19 OFICINA ESPAÑOLA DE

PATENTES Y MARCAS

ESPAÑA
11 Número de publicación: 2 788 601
51Int. CI.:
C12N 9/54 (2006.01)

C11D 3/386 (2006.01)

12 TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA T3

86 Fecha de presentación y número de la solicitud internacional: 23.04.2014 PCT/EP2014/058176

87 Fecha y número de publicación internacional: 06.11.2014 WO14177430
96 Fecha de presentación y número de la solicitud europea: 23.04.2014 E 14720548 (8)
97 Fecha y número de publicación de la concesión europea: 18.03.2020 EP 2992093

54 Título: Productos de limpieza que contienen proteasas

30 Prioridad: 73 Titular/es:
30.04.2013 DE 102013207933 HENKEL AG & CO. KGAA (100.0%)
Henkelstrasse 67
45 40589 Düsseldorf, DE
Fecha de publicación y mención en BOPI de la
traducción de la patente: 72 Inventor/es:
22.10.2020
EITING, THOMAS;
MUSSMANN, NINA;
BASTIGKEIT, THORSTEN y
WRUBBEL, NOELLE
74 Agente/Representante:
ISERN JARA, Jorge
ES 2 788 601 T3

Aviso:En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín Europeo de Patentes, de
la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea
de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se
considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del
Convenio sobre Concesión de Patentes Europeas).
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DESCRIPCIÓN

Productos de limpieza que contienen proteasas

5 La presente solicitud está dirigida a un producto de limpieza, preferiblemente un producto para lavado de vajilla,
preferiblemente un producto para lavado automático de vajilla, que contiene al menos dos proteasas, y al uso de dicho
producto de limpieza.

El criterio más importante al limpiar textiles, superficies duras, como principalmente al lavar vajillas, principalmente en
10 el caso de lavavajillas automáticos, es el rendimiento de limpieza en una amplia variedad de suciedades, que se
introducen principalmente en forma de residuos de alimentos. Incluso si el rendimiento de limpieza de los detergentes
para lavavajillas utilizados en la actualidad es generalmente alto, no obstante, se presenta el problema de que, incluso
debido a la tendencia general en el lavado automático de vajillas de utilizar cada vez más programas de baja
temperatura, muchos de los detergentes para lavavajillas automáticos habituales tienen un rendimiento de limpieza
15 inadecuado en el caso de la suciedad persistente y quemada. Tal rendimiento de limpieza inadecuado y la limpieza
inadecuada de las vajillas, asociada con este, conducen a la insatisfacción del consumidor y al hecho de que el
consumidor trata previamente las manchas rebeldes, lo que a su vez aumenta el consumo de agua y energía. Por
ejemplo, por las publicaciones EP2216393A1, WO2011072117A1, EP2551335A1 y WO2009021867A2 se conocen
se conocen composiciones de productos de limpieza con enzimas, principalmente, por ejemplo, una o dos proteasas,
20 en cuyo caso el uso de enzimas sirve para eliminar manchas especiales. Sin embargo, existe una necesidad general
de detergentes mejorados para el lavado de vajilla a máquina que todavía tengan un buen rendimiento de limpieza
incluso en suciedad persistente, principalmente quemada, sin reducir el buen rendimiento de limpieza existente en
otras suciedades.

25 Por lo tanto, el objeto de la presente invención era proporcionar un producto de limpieza, preferiblemente un producto
para lavado de vajillas, preferiblemente un producto para lavado de vajillas a máquina, que tiene un mayor rendimiento
de limpieza en el caso de dicha suciedad, sin que se reduzca el rendimiento de limpieza en otra suciedad.

Sorprendentemente, ahora se ha descubierto que el uso de una combinación de diferentes proteasas mejora
30 considerablemente el rendimiento de limpieza de los productos de limpieza correspondientes, preferiblemente un
producto para lavar vajillas, preferiblemente un producto para lavar vajillas a máquina, en el caso de suciedad sensible
a la proteasa, principalmente en suciedad asociada a alimentos quemados, principalmente a alimentos quemados que
contienen azúcar.

35 Por lo tanto, en un primer aspecto, la presente invención se dirige a un producto de limpieza para superficies duras,
principalmente un producto para lavar vajillas, preferiblemente un producto para lavar vajillas en máquina, el cual
comprende una primera y una segunda proteasa, en cuyo caso

a) la primera proteasa comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 80% a la secuencia de
40 aminoácidos indicada en Seq ID NO. 1 en toda su longitud y presenta al menos una sustitución de aminoácidos en
una de las posiciones 9, 15, 66, 212 y 239 en el recuento de acuerdo con Seq ID NO. 1, y

b) la segunda proteasa se selecciona del grupo formado por

45 b1) proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 80% a la secuencia de
aminoácidos indicada en Seq ID NO. 2 en toda su longitud total y en el recuento según Seq ID NO. 2 tiene el
aminoácido ácido glutámico (E) en la posición 99;

b2) proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
50 aminoácidos indicada en Seq ID NO. 2 en toda su longitud y en el recuento según Seq ID NO. 2 tiene la sustitución
de aminoácidos R99E en combinación con al menos otras dos sustituciones de aminoácidos adicionales, que se
seleccionan del grupo que consiste en S3T, V4I y V199I; y

b3) proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
55 aminoácidos indicada en Seq ID NO. 1 en toda su longitud y tiene la sustitución de aminoácidos S99A en combinación
con una inserción entre las posiciones 99 y 100 en el recuento según BPN', y el aminoácido insertado es ácido
aspártico (D);

Al emplear el producto, dicha combinación de varias proteasas provoca un rendimiento de limpieza significativamente
60 mayor sobre la suciedad pertinaz.

Otro objeto de la presente invención es el uso de dicho producto de limpieza, preferiblemente un producto para lavar
vajillas, preferiblemente un producto para lavar vajillas a máquina en un procedimiento de limpieza, preferiblemente
un procedimiento para lavar vajillas, principalmente en un procedimiento para lavar vajillas a máquina, preferiblemente
65 el uso para mejorar el rendimiento de limpieza, principalmente, el rendimiento de limpieza en suciedad sensible a
proteasas, en superficies duras, principalmente vajillas al lavarlas, preferiblemente en una máquina lavavajillas

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automática, principalmente suciedad pertinaz, quemada, etc., incluso a temperaturas inferiores a las temperaturas
usadas habitualmente.

Otro objeto de la presente invención es un procedimiento de limpieza, preferiblemente un procedimiento para lavar
5 vajillas, preferiblemente un procedimiento para lavar vajillas a máquina, en el que se usa dicho producto de limpieza,
preferiblemente un producto para lavar vajillas, preferiblemente un producto para lavar vajillas, principalmente con el
propósito de mejorar el rendimiento de limpieza en suciedad quemada, sensible a la proteasa. En diversas formas de
realización de la invención, en el procedimiento de lavado de vajillas se usan temperaturas que son más bajas que las
temperaturas comúnmente usadas.
10
"Temperaturas bajas" o "temperaturas que son más bajas que las temperaturas comúnmente usadas", como se usa
en el presente documento en relación con los procedimientos de lavado de vajillas, se refieren preferiblemente a
temperaturas inferiores a 60ºC, principalmente inferiores a 55ºC, más preferiblemente 50ºC o inferiores, más
preferiblemente 45°C o inferiores, y del modo más preferible 40°C o inferiores. Estas especificaciones de temperatura
15 se refieren a las temperaturas utilizadas en los pasos de enjuague.

Estos y otros aspectos, características y ventajas de la invención serán evidentes para los expertos en la materia al
estudiar la siguiente descripción detallada y las reivindicaciones. Cada característica de un aspecto de la invención
puede usarse en cualquier otro aspecto de la invención. Además, se sobreentiende que los ejemplos aquí contenidos
20 están destinados a describir e ilustrar la invención, pero no a limitarla, y principalmente la invención no se limita a estos
ejemplos. A menos que se indique lo contrario, todos los porcentajes son % en peso. Los intervalos numéricos que se
especifican en el formato "de x a y" incluyen los valores mencionados. Si se especifican varios intervalos numéricos
preferidos en este formato, se sobreentiende que también están cubiertos todos los intervalos que resultan de la
combinación de los diferentes puntos finales.
25
Las proteasas utilizadas son serina-proteasas alcalinas. Actúan como endopeptidasas no específicas, lo que significa
que hidrolizan cualesquiera enlaces de amida ácida que están dentro de péptidos o proteínas y, por lo tanto, causan
la degradación de la suciedad que contiene proteínas en los objetos que se van a limpiar. Su pH óptimo generalmente
está en el intervalo claramente alcalino.
30
Las secuencias de la proteasa (madura) Subtilisina 309 de Bacillus lentus, que se vende bajo el nombre comercial
Savinase® por Novozymes A/S, Bagsvaerd, Dinamarca, y la proteasa alcalina madura de Bacillus lentus DSM 5483
(tipo silvestre) están especificados en Seq ID NO. 1 o Seq ID NO. 2.

35 "Diversos", como se usa en el presente documento con respecto a las proteasas, se refiere a proteasas que difieren
en su secuencia de aminoácidos. En diferentes formas de realización, diferentes proteasas provienen de diferentes
tipos de organismos o difieren entre sí en, por ejemplo, mutaciones producidas artificialmente.

"Variante", como se usa en el presente documento en relación con proteasas, se refiere a variaciones naturales o
40 generadas artificialmente de una proteasa nativa que tiene una secuencia de aminoácidos modificada en comparación
con la forma de referencia. Tal variante puede tener mutaciones puntuales simples o múltiples; es decir, sustituciones
de un aminoácido, que se produce naturalmente en la posición correspondiente, por otro, inserciones (inserción de
uno o más aminoácidos) y/o supresiones (eliminación de uno o más aminoácidos), principalmente una o más
mutaciones puntuales. Variantes de este tipo tienen preferiblemente al menos 50, preferiblemente 60 o más, más
45 preferiblemente 70, 80, 90, 100% o más de la actividad enzimática de la forma de referencia. En diversas formas de
realización, una variante de este tipo tiene una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 70,
preferiblemente 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99% en toda su longitud a la secuencia que sirve como referencia. Las
variantes tienen preferiblemente la misma longitud que la secuencia de referencia. Las variantes se pueden distinguir
de la forma de referencia por propiedades mejoradas como, por ejemplo, mayor actividad enzimática, mayor
50 estabilidad, especificidad de sustrato modificada, etc. Solo se usan aquellas variantes que tienen actividad de
proteasa.

La identidad de las secuencias de ácidos nucleicos o aminoácidos se determina mediante una comparación de
secuencias. Esta comparación de secuencias se basa en el algoritmo BLAST establecido y comúnmente utilizado en
55 el estado de la técnica (véase, por ejemplo, Altschul, SF, Gish, W., Miller, W., Myers, EW & Lipman, D.J. (1990) "Basic
local alignment search tool" ["Herramienta de búsqueda de alineación local básica"] J. Mol. Biol. 215:403-410, y
Altschul, Stephan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller y David J.
Lipman (1997): "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs" ["Gapped
BLAST y PSIBLAST: una nueva generación de programas de búsqueda de bases de datos de proteínas"]; Nucleic
60 Acids Res., 25, pp.3389-3402) y ocurre en principio asignando entre sí secuencias similares de nucleótidos o
aminoácidos en las secuencias de ácido nucleico o de aminoácidos. Una asignación tabular de las posiciones
relevantes se llama alineación. Otro algoritmo disponible en el estado de la técnica es el algoritmo FASTA.

Tal comparación también permite una declaración sobre la similitud de las secuencias comparadas entre sí.
65 Habitualmente se indica en porcentaje de identidad, es decir, en la fracción de nucleótidos idénticos o residuos de
aminoácidos en las mismas posiciones o en una alineación en las posiciones correspondientes entre sí. El concepto

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más amplio de homología contempla intercambios de aminoácidos conservados en secuencias de aminoácidos, es

decir, aminoácidos con actividad química similar, ya que estos generalmente ejercen actividades químicas similares
dentro de la proteína. Por lo tanto, la similitud de las secuencias comparadas también se puede dar como porcentaje
de homología o porcentaje de similitud. Por lo tanto, las regiones homólogas o idénticas de diferentes secuencias de
5 ácido nucleico o de aminoácidos se definen mediante coincidencias en las secuencias. Tales regiones a menudo
tienen funciones idénticas. Pueden ser pequeñas y comprender solo unos pocos nucleótidos o aminoácidos. Tales
regiones pequeñas a menudo tienen funciones esenciales para la actividad total de la proteína. Por lo tanto, puede
tener sentido relacionar coincidencias de secuencia solo con áreas individuales, opcionalmente pequeñas. Sin
embargo, a menos que se indique lo contrario, la información de identidad u homología en la presente solicitud se
10 refiere a la longitud total de la secuencia de ácido nucleico o de aminoácidos especificada respectivamente.

Como primera proteasa en el sentido de la presente invención se emplea una proteasa que comprende una secuencia
de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de aminoácidos indicada en Seq ID NO. 1 en toda
su longitud y tiene al menos una sustitución de aminoácidos en una de las posiciones 9, 15, 66, 212 y 239 en el
15 recuento según Seq ID NO. 1.

Por lo tanto, como una primera proteasa puede emplearse una variante de subtilisina 309 de Bacillus lentus con la
secuencia de aminoácidos indicada en Seq ID NO. 1, que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de aminoácidos
indicada en Seq ID NO. 1 en toda su longitud y tiene al menos una sustitución de aminoácido en una de las posiciones
20 9, 15, 66, 212 y 239 en el recuento según Seq ID NO. 1. Se usan preferiblemente proteasas que tienen una sustitución
de aminoácidos en dos, preferiblemente tres, principalmente cuatro, de modo muy particularmente preferible cinco de
las posiciones mencionadas anteriormente.

Se usa de modo particularmente preferido una variante con al menos uno, preferiblemente dos, principalmente tres,
25 de modo particularmente preferible cuatro o de modo muy particularmente preferible 5, de las sustituciones de
aminoácidos seleccionadas de S9R, A15T, V66A, N212D y Q239R con respecto al recuento según Seq ID NO. 1.
Dicha variante tiene la secuencia de aminoácidos indicada en Seq ID NO. 3.

Otras variantes que se pueden usar son aquellas que tienen una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al
30 menos 95%, 96%, 97%, 98% o 99% a la secuencia de aminoácidos indicada en Seq ID NO. 3, en cuyo caso las
posiciones 9, 15, 66, 212 y 239 son invariables; es decir, el aminoácido en estas posiciones corresponde al aminoácido
correspondiente en Seq ID NO. 3.

La segunda proteasa es diferente de la primera proteasa, es decir, una proteasa que se ajusta a la definición tanto de
35 la primera proteasa como también de la segunda proteasa no puede contarse como la primera y la segunda proteasa
al mismo tiempo.

La segunda proteasa b) se selecciona del grupo de

40 b1) proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
aminoácidos indicada en Seq ID NO. 2 en toda su longitud y que tiene el aminoácido ácido glutámico (E) en la posición
99 en el recuento según Seq ID NO. 2;

b2) proteasa, que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
45 aminoácidos indicada en Seq ID NO. 2 en toda su longitud y en el recuento según Seq ID NO. 2 tiene la sustitución
de aminoácidos R99E en combinación con al menos dos otras sustituciones de aminoácidos que se seleccionan del
grupo que consiste en S3T, V4I y V199I;

b3) proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
50 aminoácidos indicada en Seq ID NO. 1 en toda su longitud y que en el recuento de BPN' tiene la sustitución de
aminoácidos S99A en combinación con una inserción entre las posiciones 99 y 100, en cuyo caso el aminoácido
insertado es ácido aspártico (D);

Un segundo componente esencial de los productos de limpieza según la invención es la proteasa b), seleccionada
55 entre las proteasas b1), b2) y b3).

La proteasa b1) comprende preferiblemente una secuencia de aminoácidos que es idéntica a la secuencia de
aminoácidos indicada en Seq ID NO. 2 en al menos 95% y cada vez más preferiblemente en al menos 95,5%, 96%,
96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% y 99% en toda su longitud y tiene el aminoácido ácido glutámico (E) en la posición
60 99 en el recuento según Seq ID NO. 2. Una proteasa particularmente preferida a este respecto se indica en Seq ID
NO. 4.

La proteasa b2) comprende preferiblemente una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% y cada
vez más preferiblemente en al menos 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% y 98,8% en toda su longitud a la
65 secuencia de aminoácidos indicada en Seq ID NO. 2 y, en el recuento según Seq ID NO. 2, tiene la sustitución de
aminoácido R99E en combinación con al menos dos sustituciones de aminoácidos adicionales que se seleccionan del

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grupo que consiste en S3T, V4I y V199I. Una proteasa particularmente preferida a este respecto se indica en Seq ID
NO. 5.

La proteasa b3) comprende preferiblemente una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% y cada
5 vez más preferiblemente en al menos 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% y 99% a la secuencia de
aminoácidos indicada en Seq ID NO. 1 en toda su longitud y tiene la sustitución de aminoácidos S99A en combinación
con una inserción entre las posiciones 99 y 100 en el recuento según BPN’, en cuyo caso el aminoácido insertado es
ácido aspártico (D). Una proteasa particularmente preferida a este respecto se indica en Seq ID NO. 6.

10 Otras proteasas preferidas adicionales son proteasas como se describen anteriormente que tienen, además, el
aminoácido leucina (L) en la posición 211 en el recuento según Seq ID NO. 2.

Los productos de limpieza particularmente preferidos según la invención se caracterizan porque la proteasa b1)
comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 99% a la secuencia de aminoácidos indicada
15 en Seq ID NO. 2 en toda su longitud y en la posición 99 en el recuento según Seq ID NO. 2 tiene el aminoácido ácido
glutámico (E). De manera muy particularmente preferible la proteasa b1) tiene una secuencia de aminoácidos que, en
el recuento según Seq ID NO. 2, en las posiciones 1-98 y 100-269, corresponde a Seq ID NO. 2 y tiene el aminoácido
ácido glutámico (E) en la posición 99. Una proteasa de este tipo se indica en Seq ID NO. 4.

20 Otros productos de limpieza preferidos según la invención se caracterizan porque la proteasa b2) comprende una
secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 98% a la secuencia de aminoácidos indicada en Seq ID NO.
2 en toda su longitud y en el recuento según Seq ID NO. 2 tiene las sustituciones de aminoácidos R99E, S3T, V4I y
V199I. De manera muy particularmente preferible, la proteasa b2) tiene una secuencia de aminoácidos según Seq ID
NO. 2 con las sustituciones de aminoácidos R99E, S3T, V4I y V199I en el recuento según Seq ID NO. 2. Una proteasa
25 de este tipo se indica en Seq ID NO. 5.

Los productos de limpieza preferidos según la invención se caracterizan además porque la proteasa b3) comprende
una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 98% a la secuencia de aminoácidos indicada en Seq ID
NO. 1 en toda su longitud y en el recuento según BPN' tiene la sustitución de aminoácidos S99A en combinación con
30 una inserción entre las posiciones 99 y 100, en cuyo caso el aminoácido insertado es Asp (D). De modo muy
particularmente preferido, la proteasa b3) tiene una secuencia de aminoácidos según Seq ID NO. 1 con la sustitución
de aminoácido S99A en combinación con una inserción del aminoácido Asp (D) entre las posiciones 99 y 100,
respectivamente en el recuento según BPN'.

35 Las combinaciones preferidas de proteasas son principalmente la combinación de la proteasa que tiene la secuencia
de aminoácidos indicada en Seq ID NO: 3 con una proteasa que tiene una de las secuencias de aminoácidos indicada
en Seq ID NO: 4, Seq ID NO: 5 o Seq ID NO: 6.

En diversas formas de realización, estas combinaciones de proteasas se usan en una relación de masa con respecto
40 a la proteína activa de 10:1 a 1:10, preferiblemente 5:1 a 1:5. La proteasa con la secuencia de aminoácidos indicada
en Seq ID NO: 3 se usa de manera particularmente preferida con la proteasa con la secuencia de aminoácidos indicada
en Seq ID NO: 4 en una relación de masa de 10:1 a 1:10, preferiblemente 5:1 a 1:5, principalmente de 2:1 a 1:2, de
modo particularmente preferible en partes iguales. Además, la proteasa con la secuencia de aminoácidos indicada en
Seq ID NO: 3 se usa de manera particularmente preferida con la proteasa que tiene la secuencia de aminoácidos
45 indicada en Seq ID NO: 5 en una relación de masa de 10:1 a 1:10, preferiblemente 5:1 a 1:5, principalmente de 2:1 a
1:2, de modo particularmente preferible en partes iguales. Según otra forma de realización particularmente preferida,
la proteasa con la secuencia de aminoácidos indicada en Seq ID NO: 3 se usa con la proteasa que tiene la secuencia
de aminoácidos indicada en Seq ID NO: 6 en una relación de masa de 10:1 a 1:10, preferiblemente 5:1 a 1:5,
principalmente de 2:1 a 1:2, de modo particularmente preferible en partes iguales.
50
Sorprendentemente, las combinaciones de diferentes proteasas, descritas en el presente documento, muestran la
propiedad de mejorar el rendimiento de los productos de limpieza, preferiblemente del producto para lavado de vajillas,
conduciendo a un rendimiento de limpieza mejorado en las manchas quemadas, pertinaces. El aumento en el
rendimiento de limpieza también puede observarse a bajas temperaturas, es decir temperaturas, que son más bajas
55 que las usadas habitualmente en los procedimientos de lavado de vajillas como se definió anteriormente. Esto permite
que el procedimiento de limpieza, preferiblemente el procedimiento de lavado automático de vajilla, se realice a
temperaturas más bajas y, a pesar de esto, mantenga un buen rendimiento de limpieza.

Como regla general, la mejora en el rendimiento de limpieza significa que al usar los productos de limpieza descritos
60 aquí, principalmente los productos para lavar vajillas, se mejora notablemente la eliminación de la suciedad,
principalmente la suciedad quemada, de las superficies duras, principalmente los vajillas, al lavarlas preferiblemente
en un lavavajillas automático, en comparación con el uso de detergentes, preferiblemente detergentes para
lavavajillas, que no contienen las combinaciones de enzimas descritas en este documento.

65 Las enzimas a emplearse también pueden prepararse junto con sustancias acompañantes, por ejemplo, procedentes
de fermentación, o con estabilizadores.

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Los productos de limpieza, principalmente los productos para lavar vajillas, contienen cada proteasa preferiblemente
en una cantidad de 1 x 10-8 a 5% en peso, con respecto a la proteína activa respectiva. Las enzimas están contenidas
en cada caso preferiblemente de 0,001 a 2% en peso, más preferiblemente de 0,005 a 1,5% en peso, aún más
5 preferiblemente de 0,01 a 1% en peso y de modo particularmente preferible de 0,01 a 0,5% en peso en estos
productos.

En formas de realización particularmente preferidas, la primera proteasa se usa en los productos descritos aquí en
una cantidad total de 0,01 a 1% en peso, preferiblemente de 0,025 a 0,5% en peso, con respecto a la proteína activa.
10 De la misma manera, la segunda proteasa se usa preferiblemente en una cantidad total de 0,005 a 0,75% en peso,
preferiblemente de 0,01 a 0,5% en peso, con respecto a la proteína activa. Como primera proteasa se emplea
preferiblemente 0,025 a 0,5% en peso de la proteasa que tiene la secuencia de Seq ID NO: 3 y como segunda proteasa
se emplea 0,01 a 0,5% en peso de la proteasa que tiene la secuencia de Seq ID NO: 4. En otra forma preferida de
realización, como primera proteasa se emplea preferiblemente 0,025 a 0,5% en peso de la proteasa que tiene la
15 secuencia de Seq ID NO: 3 y como segunda proteasa se emplea 0,01 a 0,5% en peso de la proteasa que tiene la
secuencia de Seq ID NO: 5. Según otra forma de realización, igualmente preferida, como primera proteasa se emplea
preferiblemente 0,025 a 0,5% en peso de la proteasa que tiene la secuencia de Seq ID NO: 3 y como segunda proteasa
se emplea 0,01 a 0,5% en peso de la proteasa que tiene la secuencia de Seq ID NO: 6.

20 En formulaciones líquidas, las enzimas se usan preferiblemente en forma de formulación o formulaciones líquidas
enzimáticas.

La concentración de proteína se puede determinar utilizando procedimientos conocidos, por ejemplo, el procedimiento
BCA (ácido bicinconínico; ácido 2,2'-bicinolil-4,4'-dicarboxílico) o el procedimiento de Biuret. A este respecto, la
25 concentración de proteína activa se determina titulando los centros activos usando un inhibidor irreversible adecuado
(para proteasas, por ejemplo, fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF)) y determinando la actividad residual (cf. M. Bender
y col., J. Am. Chem Soc. 88, 24 (1966), páginas 5890-5913).

Las proteasas pueden protegerse contra daños, tales como inactivación, desnaturalización o descomposición, por
30 ejemplo, por influencias físicas, oxidación o disociación proteolítica, especialmente durante el almacenamiento. En el
caso de la obtención microbiana, se prefiere particularmente la inhibición de la proteólisis. Para este propósito, los
productos descritos pueden contener estabilizadores.

Las proteasas activas para la limpieza generalmente no se proporcionan en forma de proteína pura sino más bien en
35 forma de preparaciones estabilizadas, almacenables y transportables. Estas preparaciones prefabricadas incluyen,
por ejemplo, las preparaciones sólidas obtenidas por granulación, extrusión o liofilización o, particularmente en el caso
de productos en forma líquida o de gel, soluciones de las enzimas, ventajosamente tan concentradas como sea
posible, bajas en agua y/o con estabilizadores u otros auxiliares.

40 Alternativamente, las enzimas pueden encapsularse tanto para la forma de administración sólida, como para la líquida,
por ejemplo mediante secado por pulverización o extrusión de la solución enzimática junto con un polímero
preferiblemente natural o en forma de cápsulas, por ejemplo aquellas en las que las enzimas están encerradas como
en un gel solidificado o aquellas del tipo núcleo-cáscara, en el que un núcleo que contiene enzima está recubierto con
una capa protectora impermeable al agua, al aire y/o a los productos químicos. Otros ingredientes activos, por ejemplo,
45 estabilizadores, emulsionantes, pigmentos, productos blanqueadores o colorantes, se pueden aplicar adicionalmente
en capas soportadas. Las cápsulas de este tipo se aplican mediante procedimientos conocidos per se, por ejemplo,
por agitación o granulación con rodillo o en procedimientos de lecho fluido. Dichos gránulos son ventajosamente bajos
en polvo, por ejemplo, por la aplicación de formadores de película polimérica, y son estables durante el
almacenamiento debido al recubrimiento.
50
Además, es posible embalar dos o más enzimas juntas, de modo que un solo granulado presente varias actividades
enzimáticas.

Como se puede ver en las formas de realización anteriores, la proteína enzima forma solo una fracción del peso total
55 de las preparaciones enzimáticas convencionales. Las preparaciones de proteasa usadas con preferencia contienen
entre 0,1 y 40% en peso, preferiblemente entre 0,2 y 30% en peso, de modo particularmente preferible entre 0,4 y
20% en peso y principalmente entre 0,8 y 15% en peso de la proteína enzima. Por lo tanto, los productos descritos
contienen tales preparaciones enzimáticas preferiblemente en una cantidad respectivamente de 0,1 a 10% en peso,
preferiblemente de 0,2 a 5% en peso, con respecto al producto total.
60
Los productos de limpieza descritos aquí, principalmente los productos lavavajillas automáticos preferidos, pueden ser
de naturaleza sólida o líquida y principalmente pueden estar presentes como sólidos en polvo, en forma de partículas
post-compactadas, como soluciones o suspensiones homogéneas. En otra forma preferida de realización de la
invención, el detergente para lavavajillas automático está en forma de porciones. En otra forma preferida de realización
65 de la invención, el detergente para lavavajillas automático tiene una pluralidad de composiciones separadas
espacialmente, lo que hace posible separar ingredientes incompatibles entre sí u ofrecer composiciones en

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combinación que se usan en el lavavajillas en diferentes momentos. Esto es particularmente ventajoso si los
detergentes para lavavajillas automáticos están en forma de porciones. Al menos una de las composiciones puede ser
sólida y/o al menos una de las composiciones puede ser líquida; en tal caso, las proteasas están contenidas en al
menos una de las composiciones, pero también pueden estar en varias composiciones.
5
Los productos descritos en el presente documento contienen preferiblemente al menos un constituyente más,
principalmente al menos dos constituyentes más, seleccionados del grupo que consiste en secuestrantes
(ablandadores de agua), tensioactivos, polímeros, productos blanqueadores, catalizadores de blanqueo, activadores
de blanqueo, enzimas no proteasas, inhibidores de corrosión e inhibidores de corrosión de vidrio, adyuvantes de
10 desintegración, fragancias y portadores de perfume.

A continuación, se describen posibles ingredientes que pueden usarse ventajosamente en los productos de limpieza
descritos aquí, principalmente los productos para lavar vajillas, preferiblemente los productos para lavar vajillas a
máquina.
15
Los secuestrantes se pueden usar ventajosamente. Los secuestrantes incluyen, principalmente, zeolitas, silicatos,
carbonatos, co-secuestrantes orgánicos y, donde no hay prejuicios ecológicos contra su uso, también los fosfatos.

Los silicatos cristalinos en capas se pueden usar en los productos descritos aquí. Dichos productos de limpieza,
20 preferiblemente productos para lavar vajillas, principalmente productos para lavar vajillas a máquina, contienen
preferiblemente una fracción en peso de silicato cristalino en capas de 0,1 a 20% en peso, preferiblemente de 0,2 a
15% en peso y principalmente de 0,4 a 10% en peso, cada caso con respecto al peso total de estos productos.

También es posible usar los fosfatos generalmente conocidos como sustancias secuestrantes siempre que dicho uso
25 no deba evitarse por razones ecológicas. Del gran número de fosfatos disponibles comercialmente, los fosfatos de
metales alcalinos, con especial preferencia por el trifosfato de pentasodio o pentapotasio (tripolifosfato de sodio o
potasio), son de la mayor importancia en la industria de los detergentes o productos de limpieza.

Fosfatos de metales alcalinos es el término general para las sales de metales alcalinos (especialmente sodio y potasio)
30 de los diversos ácidos fosfóricos, en los que se puede distinguir entre los ácidos metafosfóricos (HPO3)n y el ácido
ortofosfórico H3PO4 además de los representantes de mayor peso molecular. Los fosfatos reúnen en sí varias ventajas:
actúan como portadores alcalinos, impiden los depósitos de cal en las piezas de la máquina o las incrustaciones de
cal en tejidos y también contribuyen al rendimiento de la limpieza.

35 Los fosfatos particularmente importantes en la industria son el trifosfato de pentasodio, Na5P3O10 (Tripolifosfato de
sodio) y la sal correspondiente de potasio, el trifosfato pentapotásico, K5P3O10 (tripolifosfato de potasio). Los
tripolifosfatos de sodio y potasio se pueden usar preferiblemente.

En el contexto de la presente solicitud, los fosfatos se usan como sustancias activas de lavado o limpieza en los
40 productos de limpieza, preferiblemente productos para lavar vajillas, especialmente en productos para lavar vajillas a
máquina, de modo que los detergentes preferidos contienen esto(s) fosfato(s), preferiblemente fosfato(s) de metal
alcalino, de modo particularmente preferible trifosfato pentasódico o pentapotásico (tripolifosfato de sodio o potasio),
en cantidades de 5 a 80% en peso, preferiblemente de 15 a 75% en peso y principalmente de 20 a 70% en peso, cada
caso con respecto al peso del detergente, preferiblemente detergente para lavavajillas, especialmente detergente para
45 lavavajillas automático.

Otros secuestrantes son los portadores alcalinos. Como portadores alcalinos son válidos, por ejemplo, hidróxidos de
metales alcalinos, carbonatos de metales alcalinos, hidrogenocarbonatos de metales alcalinos, sesquicarbonatos de
metales alcalinos, los silicatos alcalinos mencionados, silicatos de metales alcalinos y mezclas de las sustancias
50 mencionadas anteriormente; para los fines de esta invención pueden usarse preferiblemente los carbonatos de
metales alcalinos, principalmente carbonato de sodio, hidrogenocarbonato de sodio o sesquicarbonato de sodio. Se
prefiere particularmente un sistema mejorador que contiene una mezcla de tripolifosfato y carbonato de sodio. También
se prefiere particularmente un sistema secuestrante que contiene una mezcla de tripolifosfato y carbonato de sodio y
disilicato de sodio. Debido a su baja compatibilidad química con los otros ingredientes de los productos de limpieza,
55 principalmente los productos para lavar vajillas, preferiblemente los productos para lavar vajillas a máquina, en
comparación con otras sustancias secuestrantes, los hidróxidos de metales alcalinos opcionales se prefieren solo en
pequeñas cantidades o no se usan en absoluto.

Se prefiere particularmente usar carbonato (s) y/o hidrógeno-carbonato(s), preferiblemente carbonato(s) de metal(es)
60 alcalino(s), de modo particularmente preferible carbonato de sodio, en cantidades de 2 a 50% en peso, preferiblemente
de 5 a 40% en peso y principalmente del 7,5 al 30% en peso, en cada caso con respecto al peso del detergente,
preferiblemente del detergente para lavavajillas automático. Particularmente preferidos son los productos que, con
respecto al peso del detergente para lavavajillas automáticos, están contenidos en menos de 20% en peso,
preferiblemente menos de 17% en peso, preferiblemente menos de 13% en peso y principalmente menos de 9% en
65 peso de carbonato (s) y/o hidrógeno-carbonato(s), preferiblemente carbonato(s) de metal alcalino, de modo
particularmente preferible carbonato de sodio.

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Como co-secuestrantes orgánicos pueden mencionarse, principalmente, policarboxilatos/ácidos policarboxílicos,

policarboxilatos poliméricos, ácido aspártico, poliacetales, dextrinas, otros co-secuestrantes orgánicos y fosfonatos.
Estas clases de sustancias se describen a continuación.
5
Las sustancias secuestrantes orgánicas utilizables son, por ejemplo, los ácidos policarboxílicos que se pueden usar
en forma del ácido libre y/o sus sales de sodio, y por ácidos policarboxílicos se entienden aquellos ácidos carboxílicos
que tienen más de una función ácida. Por ejemplo, estos son ácido cítrico, ácido adípico, ácido succínico, ácido
glutárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido maleico, ácido fumárico, ácidos de azúcar, ácido nitrilotriacético (NTA),
10 siempre que dicho uso no sea objetable por razones ecológicas, y mezclas de estos. Además de su efecto
secuestrante, los ácidos libres también suelen tener la propiedad de un componente acidificante y también sirven, por
lo tanto, para ajustar un valor de pH más bajo y más suave del producto. Principalmente pueden mencionarse ácido
cítrico, ácido succínico, ácido glutárico, ácido adípico, ácido glucónico y cualquier mezcla de estos.

15 El uso de ácido cítrico y/o de citratos en estos productos ha demostrado ser particularmente ventajoso para el
rendimiento de limpieza y enjuague descrito aquí. Por lo tanto, se prefieren los productos de limpieza, preferiblemente
los productos para lavar vajillas, de modo particularmente preferible los productos para lavar vajillas a máquina,
caracterizados porque el producto contiene ácido cítrico o una sal de ácido cítrico y porque la fracción en peso de
ácido cítrico o la sal de ácido cítrico es preferiblemente de más de 10% en peso, preferiblemente de más de 15% en
20 peso y principalmente se encuentra entre 20 y 40% en peso.

Otra clase importante de secuestrantes libres de fosfato son los ácidos aminocarboxílicos y/o sus sales. Los
representantes particularmente preferidos de esta clase son el ácido metilglicinadiacético (MGDA) o sus sales y el
ácido glutaminadiacético (GLDA) o sus sales, o ácido etilendiaminadiacético o sus sales (EDDS). El contenido de
25 estos ácidos aminocarboxílicos o sus sales puede constituir, por ejemplo, entre 0,1 y 15% en peso, preferiblemente
entre 0,5 y 10% en peso y principalmente entre 0,5 y 6% en peso. Los ácidos aminocarboxílicos y sus sales se pueden
usar junto con los secuestrantes mencionados anteriormente, principalmente también con los secuestrantes libres de
fosfato.

30 Los policarboxilatos poliméricos también son adecuados como secuestrantes; estos son, por ejemplo, las sales de
metales alcalinos de ácido poliacrílico o ácido polimetacrílico, por ejemplo, aquellas con una masa molecular relativa
de 500 a 70000 g/mol. Los polímeros adecuados son, principalmente, los poliacrilatos que preferiblemente tienen una
masa molecular de 2000 a 20000 g/mol. Debido a su solubilidad superior, de este grupo a su vez pueden ser preferidos
los poliacrilatos de cadena corta que tienen masas molares de 2000 a 10000 g/mol, y de modo particularmente
35 preferible de 3000 a 5000 g/mol.

También son adecuados los policarboxilatos copoliméricos, principalmente los del ácido acrílico con ácido metacrílico
y del ácido acrílico o ácido metacrílico con ácido maleico.

40 Los policarboxilatos (co)poliméricos se pueden usar en forma de polvo o de solución acuosa. El contenido de
policarboxilatos (co)poliméricos en los productos de limpieza, preferiblemente productos para lavavajillas,
principalmente productos para lavavajillas automáticos, es preferiblemente de 0,5 a 20% en peso y principalmente de
3 a 10% en peso.

45 Para mejorar la solubilidad en agua, los polímeros también pueden contener ácidos alilosulfónicos tales como, por
ejemplo, ácido aliloxibencenosulfónico y ácido metalilosulfónico, como monómeros. Otros copolímeros preferidos son
aquellos que en calidad de monómeros presentan acroleína y ácido acrílico/sales de ácido acrílico o acroleína y acetato
de vinilo.

50 Además, todos los compuestos que pueden formar complejos con iones de metales alcalinotérreos pueden usarse
como secuestrantes.

Los productos descritos en el presente documento pueden contener tensioactivos, en cuyo caso el grupo de
tensioactivos incluye los tensioactivos no iónicos, aniónicos, catiónicos y anfóteros.
55
Todos los tensioactivos no iónicos conocidos por el experto en la materia pueden usarse como tensioactivos no iónicos.
Los tensioactivos no iónicos adecuados son, por ejemplo, alquilglucósidos de fórmula general RO(G)x, en la que R
corresponde a un residuo alifático primario de cadena lineal o ramificado con metilo, principalmente ramificado con
metilo en la posición 2 que tiene 8 a 22, preferiblemente 12 a 18, átomos de carbono y G es el símbolo que representa
60 una unidad de glicosa con 5 o 6 átomos de carbono, preferiblemente glucosa. El grado de oligomerización x, que
indica la distribución de monoglicósidos y oligoglicósidos, es cualquier número entre 1 y 10; x es preferiblemente de
1,2 a 1,4.

Otra clase de tensioactivos no iónicos preferidos que se pueden usar como el único tensioactivo no iónico o en
65 combinación con otros tensioactivos no iónicos son los ésteres de alquilo de ácido graso alcoxilado, preferiblemente
etoxilado o etoxilado y propoxilado, preferiblemente con 1 a 4 átomos de carbono en la cadena de alquilo.

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Los tensioactivos no iónicos del tipo de óxido de amina, por ejemplo, óxido de N-cocoalquil-N, N-dimetilamina y óxido
de N-seboalquil-N,N-dihidroxietilamina, y de las alcanolamidas de ácidos grasos también pueden ser adecuados. La
cantidad de estos tensioactivos no iónicos es preferiblemente de no más que la de los alcoholes grasos etoxilados,
5 principalmente no más que la mitad de los mismos.

Otros tensioactivos adecuados son las amidas de ácido polihidroxigraso conocidas como PHFA.

Los tensioactivos no iónicos de baja espuma pueden usarse como tensioactivos preferidos. Los productos de limpieza,
10 preferiblemente productos para lavar vajillas, principalmente productos para lavar vajillas a máquina, contienen
principalmente de modo preferible tensioactivos no iónicos del grupo de los alcoholes alcoxilados. Los tensioactivos
no iónicos utilizados son principalmente alcoholes primarios, preferiblemente alcoxilados, ventajosamente etoxilados,
que tienen preferiblemente de 8 a 18 átomos de carbono y un promedio de 1 a 12 moles de óxido de etileno (EO) por
mol de alcohol, en los que el residuo de alcohol puede ser lineal o preferiblemente ramificado con metilo en la posición
15 2 o puede contener residuos lineales y ramificados con metilo en mezcla, tal como generalmente están presentes en
los residuos oxo-alcohol. Principalmente, sin embargo, se prefieren los etoxilatos de alcohol con residuos lineales de
alcoholes de origen nativo que tienen 12 a 18 átomos de carbono, por ejemplo, de alcohol de coco, palma, sebo u
oleilo, y un promedio de 2 a 8 moles de EO por mol de alcohol. Los alcoholes etoxilados preferidos incluyen, por
ejemplo, alcoholes de C12-14 con 3 EO o 4 EO, alcohol de C9-11 con 7 EO, alcoholes de C13-15 con 3 EO, 5 EO, 7 EO u
20 8 EO, alcoholes de C12-18 con 3 EO, 5 EO o 7 EO y mezclas de estos, tales como mezclas de alcohol de C12-14 con 3
EO y alcohol de C12-18 con 5 EO. Los grados de etoxilación indicados representan valores medios estadísticos que
pueden corresponder a un número entero o un número fraccionario para un producto específico. Los etoxilatos de
alcohol preferidos tienen una distribución homóloga estrecha (narrow range ethoxylates, NRE). Además de estos
tensioactivos no iónicos, también se pueden usar alcoholes grasos con más de 12 EO. Los ejemplos incluyen alcohol
25 graso de sebo con 14 EO, 25 EO, 30 EO o 40 EO.

Los tensioactivos no iónicos que tienen un punto de fusión por encima de la temperatura ambiente son particularmente
preferidos. Se prefieren principalmente un tensioactivos o unos tensioactivos no iónicos que tienen un punto de fusión
superior a 20ºC, preferiblemente superior a 25ºC, particularmente preferible entre 25 y 60ºC y principalmente entre
30 26,6 y 43,3ºC.

Los tensioactivos a emplear de modo preferido provienen de los grupos de tensioactivos no iónicos alcoxilados,
principalmente alcoholes primarios etoxilados.

35 Los tensioactivos aniónicos también se pueden usar como constituyentes de productos de limpieza, preferiblemente
productos para lavar vajillas, principalmente productos para lavar vajillas a máquina. Estos incluyen, principalmente,
alquilbencenosulfonatos, sulfatos de alquilo (grasos), éter sulfatos de alquilo (grasos) y sulfonatos de alcano. El
contenido de tensioactivos aniónico en los productos es habitualmente de 0 al 10% en peso.

40 En lugar de los tensioactivos mencionados o en combinación con ellos, también se pueden utilizar tensioactivos
catiónicos y/o anfóteros. En productos de limpieza, principalmente productos para lavar vajillas, preferiblemente
productos para lavar vajillas a máquina, el contenido de tensioactivos catiónicos y/o anfóteros es preferiblemente
inferior al 6% en peso, preferiblemente inferior al 4% en peso, de modo muy particularmente preferible inferior al 2%
en peso y principalmente menos del 1% en peso. Los productos que no contienen tensioactivos catiónicos o anfóteros
45 son particularmente preferidos.

El grupo de polímeros incluye principalmente los polímeros activos para lavado o limpieza, por ejemplo, los polímeros
para enjuague y/o polímeros que actúan como ablandadores. En general, además de los polímeros no iónicos, los
polímeros catiónicos, aniónicos y anfóteros también se pueden usar en detergentes para lavavajillas.
50
Los "polímeros catiónicos" en el sentido de la presente invención son polímeros que llevan una carga positiva en la
molécula de polímero. Esto se puede lograr, por ejemplo, por medio de grupos (alquil)amonio u otros grupos cargados
positivamente presentes en la cadena polimérica. Los polímeros catiónicos particularmente preferidos provienen de
los grupos de los derivados de celulosa cuaternizada, los polisiloxanos con grupos cuaternarios, los derivados de guar
55 catiónicos, las sales poliméricas de dimetildialilamonio y sus copolímeros con ésteres y amidas de ácido acrílico y
ácido metacrílico, los copolímeros de vinilpirrolidona con derivados cuaternizados de derivados de acrilato y
metacrilato de dialquilamino, los copolímeros de vinilpirrolidona-cloruro de metoimidazolinio, los alcoholes polivinílicos
cuaternizados o los polímeros indicados con las denominaciones INCI Polyquaternium 2, Polyquaternium 17,
Polyquaternium 18 y Polyquaternium 27.
60
En el sentido de la presente invención, los "polímeros anfóteros" tienen, además de un grupo cargado positivamente
en la cadena del polímero, también grupos cargados negativamente o unidades monoméricas. Estos grupos pueden
ser, por ejemplo, ácidos carboxílicos, ácidos sulfónicos o ácidos fosfónicos.

65 Los polímeros anfóteros preferidos que pueden usarse provienen del grupo de copolímeros de alquilacrilamida/ácido
acrílico, copolímeros de alquilacrilamida/ácido metacrílico, copolímeros de alquilacrilamida/ácido metilmetacrílico,

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copolímeros de alquilacrilamida/ácido acrílico/ácido alquilaminoalquil(met)acrílico, copolímeros de

alquilacrilamida/ácido metacrílico/ácido alquilaminoalquil(met)acrílico, copolímeros de alquilacrilamida/ácido
metilmetacrílico/ácido alquilaminoalquil(met)acrílico, los copolímeros de alquilacrilamida/ metacrilato de alquilo/
metacrilato de alquilaminoetilo/metacrilato de alquilo y los copolímeros de ácidos carboxílicos insaturados, ácidos
5 carboxílicos insaturados derivatizados catiónicamente y opcionalmente otros monómeros iónicos o no ionogénicos.

Los polímeros zwitteriónicos que se pueden usar con preferencia provienen del grupo de los copolímeros de cloruro
de acrilamidoalquiltrialquilamonio/ácido acrílico y sus sales alcalinas y de amonio, los copolímeros de cloruro de
acrilamidoalquiltrialquilamonio/ácido metacrílico y sus sales alcalinas y de amonio y los copolímeros de
10 metacroiletilbetaína/metacrilato.

Los detergentes, principalmente los detergentes para lavavajillas, preferiblemente los detergentes para lavavajillas
automáticos, contienen los polímeros catiónicos y/o anfóteros mencionados anteriormente de preferencia en
cantidades entre 0,01 y 10% en peso, en cada caso con respecto al peso total del producto lavavajillas en máquina.
15 Sin embargo, en el contexto de la presente solicitud, los detergentes lavavajillas en máquina preferidos son aquellos
en los que la fracción de peso de los polímeros catiónicos y/o anfóteros está entre 0,01 y 8% en peso, preferiblemente
entre 0,01 y 6% en peso, preferiblemente entre 0,01 y 4% en peso, de modo particularmente preferible entre 0,01 y
2% en peso y principalmente entre 0,01 y 1% en peso, en cada caso con respecto al peso total del detergente
lavavajillas en máquina.
20
En los productos de limpieza, preferiblemente productos para lavar vajillas, principalmente productos para lavar vajillas
en máquina, también se pueden usar productos blanqueadores. Entre los compuestos que proporcionan H2O2 en
agua, que sirven como productos blanqueadores, son de particular importancia el percarbonato de sodio, el perborato
de sodio tetrahidrato y el perborato de sodio monohidrato. Otros productos blanqueadores útiles son, por ejemplo,
25 peroxipropofosfatos, perhidratos de citrato y sales de perácidos o perácidos que proporcionan H2O2, tales como
perbenzoatos, peroxoftalatos, ácido diperazelaico, ftaloiminoperácido o ácido diperdodecanodioico. También se
pueden usar todos los otros blanqueadores peroxi inorgánicos u orgánicos conocidos por el experto en la materia.

Las sustancias que desprenden cloro o bromo también se pueden usar como productos blanqueadores. Materiales
30 que desprenden de cloro o bromo adecuados incluyen, por ejemplo, N-bromo- y N-cloramidas heterocíclicas, por
ejemplo, ácido tricloroisocianúrico, ácido tribromoisocianúrico, ácido dibromoisocianúrico y/o ácido dicloroisocianúrico
(DICA) y/o sus sales con cationes como el potasio y el sodio. También son adecuados los compuestos de hidantoína
tales como la 1,3-dicloro-5,5-dimetilhidantoína.

35 Hay detergentes, preferiblemente detergentes para lavavajillas, especialmente detergentes lavavajillas en máquina,
que contienen del 1 al 35% en peso, preferiblemente del 2,5 al 30% en peso, de modo particularmente preferible del
3,5 al 20% en peso y principalmente del 5 al 15% en peso de producto blanqueador, preferiblemente percarbonato de
sodio.

40 Además, los productos de limpieza, preferiblemente productos para lavar vajillas, principalmente productos lavavajillas
en máquina, pueden contener catalizadores de blanqueo. Los catalizadores de blanqueo que pueden usarse incluyen,
pero no se limitan a, el grupo de sales de metales de transición y complejos de metales de transición que refuerzan el
blanqueo, preferiblemente complejos de Mn, Fe, Co, Ru o Mo, de modo particularmente preferible del grupo de sales
y/o complejos de manganeso y/o cobalto, principalmente los complejos de cobalto (amoniaco), los complejos de
45 cobalto (acetato), los complejos de cobalto (carbonilo), los cloruros de cobalto o manganeso, el sulfato de manganeso
y los complejos de manganeso con 1,4,7-trimetil-1,4,7-triazaciclononano (Mn3-TACN) o 1,2,4,7- tetrametil-1,4,7-tri-
azaciclononano (Mn4-TACN).

Hay productos de limpieza, preferiblemente los productos para lavar vajillas, principalmente los productos lavavajillas
50 en máquina, que contienen de 0,001 a 1% en peso, preferiblemente de 0,01 a 0,1% en peso, de catalizador de
blanqueo, preferiblemente un complejo de Mn, principalmente un complejo de manganeso con 1,4,7-trimetil-1,4,7-
triazaciclononano (Mn3-TACN) o 1,2,4,7-tetrametil-1,4,7-tri-azaciclononano (Mn4-TACN).

En diversas formas de realización de la invención, los productos de limpieza, preferiblemente productos para lavar
55 vajillas, principalmente productos lavavajillas en máquina, contienen adicionalmente al menos un activador de
blanqueo. Los activadores de blanqueo que pueden usarse son compuestos que, en condiciones de perhidrólisis, dan
ácidos peroxocarboxílicos alifáticos que tienen preferiblemente de 1 a 10 átomos de carbono, principalmente de 2 a 4
átomos de carbono, y/o ácido perbenzoico opcionalmente sustituido. De todos los activadores de blanqueo del estado
de la técnica conocidos por el experto en la materia, de manera particularmente preferida se emplean alquilendiaminas
60 poliaciladas, principalmente tetraacetiletilendiamina (TAED), derivados de triazina acilados, principalmente 1,5-
diacetil-2,4-dioxohexahidro-1,3,5-triazina (DADHT), glicolurilos acilados, especialmente tetraacetilglicolurilo (TAGU),
N-acilimidas, especialmente N-nonanoilsuccinimida (NOSI), fenolsulfonatos acilados, especialmente n-nonanoil- o
isononanoiloxibencenosulfonato (n- o iso-NOBS). También se pueden usar combinaciones de activadores de blanqueo
convencionales. Estos activadores del blanqueo se usan preferiblemente en cantidades de hasta el 10% en peso,
65 principalmente del 0,1% en peso al 8% en peso, particularmente del 2 al 8% en peso y de manera particularmente

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preferible del 2 al 6% en peso, en cada caso con respecto al peso total de los productos que contienen el activador
del blanqueo.

Los productos de la presente invención contienen preferiblemente al menos una preparación enzimática adicional o
5 composición enzimática que contiene una o más enzimas no proteasas. Tales enzimas comprenden, pero no se limitan
a, amilasas, lipasas, celulasas, hemicelulasas, mananasas, enzimas disociadoras de pectina, tanasas, xilanasas,
xantanasas, β-glucosidasas, carragenasas, perhidrolasas, oxidasas, oxidorreductasas y sus mezclas. Las enzimas
preferidas comprenden principalmente amilasas, principalmente α-amilasas, celulasas, lipasas, hemicelulasas,
principalmente pectinasas, mananasas, β-glucanasas y mezclas de las mismas. Las amilasas y/o lipasas y sus
10 mezclas son particularmente preferidas. En principio estas enzimas son de origen natural; a partir de las moléculas
naturales se encuentran disponibles variantes mejoradas para su uso en detergentes o productos de limpieza, los
cuales se emplean preferiblemente de modo correspondiente.

Los datos sobre las cantidades y las formas de formulación proporcionados en relación con las proteasas utilizadas
15 también se aplican mutatis mutandis a todas las otras enzimas descritas anteriormente.

Los inhibidores de la corrosión del vidrio impiden la aparición de turbidez, rayas y rasguños, pero también la iridiscencia
de la superficie del vidrio de los vasos lavados en máquina. Los inhibidores de corrosión de vidrio preferidos provienen
del grupo de las sales de magnesio y zinc, así como de los complejos de magnesio y zinc. En el contexto de la presente
20 invención, el contenido de sal de zinc en productos de limpieza, preferiblemente productos lavavajillas, principalmente
productos lavavajillas en máquina, está preferiblemente entre 0,1 a 5% en peso, preferiblemente entre 0,2 a 4% en
peso y principalmente entre 0,4 a 3 % en peso, o el contenido de zinc en forma oxidada (calculado como Zn2+) entre
0,01 a 1% en peso, preferiblemente entre 0,02 a 0.5% en peso y principalmente entre 0,04 a 0,2% en peso, en cada
caso con respecto al peso total de producto que contiene inhibidor de corrosión de vidrio.
25
Para facilitar la desintegración de los cuerpos moldeados prefabricados, es posible incorporar a estos productos
adyuvantes de desintegración, los llamados desintegrantes de comprimidos, para abreviar los tiempos de
desintegración. Por desintegrantes de comprimidos o aceleradores de desintegración se entienden sustancias
auxiliares que causan la rápida desintegración de los comprimidos en agua u otros medios y la rápida liberación de
30 las sustancias activas. Los adyuvantes de desintegración se pueden usar preferiblemente en cantidades de 0,5 a 10%
en peso, preferiblemente de 3 a 7% en peso y principalmente de 4 a 6% en peso, en cada caso con respecto al peso
total del producto que contiene adyuvantes de desintegración.

Como aceites de perfume o fragancias en el contexto de la presente invención pueden usarse compuestos
35 aromatizantes individuales, por ejemplo, los productos sintéticos del tipo éster, éter, aldehído, cetona, alcohol e
hidrocarburos. Sin embargo, se da preferencia al uso de mezclas de diferentes fragancias que juntas generan una
fragancia agradable. Tales aceites de perfume también pueden contener mezclas de fragancias naturales como las
que están accesibles de fuentes vegetales, por ejemplo, aceite de pino, cítricos, jazmín, pachulí, rosa o ylang ylang.

40 El embalaje de los productos de limpieza descritos aquí, preferiblemente los productos lavavajillas, principalmente los
productos lavavajillas en máquina, se puede efectuar de diferentes maneras. Los productos pueden estar en forma
sólida o líquida, así como una combinación de formas de suministro sólidas y líquidas. Como formas sólidas de
suministro son adecuados principalmente polvos, gránulos, extrudidos, compactados, principalmente comprimidos.
Las formas líquidas de suministro a base de agua y/o disolventes orgánicos se pueden espesar y pueden presentarse
45 en forma de geles. Los productos descritos en este documento pueden embalarse en forma de productos monofásicos
o multifásicos.

Los productos de limpieza descritos aquí, preferiblemente los productos lavavajillas, principalmente los productos
lavavajillas en máquina, se pre-embalan preferiblemente en unidades de dosificación. Estas unidades de dosificación
50 comprenden preferiblemente la cantidad de sustancias activas de lavado o limpieza necesarias para un ciclo de
limpieza.

Los productos de limpieza descritos aquí, preferiblemente los productos para lavar vajillas, principalmente productos
para lavar vajillas en máquina, principalmente las unidades de dosificación prefabricadas, tienen de modo
55 particularmente preferible una envoltura soluble en agua.

La envoltura soluble en agua se forma preferiblemente a partir de un material de película soluble en agua que se
selecciona del grupo que consiste en polímeros o mezclas de polímeros. La envoltura se puede formar a partir de una
o dos o más capas del material de película soluble en agua. El material de película soluble en agua de la primera capa
60 y de las otras capas, si están presentes, pueden ser iguales o diferentes. Particularmente se prefieren las películas
que se pueden pegar y/o sellar, por ejemplo, para formar embalajes como tubos flexibles o almohadillas, después de
que se hayan llenado con un producto.

Se prefiere que la envoltura soluble en agua contenga polialcohol vinílico o un copolímero de polialcohol vinílico. Las
65 envolturas solubles en agua que contienen polialcohol vinílico o un copolímero de polialcohol vinílico tienen una buena
estabilidad con una solubilidad en agua suficientemente alta, principalmente una solubilidad en agua fría.

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Las películas solubles en agua adecuadas para preparar la envoltura soluble en agua se basan preferiblemente en un
polialcohol vinílico o un copolímero de polialcohol vinílico, cuyo peso molecular está en el intervalo de 10.000 a
1.000.000 gmol-1, preferiblemente de 20.000 a 500.000 gmol-1, de modo particularmente preferible de 30.000 a 100.000
5 gmol-1, y principalmente de 40.000 a 80.000 gmol-1.

El polialcohol vinílico generalmente se prepara por hidrólisis del poliacetato de vinilo, ya que la ruta directa de síntesis
no es posible. Algo similar es válido para los copolímeros de polialcohol vinílico que se preparan de manera
correspondiente a partir de copolímeros de poliacetato de vinilo. Se prefiere que al menos una capa de la envoltura
10 soluble en agua comprenda un polialcohol vinílico, cuyo grado de hidrólisis es del 70 al 100% molar, preferiblemente
del 80 al 90% molar, de modo particularmente preferible del 81 al 89% molar y principalmente del 82 al 88% molar.

A un material de película que contiene polialcohol vinílico, adecuado para la preparación de la envoltura soluble en
agua se puede agregar adicionalmente un polímero seleccionado del grupo que comprende (co)polímeros que
15 contienen ácido (met)acrílico, poliacrilamidas, polímeros de oxazolina, sulfonatos de poliestireno, poliuretanos,
poliésteres, poliéteres, poliácido láctico o mezclas de los polímeros anteriores. Un polímero adicional preferido es
poliácido láctico.

Además del alcohol vinílico, los copolímeros de polialcohol vinílico preferidos comprenden ácidos dicarboxílicos como
20 monómeros adicionales. Los ácidos dicarboxílicos adecuados son ácido itacónico, ácido malónico, ácido succínico y
sus mezclas; se prefiere el ácido itacónico.

Los copolímeros de polialcohol vinílico preferidos también incluyen, además del alcohol vinílico, un ácido carboxílico
etilénicamente insaturado, su sal o su éster. Tales copolímeros de polialcohol vinílico contienen de manera
25 particularmente preferida, además de alcohol vinílico, ácido acrílico, ácido metacrílico, éster de ácido acrílico, éster de
ácido metacrílico o mezclas de los mismos.

Puede preferirse que el material de película contenga otros aditivos. El material de película puede contener, por
ejemplo, plastificantes tales como dipropilenglicol, etilenglicol, dietilenglicol, propilenglicol, glicerina, sorbitol, manitol o
30 mezclas de los mismos. Otros aditivos comprenden, por ejemplo, adyuvantes de liberación, materiales de carga,
agentes de reticulación, tensioactivos, antioxidantes, absorbentes de UV, productos anti-bloqueadores, productos
antiadhesivos o mezclas de los mismos.

Las películas solubles en agua adecuadas para su uso en las envolturas solubles en agua de los embalajes solubles
35 en agua según la invención son películas que se venden en MonoSol LLC, por ejemplo, bajo la denominación M8630,
C8400 o M8900. Otras películas adecuadas incluyen películas con la denominación Solublon® PT, Solublon® GA,
Solublon® KC o Solublon® KL de Aicello Chemical Europe GmbH o las películas VF-HP de Kuraray.

El uso correspondiente de los productos descritos en el presente documento también es objeto de la invención. La
40 invención también se refiere a un procedimiento de lavado de vajilla, principalmente un procedimiento de lavado en
máquina, en el que se usa un producto según la invención. Por lo tanto, también es objeto de la presente solicitud un
procedimiento para limpiar vajillas en una máquina lavavajillas, en el cual el producto en el transcurso de un programa
de lavado de vajilla se dosifica en el interior de una máquina lavavajillas antes del inicio del ciclo de lavado principal o
en el transcurso del ciclo de lavado principal. El producto puede dosificarse o introducirse en el interior de la máquina
45 lavavajillas manualmente, pero el producto se dosifica preferiblemente en el interior de la máquina lavavajillas por
medio de la cámara de dosificación. En diversas formas de realización de la invención, la temperatura (de enjuague)
en tales procedimientos de lavado de vajilla es preferiblemente de 50ºC o inferior, de modo particularmente preferible
de 45ºC o inferior, más preferiblemente de 40ºC o inferior.

50 Una formulación típica de marco para un detergente lavavajillas que se puede usar preferiblemente, por ejemplo, en
forma de comprimido, comprende las siguientes sustancias:

Tripolifosfato de Na 20-50% en peso

55 Carbonato de sodio 10-30% en peso

Percarbonato de sodio 5-18% en peso

Activador de blanqueo 0,5-5% en peso

60
Catalizador de blanqueo 0,01-1% en peso

Sulfopolímero 2,5-15% en peso

65 Policarboxilato 0,1-10% en peso

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Tensioactivo no iónico 0,5-10% en peso

Fosfonato 0,5-5% en peso

5 Proteasas 0,1 -5% en peso

Amilasa 0,1 -5% en peso,

donde los porcentajes en peso se refieren respectivamente a todo el producto. En lugar del o de una parte del
10 tripolifosfato, también se puede usar en la formulación principalmente 10-50% en peso de citrato o MGDA o GLDA o
EDDS o mezclas de dos o tres de estas sustancias.

Ejemplos

15 Ejemplo 1: Mejora del rendimiento de la proteasa en los lavavajillas automáticos.

En una máquina lavavajillas Bosch SMS86 a 40°C (programa "Suave 40") y 21°dH se lavaron vajillas de porcelana
con suciedad de té negro, yema de huevo, carne picada y crema catalana con un comprimido sólido para lavavajillas
(20 g; composición ver tabla 1) que tiene diferentes proteasas individuales (experimentos comparativos V1-V5) o
20 combinaciones de proteasas (M1-M3). La suciedad de crema catalana se usó como una suciedad pertinaz. Para este
propósito, la mezcla terminada de Creme Brûlée [crema catalana] de Debic se calentó a 60°C en una cacerola y se
aplicaron 3,5 g sobre un plato para postre con un cepillo y se dejó secar durante 2 horas a temperatura ambiente. Los
platos se colocaron luego en un horno frío (aglutinante) y se calentaron a 140ºC durante 1h. Luego, la mancha de
crema catalana se horneó en el horno durante 2h a 140ºC.
25
Después de cada ciclo de enjuague, el rendimiento de limpieza se determinó visualmente según IKW [Industrieverband
Körperpflege- und Waschmittel o Asociación de industrias de detergentes y productos para el cuidado corporal]
(evaluación de 1-10, cuanto mayor sea el valor, mejor será el rendimiento, las diferencias de al menos 1 son
significativas). Los resultados para las formulaciones ensayadas se listan en la Tabla 2 como valores medios
30 aritméticos. Los valores más altos significan un mejor rendimiento de limpieza.

Tabla 1: Composición del producto lavavajillas en máquina

Base
Fosfato (% en peso) 35,9
Carbonato de sodio (% en peso) 12,2
Fosfonato (% en peso) 2,4
Polímero que contiene grupos de ácido sulfónico (% en peso) 7,9
Poliacrilato (% en peso) 4,6
Tensioactivos no iónicos (% en peso) 6,1
Percarbonato (% en peso) 14,6
TAED (% en peso) 2,3
Catalizador de blanqueo (% en peso) 1,0
Policarboxilato (% en peso) 1,5
Silicato de sodio/policarboxilato (% en peso) 3,9
Composición enzimática (amilasa) (% en peso) 1,0
Acetato de zinc (% en peso) 0,2
Restos (perfume, colorantes, proteasas o mezclas de proteasas etc.)
ad 100
(% en peso)

A la formulación según la Tabla 1 se añadió tanto de la preparación de proteasas correspondiente (proteasas

35 individuales, V1-V5) o sus mezclas (M1-M3), que la cantidad total de proteasas en la formulación fue del 0,24% en
peso.

V1: Base + enzima según Seq ID No. 3

40 V2: Base + enzima según Seq ID No. 4

V3: Base + enzima según Seq ID No. 5

V4: Base + enzima según Seq ID No. 6

45
V5: Base + Savinase Ultra Plus 16L (Novozymes)

M1: Base + mezcla en partes iguales con respecto al contenido de proteasa en % en peso de enzima según la Seq
ID. 3 y enzima según Seq ID No. 4

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M2: Base + mezcla en partes iguales con respecto al contenido de proteasa en % en peso de enzima según la Seq
ID. 3 y enzima según Seq ID No.5

5 M3: Base + mezcla en partes iguales con respecto al contenido de proteasa en % en peso de enzima según la Seq
ID. 3 y enzima según Seq ID No.6

Tabla 2: Rendimiento de limpieza

Proteasa/combinación de proteasas Té Carne picada Yema de huevo Crema catalana
V1 8,7 10,0 5,8 4,6
V2 5,6 9,8 6,9 8,4
V3 6,3 10,0 5,7 7,8
V4 6,8 9,8 5,1 8,8
V5 5,1 10,0 6,0 5,2
M2 8,6 9,8 6,3 8,7

Proteasa/combinación de proteasas Té Carne picada Yema de huevo Crema catalana

V1 9,5 9,7 6,3 4,1
M1 8,7 9,5 6,1 6,8
M3 9,3 9,7 6,2 7,6

10 Como se puede ver en la Tabla 2, la proteasa según la Seq ID No 3 (V1) muestra un muy buen rendimiento de limpieza
en las manchas de té, mientras que el rendimiento de limpieza en crema catalana es solo mediocre. Por el contrario,
las proteasas según Seq ID No 4, 5 y 6 (V2 a V4) muestran un buen rendimiento en crema catalana, mientras que el
rendimiento en té es solo mediocre. Savinasa (V5) no muestra un buen rendimiento ni en té ni en crema catalana.

15 Como se puede ver en todas las combinaciones de proteasas ensayadas de la invención, tanto el rendimiento de
limpieza del té, como también el rendimiento de limpieza de la crema catalana están en un alto nivel. La Tabla 2
muestra claramente que la combinación de dos proteasas diferentes conduce a una mejora significativa en el
rendimiento de limpieza (M1 a M3).

20 Listado de secuencias

<110> Henkel AG & Co. KGaA

<120> Producto de limpieza que contiene proteasas

25
<130> PT031731_PCT

<150> DE102013207933.8
<151> 2013-04-30
30
<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

35 <210> 1
<211> 269
<212> PRT
<213> Bacillus lentus

40 <400> 1

14
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15
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<210> 2
<211> 269
5 <212> PRT
<213> Bacillus lentus

<400> 2

16
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17
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<210> 3
<211> 269
5 <212> PRT
<213> Artificial

<220>
<223> Variante optimizada de B. lentus subtilisin 309
10
<400> 3

18
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19
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<210> 4
<211> 269
5 <212> PRT

20
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<213> Artificial

<220>
<223> Variante optimizada de la proteasa alcalina de B. lentus
5
<400> 4

21
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22
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<210> 5
<211> 269
5 <212> PRT
<213> Artificial

<220>
<223> Variante optimizada de la proteasa alcalina de B. lentus
10
<400> 5

23
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24
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<210> 6
<211> 270
5 <212> PRT
<213> Artificial

<220>
<223> Variante optimizada de B. lentus subtilisin 309
10
<400> 6

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REIVINDICACIONES

1. Producto de limpieza, caracterizado porque comprende al menos una primera y una segunda proteasa, en el cual

5 a) la primera proteasa comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
aminoácidos indicada en Seq ID NO. 1 en toda su longitud y tiene al menos una sustitución de aminoácidos en una
de las posiciones 9, 15, 66, 212 y 239 en el recuento según Seq ID NO. 1 y

b) la segunda proteasa se selecciona del grupo formado por

10
b1) proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
aminoácidos indicada en Seq ID NO. 2 en toda su longitud y tiene el aminoácido ácido glutámico (E) en la posición 99
en el recuento según Seq ID NO. 2;

15 b2) proteasa, que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
aminoácidos indicada en Seq ID NO. 2 en toda su longitud y en el recuento según Seq ID NO. 2 tiene la sustitución
de aminoácido R99E en combinación con al menos dos sustituciones de aminoácidos adicionales, que se seleccionan
del grupo que consiste en S3T, V4I y V199I; y

20 b3) proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
aminoácidos indicada en Seq ID NO. 1 en toda su longitud y en el recuento de BPN' tiene la sustitución de aminoácido
S99A en combinación con una inserción entre las posiciones 99 y 100, en donde el aminoácido insertado es ácido
aspártico (D);

25 2. Producto de limpieza según la reivindicación 1, caracterizado porque la primera proteasa comprende una secuencia
de aminoácido que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de aminoácidos indicada en Seq ID NO. 1 en toda su
longitud y en el recuento según Seq ID NO. 1 tiene al menos una sustitución de aminoácido que se selecciona del
grupo que consiste en S9R, A15T, V66A, N212D y Q239R;

30 3. Producto de limpieza según la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque la primera proteasa tiene una secuencia
de aminoácidos según Seq ID NO. 3.

4. Producto de limpieza según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la proteasa según b1) tiene una
secuencia de aminoácidos que corresponde en el recuento según Seq ID NO. 2 en las posiciones 1-98 y 100-269 a
35 Seq ID NO. 2 y en la posición 99 tiene el aminoácido ácido glutámico (E).

5. Producto de limpieza según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la proteasa b2) tiene una
secuencia de aminoácidos según Seq ID NO. 2 con las sustituciones de aminoácidos R99E, S3T, V4I y V199I en el
recuento según Seq ID NO. 2.
40
6. Producto de limpieza según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la proteasa b3) tiene una
secuencia de aminoácidos según Seq ID NO. 1 con la sustitución de aminoácido S99A en combinación con una
inserción del aminoácido Asp (D) entre las posiciones 99 y 100, respectivamente en el recuento según BPN '.

45 7. Producto de limpieza según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque contiene una primera proteasa
y una segunda proteasa en una relación de masa de 10:1 a 1:10.

8. Producto de limpieza según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la fracción en peso de cada
una de las proteasas, con respecto a la proteína activa correspondiente, en el peso total del producto es de 1 x 10-8 a
50 5% en peso, preferiblemente 0.001 a 2% en peso %, más preferiblemente de 0,005 a 1,5% en peso, incluso más
preferiblemente de 0,01 a 1% en peso y de modo particularmente preferible de 0,01 a 0,5% en peso.

9. Producto de limpieza según una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque contiene al menos otro
componente, preferiblemente al menos otros dos componentes, seleccionados del grupo que consiste en
55 secuestrantes, tensioactivos, polímeros, productos blanqueadores, catalizadores de blanqueo, activadores de
blanqueo, enzimas no proteasas, inhibidores de corrosión, inhibidores de corrosión de vidrio, adyuvantes de
desintegración, fragancias y portadores de perfume.

10. Producto de limpieza según una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque es un producto lavavajillas,
60 principalmente un producto lavavajillas en máquina.

11. Producto de limpieza según la reivindicación 10, caracterizado porque el

(1) el detergente lavavajillas en máquina está en forma sólida; y/o

65
(2) el detergente lavavajillas en máquina está en forma de porciones; y/o

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(3) el detergente lavavajillas en máquina tiene varias composiciones separadas espacialmente entre sí.

12. Uso de un producto de limpieza según una de las reivindicaciones 1 a 11 en un procedimiento de lavado de vajillas
5 en máquina.

13. Procedimiento para limpiar vajillas en una máquina lavavajillas automática, caracterizado porque un producto de
limpieza según una de las reivindicaciones 1 a 11 se dosifica en el interior de una máquina lavavajillas durante el
transcurso de un programa de lavavajillas antes del inicio del ciclo de lavado principal o en el transcurso del ciclo de
10 lavado principal.

14. Uso de una combinación de una primera y una segunda proteasas para mejorar el rendimiento de limpieza,
principalmente el rendimiento de limpieza en suciedad sensible a enzimas, de un producto de limpieza, preferiblemente
un producto lavavajillas en máquina, caracterizado porque
15
a) la primera proteasa comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
aminoácidos indicada en Seq ID NO. 1 en toda su longitud y tiene al menos una sustitución de aminoácidos en una
de las posiciones 9, 15, 66, 212 y 239 en el recuento según Seq ID NO. 1, y

20 b) la segunda proteasa se selecciona del grupo formado por

b1) proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
aminoácidos indicada en Seq ID NO. 2 en toda su longitud y tiene el aminoácido ácido glutámico (E) en la posición 99
en el recuento según Seq ID NO. 2;
25
b2) proteasa, que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
aminoácidos indicada en Seq ID NO. 2 en toda su longitud y en el recuento según Seq ID NO. 2 tiene la sustitución
de aminoácido R99E en combinación con al menos dos otras sustituciones de aminoácidos, que se seleccionan del
grupo que consiste en S3T, V4I y V199I; y
30
b3) proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos 95% a la secuencia de
aminoácidos indicada en Seq ID NO 1 en toda su longitud y en el recuento de BPN' tiene la sustitución de aminoácido
S99A en combinación con una inserción entre las posiciones 99 y 100, en cuyo caso el aminoácido insertado es ácido
aspártico (D).
35

29