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    PCR y Electrof.

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    Cileni nuñez talenas
    La técnica de PCR se basa en ciclos repetitivos de desnaturalización, hibridización y extensión del ADN que permiten amplificar selectivamente secuencias de ADN de manera exponencial. La PCR utiliza una ADN polimerasa termoestable junto con cebadores específicos para copiar una región de ADN, generando millones de copias que pueden analizarse mediante electroforesis en gel. Esta técnica tiene importantes aplicaciones forenses y en test de paternidad.

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    PCR y Electrof.

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    Cileni nuñez talenas
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    La técnica de PCR se basa en ciclos repetitivos de desnaturalización, hibridización y extensión del ADN que permiten amplificar selectivamente secuencias de ADN de manera exponencial. La PCR utiliza una ADN polimerasa termoestable junto con cebadores específicos para copiar una región de ADN, generando millones de copias que pueden analizarse mediante electroforesis en gel. Esta técnica tiene importantes aplicaciones forenses y en test de paternidad.

    Descripción original:

    Biologia 2

    Título original

    Pcr y Electrof.

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    La técnica de PCR se basa en ciclos repetitivos de desnaturalización, hibridización y extensión del ADN que permiten amplificar selectivamente secuencias de ADN de manera exponencial. La PCR utiliza una ADN polimerasa termoestable junto con cebadores específicos para copiar una región de ADN, generando millones de copias que pueden analizarse mediante electroforesis en gel. Esta técnica tiene importantes aplicaciones forenses y en test de paternidad.

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    PCR y Electrof.

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    Cileni nuñez talenas
    La técnica de PCR se basa en ciclos repetitivos de desnaturalización, hibridización y extensión del ADN que permiten amplificar selectivamente secuencias de ADN de manera exponencial. La PCR utiliza una ADN polimerasa termoestable junto con cebadores específicos para copiar una región de ADN, generando millones de copias que pueden analizarse mediante electroforesis en gel. Esta técnica tiene importantes aplicaciones forenses y en test de paternidad.

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    de 33

    Fundamentos de PCR

    Seminario N4
    Objetivos

    Estudiar los pasos que componen la


    reaccin de PCR
    Conocer el fundamento de la tcnica de
    electroforesis
    Conocer la aplicacin del PCR en Test de
    Paternidad
    Estructura del ADN
    Replicacin de ADN y ADN Polimerasa
    Reaccin en cadena de la
    polimerasa - PCR
    PCR es bsicamente una tcnica de amplificacin del ADN.

    ADN
    PCR
    Muchas
    molculas
    (molcula sencilla) amplificacin
    Historia

    1985 se crea la
    tcnica molecular
    conocida como
    PCR
    Kary B. Mullis,
    Coorporacion
    CETUS
    Premio Nobel en
    Qumica 1993
    Procedimiento del PCR
    Desnaturalizacin
    Hibridizacin
    Extensin
    Desnaturalizacin

    Calor del ADN 94C.


    Filamentos dobles se
    derriten.
    Hay una separacin
    fsica de las dos
    cadenas.
    Hibridizacin
    La temperatura se reduce a 54 C.
    Movimiento Browniano.
    El movimiento que lleva a cabo una partcula
    muy pequea que esta inmersa en un fluido
    Enlaces de hidrgeno.
    Filamento de ADN.
    Bases construidas.
    Extensin o Polimerizacin
    Temperatura de polimerasas 72C.
    Los primers tienen una fuerte atraccin
    al molde o templado
    Los primers sin exacto pareo se pierden.
    No dan extensiones de fragmento.
    El procedimiento se repite y se forman
    copias del ADN.
    PCR
    Dolan Learning Center
    Biology Animation Library
    CSHL
    LA TCNICA SE BASA EN CICLOS DE 1 O 2 MINUTOS

    CON TEMPERATURAS QUE VARIAN ENTRE LOS 98C-

    90C Y 60C- 55C.

    EN CADA CICLO EL ADN SE DUPLICA.

    LOS CEBADORES CONSTAN DE 20 A 30 BASES DE

    LARGO.

    LA POLIMERASA SE OBTIENE PURIFICADA DE LA

    BACTERIA THERMUS AQUATICUS, ESTABLE A ALTAS

    TEMPERATURAS. AHORA SE SINTETIZA POR

    INGENIERA GENTICA.
    Hay 7 componentes esenciales
    en el proceso standard de PCR

    ADN polimerasa termoestable


    Oligonucleotidos iniciadores (primers)
    Desoxiribonucletidos trifosfatados
    (dNTPs)
    Cationes divalentes
    Buffer (para mantener el pH)
    Cationes divalentes
    ADN molde (Templado)
    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR

    PCR es bsicamente una tcnica de amplificacin


    del DNA.

    DNA
    PCR
    Muchas
    moleculas
    (molecula sencilla) amplificacin
    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR

    Sntesis por DNA polimerasa

    5 3
    -T A C G
    -A T G C A T G C A T G C * *

    Primers cortos de DNA especficos hibridizan con la


    cadena que tiene que ser copiada
    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR

    Sntesis por DNA polimerasa

    5 3
    -T A C G T
    -A T G C A T G C A T G C * *
    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR

    Sntesis por DNA polimerasa

    5 3
    -T A C G T A
    -A T G C A T G C A T G C * *
    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR

    Sntesis por DNA polimerasa

    5 3
    -T A C G T A C
    -A T G C A T G C A T G C * *
    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR

    Sntesis por DNA polimerasa

    5 3
    -T A C G T A C G
    -A T G C A T G C A T G C * *
    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR

    Sntesis por DNA polimerasa


    5 3
    -T A C G T A C G T
    -A T G C A T G C A T G C * *
    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR

    Sntesis por DNA polimerasa

    5 3
    -T A C G T A C G T A
    -A T G C A T G C A T G C * *
    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR

    Despues del primer periodo de sintesis de


    DNA, tenemos copiada una cadena de DNA

    Primer 1 Extensin de la cadena

    Cadena original de DNA

    Cmo produce este proceso una AMPLIFICACIN?


    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR
    Primero, la fusin separa las dos cadenas de DNA a alta
    temperatura (~100C)
    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR
    Primero, la fusin separa las dos cadenas de DNA a alta
    temperatura (~100C)
    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR

    Luego, usando un segundo primer, se copia la nueva


    cadena con la DNA polimerasa
    2

    Al mismo tiempo, la cadena original se copia


    nuevamente, dado que hay un exceso de Primer 1

    Ahora tenemos dos copias de la molcula original


    Reaccin en cadena de la polimerasa - PCR

    Para controlar el proceso, necesitamos controlar la temperatura

    Fusin Hibridizacin Extensin de 2do Ciclo


    95C 50-60C La cadena 95C
    75C 50 - 60C
    75C
    Primer Ciclo
    Si repetimos el ciclo, tendremos cuatro copias
    Mltiples ciclos darn un incremento exponencial en
    el nmero de copias
    Cmo funciona la electroforesis de
    ADN?
    Electroforesis de ADN: deteccin con
    Bromuro de Etidio
    Aplicaciones

    Forense
    Aplicaciones

    Forense
    Aplicaciones

    Test de Paternidad

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