Sanidad

Laboratorio clínico y biomédico

Análisis bioquímico
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 ISOENZIMAS

 Las diferentes isoenzimas de una enzima pueden expresarse en el mismo tejido o en

tejidos diferentes, e incluso dentro de una misma célula:
 Ciertas isoenzimas de una enzima pueden ser específicas de un determinado
órgano. Por ejemplo, la CK presente en el corazón es distinta a la proteína
existente en el músculo.
 Pueden tener distinta localización subcelular como por ejemplo la AST presente
en la mitocondria difiere de la citosólica
 Métodos de separación de isoenzimas
 Por diferente carga: electroforesis y cromatografía de intercambio iónico.
 Diferente termoestabilidad, anulando alguna isoenzima con calor
 Especificidad de sustrato
 Especificidad de anticuerpo
 Actividad enzimática y diagnóstico clínico

 La enzimología clínica es la aplicación del conocimiento de las enzimas al diagnóstico,

tratamiento y pronóstico de la enfermedad.
 Características de las enzimas a considerar para el uso diagnóstico de la actividad
enzimática:
 La vida media: debe ser adecuada.
 El rango de normalidad: varía con factores como edad, sexo, etc.
 La existencia de isoenzimas: proporcionan información adicional.
 La estabilidad de la actividad: la mayoría lo son 2-7 días a 4°C.
Consideraciones para la correcta determinación:
La muestra debe ser suero (evita interferencias).
 Optimización del sistema reactivo: condiciones estandarizadas de pH,
temperatura, presencia de cofactores, etc.
 Actividad enzimática y diagnóstico clínico

Enzimas presentes en el plasma

 El plasma recibe las enzimas de los tejidos y de las células de la sangre.

 Enzimas específicas del plasma:
 Su función fisiológica o actividad enzimática se realiza en el plasma.
 Alteración más frecuente: disminución de su actividad debida a una
alteración en la síntesis.
 Enzimas no específicas del plasma: poca actividad en el plasma.
 Desarrollan su actividad en las células u órganos de destino.
 Concentraciones elevadas sugieren destrucción celular y tisular.
 Tipos según su origen:
 Enzimas de secreción: realizan su actividad fuera del origen.
 Enzimas asociadas al metabolismo celular: realizan su actividad dentro de la
célula.
 Actividad enzimática y diagnóstico clínico

Enzimas presentes en otros líquidos biológicos

Líquidos biológicos en los que se determinan enzimas:

 Orina: amilasa para el diagnóstico de la pancreatitis aguda.
 Heces: tripsina y quiotripsina para descartar fibrosis quística.
 Líquido cefalorraquídeo: lactato deshidrogenasa (LDH) aumentada indica tumor
cerebral, meningitis bacteriana y trauma cerebral.
 Líquido sinovial: LDH aumentada en artritis agudas.
 Líquido pleural: adenosina desaminasa aumentada en tuberculosis y otras
enfermedades infecciosas con respuesta inmune celular.
 Líquido ascítico: amilasa para descartar pancreatitis.
 Semen: fosfatasa ácida como medida de la función prostática
Actividad enzimática y diagnóstico clínico
Principales enzimas de interés clínico

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 Enzimas asociadas a patologías hepáticas

Fosfatasa alcalina (FA)

 Las FA están situadas en la membrana celular.

 Son hidrolasas que requieren un ambiente de pH alcalino.
 Se elevan en el embarazo y en el periodo de crecimiento óseo.
 Alteraciones de la FA:
Niveles altos:
Enfermedad hepatobiliar:
Obstrucción biliar: coledocolitiasis, tumor de páncreas, etc.
Alteración de la secreción biliar: colestasias por drogas, etc.
 Patologías infiltrativas del hígado: metástasis, linfoma, etc.
 Procesos asociados con patologías del hueso.
 Niveles bajos: pacientes sometidos a transfusiones sanguíneas.
 Enzimas asociadas a patologías hepáticas

 Determinación de la actividad de la FA:

 Mediante métodos cinéticos:
 La hidrólisis del 4-nitrofenil-fosfato libera 4-nitrofenol.
 El 4-nitrofenol absorbe luz entre 400 y 420 nm.
 Consideraciones adicionales: Contexto clínico.
 Otros exámenes de laboratorio.
 Discriminación por métodos electroforéticos.
 Valores normales:
 Hombres: 40-130 U/l.
 Mujeres: 35-105 U/l.
 Enzimas asociadas a patologías hepáticas

Gamma-glutamil transferasa (γ-GT)

 Enzima de la membrana canicular del hepatocito.

 Función vinculada a la degradación del glutatión y a la desintoxicación de drogas y
xenobióticos.
 Está en el hígado, el riñón y el páncreas.
 Predomina en las vías biliares.
 Alteraciones de la γ-GT.
 Se observan niveles elevados en:
 Colestasis: útil para excluir el origen óseo en el aumento de FA.
 Personas con medicación anticonvulsionante y consumidores habituales de
alcohol.
Determinación de la actividad γ-GT: métodos cinéticos.
 La cantidad de 5-amino-2-nitrobenzoato liberada es proporcional a la actividad de la
γ-GT y se mide fotométricamente.
 Valores normales:
 8-61 U/l (hombres)
 5-36 U/l (mujeres).
 Enzimas asociadas a patologías hepáticas

Aminotransferasas: ALT y AST

 Están presentes en la mayoría de células.

 Informan sobre la integridad de los hepatocitos, ya que allí son muy abundantes.
 Niveles elevados de AST indican lesión hepática leve pero si los niveles de ALT son
elevados entonces es grave:
 Relación ALT/AST > 1: enfermedad hepática aguda.
 Relación ALT/AST < 1: enfermedad crónica (cirrosis, tumores o hepatopatía
alcohólica).
 Enzimas asociadas a patologías hepáticas

Aspartato aminotransferasa (AST)

 Está presente en las células del corazón, los músculos y el hígado.

 Cataliza la transferencia de un grupo amino utilizando un cofactor: PLP.
 Alteraciones de la AST.
 Altas concentraciones pueden indicar:
 Lesiones hepáticas: necrosis de los hepatocitos.
 Necrosis de miocardio.
 Distrofia muscular.
 Necrosis tisular: embolia o infarto pulmonar.
 Determinación de AST: por métodos cinéticos.
 Valores normales:
 ≤ 40 U/l (hombres)
 ≤ 32 (mujeres).
 Enzimas asociadas a patologías hepáticas

Alanino aminotransferasa (ALT)

 Está presente solo en el citoplasma (mayormente en los hepatocitos).
 Cataliza la transferencia de un grupo amino utilizando un cofactor: PLP.
 Alteraciones de la ALT:
 Las mismas que para la AST.
 Determinación de ALT: por métodos cinéticos.
 Valores normales:
 ≤ 40 U/l (hombres)
 ≤ 32 U/l (mujeres).
 Enzimas asociadas a patologías hepáticas

Lactato deshidrogenasa (LDH)

 Enzima intracelular presente en todas las células del organismo.
 Cataliza la reducción de piruvato a lactato de forma reversible.
 Estructura de tetrámero de dos cadenas (H y M), cuya combinación da lugar a sus
cinco isoenzimas.
 Alteraciones de la LDH: aparecen en gran número de situaciones.
 Aplicaciones clínicas:
 Aumento en pacientes con necrosis hepática.
 Diagnóstico y pronóstico de enfermedades neoplásicas.
 Determinación de la actividad LDH: por métodos cinéticos.
 Identificación de isoenzimas mediante electroforesis.
 Valores normales: 230-460 U/l.
 Lactato deshidrogenasa (LDH)

La LDH tiene una estructura de tetrámero constituido por dos tipos

de cadenas, H (heart) y M (muscle), cuya combinación da lugar a
sus cinco isoenzimas con distinta presencia en los tejidos
 LDH 1 (H4), se encuentra en el corazón, la musculatura y los
eritrocitos.
 LDH 2 (H3M), en el sistema reticuloendotelial y en los leucocitos.
 LDH 3 (H2M2), en los pulmones.
 LDH 4 (HM3), en los riñones, la placenta y el páncreas.
 LDH 5 (M4), en el hígado y en los músculos esqueléticos
 Lactato deshidrogenasa (LDH)

 Muy inespecífica
 Un aumento de actividad de LDH total se registra en pacientes con necrosis hepática,
producida por agentes tóxicos, por metástasis o por infección aguda como la hepatitis
viral.
 Incrementos importantes de LDH sérica tienen utilidad en el diagnóstico y pronóstico
de determinadas enfermedades neoplásicas (leucemia linfoblástica, melanoma,
neoplasias de células germinales, etc.).
 Además, es muy útil en el seguimiento de la quimioterapia del cáncer, puesto que la
respuesta en la terapéutica se acompaña por una disminución del nivel sérico de LDH.
 Enzimas asociadas a patologías hepáticas- Otras enzimas para la
valoración hepática

Nucleotidasa (5-NT) y leucina aminopeptidasa (LAP):

 Su determinación tiene poca especificidad diagnóstica, pero aumenta la especificidad

diagnóstica de la fosfatasa alcalina.
 Un aumento de fosfatasa alcalina acompañado de aumento de 5-NT y LAP indica
alteración hepática.
Colinesterasa:
 Enzima sintetizada en el hígado.
 Útil en el estudio preoperatorio:
 Metaboliza la succinilcolina (relajante muscular), pero algunas variantes no lo hacen:
complicaciones.
 Determinación con/sin inhibidor competitivo para determinar la fracción de
colinesterasa normal y anormal.
 Colinesterasa:
 Succinilcolina y preoperatorio
 Número de dibucaína
 Para evitar estas complicaciones en los pacientes, se determina la actividad
colinesterasa tanto en presencia de nibucaína, un inhibidor competitivo, como
sin ella, y se calcula el número de dibucaína, ND

 Un valor del ND de 80-90 indica la presencia de formas normales de

colinesterasa (genes normales en homocigosis).
 Un valor del ND de 60-70 indica la presencia de formas anormales y
normales (genes en heterocigosis).
 Un valor del ND de 15-20 indica la presencia de formas anormales (genes en
homocigosis).
 Enzimas asociadas a patologías pancreáticas

Lipasa y amilasa
 La pancreatitis aguda es la inflamación del páncreas y del tejido peripancreático de
forma aguda.
 Si la lipasemia se multiplica por más de 3 o la amilasemia por más de 4,
tienen una alta sensibilidad y especificidad en la clínica de la pancreatitis
aguda.
 Diagnóstico y monitorización: determinación de lipasa y amilasa.
 La lipasa es más específica, concretamente si el origen es alcohólico.
 Causas más frecuentes de pancreatitis aguda:
 Obstrucción del colédoco por cálculos biliares.
 Consumo abusivo de alcohol.
 Enzimas asociadas a patologías pancreáticas

α-amilasa
 Enzima pancreática con actividad hidrolasa que rompe moléculas de glucógeno y
almidón para formar azúcares simples.
 Alteraciones de la α-amilasa:
 Elevación de los valores normales.
 En la pancreatitis aguda la α-amilasa se eleva al comienzo del proceso:
valores normales no excluyen el diagnóstico.
 Otras patologías que lo aumentan: cáncer de páncreas, cirrosis, etc.
 Determinación de la actividad α-amilasa.
 Más de 200 métodos analíticos que se agrupan en:
 Ensayos amiloclásticos: monitorización del almidón como sustrato.
 Ensayos sacarogénicos: oligosacáridos como sustrato y monitorización de
glucosa.
 Ensayos cromogénicos: sustratos con cromógeno, medida de la
absorbancia.
 Enzimas asociadas a patologías pancreáticas

Lipasa
 Hidrolizan los ésteres de glicerol de cadena larga.
 La lipasa pancreática necesita un cofactor y sales biliares para actuar.
 La determinación de valores elevados de actividad de la lipasa presenta una mayor
especificidad (96%) y sensibilidad (94%) para pancreatitis.
 Alteraciones de la lipasa:
 Aumento: mayor especificidad que la amilasa para el diagnóstico de pancreatitis
aguda.
 Disminución: enfermedades pancreáticas crónicas (fibrosis quística).
 Determinación de la lipasa: hidrólisis de triglicéridos.
 Métodos turbidimétricos: aclaramiento de la emulsión de triglicéridos.
 Medida de la disminución de la turbidez o de la luz dispersada.
 Métodos espectrofotométricos: la hidrólisis da lugar a un compuesto.
 La velocidad de formación del compuesto es proporcional a la concentración
catalítica de lipasa.
 Enzimas asociadas a patologías cardiacas y musculares

 Enzimas que pueden ver afectada su concentración en el infarto agudo de miocardio:

 Creatina quinasa total.
 Creatina quinasa MB.
 AST.
 LDH.
 Han sido desplazadas por troponina T (cTn)
 Enzimas asociadas a patologías cardiacas y musculares

Creatina quinasa total (CK)

 Enzima que se localiza preferentemente en la

musculatura estriada.
 Cuando los músculos se contraen, cataliza la
refosforilación de ADP para formar ATP (usando
fosfocreatina).
 Formada por dos cadenas de polipéptidos (B y M)
que se combinan para formar sus tres isoenzimas.
 Enzimas asociadas a patologías cardiacas y musculares

Creatina quinasa total (CK)

 Alteraciones de la CK total:
 Aumento de los valores normales.
 Sugiere lesiones en el corazón, el cerebro o los músculos esqueléticos.
 Causas del aumento: infarto agudo de miocardio, daño muscular,
procedimientos quirúrgicos, insuficiencia renal, hipo e hipertermia, hipo e
hipertiroidismo, intoxicación alcohólica, etc.
 Determinación de la actividad CK total:
 Cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato de la fosfocreatina al ADP.
 Los valores de referencia dependen de la masa muscular:
 Varían entre hombres y mujeres, con la edad, con la raza y la actividad física.
 V/N, aproximadamente:
 < 190 U/l (hombres)
 < 160 U/l (mujeres).
 Enzimas asociadas a patologías cardiacas y musculares

Creatina quinasa MB (CK-MB)

 Se encuentra principalmente en el tejido cardiaco:

 Representa el 15-20 % de la CK del tejido cardiaco.
 Alteraciones de la CK-MB:
 Aumento de la concentración.
 Se produce en las primeras 24 horas de una lesión miocárdica.
 Determinación de CK-MB.
 Dos variantes de ensayos disponibles:
 CK-MB masa: técnicas enzimoinmunológicas con anticuerpos monoclonales
específicos.
Se evitan interferencias por hemolisis.
 Actividad de CK-MB: métodos de inmunoinhibición de CK-M.
 Según la relación CK-MB/CK:
4-5 %: evidencia de daño muscular.
> 20 %: presencia de macro-CK-BB resistente a la inhibición.
 Otras enzimas

 Otras enzimas con interés diagnóstico son:

Fosfatasa ácida
 En la próstata, el bazo y muchas células.
 Cataliza la fosforilación en medio ácido.
 Isoenzima 1: niveles elevados en carcioma de próstata.
 Isoenzima 5: niveles elevados en enfermedades óseas.
Enzima convertidora de la angiotensina (ACE):
 En los capilares pulmonares. Se utiliza para:
 Diagnóstico de sarcoidosis pulmonar.
 Control en el tratamiento de la hipertensión y el fallo cardiaco.
Adenosindeaminasa (ADA):
 Aumenta en la cirrosis y la tuberculosis.
Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa:
 Deficiencia enzimática más común (asintomática o con anemia hemolítica).
 Actividad de renina plasmática:
 diagnóstico diferencial de síndrome de Conn, hiperaldosteronismo secundario y
enfermedad de Addison
 ECA (enzima conversora de angiotensina)

 Cataliza la transformación de angiotensina 1 en angiotensina 2.

 Utilidad: valorar la gravedad y actividad de la sarcoidosis (y también diagnóstico de
enfermedad de Gaucher)
Patrones de alteración enzimática
Infarto de miocardio:

 CK y su isoenzima MB: se eleva a las 4-6 horas y alcanza el pico máximo entre las
12-24 horas. Se normaliza sobre el tercer día.
 LDH e isoenzimas LDH1 y 2: se elevan más tarde (12-24 horas), alcanzando su
pico máximo al tercer día y puede durar 10 o más días
 AST (GOT): se eleva más tarde que la CK (6-8 horas) y alcanza el pico máximo a las
24-48 horas, normalizándose al quinto día.
 Patrones de alteración enzimática
Pancreatitis aguda:

 Lipasa y amilasa en suero: se elevan a las 6-8 horas y el pico máximo lo alcanza a
las 20-30 horas. Se normalizan entre 2-8 días.
 Amilasa en orina
 Patrones de alteración enzimática
Hepatitis víricas agudas:

 GPT, GOT: elevadas incluso 100 veces por encima de lo normal.

 Aumento mayor de GPT que de GOT
 Colestasis

 Aumenta la GGT y la ALP.

 También aumenta la 5´-N y la LAP
 Aumentarán ligeramente las transaminasas
 Alcoholismo

 Aumento de GGT
 Cirrosis

 Aumento moderado de transaminasas: más alta la GOT

 Si es de origen etílico: también aumenta la GGT
 Si el origen es biliar: aumenta la ALP
 Enfermedades musculares

 CPK
 Aldolasa
 LDH
 GOT
 La más específica es la CPK.
 Neoplasias

 Aumento de LDH
 Cáncer prostático: aumento ACP
 Metástasis hepáticas: aumento ALP y GGT
 Metástasis óseas: aumento ALP