOQUIMICA

     Es un método de
    tinción de tejidos que
    permite identificar
    macromoléculas intra
    y extracelulares a
    través de la
    reacción de un
    componente celular
    con un colorante
    que presenta la
    actividad
    enzimática.
    REACCIONES HISTOQUÍMICAS
    COLORANTE/ AGENTE RESULTADO COLORACION

    Acido Peryodico- Reactivo de Hidratos de carbono y moléculas ricas MAGENTA


    Schiff en Glucógeno, Mucina, Membrana
    basal, Glucocalix Fibras reticulares.

    Reacción de Feulgen ADN ROJO

    Tricromico de Masson Núcleo AZUL OSCURO


    Fibras de músculo, Queratina, ROJO
    citoplasma.

    Colágena y Mucinogeno AZUL CLARO

    Tricromico Gallego Colágena VERDE TURQUESA


    Músculo VERDE
    Núcleos CAFE
    Tinción de Wright y Giemsa Frotis Sanguíneos ROSA / PURPURA
    Glóbulos Rojos
    Gránulos eosinofilicos
    Núcleos y gránulos basófilos

    Colorantes de Sudan Lípidos ROJO Y NEGRO


    INMUNOCITOQUIMICA
     Es un método que
    utiliza anticuerpos
    marcados con
    fluoresceína para
    identificar
    macromoléculas de
    forma mas precisa
    que la histoquímica,
    (reacción AG- AC)
     Rodamina, Ferritina
    y oro (ME)
    AUTORRADIOGRAFIA

     Es un método en el que
    se incorporan
    Isotopos
    radioactivos en
    macromoléculas y se
    observan con el uso
    de una película
    emulsión
    superpuesta.
     Isotopo radioactivo
    (TRITIO)
     Investiga secuencia
    temporal especifica.
    GRACIAS

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