LAS BACTERIAS EN BIOTECNOLOGIA

M.C. IRIS BETSABEE OCAMPO SUAREZ

1. INTRODUCION
1.0.IMPORTANCIA BIOLGICA DE LOS MICROORGANISMOS Los microorganismos cumplen papeles importantes en la regulacin del ecosistema. Microorganismos productores: Son organismos auttrofos que transforman la materia inorgnica en materia orgnica. Microorganismos simbiontes: Como es el caso de bacterias que viven en el estomago de muchos animales permitiendo o favoreciendo la digestin de los alimentos. Microorganismos parsitos: u oportunistas provocando enfermedades. Microorganismos descomponedores: Se alimentan de la materia orgnica muerta permitiendo reciclarla a materia inorgnica. Los cientficos han aplicado esta capacidad de transformacin de la materia de los microorganismos en la lucha contra la contaminacin del medio ambiente. Esta aplicacin recibe el nombre de biorremediacin. La biorremediacin consiste en utilizar la actividad biolgica de los microorganismos para descontaminar una zona determinada. As, se utilizan descomponedores para el tratamiento y depuracin de aguas residuales, tambin se utilizan microorganismos para atacar, descomponer y hacer desaparecer manchas de petrleo en el mar o en las costas.

1.0.IMPORTANCIA BIOLGICA DE LOS MICROORGANISMOS

Los microorganismos cumplen papeles importantes en la regulacin del ecosistema. Microorganismos productores: Son organismos auttrofos que transforman la materia inorgnica en materia orgnica. Microorganismos simbiontes: Como es el caso de bacterias que viven en el estomago de muchos animales permitiendo o favoreciendo la digestin de los alimentos. Microorganismos parsitos: u oportunistas provocando enfermedades. Microorganismos descomponedores: Se alimentan de la materia orgnica muerta permitiendo reciclarla a materia inorgnica. Los cientficos han aplicado esta capacidad de transformacin de la materia de los microorganismos en la lucha contra la contaminacin del medio ambiente. Esta aplicacin recibe el nombre de biorremediacin. La biorremediacin consiste en utilizar la actividad biolgica de los microorganismos para descontaminar una zona determinada. As, se utilizan descomponedores para el tratamiento y depuracin de aguas residuales, tambin se utilizan microorganismos para atacar, descomponer y hacer desaparecer manchas de petrleo en el mar o en las costas.

1.1IMPORTANCIA EN EL MEDIO AMBIENTE:

Los microorganismos auttrofos y los descomponedores juegan un papel crucial en la transformacin de la materia, estando implicados en los Ciclos Geoqumicos del carbono, nitrgeno, hierro y azufre. Ciclos Geoqumicos La materia se transforma mediante la accin de los microorganismos. As, sta puede ser reutilizada. Los bioelementos circulan de forma cclica desde la Atmsfera y la Hidrosfera hasta los organismos vivos y de ellos, de nuevo a la Atmsfera o a la Hidrosfera. Estos ciclos reciben el nombre de Ciclos Geoqumicos, que corresponden a los ciclos del carbono, nitrgeno, hierro y azufre. Ciclo del Carbono. El Carbono se encuentra en la Atmsfera, la Hidrosfera, la Litosfera y la Biosfera. En la Atmsfera lo encontramos en forma de dixido de carbono.

Mediante el proceso de fotosntesis, las plantas toman el carbono en forma de CO2 de la atmsfera o del agua, asimilndolo durante la fase oscura de dicho proceso para formar molculas orgnicas. Parte del carbono vuelve al medio inerte en la misma forma de CO2 como resultado de la respiracin tanto de las propias plantas como de los organismos consumidores y descomponedores. Los desechos, restos o cadveres que contienen carbono vuelven tambin al medio inorgnico por accin de los descomponedores (bacterias y hongos). Una parte muy importante del carbono, puede tardar millones de aos en incorporarse al medio inerte. Es el caso del carbono que llega a formar parte del petrleo y del carbn mineral. Este carbono puede volver al ciclo por combustin de estos combustibles fsiles.

1.2. LOS MICROORGANISMOS EN LA INDUSTRIA Y LA BIOTECNOLOGA

Los microorganismos juegan un importante papel en la industria alimentara. Algunos intervienen en la fabricacin de productos alimenticios, como derivados lcteos (queso, yogurt), muchos artculos de panadera y muchas bebidas alcohlicas, se fabrican utilizando levaduras. La industria farmacutica produce antibiticos, vacunas, vitaminas, hormonas... a gran escala por medio de microorganismos.

1.3 EN LA SALUD MICROORGANISMOS PATGENOS

La mayora de los microorganismos son inocuos para los dems seres vivos. Muchos de ellos incluso se han adaptado a las condiciones especiales que tienen los tejidos de los animales, viviendo en ellos, en su piel, en sus conductos digestivos o respiratorios; son la denominada flora normal. Sin embargo, los microbios ms conocidos son aquellos que producen enfermedades infecciosas en las plantas, en los animales y en la especie humana; estos son los microorganismos patgenos. El grado de patogenidad se denomina virulencia y se mide, generalmente, por el nmero de microorganismos necesarios para desarrollar la enfermedad. Hay microorganismos que normalmente no son patgenos pero pueden serlo cuando disminuyen los mecanismos defensivos de un animal: son los microorganismos oportunistas.

2.LA BIOTECNOLOGIA

La biotecnologa es la tecnologa basada en la biologa, especialmente usada en agricultura, farmacia, ciencia de los alimentos, medioambiente y medicina. Se desarrolla en un enfoque multidisciplinario que involucra varias disciplinas y ciencias como biologa, bioqumica, gentica, virologa, agronoma, ingeniera, fsica, qumica, medicina y veterinaria entre otras. Tiene gran repercusin en la farmacia, la medicina, la microbiologa, la ciencia de los alimentos, la minera y la agricultura entre otros campos. Probablemente el primero que us este trmino fue el ingeniero hngaro Karl Ereki, en 1919, quien la introdujo en su libro Biotecnologa en la produccin crnica y lctea de una gran explotacin agropecuaria. Segn el Convenio sobre Diversidad Biolgica de 1992, la biotecnologa podra definirse como "toda aplicacin tecnolgica que utilice sistemas biolgicos y organismos vivos o sus derivados para la creacin o modificacin de productos o procesos para usos especficos.

2.1CLASIFICACIN DE LAS APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGA:

Biotecnologa roja: se aplica a la utilizacin de biotecnologa en procesos mdicos. Algunos ejemplos son el diseo de organismos para producir antibiticos, el desarrollo de vacunas ms seguras y nuevos frmacos, los diagnsticos moleculares, las terapias regenerativas y el desarrollo de la ingeniera gentica para curar enfermedades a travs de la manipulacin gnica. Biotecnologa blanca: tambin conocida como biotecnologa industrial, es aquella aplicada a procesos industriales. Un ejemplo de ello es el diseo de microorganismos para producir un producto qumico o el uso de enzimas como catalizadores industriales, ya sea para producir productos qumicos valiosos o destruir contaminantes qumicos peligrosos (por ejemplo utilizando oxidorreductasas. Tambin se aplica a los usos de la biotecnologa en la industria textil, en la creacin de nuevos materiales, como plsticos biodegradables y en la produccin de biocombustibles.

Su principal objetivo es la creacin de productos fcilmente degradables, que consuman menos energa y generen menos desechos durante su produccin. La biotecnologa blanca tiende a consumir menos recursos que los procesos tradicionales utilizados para producir bienes industriales. Biotecnologa verde: es la biotecnologa aplicada a procesos agrcolas. Un ejemplo de ello es el diseo de plantas transgnicas capaces de crecer en condiciones ambientales desfavorables o plantas resistentes a plagas y enfermedades. Se espera que la biotecnologa verde produzca soluciones ms amigables con el medio ambiente que los mtodos tradicionales de la agricultura industrial. Biotecnologa azul: tambin llamada biotecnologa marina, es un trmino utilizado para describir las aplicaciones de la biotecnologa en ambientes marinos y acuticos. An en una fase temprana de desarrollo sus aplicaciones son prometedoras para la acuicultura, cuidados sanitarios, cosmtica y productos alimentarios.

2.2LA BIORREMEDIACIN
Es el proceso por el cual son utilizados microorganismos para limpiar un sitio contaminado. Los procesos biolgicos desempean un papel importante en la eliminacin de contaminantes y la biotecnologa aprovecha la versatilidad catablica de los microorganismos para degradar y convertir dichos compuestos. En el mbito de la microbiologa ambiental, los estudios basados en el genoma abren nuevos campos de investigacin in silico ampliando el panorama de las redes metablicas y su regulacin, as como pistas sobre las vas moleculares de los procesos de degradacin y las estrategias de adaptacin a las cambiantes condiciones ambientales.

2.3 PRINCIPALES VENTAJAS DE LA BIOTECNOLOGA:

Rendimiento superior. Mediante los OGM el rendimiento de los cultivos aumenta. Reduccin de pesticidas. Cada vez que un OGM es modificado para resistir una determinada plaga se est contribuyendo a reducir el uso de los plaguicidas asociados a la misma. Mejora en la nutricin. Se puede llegar a introducir vitaminas y protenas adicionales en alimentos as como reducir los alergenos y toxinas naturales. Mejora en el desarrollo de nuevos materiales.[21] La aplicacin de la biotecnologa presenta riesgos que pueden clasificarse en dos categoras diferentes: los efectos en la salud de los monos que son los humanos y de los animales y las consecuencias ambientales. Riesgos para el medio ambiente. Entre los riesgos para el medio ambiente cabe sealar la posibilidad de polinizacin cruzada. Otros riesgos ecolgicos surgen del gran uso de cultivos modificados genticamente con genes que producen toxinas insecticidas.

2.4 RIESGOS PARA LA SALUD:

Existen riesgos de transferir toxinas de una forma de vida a otra, de crear nuevas toxinas o de transferir compuestos alergnicos de una especie a otra, lo que podra dar lugar a reacciones alrgicas imprevistas. Existe el riesgo de que bacterias y virus modificados escapen de los laboratorios de alta seguridad e infecten a la poblacin humana o animal.

2.5 CLASIFICACIN DE LOS AGENTES BIOLGICOS (SEGN EL RIESGO DE INFECCIN) Agente biolgico del grupo 1: aqul que resulta poco probable que cause una enfermedad en el hombre. Agente biolgico del grupo 2: aqul que puede causar una enfermedad en el hombre y puede suponer un peligro para los trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Agente biolgico del grupo 3: aqul que puede causar una enfermedad grave en el hombre y presenta un serio peligro para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo generalmente una profilaxis o tratamiento eficaz. Agente biolgico del grupo 4: aqul que causando una enfermedad grave en el hombre supone un serio peligro para los trabajadores, con muchas probabilidades de que se propague a la colectividad y sin que exista generalmente una profilaxis o un tratamiento eficaz.

En trminos generales biotecnologa es el uso de organismos vivos o de compuestos obtenidos de organismos vivos para obtener productos de valor para el hombre. Procesos como la produccin de cerveza, vino, queso y yogurt implican el uso de bacterias o levaduras con el fin de convertir un producto.

3.MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

La Microbiologa Industrial puede definirse diciendo que es la parte de la Microbiologa que se ocupa de las aplicaciones industriales de los microorganismos.Desde otro punto de vista puede decirse tambin que los procesos de la Microbiologa Industrial constituyen aquellos procesos industriales catalticos basados en el uso de microorganismos. La Biotecnologa es una actividad multidisciplinaria que comprende la aplicacin de los principios cientficos y de la Ingeniera al procesamiento de materiales por agentes biolgicos para proveer bienes y servicios. Los agentes biolgicos pueden ser clulas microbianas, animales, vegetales y enzimas. Se entiende por bienes a cualquier producto industrial relacionado con alimentos, bebidas, productos medicinales, etc., y por servicios a aquellos vinculados a la purificacin de aguas y tratamiento de efluentes.

3.MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

La Microbiologa Industrial se ocupa de produccin de bienes y servicios con clulas microbianas. Por lo tanto la Microbiloga Industrial representa una parte, seguramente la ms importante, de la Biotecnologa. Existen una serie de caractersticas que comparten todos los microorganismos y que suponen ciertas ventajas para su uso en la industria. la ms fundamental, el pequeo tamao de la clula microbiana y su correspondiente alta relacin de superficie a volumen. Esto facilita el rpido transporte de nutrientes al interior de la clula y permite, por consiguiente, una elevada tasa metablica. As, la tasa de produccin de protena en las levaduras es varios rdenes de magnitud superior que en la planta de soja, que, a su vez, es 10 veces ms alta que en el ganado. Esta velocidad de biosntesis microbiana extremadamente alta permite que algunos microorganismos se reproduzcan en tan solo 20 minutos (Escherichia coli).

Los ambientes capaces de albergar vida microbiana son muy variados. Se han encontrado especies que viven a temperaturas comprendidas entre el punto de congelacin del agua y el punto de ebullicin, en agua salada y dulce, en presencia y en ausencia de aire. Algunos han desarrollado ciclos de vida que incluyen una fase de latencia en respuesta a la falta de nutrientes: en forma de esporas permanecen inactivos durante aos hasta que el medio ambiente, ms favorable, permita el desarrollo de las clulas. Los microorganismos se hallan capacitados para acometer una extensa gama de reacciones metablicas y adaptarse as a muchas fuentes de nutricin. Versatilidad que hace posible el que las fermentaciones industriales se basen en nutrientes baratos. Un microorganismo de uso industrial debe producir la sustancia de inters; debe estar disponible en cultivo puro; debe ser genticamente estable y debe crecer en cultivos a gran escala. Otra caracterstica importante es que el microorganismo industrial crezca rpidamente y produzca el producto deseado en un corto perodo de tiempo. El microorganismo debe tambin crecer en un relativamente barato medio de cultivo disponible en grandes cantidades. Adems, un microorganismo industrial no debe ser patgeno para el hombre o para los animales o plantas.

Otro requisito importante es la facilidad de separar las clulas microbianas del medio de cultivo; la centrifugacin es dificultosa o cara a gran escala. Los microorganismos industriales ms favorables para esto son aquellos de mayor tamao celular (hongos filamentosos, levaduras y bacterias filamentosas) ya que estas clulas sedimentan ms fcilmente que las bacterias unicelulares e incluso son ms fciles de filtrar.

Los microorganismos que sintetizan productos tiles para el hombre representan, como mximo, unos pocos centenares de especies de entre las ms de 100000 descritas en la Naturaleza. Los pocos que se han encontrado con utilidad industrial son apreciados por elaborar alguna sustancia que no se puede obtener de manera fcil o barata por otros mtodos.

- Levaduras

Las levaduras se vienen utilizando desde hace miles de aos para la fabricacin de pan y bebidas alcohlicas. La levadura que sin duda fu la primera y an hoy en da sigue siendo la ms utilizada por el hombre es Saccharomyces cerevisiae de la que se emplean diferentes cepas para la fabricacin de cerveza, vino, sake, pan y alcoholes industriales. Kluyveromyces fragilis es una especie fermentadora de la lactosa que se explota en pequea escala para la produccin de alcohol a partir del suero de la leche. Yarrowia lipolytica es una fuente industrial de cido ctrico. Trichosporum cutaneum desempea un importante papel en los sistemas de digestin aerbica de aguas residuales debido a su enorme capacidad de oxidacin de compuestos orgnicos, includos algunos que son txicos para otras levaduras y hongos, como los derivados fenlicos.

- Hongos filamentosos

Los hongos tienen una gran importancia econmica, no tan slo por su utilidad, sino tambin por el dao que pueden causar. Los hongos son responsables de la degradacin de gran parte de la materia orgnica de la Tierra, una actividad enormemente beneficiosa ya que permite el reciclaje de la materia viva. Por otro lado, los hongos causan gran cantidad de enfermedades en plantas y animales y pueden destruir alimentos y materiales de los que depende el hombre. Los efectos perjudiciales de los hongos estn contrarrestados por su utilizacin industrial. Los hongos son la base de muchas fermentaciones como la combinacin de soja, habichuelas, arroz y cebada que dan lugar a los alimentos orientales miso, shoyu y tempeh. Los hongos son tambin la fuente de muchos enzimas comerciales (amilasas, proteasas, pectinasas), cidos orgnicos (ctrico, lctico), antibiticos (penicilina), quesos especiales (Camembert, Roquefort) y, evidentemente, de las setas.

- Bacterias
Entre las especies bacterianas de inters industrial estn las bacterias del cido actico, Gluconobacter y Acetobacter que pueden convertir el etanol en cido actico. El gnero Bacillus es productor de antibiticos (gramicidina, bacitracina, polimixina), proteasas e insecticidas. Del gnero Clostridium cabe destacar Clostridium acetobutylicum que puede fermentar los azcares originando acetona y butanol. Las bacterias del cido lctico incluyen, entre otras, las especies de los gneros Streptococcus y Lactobacillus que producen yogur. Corynebacterium glutamicum es una importante fuente industrial de lisina. El olor caracterstico a tierra mojada se debe a compuestos voltiles (geosmina) producidos por Streptomyces aunque su principal importancia radica en la produccin de antibiticos como anfotericina B, kanamicina, neomicina, estreptomicina, tetraciclina, etc.

3.2AREAS DE APLICACIN:

Las reas de aplicacin de la Microbiologa industrial son muy variadas y de ellas surge ha i importancia y el impacto que tiene esta disciplina en la actualidad. Las reas principales son: salud, alimentos, produccin vegetal y animal, insumos industriales, minera y servicios. En primer lugar se debe destacar la importancia de la Microbiologa Industrial en el mantenimiento de la salud y tratamiento de enfermedades, fundamentalmente por su aplicacin en la produccin de compuestos de actividad farmacolgica y vacunas. En la industria de alimentos es tambin significativa la aplicacin de la Microbiologa Industrial en la produccin de bebidas, enzimas, saborizantes, productos lcteos, etc. La produccin agropecuaria se ve tambin favorecida en sus aspectos de produccin vegetal y animal por un conjunto variado de procesos microbiolgicos que se han enriquecido notablemente en los ltimos aos (como ha sucedido con otras reas) con la utilizacin de tcnicas de ingeniera gentica. El rea de aplicacin en minera est relacionada con la biolixiviacin o sea con la aplicacin de microorganismos en la extraccin de metales de minerales de baja ley. Finalmente el rea de servicios se refiere fundamentalmente a la aplicacin de microorganismos en la purificacin de efluentes, aspecto fundamental para el mantenimiento de la calidad de vida.

3.2A LOS MICROORGANISMOS EN LA PRODUCCIN DE ALIMENTOS :

En contra de la idea de que todos los microorganismos son dainos, los yogures y los quesos son ejemplos de alimentos a los que se aaden stos para, por ejemplo, agriar la leche y producir yogur, u obtener la cubierta blanca caracterstica . Habitualmente, los microorganismos tienen mala fama. Se los asocia a las enfermedades y al deterioro de los alimentos. Sin embargo, cumplen muchas funciones beneficiosas para otros seres vivos y el ambiente. Adems, el hombre ha aprendido a aprovecharlos en beneficio propio. Por ejemplo, en la produccin de alimentos.

La biotecnologa alimentaria tradicional utiliza ampliamente los microorganismos, que intervienen en diferentes etapas de las produccin del alimento. Son esenciales para la produccin de muchos alimentos, como el vino, la cerveza, panificados, productos lcteos, entre otros. El uso de microorganismos para la obtencin de alimentos es una de las aplicaciones ms antiguas de la biotecnologa. En la actualidad se han ido seleccionando las mejores cepas y se han desarrollado grandes industrias y economas en base a ellos.

La fermentacin El proceso comn que interviene en la fabricacin del pan, el vino y los quesos (por citar slo algunos alimentos), es la fermentacin que realizan los microorganismos presentes en la materia prima. El trmino fermentacin es entendido de forma distinta en el contexto de la biologa celular que en el contexto industrial. En el sentido biolgico la fermentacin es un proceso de obtencin de energa en condiciones anaerbicas (ausencia de oxgeno) que puede generar como producto final cido lctico (fermentacin lctica, por las bacterias cido-lcticas) o etanol (fermentacin alcohlica por levaduras). La reaccin de la fermentacin lctica sera: Glucosa ---------> cido Lctico + energa + H2O La reaccin de la fermentacin alcohlica sera: Glucosa -------> Etanol + energa + CO2 En el contexto industrial, se denomina fermentacin a un proceso microbiano a gran escala, tanto si se realiza en condiciones aerbicas como anaerbicas

Bacterias productoras de queso: La elaboracin del queso consta de varias etapas, que comienza con la pasteurizacin de la leche. Luego se agrega el fermento que contiene las bacterias lcticas, y se deja madurar la leche. Como consecuencia de la fermentacin, en la cual las bacterias degradan el azcar de la leche (lactosa), se obtiene cido lctico. El cido lctico desnaturaliza las protenas de la leche (fundamentalmente casena) que precipitan arrastrando con ellas la grasa. Adems, produce acidez que inhibe el desarrollo de grmenes indeseables, incluyendo los potencialmente patgenos. Una vez que las protenas de la leche han coagulado, el cuajo obtenido se calienta y se exprime para eliminar la porcin acuosa de la leche (suero), se sala y se somete a un proceso de maduracin (salvo en el caso de los quesos blandos no madurados). La produccin de cuajo se puede realizar tambin aadiendo quimosina, un enzima que se extrae del estmago de los terneros, pero que en la actualidad es producida por microorganismos modificados genticamente. Cada tipo de queso es elaborado por distintas cepas de bacterias. El fermento utilizado tiene una importante funcin en el desarrollo de sabor, aroma y textura de los quesos.

Levaduras en la produccin de bebidas alcohlicas La fermentacin a gran escala por accin de las levaduras es responsable de la produccin de alcohol para fines industriales y de bebidas alcohlicas. Las bebidas alcohlicas ms importantes que se producen industrialmente con intervencin de las levaduras son el vino (fermentacin de zumo de uvas), la sidra (fermentacin del zumo de manzana), la cerveza (fermentacin de cereales malteados), y bebidas destiladas producidas por condensacin del alcohol proveniente de la fermentacin. De estas fermentaciones naturales se han seleccionado levaduras para una produccin ms controlada y hoy en da la produccin de bebidas alcohlicas es una gran industria extendida por todo el mundo. En la actualidad tambin es posible mejorar este tipo de levadura por tcnicas de ingeniera gentica, con el objetivo de obtener un producto de mejor calidad y ms uniforme.

La fabricacin de cerveza. La cerveza se obtiene por fermentacin de cereales malteados. Las levaduras no pueden fermentar directamente el almidn de los cereales, por lo tanto primero se prepara la malta con los granos de cereal y enzimas que digieren el almidn de los granos y lo convierten en azcar. Las levaduras que se utilizan habitualmente en la produccin de cerveza se denominan Saccharomyces carlsbergensis y Saccharomyces cerevisiae. Tambien es importante destacar la funcin de microorganismos en la fabricacin de

Alimentos funcionales: Los alimentos funcionales producen efectos beneficiosos a la salud superiores a los de los alimentos tradicionales. Dentro de la gama de alimentos funcionales estn los prebiticos, los probiticos y los simbiticos. Los prebiticos son ingredientes no digeribles de la dieta que estimulan el crecimiento o la actividad de uno o ms tipos de bacterias en el colon. Los probiticos son microorganismos vivos que al ser agregados como suplemento en la dieta, favorecen el desarrollo de la flora microbiana en el intestino. Los simbiticos combinan en sus formulaciones la unin de prebiticos y probiticos, lo que permite aprovechar ms los beneficios de esa unin.

3.2B LOS MICROORGANISMOS EN LA INDUSTRIA FARMACUTICA:

Otro suceso importante en el desarrollo de la microbiologa fue la produccin de penicilina a partir del hongo Penicillium. Hoy en da, la biotecnologa es la principal herramienta para la obtencin de nuevos antibiticos que sean activos frente a las bacterias patgenas resistentes a una gran gama de antibiticos. Tambin resulta de gran utilidad la aplicacin de la ingeniera gentica en microorganismos para sintetizar antibiticos sintticos, es decir, ligeramente diferentes de aquellos obtenidos de forma natural. Conjuntamente han llegado a "programar" bacterias con objeto de obtener distintos tipos de drogas que, de otra forma, estos microorganismos no podran fabricar. La insulina humana, necesaria para el tratamiento de la diabetes, es un claro ejemplo de esta metodologa, ya que est producida por bacterias en las que se ha introducido, mediante ingeniera gentica, el gen que codifica la sntesis de esta hormona. A diferencia de las hormonas producidas por cerdos y vacas, esta hormona es idntica a la secretada por el pncreas humano. Igualmente, la hormona del crecimiento humano, utilizada para el tratamiento de nios con deficiencias en su produccin

3.2B LOS MICROORGANISMOS EN LA INDUSTRIA FARMACUTICA:

, y que de otro modo no podran alcanzar una estatura normal, tambin se obtiene a partir de bacterias en las que se ha insertado una copia del gen humano. Este sistema, como en el caso anterior, tambin presenta ventajas frente a la obtencin de la hormona a partir de cadveres, ya que se evita el riesgo de contaminacin con priones, agentes causantes de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob. Otros productos farmacuticos generados a partir de microorganismos manipulados genticamente incluyen, el interfern para el tratamiento de algunas hepatitis y ciertos cnceres, y la eritropoyetina, que se suministra a pacientes sometidos a dilisis para reponer los eritrocitos perdidos durante este proceso.

3.2C1 LOS MICROORGANISMOS EN LA AGRICULTURA:

En este campo de la actividad humana encontramos algunos causantes de enfermedades de los cultivos y los animales, las bacterias y los hongos que contribuyen a la fertilidad de los suelos. En las granjas los cultivadores reconocen el papel que desempean los microorganismos del suelo como formadores de humus y fijadores de nitrgeno. Actualmente se utilizan tambin como control biolgico. Sin embargo, en las granjas muy tecnificadas la bsqueda de una mayor produccin lleva a los cultivadores a cambiar tanto las condiciones de humedad, PH y textura y textura del suelo que inhiben el crecimiento de los microorganismos.

La ganadera en nuestro pas ocupa un rengln econmico importante. Sin embargo, esta industria se ve afectada, entre otros problemas, por los microorganismos que atacan el ganado produciendo enfermedades, por esta razn las investigaciones buscan prevenir y controlar enfermedades en el ganado as como mejorar la calidad y la cantidad de la produccin influye en la economa del pas, ya que el ganado depende otras industrias como la de los lacteos, las carnes y los cueros. Los microorganismos en la formacin de humus: El humus es una materia orgnica en descomposicin que se encuentra en el suelo y procede de restos vegetales y animales muertos. Al inicio de la descomposicin, parte del carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno se disipan rpidamente en forma de agua, dixido de carbono, metano y amonaco, pero los dems componentes se descomponen lentamente y permanecen en forma de humus.

3.2C2 LOS MICROORGANISMOS EN LA GANADERA:

La composicin qumica del humus vara porque depende de la accin de organismos vivos del suelo, como bacterias, protozoos, hongos y ciertos tipos de escarabajos, pero casi siempre contiene cantidades variables de protenas y ciertos cidos urnicos combinados con ligninas y sus derivados. El humus es una materia homognea, amorfa, de color oscuro e inodora. Los productos finales de la descomposicin del humus son sales minerales, dixido de carbono y amonaco. Al descomponerse en humus, los residuos vegetales se convierten en formas estables que se almacenan en el suelo y pueden ser utilizados como alimento por las plantas. La cantidad de humus afecta tambin a las propiedades fsicas del suelo tan importantes como su estructura, color, textura y capacidad de retencin de la humedad. El desarrollo ideal de los cultivos, por ejemplo, depende en gran medida del contenido en humus del suelo. En las zonas de cultivo, el humus se agota por la sucesin de cosechas, y el equilibrio orgnico se restaura aadiendo humus al suelo en forma de compost o estircol. Vese tambin Mantillo; Acondicionamiento del suelo

3.2D PURIFICACIN DE EFLUENTES: Uso de bacterias amigables para limpiar ros : Investigadores del rea de Qumica Ambiental de la UNGS realizan un proyecto para descontaminar ros con tcnicas de biorremediacin. Utilizan bacterias que pueden absorber sustancias txicas, como metales pesados, de los efluentes industriales de distintas cuencas. Este mtodo, conocido como biorremediacin, implica el uso de agentes biolgicos para tratar suelos y aguas contaminadas. En la actualidad, diferentes industrias generan contaminacin a gran escala con metales pesados que afectan la fertilidad y el uso de los suelos y contaminan los acuferos y aguas superficiales. Dado que existen bacterias que son resistentes a estos metales y que pueden desarrollarse en su presencia, los investigadores de la UNGS pensaron en aprovechar esta propiedad para limpiar los efluentes.

4EFECTOS NEGATIVOS DE LOS MICROORGANISMOS:

4.1.1 LAS BACTERIAS:

Las bacterias juegan un papel fundamental en la naturaleza y en el hombre: la presencia de una flora bacteriana normal es indispensable, aunque grmenes son patgenos. Anlogamente tienen un papel importante en la industria y permiten desarrollar importantes progresos en la investigacin, concretamente en fisiologa celular y en gentica. El examen microscpico de las bacterias no permite identificarlas, ya que existen pocos tipos morfolgicos, cocos (esfricos), bacilos (bastn), espirilos (espiras) y es necesario por lo tanto recurrir a tcnicas que se detallarn ms adelante. El estudio mediante la microscopia ptica y electrnica de las bacterias revela la estructura de stas.

Estructura y fisiologa de las bacterias: La cpsula no es constante. Los cilios, o flagelos, no existen ms que en ciertas especies. La pared que poseen la mayora de las bacterias explica la constancia de su forma. En efecto, es rgida, dctil y elstica. Su originalidad reside en la naturaleza qumica del compuesto macromolecular que le confiere su rigidez. Este compuesto, un mucopptido, est formado por cadenas de acetilglucosamina y de cido murmico sobre las que se fijan tetrapptidos de composicin variable. La membrana citoplasmtica. Estructuras internas: El ncleo. Los ribosomas El citoplasma Nutricin y crecimiento bacterianos. Las bacterias necesitan de un aporte energtico para desarollarse. La energa en un sustrato orgnico es liberada en la oxidacin del mismo mediante sucesivas deshidrogenaciones. Adems de los elementos indispensables para la sntesis de sus constituyentes y de una fuente de energa, ciertas bacterias precisan de unas sustancias especficas: los factores de crecimiento.

 Se puede medir el crecimiento de las bacterias siguiendo la evolucin a lo largo del tiempo del nmero de bacterias por unidad de volumen. Existen seis fases en las curvas de crecimiento. Las ms importantes son la fase de latencia (que depende del estado fisiolgico de los grmenes estudiados) y la fase exponencial, en la que la tasa de crecimiento es mxima. Gentica bacteriana: Por la rapidez en su multiplicacin, se eligen las bacterias como material para los estudios genticos. En un pequeo volumen forman enormes poblaciones cuyo estudio evidencia la aparicin de individuos que tienen propiedades nuevas. Las mutaciones: Todos los caracteres de las bacterias pueden ser objeto de mutaciones y ser modificados de varias maneras. El estudio de las mutaciones tiene un inters fundamental. En efecto, tiene un inters especial de cara a la aplicacin de dichos estudios a los problemas de resistencia bacteriana a los antibiticos. Estos procesos son realizados mediante la transmisin de caracteres hereditarios

Importancia de las bacterias. Existen bacterias en todos los sitios. Hemos visto el inters de su estudio para la comprensin de la fisiolgica celular, de la sntesis de protenas y de la gentica. Aunque las bacterias patgenas parecen ser las ms preocupantes, su importancia en la naturaleza es ciertamente menor. El papel de las bacterias no patgenas es fundamental. Intervienen en el ciclo del nitrgeno y del carbono, as como en los metabolismos del azufre, del fsforo y del hierro. Las bacterias de los suelos y del las aguas son indispensables para el equilibrio biolgico.Por ltimo, las bacterias pueden ser utilizadas en las industrias alimenticias y qumicas: intervienen en la sntesis de vitaminas y de antibiticos. Las bacterias tienen, por lo tanto, un papel fundamental en los fenmenos de la vida, y todas las reas de la biologa han podido ser mejor comprendidas gracias a su estudio.

4.1.2 LAS BACTERIAS:

BACTERIAS QUE CAUSAN ENFERMEDADES HUMANAS

Slo una pequea parte de los miles de especies de bacterias causan enfermedades humanas conocidas. Las infecciones bacterianas se evitan destruyendo las bacterias con calor, como se hace en las tcnicas de esterilizacin y pasteurizacin. Cuando se producen, las enfermedades bacterianas se tratan con antibiticos. Pero el abuso de estos compuestos en los ltimos aos ha favorecido el desarrollo de cepas de bacterias resistentes a su accin, como Mycobacterium tuberculosis, que causa la tuberculosis.

Virus patgenos para el hombre

4.2LOS VIRUS

Los virus causan muchas enfermedades humanas comunes, como resfriados, gripes, diarreas, varicela, sarampin y paperas. Algunas enfermedades vricas, como la rabia, la fiebre hemorrgica, la encefalitis, la poliomielitis, la fiebre amarilla o el sndrome de inmunodeficiencia adquirida, son mortales. La rubola y el citomegalovirus pueden provocar anomalas graves .
Se estima que hay entre 1.000 y 1.500 tipos de virus, de los que aproximadamente 250 son patgenos para el hombre.

4.3 LOS HONGOS:

Caractersticas de las infecciones producidas por hongos Las micosis varan considerablemente en sus manifestaciones, pero tienden a ser enfermedades subagudas o crnicas de curso indolente y recurrente. Los hongos rara vez causan infecciones agudas como las producidas por muchos virus y bacterias. La mayora de las infecciones fngicas en el hombre no son contagiosas, aparecen tras un contacto con un reservorio ambiental o a partir de la flora de hongos del propio paciente. Atendiendo al lugar y grado de afectacin las micosis pueden ser divididas para su estudio en tres grandes

grupos: micosis profundas, micosis subcutneas y micosis superficiales. En la mayora de la gente sana, las infecciones por hongos son leves, afectan slo a la piel, el cabello, las uas, u otras zonas superficiales, y se resuelven espontneamente. Comprenden la tia y el pie de atleta. Sin embargo, en las personas con un sistema inmunolgico deteriorado, este tipo de infecciones, denominadas dermatofitosis, pueden persistir durante largo tiempo. Los organismos responsables de las dermatofitosis pertenece al gnero Microsporum, Epidermophyton y Trichophyton. Las enfermedades causadas por hongos son muy comunes en pacientes que tienen muy daado su sistema de defensa o inmunologico como es el caso de los enfermos de SIDA, o que han estado ingiriendo frmacos,

antitumorales, o radiacin. Tambin aparecen en pacientes tratados con hormonas esteroideas, como el cortisol, en sujetos con diabetes y en quienes han seguido tratamiento antibitico durante mucho tiempo. A estas micosis se les conoce como "Oportunistas". Los hongos que pertenecen al gnero Candida, en especial Candida albicans (el cual produce candidiasis), pueden infectar los rganos internos y las membranas mucosas de la boca, garganta y tracto genital. En las personas con inmunidad deteriorada, este organismo puede originar una infeccin crnica.

4.4 PROTOZOOS:

Estos organismos microscpicos unicelulares estn muy extendidos por la naturaleza, su hbitat ms frecuente es la tierra y el agua. Algunos de ellos pueden vivir durante muchos aos de forma inactiva protegidos por una cubierta en forma de quistes. Al ser humano pasan a travs del agua, alimentos, picaduras de insectos portadores y mediante relaciones sexuales. Una de las enfermedades producida por protozoos, y muy extendida por todo el mundo, es la malaria, transmitida a los humanos por picadura de un mosquito del gnero anopheles. Otra enfermedad muy frecuente es la disentera amebiana, transmitida por la ingesta de aguas contaminadas. Entre las infecciones que se transmiten por contagio sexual destaca la tricomoniasis muy frecuente en nuestro medio.
Tratamiento farmacolgico Los frmacos que se usan en el tratamiento de estas infecciones son los antiparasitarios como la cloroquina, quinina, pirantel, metronidazol, etc. Algunos frmacos antiparasitarios no estn comercializados en Espaa y se importan para casos especiales como medicamento extranjero, ya que muchas de las enfermedades producidas por protozoos son muy raras en nuestro medio.

5.LABOTARIOS DE MICROBIOLOGA:

5.1INTRODUCIN:

Los laboratorios microbiolgicos constituyen medio ambientes de trabajo especiales, generalmente nicos, que pueden presentar riesgos de enfermedades infecciosas identificables para las personas que se encuentren en o cerca de ellos. Durante todo el transcurso de la historia de la microbiologa, las infecciones se han contrado en el laboratorio.

5.2 CONTENCIN:

El trmino contencin se utiliza para describir mtodos seguros para manejar materiales infecciosos en el medio ambiente del laboratorio donde son manipulados o conservados. El objetivo de la contencin es reducir o eliminar la exposicin de quienes trabajan en laboratorios u otras personas, y del medio ambiente externo a agentes potencialmente peligrosos. La contencin primaria, la proteccin del personal y del medio ambiente inmediato del laboratorio de la exposicin a agentes infecciosos, es provista tanto mediante buenas tcnicas microbiolgicas como a travs del uso de equipos de seguridad adecuados. El uso de vacunas puede brindar un mayor nivel de proteccin del personal. La contencin secundaria, la proteccin del medio ambiente externo al laboratorio de la exposicin a materiales infecciosos, se logra a travs de una combinacin del diseo de la instalacin y prcticas operativas. Por lo tanto, los tres elementos de contencin incluyen prcticas tcnicas de laboratorio, equipos de seguridad y el diseo de la instalacin. La evaluacin del riesgo del trabajo a realizar con un agente especfico determinar la combinacin apropiada de estos elementos.

5.2.1 PRCTICAS Y TCNICAS DE LABORATORIO:

El elemento ms importante de la contencin es el cumplimiento estricto de las prcticas y tcnicas microbiolgicas estndar. Las personas que trabajan con agentes infecciosos o materiales potencialmente infectados deben conocer los riesgos potenciales, y tambin deben estar capacitados y ser expertos en las prcticas y tcnicas requeridas para manipular dichos materiales en forma segura. El director o la persona a cargo del laboratorio es responsable de brindar u organizar la capacitacin adecuada del personal

Cada laboratorio est obligado a desarrollar o adoptar un manual de operaciones o de bioseguridad que identifique los riesgos que se encontrarn o puedan producirse, y que especifique las prcticas y procedimientos destinados a minimizar o eliminar las exposiciones a estos riesgos. Se debe alertar al personal acerca de los riesgos especiales y se le debe exigir que lea y cumpla las prcticas y procedimientos requeridos. El personal, las prcticas de seguridad y las tcnicas de laboratorio tienen que complementarse con un diseo de instalacin y caractersticas de ingeniera, equipos de seguridad y prcticas de manejo adecuadas.

5.2.2 EQUIPOS DE SEGURIDAD:(Barreras Primarias).

Los equipos de seguridad incluyen gabinetes de seguridad biolgica (BSCs), recipientes cerrados, y otros controles de ingeniera destinados a eliminar o minimizar las exposiciones a materiales biolgicos peligrosos. El gabinete de seguridad biolgica (BSC) es el dispositivo principal utilizado para proporcionar contencin de salpicaduras o aerosoles infecciosos generados por diversos procedimientos microbiolgicos. Los equipos de seguridad pueden tambin incluir elementos de proteccin personal, tales como guantes, ambos, delantales, cobertores de zapatos, botas, respiradores, mscaras faciales, anteojos de seguridad o antiparras

.
5.2.3 INSTALACION: (Barreras Secundarias)
El diseo y la construccin de la instalacin contribuyen a la proteccin de quienes trabajan en el laboratorio, proporcionan una barrera para proteger a las personas que se encuentran fuera del laboratorio, y protegen a las personas o animales de la comunidad de agentes infecciosos que pueden ser liberados accidentalmente del laboratorio. La barrera o barreras recomendadas dependern del riesgo de transmisin de los agentes especficos. Las barreras secundarias en estos laboratorios pueden incluir la separacin del rea de trabajo del laboratorio del acceso al pblico, la disponibilidad de una sistema de descontaminacin (por ejemplo, autoclave) e instalaciones para el lavado de las manos. Cuando el riesgo de infeccin por exposicin a un aerosol infeccioso est presente, quizs sea necesario implementar un mayor nivel de contencin y barreras secundarias mltiples para evitar que los agentes infecciosos se escapen hacia el medio ambiente.

5.3BIOSEGURIDAD:

A Continuacin se describen cuatro niveles de bioseguridad (BSLs), que constan de combinaciones de prcticas y tcnicas de laboratorio, equipos de seguridad e instalaciones de laboratorio. Cada combinacin es especficamente apropiada para las operaciones llevadas a cabo, las vas de transmisin documentadas o sospechadas de los agentes infecciosos, y la funcin o la actividad del laboratorio.

5.3.1Niveles:

El Nivel de Bioseguridad 1: representa un nivel bsico de contencin que se basa en prcticas microbiolgicas estndar sin ninguna barrera primaria o secundaria especialmente recomendada, salvo una pileta para lavado de manos. El Nivel de Bioseguridad 1 es adecuado para trabajos que involucran agentes bien caracterizados que no producen enfermedad en humanos adultos sanos, y que imponen un riesgo potencial mnimo para el personal del laboratorio y el medio ambiente. El laboratorio no est necesariamente separado de los patrones de trnsito generales en el edificio. El trabajo se realiza generalmente sobre mesas de trabajo utilizando prcticas microbiolgicas estndar. No es necesario el uso de equipos de contencin especiales y en general no se los utiliza.

Las siguientes prcticas estndar y especiales, equipos de seguridad e instalaciones se aplican a los agentes asignados al Nivel de Bioseguridad 1: A. Prcticas Microbiolgicas Estndar 1. El acceso al laboratorio es limitado o restringido a criterio del director cuando se estn llevando a cabo experimentos o trabajos con cultivos y especimenes. 2. Las personas se lavan las manos luego de manipular materiales viables, luego de quitarse los guantes y antes de retirarse del laboratorio. 3. No est permitido comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto, maquillarse o almacenar alimentos para uso humano en reas de trabajo. Las personas que usan lentes de contacto en laboratorios deben tambin utilizar antiparras o un protector facial. Los alimentos se almacenan fuera del rea de trabajo en gabinetes o refrigeradores designados y utilizados

con este nico fin. 4. Est prohibido pipetear con la boca; se utilizan dispositivos pipeteadores mecnicos. 5. Se instituyen polticas para el manejo seguro de objetos cortantes o punzantes. 6. Todos los procedimientos se llevan a cabo con precaucin a fin de minimizar la creacin de salpicaduras o aerosoles. 7. Las superficies de trabajo se descontaminan como mnimo una vez por da y luego de todo derrame de material viable. 8. Todos los cultivos, stocks y otros desechos reglamentados se descontaminan antes de ser desechados mediante un mtodo de descontaminacin aprobado, como por ejemplo, mediante autoclave. 9. Se debe colocar una seal de advertencia de riesgo biolgico en la entrada del laboratorio cuando se encuentren presentes agentes infecciosos

B. Prcticas Especiales: Ninguna. C. Equipos de Seguridad (Barreras Primarias) 1. En general, no se requieren dispositivos o equipos de contencin o equipamientos especiales, como gabinetes de seguridad biolgica para las manipulaciones de agentes asignados al Nivel de Bioseguridad 1. 2. Se recomienda el uso de ambos, delantales o uniformes de laboratorio a fin de evitar que la ropa de calle se pueda contaminar o ensuciar. 3. Se deben usar guantes si existen lastimaduras en las manos o si la piel presenta alguna erupcin. Deben existir alternativas disponibles al uso de guantes de ltex empolvados. 4. Se debe utilizar proteccin ocular para los procedimientos en los que se puedan producir salpicaduras de microorganismos u otros materiales peligrosos.

D. Instalaciones del Laboratorio (Barreras Secundarias) 1. Los laboratorios deben tener puertas para el control de acceso. 2. Cada laboratorio contiene una pileta para el lavado de manos. 3. El laboratorio ha sido diseado para que su limpieza sea sencilla. 4. Las superficies de las mesas de trabajo son impermeables al agua y son resistentes al calor moderado y a solventes orgnicos, cidos, lcalis y productos qumicos utilizados para descontaminar la superficie de trabajo y los equipos. 5. Los muebles de laboratorio deben tener la capacidad de soportar cargas y usos previstos. 6. Si el laboratorio tiene ventanas que se abren hacia el exterior, estn provistas de mosquiteros.

Nivel de Bioseguridad 2.:Las prcticas, los equipos, el diseo y la construccin de instalaciones del Nivel de Bioseguridad 2 son aplicables a laboratorios educativos, de diagnstico, clnicos u otros laboratorios donde se trabaja con un amplio espectro de agentes de riesgo moderado que se encuentran presentes en la comunidad y que estn asociados con enfermedad humana de variada gravedad. Con buenas tcnicas microbiolgicas, estos agentes se pueden utilizar en forma segura en actividades realizadas en una mesa de trabajo, siempre que el potencial de que se produzcan salpicaduras o aerosoles sea bajo. El virus de la Hepatitis B, el HIV, el salmonela, y el Toxoplasma spp. son representativos de los microorganismos asignados a este nivel de contencin. El Nivel de Bioseguridad 2 es adecuado cuando se trabaja con sangre derivada de humanos, fluidos corporales, tejidos o lneas de clulas primarias humanas donde puede desconocerse la presencia de un agente infeccioso. Los riesgos primarios del personal que trabaja con estos agentes estn relacionados con exposiciones accidentales de membranas mucosas o percutneas, o ingestin de materiales infecciosos.

Debe tenerse especial precaucin con agujas o instrumentos cortantes contaminados. Las tareas deben llevarse a cabo en equipos de contencin primaria o en dispositivos tales como un BSC o cubetas centrfugas de seguridad. Se deben utilizar las dems barreras primarias que correspondan, tales como mscaras contra salpicaduras, proteccin facial, delantales y guantes. Se debe contar con barreras secundarias, tales como piletas para lavado de manos e instalaciones de descontaminacin de desechos a fin de reducir la contaminacin potencial del medio ambiente. Es adecuado para trabajos que involucren agentes de riesgo potencial moderado para el personal y el medio ambiente.

el personal del laboratorio cuenta con una capacitacin especfica en la manipulacin de agentes patognicos y est dirigido por cientficos competentes; el acceso al laboratorio es limitado cuando se estn desarrollando actividades; se toman precauciones extremas con elementos cortantes contaminados y ciertos procedimientos que pueden generar aerosoles o gotitas infecciosas se llevan a cabo en gabinetes de seguridad biolgica o en otros equipos de contencin fsica. Las siguientes prcticas especiales y estndar, los equipos de seguridad y las instalaciones se aplican a los agentes asignados al Nivel de Bioseguridad 2: A. Prcticas Microbiolgicas Estndar 1. El director del laboratorio limita o restringe el acceso al laboratorio cuando se estn realizando experimentos.

2. Las personas se lavan las manos luego de manipular materiales viables, luego de quitarse los guantes y antes de retirarse del laboratorio. 3. No est permitido comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto y maquillarse en las reas de trabajo. 4.Est prohibido pipetear con la boca. 5. Se instituyen polticas para la manipulacin segura de elementos cortantes o punzantes. 6. Todos los procedimientos se realizan con cuidado a fin de minimizar la generacin de salpicaduras o aerosoles. B. Prcticas Especiales: 1. El director del laboratorio limita o restringe el acceso al laboratorio cuando se estn realizando trabajos con agentes infecciosos.

2. El director del laboratorio establece polticas y procedimientos mediante los cuales las personas que han sido advertidas acerca de los riesgos potenciales y cumplen con requisitos especficos de ingreso (por ejemplo, inmunizacin) puedan entrar al laboratorio. 3. Se debe colocar una seal de advertencia de riesgo biolgico en la entrada del laboratorio cuando se estn utilizando agentes etiolgicos. 4. El personal del laboratorio debe someterse a las inmunizaciones o a los anlisis de los agentes manejados o potencialmente presentes (por ejemplo, vacuna contra la Hepatitis B, evaluacin cutnea de Tuberculosis). 5. Cuando corresponda, considerando los agentes manipulados, se recogen y almacenan las muestras de suero de base para el personal del laboratorio y otros equipos de trabajo en riesgo. 6. Se incorporan los procedimientos de seguridad de los procedimientos operativos estndar o del manual de bioseguridad adoptado o preparado especficamente para el laboratorio por el director del laboratorio. Se le advierte al personal sobre los riesgos especiales.

7. El director del laboratorio debe garantizar que el personal de laboratorio y de asistencia o soporte reciba la capacitacin adecuada sobre los posibles riesgos asociados con el trabajo en cuestin, las precauciones necesarias para evitar exposiciones y los procedimientos de evaluacin de exposicin. 8. Se debe siempre tener un alto grado de precaucin con los artculos punzantes o cortantes contaminados, incluyendo las agujas y jeringas.El uso de agujas y jeringas y otros instrumentos punzantes o cortantes debe quedar restringido en el laboratorio para cuando no haya otra alternativa. El material de vidrio debe ser sustituido por material plstico. Se deben utilizar jeringas que re-enfundan las agujas, sistemas sin agujas, y otros dispositivos seguros. No se deben manipular directamente con las manos los artculos de vidrio rotos. 9. Los cultivos, tejidos, fluidos corporales, o desechos potencialmente infecciosos se colocan en un recipiente con tapa que evita las filtraciones durante la recoleccin, manejo, procesamiento, almacenamiento, transporte o envo.

10. Se descontaminan los equipos y las superficies de trabajo regularmente con un desinfectante efectivo despus de trabajar con el agente infeccioso, y especialmente cuando se producen derrames evidentes, salpicaduras u otra contaminacin por materiales infecciosos. 11. Se deben informar de inmediato al director de la institucin los derrames y accidentes que deriven en exposiciones evidentes a los materiales infecciosos y se guardan registros escritos. 12. No se permite la presencia en el laboratorio de animales que no se estn utilizando en el trabajo que se est realizando. C. Equipo de Seguridad (Barreras Primarias) 1. Se utilizan gabinetes biolgicos mantenidos de manera adecuada. Se realicen procedimientos que puedan generar aerosoles o salpicaduras infecciosas. Entre otros centrifugado, pulverizado, mezclado, agitacin, sonicacin.

Se utilicen altas concentraciones o grandes volmenes de agentes infecciosos. 2. Se utiliza una proteccin facial (anteojos, mscaras, protecciones faciales u otra proteccin) para las probables salpicaduras o aerosoles de materiales infecciosos u otros materiales peligrosos para el rostro cuando se deben manipular los microorganismos fuera del BSC. 3. Se deben usar ambos, delantales, batas cortas o uniformes de laboratorio de proteccin adecuados para el laboratorio durante la permanencia en el mismo. 4. Se deben usar guantes cuando es posible que las manos entren en contacto con materiales infecciosos, superficies o equipos contaminados. D. Instalaciones del Laboratorio (Barreras secundarias) 1. Proveer puertas con llave para las instalaciones que contengan agentes Restringidos.

2. Considerar la ubicacin de nuevos laboratorios lejos de las reas pblicas. 3. Cada laboratorio contiene un lavatorio para el lavado de manos. 4. El laboratorio est diseado para que pueda limpiarse fcilmente. 5. Las superficies de las mesas de trabajo deben ser impermeables al agua y resistentes al calor moderado. 6. Los muebles del laboratorio pueden soportar las cargas y usos anticipados. 7. Instalar gabinetes de seguridad biolgica de tal manera que las fluctuaciones del aire de entrada y escape de la sala no hagan funcionar a los gabinetes de seguridad biolgica fuera de sus parmetros para contencin. 8. Se debe disponer de una estacin para el lavado de ojos. 9. La iluminacin es adecuada para todas las actividades, evitando los reflejos. 10. No existen requisitos de ventilacin especficos.

Nivel de Bioseguridad 3: Las prcticas, equipos de seguridad y el diseo y la construccin de las instalaciones del Nivel de Bioseguridad 3 pueden aplicarse a instalaciones clnicas, de produccin, investigacin, educacin o diagnstico, donde se trabaja con agentes exticos o indgenos con potencial de transmisin respiratoria, y que pueden provocar una infeccin grave y potencialmente letal. La tuberculosis Mycobacterium, el virus de la encefalitis de St. Louis, y el Coxiella burnetii son representativos de los microorganismos asignados a este nivel. Los riesgos primarios del personal que trabaja con estos agentes estn asociados a la auto inoculacin, ingestin y exposicin a aerosoles infecciosos. Las barreras secundarias para este nivel incluyen el acceso controlado al laboratorio y requisitos de ventilacin que minimizan la liberacin de aerosoles infecciosos desde el laboratorio.

El Nivel de Bioseguridad 3 es aplicable a las instalaciones clnicas, de diagnstico, enseanza, investigacin o produccin en las que se llevan a cabo trabajos con agentes indgenas o exticos que pueden producir una enfermedad grave o potencialmente letal como resultado de la exposicin por va de inhalacin. El personal de laboratorio recibe instruccin especfica en el manejo de agentes patognicos y potencialmente letales, y es supervisado por cientficos competentes con experiencia en el trabajo con estos agentes. Todos los procedimientos que involucren la manipulacin de materiales infecciosos se realizan dentro de gabinetes de bioseguridad u otros dispositivos de contencin fsica o por personal que lleva ropa y equipo protector adecuado. El laboratorio tiene caractersticas de diseo e ingeniera especiales.

Se aplican las siguientes prcticas, equipos e instalaciones de seguridad especiales y estndar a los agentes asignados al Nivel de Bioseguridad 3: A. Prcticas Microbiolgicas Estndar 1. Queda limitado o restringido el acceso al laboratorio a discrecin del director del laboratorio cuando se estn llevando a cabo los experimentos. 2. El personal debe lavarse las manos despus de manipular materiales infecciosos, despus de retirarse los guantes y cuando se retira del laboratorio. 3. No se permite comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto y maquillarse en el laboratorio. 4. Se prohbe el pipeteo con la boca. 5. Se instituyen polticas para la manipulacin segura de objetos punzantes. 6. Todos los procedimientos se realizan con cuidado para minimizar la generacin de aerosoles.

7. Las superficies de trabajo se descontaminan por lo menos una vez por da y despus de todo derrame de material viable. 8. Se descontaminan todos los cultivos, materiales y otros desechos regulados antes de su disposicin por algn mtodo de descontaminacin aprobado. 9. Se encuentra en vigencia un programa de control de roedores e insectos. B. Prcticas Especiales 1. Las puertas del laboratorio se mantienen cerradas cuando se estn practicando experimentos. 2. El director del laboratorio controla el acceso al laboratorio y restringe el acceso a las personas que deben estar en laboratorio a los fines del programa o asistencia. No se permite el acceso de menores al laboratorio.

3. El director del laboratorio establece polticas y procedimientos por medio de los cuales slo las personas que han sido advertidas sobre los riesgos biolgicos posibles, que cumplan con los requisitos de ingreso especficos (por ejemplo, inmunizaciones) y que cumplan con los procedimientos de entrada y salida podrn ingresar al laboratorio o salas de animales. 4. Se debe colocar un cartel de bioriesgo, incorporando el smbolo de bioriesgo universal en la puerta de acceso a todos los laboratorios. 5. El personal del laboratorio debe someterse a las inmunizaciones o a los anlisis de los agentes manejados o potencialmente presentes (por ejemplo, vacuna contra la Hepatitis B, evaluacin cutnea de Tuberculosis y a estudios peridicos segn las recomendaciones para el agente que se est manipulando). 6. Se recogen muestras de suero base segn sea apropiado y se almacenan para todo el personal del laboratorio y otras personas en riesgo. 7. El director del laboratorio prepara o adopta un manual de bioseguridad Especfico,se advierte al personal sobre los riesgos especiales.

8. El personal del laboratorio y de asistencia o soporte recibe la capacitacin apropiada sobre los posibles riesgos asociados con el trabajo en cuestin, las precauciones necesarias para evitar exposiciones y los procedimientos de evaluacin de la exposicin. 9. El director del laboratorio es responsable de garantizar que, antes de trabajar con organismos en el Nivel de Bioseguridad 3, todo el personal demuestre pericia en las prcticas y tcnicas microbiolgicas estndar, y en las prcticas y operaciones especficas del laboratorio. 10. Se debe siempre tener un alto grado de precaucin con los artculos punzantes o cortantes contaminados, incluyendo las agujas y jeringas, portaobjetos, pipetas, tubos capilares y escalpelos. 11. Toda manipulacin abierta de materiales infecciosos se practica en gabinetes de seguridad biolgica u otros dispositivos de contencin fsica dentro del mdulo de contencin. No se realizan trabajos en recipientes abiertos sobre la mesa de trabajo.

12. Se deben descontaminar los equipos de laboratorio y las superficies de trabajo de manera rutinaria con un desinfectante efectivo, despus de finalizar el trabajo con materiales infecciosos, y especialmente despus de derrames, salpicaduras u otra forma de contaminacin manifiesta con materiales infecciosos. a. Los derrames de materiales infecciosos son descontaminados, contenidos y limpiados por personal profesional idneo. b. Se deben descontaminar los equipos contaminados antes de retirarlos de las instalaciones para su reparacin o mantenimiento o embalarlos para su transporte, conforme a las normas federales, estatales o locales. 13. Se colocan los cultivos, tejidos, especimenes de fluidos corporales o desechos en un recipiente a prueba de filtraciones durante la recoleccin, manejo, procesamiento, almacenamiento, transporte o envo. 14. Se descontaminan todos los materiales de desecho potencialmente contaminados (por ejemplo, guantes, ambos de laboratorio, entre otros) de los laboratorios antes de desecharlos o reutilizarlos.

Nivel de Bioseguridad 4:Las prcticas, equipos de seguridad, y el diseo y la construccin de instalaciones del Nivel de Bioseguridad 4 son aplicables al trabajo con agentes peligrosos o txicos que representan un alto riesgo individual de enfermedades que ponen en peligro la vida, que pueden transmitirse a travs de aerosoles y para las cuales no existen vacunas o terapias disponibles. Los virus como Marburg o la fiebre hemorrgica Congo-Crimeana se manipulan al Nivel de Bioseguridad 4. Los riesgos principales para el personal que trabaja con agentes del Nivel de Bioseguridad 4 son la exposicin respiratoria a aerosoles infecciosos, la exposicin de membranas mucosas o piel lastimada a gotitas infecciosas y la auto inoculacin.

El aislamiento completo del personal de laboratorio de los materiales infecciosos en aerosol se logra principalmente trabajando en un BSC Clase III o en un traje de cuerpo entero, con provisin de aire y presin positiva. Por lo general, la instalacin del Nivel de Bioseguridad 4 es un edificio separado o una zona totalmente aislada con sistemas de gestin de desechos y requisitos de ventilacin especializados y complejos para prevenir la liberacin de agentes viables al medio ambiente. El director del laboratorio es la persona especfica y principalmente responsable de la operacin segura del laboratorio.

A los agentes del Nivel de Bioseguridad 4 se manipulan en este nivel hasta que se obtienen datos suficientes, ya sea para confirmar la continuacin del trabajo en este nivel o para trabajar con ellos en un nivel ms bajo. El laboratorio de Nivel de Bioseguridad 4 tiene caractersticas especiales de ingeniera y diseo para evitar la diseminacin de los microorganismos en el medio ambiente. A. Prcticas Microbiolgicas Estndar: Igual que en los anteriores niveles.

B. Prcticas Especiales

1. Slo se autoriza el ingreso a las personas cuya presencia en el establecimiento o salas individuales de laboratorio se requiere a los fines del programa o por razones de mantenimiento. Las personas inmunocomprometidas o inmunodeprimidas pueden correr riesgo de contraer infecciones. El supervisor tiene la responsabilidad final de evaluar cada circunstancia en particular y de determinar quin puede ingresar o trabajar en el laboratorio. 2Cuando hay materiales infecciosos o animales infectados en el laboratorio colocan en todas las puertas de acceso carteles de advertencia de riesgo.

3. El director del laboratorio es responsable de asegurar que, antes de trabajar con organismos en el Nivel de Bioseguridad 4, todo el personal demuestre una gran habilidad para implementar las prcticas y tcnicas microbiolgicas estndar y las prcticas y operaciones especiales especficas del laboratorio. 4. El personal del laboratorio recibe inmunizaciones disponibles para los agentes manipulados o que posiblemente puedan estar potencialmente presentes en el laboratorio. 5. Se toman y almacenan muestras de suero de base para todo el personal del laboratorio y dems personal de riesgo . 6. Se prepara o se adopta un manual de bioseguridad. Se notifica al personal acerca de los riesgos especiales y se le ordena que lea y cumpla lasinstrucciones sobre prcticas y procedimientos.

7. El personal de laboratorio y de mantenimiento recibe capacitacin. 8. El personal ingresa y sale del laboratorio slo despus de realizarse el cambio de ropa o de pasar por las duchas. 9. El personal se quita la ropa en la sala externa de cambio de ropa y la deja all. A todo el personal que ingresa al laboratorio se le suministra ropa completa de laboratorio, incluyendo ropa interior, pantalones y camisas o mamelucos, zapatos y guantes, y el personal debe usar esa ropa. 10. Los insumos y materiales necesarios son introducidos por medio de la autoclave de doble puerta, cmara de fumigacin o esclusa de aire, la cual es adecuadamente descontaminada entre un uso y otro. 11. Siempre se debe tener mucha precaucin con los instrumentos filosos contaminados, incluyendo las agujas y las jeringas, portaobjetos, pipetas, tubos capilares y escalpelos.

12. Los materiales biolgicos que deben retirarse del gabinete Clase III o del laboratorio de Nivel de Bioseguridad 4 en estado viable o intacto son transferidos a un recipiente primario sellado e irrompible y luego encerrados en un recipiente secundario sellado e irrompible. 13. No se retira ningn material del laboratorio de Nivel de Bioseguridad 4, salvo los materiales biolgicos que deben permanecer en estado viable o intacto, a menos que hayan sido pasados por la autoclave o descontaminados antes de sacarlos del laboratorio. 14. Los equipos de laboratorio son descontaminados rutinariamente despus de finalizado el trabajo con materiales infecciosos, y especialmente despus de derrames o salpicaduras directas o de otra contaminacin con materiales infecciosos.

15. Miembros profesionales adecuados del personal u otras personas debidamente capacitadas y equipadas para trabajar con material infeccioso concentrado contienen y limpian los derrames de materiales infecciosos. 16. Se establece un sistema para informar accidentes y exposiciones de laboratorio y ausentismo del personal, as como tambin para el control mdico de enfermedades potenciales asociadas al laboratorio. Se preparan y llevan registros escritos. 17. No se permite que haya en el establecimiento materiales no relacionados con el experimento que se est realizando (por ejemplo, plantas, animales y ropa).

C. Equipos de Seguridad (Barreras Primarias) Todos los procedimientos realizados dentro del establecimiento se llevan a cabo en el gabinete de seguridad biolgica Clase III o en gabinetes de seguridad biolgica Clase II utilizados conjuntamente con trajes presurizados de presin positiva de una pieza. D. Laboratorio (Barreras Secundarias) Es un edificio separado o una zona toltmante aislada con sistemas de gestion de desechos y requisitos de ventilacin especificado y complejos para prevenir la liveracion de agentes viables al medio ambiente.

6seleccion,mantenimiento y mejora de microorganismos de interes industrial. SELECCION, MANTENIMIENTO Y MEJORAMIENTO DE MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL Seleccin Debido a que el xito o fracaso de un proceso fermentativo comienza con el microorganismo utilizado, en la eleccin del mismo se deberan tener en cuenta ciertos criterios generales que se indican a continuacin: 1. La cepa a utilizar debe ser genticamente estable. 2 Su velocidad de crecimiento debera ser alta. 3. La cepa debe estar libre de contaminantes, includos fagos. 4. Sus requerimientos nutricionales deberan ser satisfechos a partir de medios de cultivo de costo reducido. 5. Debe-ser de fcil conservacin por largos perodos de tiempo, sin prdida de sus caractersticas particulares. 6. Debera llevar a cabo el proceso fermentativo completo en un tiempo corto. 7. Si el objetivo del proceso es un producto, ste debera ser de alto rendimiento y de fcil extraccin del medio de cultivo.

Los microorganismos que se utilizan en un proceso, pueden ser obtenidos por aislamiento a partir de fuentes naturales o de una coleccin de cultivos. A nivel industrial, en general, cada firma posee su propia coleccin de organismos, muchos de los cuales han sido mejorados a travs de tcnicas clsicas de mutacin o de ingeniera gentica. Si el organismo a utilizar es aislado de fuentes naturales como agua, suelo, plantas y desechos, la eleccin del material de partida puede hacerse teniendo en cuenta que el organismo exprese en ese ambiente las propiedades que son de inters. Elegida la fuente de aislamiento, las posibilidades de xito dependen de la tcnica elegida para el mismo; en este caso las alternativas son: a) aislamiento directo, o b) enriquecimiento del cultivo con o sin pretratamiento de la muestra.

6.1Aislamiento

Una vez efectuado el muestreo y seleccin (screening) para el aislamiento de una cepa de inters, la misma deber ser caracterizada. En este procedimiento se debe tener en cuenta que la composicin qumica del material a partir del cual se va a realizar el aislamiento comienza a variar a partir del momento en que es tomada la muestra, por lo tanto sta se debe procesar rpidamente, tratando de evitar alteraciones que afecten a la poblacin de inters. a) Aislamiento directo: en este caso es deseable que el medio que se utiliza para el aislamiento permita la mxima expresin del material gentico del organismo. b) Enriquecimiento del cultivo: esta tcnica consiste en incrementar en una poblacin mixta el nmero de organismos de inters en relacin al resto. De esta forma se busca favorecer el crecimiento de un tipo dado de microorganismos me diante condiciones de cultivo adecuadas al mismo, o de condiciones inapropiadas para el desarrollo de los otros.

Esto lleva a que el organismo de inters sea el dominante de la poblacin, lo cual facilita su posterior aislamiento en medio slido. Se debe considerar en este caso el efecto del medio sobre la velocidad especfica de crecimiento (u). 6.2 Mantenimiento o conservacin de los cultivos Los objetivos de la conservacin de los cultivos se podran resumir en los siguientes aspectos: a) preservar la pureza gentica del cultivo sin prdida de ninguna de sus propiedades bioqumicas; b) preservar los niveles de su productivi dad inicial; c) lograr que el cultivo pueda ser transportado y manejado con facilidad. Esto ltimo puede ser un factor esencial en la seleccin de un mtodo de preservacin.

En todo trabajo de Microbiologa se deben conocer las caractersticas de la poblacin con la cual se va a trabajar (propiedades morfolgicas y bioqumicas). Tanto para el mantenimiento, preparacin y propagacin de inculos se deben usar mtodos reproducibles que no produzcan variaciones o prdidas de las caractersticas de la cepa empleada. Los mtodos de preservacin o mantenimiento ms importantes son los siguientes: 6.2.1Subcultivos Es un mtodo comn de conservacin, que consiste en el repique peridico del cultivo en un medio nutritivo fresco. El intervalo de transferencia vara con el microorganismo, debiendo considerarse el medio adecuado para cada especie. Una vez desarrollados los cultivos se mantienen a 4 C durante lapsos que oscilan entre 15 das y 2 meses.

Los inconvenientes que presenta son varios: a) incremento de la posibilidad de mutacin con cada transferencia, con prdida de las caractersticas del organismo; b) riesgo de contaminacin; c) alteraciones en el medio de cultivo, durante la estada en fro, en la cual se produce una desecacin gradual del mismo. 6.2.2Mantenimiento bajo capa de aceite Es una tcnica simple y efectiva para prolongar la conservacin de muchos organismos y consiste en cubrir completamente el cultivo despus de su desarrrollo en medio slido, con una capa de aceite mineral o vaselina estril. Los cultivos en esta forma se pueden conservar a temperatura ambiente o an mejor en heladera por perodos de varios aos.

6.2.3Congelacin:

la congelacin es una tcnica de eleccin, ya sea para cortos o largos perodos de tiempo. La tcnica involucra el crecimiento del cultivo hasta la fase estacionaria, ya que en general en esta etapa las clulas son ms resistentes a los daos por congelacin y descongelacin, que las de fase exponencial. La suspensin celular es colocada en ampollas (vidrio o plstico) y sellada antes de colocarla bajo nitrgeno lquido. Uno de los problemas de esta tcnica se refiere a la velocidad de congelacin. Como criterio general se puede decir que, lo ms ampliamente usado es el enfriamiento a 1 C min-1 (ya que una rpida congelacin causa ruptura de membranas) hasta -20 C y luego un rpido descenso. En cuanto a la temperatura de conservacin, la ms baja recomendada es -70 C, ya que a temperaturas ms altas ocurren algunas recristalizaciones, las cuales si son intracelulares son letales para las clulas.

6.2.4Cultivos en tierra

La tierra estril puede ser inoculada con un cultivo e incubada varios das para inducir esporulacin de bacilos aerobios y anaerobios. Una vez que la misma se manifiesta, la tierra es secada (desecador) y el cultivo mantenido de esta forma en una atmsfera seca o en refrigerador. El mtodo ha sido utilizado ampliamente con hongos y actinomycetes, los cuales han sido mantenidos en estas condiciones varios aos. Tambin se puede utilizar tierra para la conservacin directa de suspensiones de esporos.

6.2.5Preservacin en celulosa

El empleo de un soporte de papel para el mantenimiento de clulas en condiciones de ausencia de agua es un procedimiento adecuado y sencillo, para conservar cepas. La tcnica consiste en embeber tiras de papel de filtro con una suspensin densa de organismos en suero, glutamato de sodio u otro agente, las mismas son posteriormente colocadas en tubos para su posterior secado bajo vaco. De esta forma se han logrado conservar cepas de Streptomyres y Salmonella por perodos de hasta 2 aos a temperatura ambiente.

6.2.6Liofilizacin

La liofilizacin est considerada como el mtodo ms adecuado para la preservacin de microorganismos. La tcnica involucra el congelamiento de un cultivo seguido por un secado bajo vaco, lo cual resulta en la sublimacin de agua de la suspensin celular. La ventaja es que la mayora de los organismos sobreviven al secado y el cultivo es fcilmente mantenido an a temperatura ambiente sin prdida significativa de viabilidad. La liofilizacin es apropiada para la conservacin de la mayora de las bacterias, encontrndose que las Gram-positivas sobreviven mejor que las Gram-negativas cuando se las liofiliza y mantiene en condiciones similares. Tambin se emplea en la conservacin de esporos, actinomycetes y muchos hongos incluidas levaduras. Sin embargo, no es adecuada para clulas animales, algas y hongos en fase de micelio.

La tcnica consiste en partir de un cultivo de fase estacionaria (donde las clulas son usualmente ms resistentes) resuspendiendo las clulas con un medio crioprotector, en el cual se obtenga una alta densidad celular. El medio empleado en la liofilizacin es un factor importante en el proceso. Entre los agentes recomendados estn la leche descremada en concentraciones del 10 al 20%; suero equino, mezclas de suero, glucosa y extrato de levadura; suero fetal bovino, etc. Normalmente la liofilizacin produce daos en las clulas, siendo los mismos en algunas casos reversibles, por lo cual stas necesitan un tiempo de recuperacin que es variable en funcin del tipo de dao producido.

6.2.7Conclusion:

En general no es posible determinar para cada grupo de organismos el mtodo de conservacin ideal, por lo que se trata de emplear el ms adecuado. De todos, la liofilizacin es el ms utilizado, aunque algunos organismos muestran al tas tasas de mortandad. En este caso la alternativa es la congelacin, a pesar de que las cepas mantenidas de esta forma son difciles de transportar.

6.3Mejoramiento de microorganismos industriales

En general los organismos aislados de la naturaleza productores de metabolitos de inters industrial producen a los mismos en niveles muy bajos, por lo tanto se hace necesario incrementar estos rendimientos para lograr una mayor rentabilidad de los procesos. Una forma de mejorar el rendimiento es mediante la optimizacin del medio de cultivo y de las condiciones de operacin, pero esto est limitado por la capacidad de sntesis mxima del producto deseado que tiene el organismo. La otra posibilidad es el mejoramiento gentico de la cepa. La obtencin de cepas modificadas genticamente se puede realizar por 1) Seleccin natural de variantes, 2) Mutacin inducida, y 3) Recombinacin gentica.

6.3.1Seleccin natural

Se debe tener en cuenta que en cada divisin celular hay una pequea probabilidad de que ocurra un cambio gentico, por lo cual no es sorprendente que en una gran masa celular la poblacin sea heterognea. Estos cambios definitivos (mutaciones) se deben distinguir de las variaciones fenotpicas que dependen de las condiciones ambientales y que tienen lugar en todas las clulas de la poblacin que expresan la misma modificacin fisiolgica, dentro de las variaciones permitidas por su genotipo. En las mutaciones espontneas el elemento responsable de la mutacin no es conocido, pero igual que las inducidas, La frecuencia de mutaciones espontneas vara entre 10 -6 a 10 -9 mutaciones por genoma y por generacin. En la seleccin de variantes naturales, una prctica que todava es utilizada se refiere a la observacin de las caractersticas morfolgicas de las colonias, las cuales, en manos de un operador avezado, se asocian con mayor o menor productividad, lo que permite seleccionar y posteriormente estudiar los clones aislados.

6.3.2 Mutacin inducida.

El procedimiento de mutacin mediante el empleo de un agente determinado implica dos etapas, el tratamiento de la poblacin con el mutgeno elegido y luego el aislamiento de los mutantes para su posterior ensayo y seleccin. La eleccin de un agente mutagnico depende en general de consideraciones prcticas. La tcnica a emplear puede producir una alta tasa de mutacin o puede favorecer la separacin de un nmero reducido de tipos deseables de un gran nmero de productores mediocres. Hasta donde sea posible el aislamiento del mutante debera utilizar la caracterstica mejorada del mismo como factor de seleccin. Los agentes mutagnicos pueden ser agrupados en: Fsicos, como la luz ultravioleta, que es un mutgeno muy conveniente. Qumicos: Estos agentes se emplean en concentraciones del orden de 0.05M con exposiciones de 0.5 a 12 horas.

A) mutantes con niveles mejorados de metabolitos primarios

Metabolitos primarios son aquellos esenciales para la vida de un microorganismo como por ejemplo, aminocidos, nucletidos, vitaminas, cidos orgnicos. Antes de considerar la seleccin de este tipo de mutantes, es necesario conocer los mecanismos de control involucrados en la biosntesis de estos metabolitos. Las concentraciones de los mismos estn reguladas por sistemas de control por retroalimentacin ("feed back). Los dos principales sistemas involucrados son inhibicin y represin "feed back". En la inhibicin, el producto final de una va metablica inhibe la actividad de una enzima (normalmente la primera) de su va de formacin, cundo se ha sobrepasado un valor mximo de concentracin intracelular de dicho producto. La represin es aquella donde el producto final de una va metablica previene la sntesis de una enzima o de todas las que catalizan la va mencionada.

Esto ocurre a nivel de cido desoxirribonucleico (ADN), impidiendo la transcripcin del gen a cido ribonucleico mensajero (ARNm). Este mecanismo es de accin ms lenta que el anterior, ya que permite actuar a las enzimas preformadas. Como se ve, la concentracin de un metabolito microbiano es controlada por una variedad de mecanismos. El conocimiento de la va metablica y su control facilita la construccin del mutante deseado. Estos pueden tener distintas modificaciones: a) el mutante no reconoce la presencia del inhibidor o represor; b) no se produce producto final, que es el que controla la enzima clave de la va metablica; c) el producto final es eliminado de la clula debido a una modificacin en la permeabilidad de la membrana celular. Los mutantes que no producen inhibidores o represores por producto final pueden ser empleados para la produccin de intermediarios en caminos no ramificados, o de intermediarios y productos finales en caminos ramificados.

B) Mutantes productores de enzimas de inters industrial

Solamente se tendrn en cuenta las enzimas degradativas, cuya produccin puede ser controlada por induccin, represin "feed back" y/o represin catablica. Las tcnicas de mutacin en este caso pretenden alterar los mecanismos de control para obtener mutantes que puedan producir enzimas en ausencia de inductor y an en presencia de represores. Las mutaciones pueden tener lugar en un gen regulador, eliminando la produccin de un represor activo, o si se producen en el operador, se podra evitar la unin del represor. Los mutantes que producen enzimas inducibles en ausencia de inductor se denominan mutantes constitutivos. C)Mutantes con mejores rendimientos de metabolitos secundarios Metabolitos secundarios son sustancias no imprescindibles para las funciones vitales como por ejemplo alcaloides, toxinas, antibiticos, giberelinas, etc. La relacin entre metabolito primario y secundario presenta todava numerosos interrogantes con relacin a los mecanismos que controlan la sntesis de estos ltimos.

Otro factor del proceso de control es la regulacin "feed back" lo que significa que la acumulacin de metabolitos secundarios (penicilina, cloranfenicol, cicloheximida, cte.) es lo que limita su propia sntesis. Algunos tipos de regulacin "feed back" involucran a fosfato inorgnico, el cual regula la actividad de fosfatasas. Debido a que la produccin de estos metabolitos es afectada por mecanismos de control genticamente determinados, las mutaciones pueden tener efectos importantes en el mejoramiento de cepas. 6.3.3. Recombinacin gentica El mejoramiento de una cepa industrial empleando tcnicas de mutagnesisseleccin conduce a la creacin de lineas divergentes. Una estrategia ms lgica en tal programa de mejoramiento sera reagrupar las potencialidades de distin tas variantes con el objeto de seleccionar la mejor combinacin de genes responsables de codificar la produccin de determinado metabolito. Los virus pueden intercambiar material gentico entre cepas heterognicas

despus de una infeccin mixta en el mismo husped. En bacterias el fenmeno de recombinacin se observa en: 1) conjugacin, en donde la transferencia de material gentico se realiza a travs de pilis, teniendo algunas caractersticas de un proceso sexual; 2) transduccin, en el que la transferencia de ADN de una clula a otra se realiza mediante una partcula viral que acta como vector; y 3) transformacin, donde la recombinacin puede ocurrir despus de la insercin experimental de un ADN aislado, a una bacteria receptora. El intercambio de material gentico entre diferentes especies puede tambin ser alcanzado por fusin celular. A)Obtencin de nuevas cepas por ingeniera gentica: La nueva metodologa resultante conocida con el nombre de ingeniera gentica ha revolucionado el campo especfico de la Biotecnologa. A travs del procedimiento de clonado de ADN, genes de cualquier tipo pueden ser tomados de su ambiente natural, analizados, alterados y reinsertados en el mismo tipo de organismo o en otro diferente. Es as que la produccin de solventes, productos qumicos, hormonas, antgenos, enzimas y otras sustancias de inters farmacolgico puede realizarse en grandes cantidades, a travs del clonado de genes especficos en organismos que pueden ser desarrollados en escala industrial. Gran parte del xito de una fermentacin, como incrementar el rendimiento

de un producto, aumentar su velocidad de formacin, eliminar productos indeseables o la inhibicin por un producto final, se puede alcanzar, al menos en principio, mediante el empleo de tcnicas genticas y estrategias que involucran metodologa de ADN recombinante in vitro. Esta metodologa ha contribudo adems al conocimiento de las funciones del ADN, a la organizacin de los genes, a la regulacin de la expresin y a la estructura primaria de protenas. El aspecto principal del clonado es la propagacin de un fragmento determinado de ADN en una lnea celular en crecimiento. Este fragmento, para poder propagarse debe ser unido a una molcula transportadora o vector el cual s es capaz de multiplicarse en el husped. B)Vectores de clonado Para la transferencia y expresin de un ADN "extrao" en una clula husped, se requiere de un vector de expresin, el cual debe ser capaz de entrar y replicarse dentro de ella. Un vector ideal debera ser pequeo, de fcil preparacin y replicacin en la clula husped, no generar productos txicos para la misma, poseer uno o ms marcadores (resistencia a drogas, etc.) para facilitar una rpida y positiva seleccin y contener al menos un sitio donde se pueda integrar el ADN extrao sin destruir una funcin esencial (replicacin).

6.4 Nutricion microbiana:

3 El conocimiento de la nutricin microbiana permite el cultivo de los Microorganismos en el laboratorio. Como acabamos de ver, en general, todos los Microorganismos tienen parecidos requerimientos de macro- y micro nutrientes, Aunque ha quedado claro que la forma en que cada nutriente es captado puede Variar mucho entre unas bacterias y otras, as como la cantidad relativa de cada nutriente. Los microbilogos, en su trabajo cotidiano, estn acostumbrados a manejar multitud de "recetas" o frmulas correspondientes a muchos tipos de medios de cultivo. Un medio de Cultivo es una solucin acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un coloide en estado de gel en la que estn presentes todas las sustancias necesarias para el crecimiento de un(os) determinado(s) microorganismo(s). los medios de cultivo se pueden clasificar, en primera instancia, en tres grandes tipos:

6.4.1Medios complejos o indefinidos:

su composicin qumica exacta se desconoce, ya que son el Producto de realizar infusiones y extractos de materiales naturales complejos: Digeridos crudos de extracto de carneDigeridos de extracto de levaduraDigeridos de peptona de carne o de sojaDigeridos de casena (de la Leche).

Con ellos se logra un tipo de medio rico nutricionalmente, aunque indefinido qumicamente. si lo que pretendemos simplemente es obtener un buen crecimiento bacteriano, este tipo de medios es ideal, ya que su confeccin es fcil y rpida (basta pesar una cierta cantidad del extracto desecado, suministrado por casas comerciales, disolverlo en agua y esterilizar en autoclave, antes de inocular e incubar la bacteria con la que queramos trabajar). estos medios contienen fuentes variadas de c y n orgnicos, sales minerales y micro nutrientes. sin embargo, con ellos no podemos tener un control nutricional preciso, ya que desconocemos la composicin qumica y proporcin exacta de los distintos nutrientes.

6.4.2Medios sintticos o definidos: se obtienen disolviendo en agua destilada cantidades concretas de distintas sustancias qumicas puras, orgnicas y/o inorgnicas. la composicin concreta de un medio sinttico depender de la bacteria que queramos cultivar: lgicamente, un medio definido para una bacteria con grandes capacidades biosintticas ser ms sencillo que el medio definido de otra bacteria con menores posibilidades biosintticas. en la tabla siguiente se dan las composiciones de sendos medios sintticos para dos bacterias diferentes.

6.4.3En tercer lugar, podemos fabricar un tipo de medio "mezcla" de los anteriores, denominado medio semisinttico: llevan algunas sustancias qumicas cuya naturaleza y Cantidad conocemos, junto con sustancias de naturaleza y composicin indefinidas. Cualquiera que sea el tipo de medio, de los tres que acabamos de citar, podemos elaborar dos tipos de "versiones", segn su estado aparente: medios lquidos (por ejemplo, los dosde la tabla)medios slidos:derivan de los lquidos simplemente aadiendo a la solucin nutritiva un coloideen estado de gel, que solidifica (da consistencia) a estaSolucin.

En los primeros tiempos de la Bacteriologa slo se conoca como sustancia gelificante incorporable a los Medios la gelatina. Sin embargo, presenta muchos inconvenientes, ya que funde a 25oc (por encima de esta temperatura el medio se licua), y adems, muchas bacterias presentan gelatinazas que hidrolizan la gelatina. El gelificante ms usado es el agar-agar, extrado de algas rojas (p. ej. gelidium), del cual existen versiones ms o menos purificadas (las ms puras estn ms enriquecidas en el polisacrido agarosa; son las que se emplean para los medios definidos, con objeto de evitar la introduccin de sustancias "contaminantes" inadvertidas que falseen las interpretaciones sobre el comportamiento nutricional de la bacteria).

El agar presenta la gran ventaja de que una vez gelificado, no funde hasta cerca de los 100oC, lo que permite su uso para la inmensa mayora de bacterias, que son mes filas. Un comportamiento notable del agar es que una vez fundido (a 100C), no gelifica (solidifica) hasta los 45C. En este margen de temperatura hasta el lmite de solidificacin de 45C se dice que el agar est en sobrefusin. Para cultivar ciertas bacterias (sobre todo los quimioautotrofos) se suele recurrir a un gelificante inorgnico, el silicagel o gel de Slice. Finalmente, introduciremos otra serie de conceptos relativos a medios de cultivo.

6.4.3 Medios selectivos:

Son aquellos que permiten seleccionar un tipo (o unos pocos tipos) de Microorganismos. En el laboratorio se emplean mucho medios selectivos slidos Que incorporan ciertas sustancias que inhiben el crecimiento de ciertas Bacterias, pero permiten el crecimiento de otras. (P. ej. medios que llevan violeta cristal inhiben el crecimiento de bacterias Gran-positivas. Medios diferenciales son aquellos que permiten distinguir a simple vista dos o ms tipos de bacterias en funcin de su distinto comportamiento respecto de algn nutriente del medio. Ese comportamiento Diferencial se traduce normalmente en un viraje de color de una sustancia Indicadora presente en el medio.

Ejemplos: en el medio EMB (eosina-azul de metileno)ciertos tipos metablicos de bacterias producen cambios de color y precipitacinde sales cuando producen cidos por fermentacin de ciertas fuentes deCarbono.El medio llamado agar-sangre lleva un 5%de sangre de caballo o carnero, lo cual revela la capacidad (y el tipo) deHemlisis de ciertas bacterias.Algunos medios son simultneamente selectivos y Diferenciales. P. ej., el agar de MacConkey, que elAlumno manejar en la segunda tanda de prcticas. Se trata de un medio de colorrosado y transparente, que posee, entre otras sustancias, lactosa, peptonas, elcolorante vital rojo neutro, sales biliares y violetacristal.

Sitios donde saque la informacion

Wikipedia Encarta Otras inclopedias como larrus www.solociencia.com www.microbiologia.com www.semicro.com www.elsevier.com www.elergonomista.com Y numerosas pginas mas.