Tecnicas de Precipitacion

PREPARACIÓN PARTE PRÁCTICA TECNICAS DE PRECIPITACIÓN
SUPUESTO PRÁCTICO 1
Se elabora un estudio relacionado con la inmunidad aportada por la leche materna en bebés lactantes de 12 meses.
El grupo control solo se alimentó con leche de fórmula. Se pincharon a los bebes y se les extrajo el suero y se
procedió a realizar la cuan ﬁcación de IgA por la técnica de inmunodifusión radial obteniéndose los siguientes
resultados
R1=0mm
R2=4,3 mm
R3=4,5 mm
Contesta a las siguientes preguntas
a. En que consiste la técnica de inmunodifusión radial. Explicar brevemente indicando que debe contener el gel
para la formación de precipitados. ¿Se trata de una muestra cualita va, cuan ta va o semicuan ta va?
Se fundamenta en la difusión libre en un gel preparado con un an cuerpo contra lo que se quieran detectar. Se
cargan las muestras en los pocillos que se quieren testar. La muestra difundirá de forma radial, y la formación de
inmunocomplejos en la zona de equivalencia generará un precipitado en forma de anillo. El diámetro será
proporcional al componente que difunde por el gel
b. Junto con las muestras problema (R) se cargaron unas can dades conocidas de IgA (C), y se midieron los
diámetros que quedaron registrados en la siguiente tabla. Explica brevemente para que se puede u lizar los
controles
aplicado a este supuesto prác co el gel se ha preparado con An -globulinaA. Se cargan las muestras en los pocillos
en este caso se cargan las muestras patron C1-C5 de concentración conocida (ver tabla). La muestra difundirá de
forma radial, y la formación de inmunocomplejos en la zona de equivalencia generará un precipitado en forma de
anillo. El diámetro será proporcional a la concentración de cada una de las muestras patron, así dispondríamos de
unas concentraciones y un diámetro que nos permi rían generar una recta patrón a través de la cual podríamos
extrapolar las concentraciones de las muestras problemas
c. En base a lo anterior, ¿cuál sería la concentración de las muestras problema? ¿De las muestras analizadas
cual correspondería a la muestra de bebes lactantes y cuál a los alimentados con leche de fórmula?
En relación a lo anterior los resultados serían los siguientes
R0: Correspondería a las muestras de los bebes alimentados con leche de fórmula, No se ha producido
precipitación por lo que estos bebes no enen IgA procedentes de la leche materna
R1 Corresponde a la muestra de unos de los bebes alimentado con leche materna. La concentración sería
cercana a 0,04mg/ml
R2 Muestra de suero procedente de un bebe alimentado con leche materna. La concentración sería de 0,05
dado que el diámetro coincide con la muestra patrón C5
SUPUESTO PRÁCTICO 2
Como hemos visto en la teoría y en la prác ca la Doble difusión o reacción de Ouchterlony es

En ella se enfrentan an genos y an cuerpos en un gel de agarosa, colocándolos en los pocillos circulares
adyacentes, para que difundan y formen líneas de precipitación entre ellos (zona de equivalencia).
A con nuación, se muestran posibles resultados. Explica cada una de las imágenes x
2.1 Explica cada una de las imágenes (S es el suero que con ene el an cuerpo, X e Y son los an genos )
A- Relación de iden dad los an genos de los pocillos comparten enen los mismos epítopos que son
reconocidos por los an cuerpos presente en el suero del paciente
B- No iden dad, el suero del paciente posee an cuerpos contra los dos an genos pero esos an genos no
comparten ningún epitopo
C- Relación de iden dad parcial Los an genos comparten algún epítopo común que es reconocido por el
an cuerpo. Se genera un espolón hacia el que ene menos epitopos reconocidos
2.2 En relación a lo anterior, ¿cuál de las muestras (1-6) presentan relación de iden dad total?
Las muestras dos y tres

2.3 En la siguiente imagen el poncillo central ene suero de conejo an -albúmina bovina (-BSA), ¿que
pocillos muestran relación de iden dad total, cuales iden dad parcial y cuales no iden dad?
La iden dad total sería contra la BSA y el

suero bobino.
La iden dad parcial sería contra el suero

del Carnero
No iden dad suero humano y de conelo
2.4 En un laboratorio forense se u liza Doble difusión o reacción de Ouchterlony para la determinar la
presencia o ausencia de determinadas sustancias de un posible sospechoso Explica la imágene (S es el
suero con an cuerpos contra determinadas drogas, M muestra del paciente, X es un control para una de las
drogas )
En este caso se nos presenta la muestra del paciente M donde se quiere
detectar si ha consumido determinadas drogas, por lo que se le pone en
contacto con un suero con an cuerpos contra diversas drogas. Las bandas de
precipitado muestran que en la muestra del paciente se detectan al menos
tres drogas. Se conﬁrmaría la droga X dado que se produce una reacción de
iden dad con la muestra del paciente. El precipitado en diferentes
posiciones podría indicar diferentes concentraciones de drogas mas
concentradas cuanto más cerca del suero se produzcan, o por una diferencia
en el peso molecular.
2.5 Aunque la técnica de Doble difusión o reacción de Ouchterlony es una técnica cualita va, (presencia
ausencia), pero también da información del pocillo que contenga el componente menos concentrado y/o de
mayor tamaño molecular En base a esto explica las imágenes que se muestran a con nuación
La parte cóncava de una reacción de iden dad muestra un mayor peso
molecular o una menor concentración. De tal forma que si miramos en
función de su peso molecular el an geno a tendría un mayor peso
molecular que el S y en relación a su concentración a tendría menos
concentración que S. Si comparamos S y b, el que tendría mayor
concentración sería b y si miramos el peso molecular sería S.
Se trata de una zona de iden dad, pero no se podría decir si total o parcial
debido que no se visualiza el punto de contacto de las dos precipitaciones. La
causa puede ser debida a una baja concentración de los tres componentes o
que la distancia entre los pocillos no es la adecuada

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PREPARACIÓN PARTE PRÁCTICA TECNICAS DE PRECIPITACIÓN

Contesta a las siguientes preguntas

Como hemos visto en la teoría y en la prác ca la Doble difusión o reacción de Ouchterlony es

Las muestras dos y tres

La iden dad total sería contra la BSA y el

La iden dad parcial sería contra el suero

No iden dad suero humano y de conelo

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