03 - Replicación Del ADN V2

Replicación del ADN
Biología II
Docente: Jorge Alejandro Lopera Rodríguez
[email protected]
Maestría en Ingeniería Biomédica
ITM Institución Universitaria
2020-1
Los puentes de hidrógeno son uniones
débiles.
El ADN también puede
desnaturalizarse por la
temperatura
• La desnaturalización
es el proceso
mediante el que la
doble cadena de ADN
se separa entre sí.
• Ocurre si se
incrementa la
temperatura.
¡¡¡Y el ADN puede
renaturalizarse!!!
• Co=concentración
inicial de ADN.
• t=tiempo de
incubación.
FRACCIONES MUY
REPETIDAS
Fracción muy repetida: 1-10% de

genoma. Son secuencias muy cortas. Se
divide en:
ADN satélite (5 a cientos pb): se
pueden separar en bandas en la
centrifugación y suelen localizarse
hacia los centrómeros.
ADN minisatélite (10 a 100 pb): pueden

variar entre individuos y entre
generaciones. Por tanto, son útiles en
el reconocimiento de individuos.
ADN microsatélite (1 a 5 pb): los loci

tienen longitud variable en la
población y suelen diferir entre etnias.
FRACCIONES
MODERADAMENTE
REPETIDAS
Están de forma difusa en el genoma. Se
dividen en:
ADN repetido codificante: codifican

para el ARN ribosomal y las histonas.
ADN repetido no codificante: es la

mayoría de las fracciones
moderadamente repetidas. Son los
elementos genéticos móviles
(transponibles o “chatarrería
genética”), se piensa que pueden
proceder de virus que integraron el
material genético. Estos elementos
podrían generar cambios en el genoma
o propiciar la evolución dando lugar
por combinación a genes nuevos.
FRACCIONES NO REPETIDAS
Constituyen el material de la herencia

mendeliana.
Usualmente se ubican en una porción

estable del genoma (locus).
Pero son muy pocas, alrededor de sólo

el 1.5% del genoma humano codifica
para proteínas.
¿Qué pasa con el material genético

restante?
Dogma de la biología molecular
Diferentes tipos de
proteína van a
ayudar para que se
dé este proceso
Dogma de la biología molecular
Replicación
• Es la forma que tienen el ADN para
garantizar su reproducción y
preservación.
• Al par que se va dando la replicación,

también se da un fenómeno de
reparación del mismo ADN.
• El fenómeno de autorreplicáción del

ADN dio pie a la formación de la vida en
la Tierra.
ADN polimerasa
¿Cómo se lleva a cabo este
proceso de replicación?
Las cadenas de ADN están unidas por
puentes de hidrógeno, cuya unión es muy
débil y esto va a llevar a que se separen
paulatinamente. Como las cadenas son
complementarias, otros nucleótidos se
unirán para formar de nuevo la doble
hélice.
1953, James Watson y Francis Crick

proponen la estructura del ADN
REPLICACIÓN SEMICONSERVADORA
• Las cadenas hijas

tienen una cadena
parental.
REPLICACIÓN CONSERVADORA
REPLICACIÓN DISPERSIVA
• Al no poder
desenrollarse, el ADN se
debería partir en muchos
pedazos y cada pedazo
construir un nuevo
fragmento. El producto es
que las cadenas hijas
tendrán fragmentos
nuevos y viejos.
¿Cuál era la realidad?
¿Qué hacemos entonces?
¡Súper fácil!
¡Pintemos el ADN!
¿Si vio?
¡La replicación del
ADN es
semiconservadora!
15N (isótopo de nitrógeno pesado), 14N (isótopo de ADN ligero)

La replicación es semiconservadora tanto en
procariotas como eucariotas
1er ciclo de 2do ciclo de
replicación replicación
BrdU: bromodesoxiuridina (se une al ADN en lugar de la timidina).

Timidina: es el nucleósido conformado por la deoxirribosa y la timina.
Replicación en procariotas
OJO, la replicación
es bidireccional.
El origen es una
secuencia especial
llamada oriC.
Replicación en procariotas
Hay al menos 30
proteínas involucradas
en la replicación
bacteriana.
Primer problema
• El ADN está enrollado.

¿Cómo lo desenrollamos?
Al desenrollarse y no
liberarse presión en
este extremo, hace que
se superenrolle la Puede pasar esto
porción que no está
libre.
Entonces, ¿qué hacemos?
Llamen a la ADN Girasa…

Esa le desenrolla lo que sea.
Efecto de la ADN girasa
Parte de las topoisomerasas.
En este caso esta es la topoisomerasa IB,

encontrada en el ser humano.
Acción de topoisomerasa II.
Requiere ATP.
Clasificación topoisomerasas
El real responsable, la ADN polimerasa
• “Polimeriza” nuevas cadenas de
ADN.
• Por tanto, cataliza la síntesis de ADN.
• Conocida también como ADN Pol.
• Existen 13 tipos de ADN Pol.
• Para poder iniciar la síntesis de ADN,

las ADN Pol requieren plantillas de
inicio.
¿Y qué pasa con la replicación
de las cadenas 3’ – 5’?
Fragmentos de Okazaki (Reiji Okazaki),
iniciados por primasa ARN polimerasa qu
genera una secuencia de ARN que actúa
como cebador.
La helicasa
• La helicasa rompe los
puentes de hidrógeno
de la doble cadena
(requiere ATP).
• Ocurre la exposición de
las plantillas de ADN
monocatenario.
Proteína de unión al ADN
monocatenario
• Mantienen al ADN
monocatenario en
su sitio.
• Evita que se vuelva a

enrollar.
• Lo protege de
potenciales daños.
La ADN polimerasa “salta” al
próximo cebador.
Abrazadora
Permite que la
ADNPol esté
unida al ADN.
Actividad exonucleasa
• Las ADN Pol pueden tener actividad
exonucleasa.
• Esta actividad implica la degradación de

ácidos nucleicos.
• Los cebadores para los fragmentos de Okazaki

son degradados por la actividad de
exonucleasa de la ADN Pol 1.
• También se usa para corregir errores durante

la replicación.
• La probabilidad de error es de 1x10^-9.

Errores en la polimerización
Puede ocurrir cada

10^5 a 10^6
nucleótidos
incorporados.
• Ante un nucleótido mal pareado la ADN Pol se detiene y pasa a
actividad de exonucleasa.
• Retira el nucleótido erróneo y reemplaza por un nucleótido correcto.

Diferencias con la replicación en
eucariotas
• Al tener mayor cantidad de material genético, la replicación se realiza a la vez
en diferentes sitios conocidos como “replicones”.
• La ADN Pol es más lenta en eucariotas.
• Lo que ocurre en la horquilla de replicación es muy similar independiente de si

hablamos de virus, bacterias o eucariotas.
• La heterocromatina es la última porción del genoma en replicarse.
• El origen de la replicación se da por la presencia de secuencias de replicación

autónoma (ARS).
• Funcionan como sitio de unión para un complejo multiproteico denomidado

ORC.
¿Qué pasa con los nucleosomas?
Nucleosomas durante la replicación
• A medida que se van sintetizando las nuevas cadenas, histonas

recién sintetizadas y heredadas de la hebra padre son usados
para el empaquetamiento del ADN.
Fases de la replicación
• Son 3:
• Iniciación.
• Elongación.
• Terminación.
Iniciación
• La helicasa rompe los puentes de hidrógeno.
• Las proteínas SSB estabilizan el ADN

monocatenario (impiden la renaturalización del
ADN durante la replicación).
• La ADN girasa libera la presión y ayuda al

desenrollamiento del ADN.
Elongación
• La ADN Pol añade nucleótidos a la cadena hija.
• La ARN primasa sintetiza un ARN cebador que servirá para el inicio

de la síntesis del fragmento de Okazaki en dirección 3’-5’.
• La ADN Pol con actividad exonucleasa retira el fragmento cebador y

añade nucleótidos.
• Ante un nucleótido mal pareado, la ADN Pol activa su acción

exonucleasa y escinde el nucleótido mal pareado agregando un
nucleótido correcto.
Terminación
• Se da cuando la ADN Pol se encuentra una
secuencia de replicación.
• Todo el complejo de replicación se separa del

ADN.
Video síntesis

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Replicación del ADN

Fracción muy repetida: 1-10% de

ADN minisatélite (10 a 100 pb): pueden

ADN microsatélite (1 a 5 pb): los loci

ADN repetido codificante: codifican

ADN repetido no codificante: es la

Constituyen el material de la herencia

Usualmente se ubican en una porción

Pero son muy pocas, alrededor de sólo

¿Qué pasa con el material genético

• Al par que se va dando la replicación,

• El fenómeno de autorreplicáción del

1953, James Watson y Francis Crick

• Las cadenas hijas

15N (isótopo de nitrógeno pesado), 14N (isótopo de ADN ligero)

BrdU: bromodesoxiuridina (se une al ADN en lugar de la timidina).

• El ADN está enrollado.

Llamen a la ADN Girasa…

Parte de las topoisomerasas.

En este caso esta es la topoisomerasa IB,

• Por tanto, cataliza la síntesis de ADN.

• Conocida también como ADN Pol.

• Existen 13 tipos de ADN Pol.

• Para poder iniciar la síntesis de ADN,

• Evita que se vuelva a

• Esta actividad implica la degradación de

• Los cebadores para los fragmentos de Okazaki

• También se usa para corregir errores durante

• La probabilidad de error es de 1x10^-9.

Puede ocurrir cada

• Retira el nucleótido erróneo y reemplaza por un nucleótido correcto.

• La ADN Pol es más lenta en eucariotas.

• Lo que ocurre en la horquilla de replicación es muy similar independiente de si

• La heterocromatina es la última porción del genoma en replicarse.

• El origen de la replicación se da por la presencia de secuencias de replicación

• Funcionan como sitio de unión para un complejo multiproteico denomidado

• A medida que se van sintetizando las nuevas cadenas, histonas

• Las proteínas SSB estabilizan el ADN

• La ADN girasa libera la presión y ayuda al

• La ARN primasa sintetiza un ARN cebador que servirá para el inicio

• La ADN Pol con actividad exonucleasa retira el fragmento cebador y

• Ante un nucleótido mal pareado, la ADN Pol activa su acción

• Todo el complejo de replicación se separa del

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