Responsables

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL

 López Jara Davis
SANTA Antonio

Escuela académica profesional de Biología en  Monzón Aparicio

Genaro Junior
Acuicultura
 Varas Solís
DEPARTAMENTO ACADÉMICO: BIOLOGÍA,
Teresita
MICROBIOLOGÍA Y BIOTECNOLOGÍA
 Sosa Pérez Deysi

Docente
Blgo. Mblgo. Eddy Espejo
Vargas

PRODUCTO I
Aislamiento e identificación de
coliformes en muestras de agua de
la bahía de Coishco en la zona del
Puente Shisho, Ancash - Perú
Aislamiento e identificación de coliformes en muestras de agua de la bahía de Coishco
en la zona del Puente Shisho, Ancash - Perú

Universidad Nacional del Santa

Escuela Profesional de Biología en Acuicultura
DEPARTAMENTO ACADÉMICO: Biología, microbiología y biotecnología
Asignatura: Microbiología acuática
Responsables
López Jara David Antonio
Monzón Aparicio Genaro Junior
Varas Solís Teresita
Sosa Pérez Deysi

Prof. Blgo. Mblgo. Eddy Espejo Vargas

Fecha de entrega: 30 de mayo 2024.
Nuevo Chimbote.
1 Introducción

La bahía de Coishco, situada en es un ecosistema costero de gran importancia tanto para la

biodiversidad marina como para las comunidades humanas que dependen de sus recursos. Sin

embargo, en las últimas décadas, ha experimentado un crecimiento significativo de la

actividad industrial, urbana y agrícola en sus alrededores, lo que ha generado preocupaciones

sobre la calidad ambiental de sus aguas.

La contaminación en la bahía de Coishco es un problema multifacético que abarca diversas

fuentes y tipos de contaminantes. Entre los principales factores contribuyentes se incluyen el

vertido de aguas residuales urbanas, la escorrentía agrícola que transporta pesticidas y

fertilizantes, así como las descargas industriales. Estas actividades antropogénicas han

introducido una amplia gama de contaminantes químicos y biológicos en el ecosistema

marino, comprometiendo la calidad del agua y amenazando la salud de los organismos

acuáticos

Entre los contaminantes de particular interés se encuentran los coliformes, un grupo de

bacterias indicadoras de contaminación fecal que pueden indicar la presencia de

microorganismos patógenos y representar un riesgo para la salud pública.

La presencia de coliformes en la Bahía de Coishco puede estar asociada a diversas fuentes de

contaminación, incluyendo descargas de aguas residuales urbanas y agrícolas, escorrentía de

tierras circundantes, así como actividades industriales y portuarias. Estas fuentes pueden

introducir una variedad de contaminantes orgánicos e inorgánicos en el ecosistema marino,

afectando la calidad del agua y la vida acuática.

El aislamiento de coliformes se lleva a cabo mediante técnicas microbiológicas específicas

que implican el uso de medios de cultivo selectivos. Se preparan medios de cultivo

específicos diseñados para favorecer el crecimiento de coliformes y suprimir el crecimiento

de otros microorganismos no deseados. Los medios selectivos comúnmente utilizados

incluyen el Caldo Lactosado Bilis Verde Brillante (LBVB) o el Caldo Lactosado con Caldo

Bile Verde MUG (LCBVM).

En esta investigación, se llevará a cabo un estudio exhaustivo sobre la contaminación en la

bahía de Coischo, centrándose específicamente en la presencia y distribución de coliformes

en sus aguas. Se utilizarán técnicas de muestreo, aislamiento e identificación microbiológica

para evaluar el grado de contaminación microbiana y su posible impacto en el ecosistema

marino y la salud pública.

2 Objetivos

2.1 Objetivo general

Aislar coliformes totales y coliformes fecales para determinar su presencia o ausencia en

aguas de la Bahía de Coishco, específicamente entre la desembocadura del Puente Shisho y el

muelle Antiguo, Ancash - Perú.

2.2 Objetivos específicos

Recolectar muestras de agua de manera sistemática en varios puntos estratégicos de la

Bahía de Coishco, con énfasis en la zona del Puente Shisho, para representar

adecuadamente la calidad del agua en el área de estudio.

Realizar el aislamiento de coliformes presentes en las muestras de agua utilizando

técnicas microbiológicas estándar, incluyendo la inoculación en medios de cultivo

selectivos y la incubación a temperatura óptima

3 Justificación

La Bahía de Coishco es un recurso natural vital para la región, tanto en términos de su biodiversidad

marina como de su relevancia económica y cultural para las comunidades locales. Evaluar la

presencia de coliformes en el agua es fundamental para comprender su calidad y salud ambiental,

proporcionando información esencial para la toma de decisiones en la gestión de los recursos

hídricos.

Los coliformes son indicadores de contaminación fecal y su presencia en el agua puede indicar la

posible presencia de patógenos transmitidos por agua que representan un riesgo para la salud

pública, como bacterias patógenas, virus y parásitos. Identificar y cuantificar los coliformes en la

Bahía de Coishco es crucial para evaluar el riesgo de enfermedades transmitidas por el agua y tomar

medidas preventivas para proteger la salud de la población local y los visitantes.

4 Antecedentes

Determinación de Escherichia coli enteropatógena (ECEP) en mar del Circuito de Playas de la

Costa Verde

Autores: Verónica Patricia Benvenutto Vargas

La contaminación de los cuerpos naturales de agua es una problemática, principalmente en los países de

América Latina y el Caribe, relacionada con la descarga incontrolada de aguas residuales domésticas sin

tratamiento, las cuales contaminan los recursos hídricos superficiales, subterráneos y las zonas costeras,

generando un deterioro de los ecosistemas y causando numerosas enfermedades, tales como el cólera, la

amebiasis, la hepatitis, la fiebre tifoidea, enterocolitis, entre otras.

Objetivo: Determinar la presencia de Escherichia coli enteropatógena (ECEP) en agua de mar de 15

playas del circuito de playas de la Costa Verde.

Materiales y métodos: Se tomó 50 mL de agua de mar, previa homogenización de la muestra

recolectada y se añadió en 150 mL de agua peptonada marca Merck, se incubó por 24 horas a 35°C ±

1°C para la multiplicación y reparación de los microorganismos presentes.

Después de 24 horas de incubación, se procedió al aislamiento de las bacterias coliformes en agar

selectivo y diferencial Mc Conkey marca Merck, para ello se añadió 50µL de la muestra incubada sobre

la superficie del agar Mc Conkey solidificado y se distribuyó con espátula Drigalski por el Método de

Diseminación en Superficie de Agar; se incubó durante 24 horas a 35°C ± 1°C

Después del desarrollo bacteriano en agar Mc Conkey, se procedió a la resiembra en agar EMB y se

incubó durante 24 horas a una temperatura de 35°C ± 1°C para el desarrollo de las bacterias

correspondientes.La determinación presuntiva del aislamiento de Escherichia coli se realizó

seleccionando las colonias que presentaron las siguientes características en el agar EMB: Colonias

grandes, color negro azulado y brillo verde metálico. Estas colonias fueron seleccionadas y conservadas

en cepario para los análisis confirmatorios mediante Identificación Bioquímica API 20E BioMérieux y

Prueba Serológica con el Kit PROBAC

Resultados: Después de transportar las muestras al laboratorio y realizar su pre enriquecimiento con

agua peptonada, se realizó la prueba de proliferación de enterobacterias en agar selectivo Mc Conkey.

Como resultado de esta prueba se obtuvieron dos tipos de colonias, colonias blanquecinas y colonias de

color rojo grosella. Las colonias blanquecinas indican que no hay consumo de lactosa, por lo tanto, el

indicador rojo neutro no se activó; por lo contrario, las colonias rojizas indican el consumo de lactosa del

agar selectivo Mc Conkey, por lo tanto se presume que estas colonias son enterobacterias.; aislaron 650

colonias de color rojo grosella y de bordes lisos del agar Mc Conkey y se sembraron por método de

estría en Agar EMB a fin de identificar las colonias características de Escherichia coli. Después de 24

horas de solo 12 (80%) playas tuvieron crecimiento de colonias características de Escherichia coli, las
cuales fueron: Pampilla II, Pampilla I, Miraflores, Makaha, Redondo II, Redondo I, La Estrella, Las

Cascadas, Barranquito, Los Pavos, Los Yuyos y Las Sombrillas.

A fin de tener un mayor aislamiento de Escherichia coli, se utilizó el medio de cultivo cromogénico

TBX. Las colonias aisladas en cepario fueron sembradas con asa de siembra por método de estrías en el

medio y fue incubado a 35°C ± 1°C durante 24 horas

Conclusión: :Se determinó la presencia de Escherichia coli enteropatógena en el 60% (9) de las playas

muestreadas en el Circuito de Playas de la Costa Verde.

Se identificó a Escherichia coli mediante prueba bioquímica rápida API 20E en el 90% (90 de 100) de

las cepas analizadas. Asimismo, estas muestras positivas pertenecen al 80% (12) de las playas

muestreadas.

“AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE COLIFORMES TOTALES Y

COLIFORMES FECALES, DE AGUAS DE LA QUEBRADA CORRIENTILLO DEL

CENTRO POBLADO DE ZUNGAROCOCHA (IQUITOS, PERÚ)”

Autores: LUZ MARICRUZ VARGAS PEÑA

El agua es uno de los elementos más valiosos que nos brinda la naturaleza y es

imprescindible para la vida y el bienestar del hombre y de su calidad depende el estado de

salud de los que la consumen. Es importante entonces, que el agua que consume el hombre,

reúna las condiciones sanitarias óptimas que garanticen su buen estado de salud

Objetivo: Aislar e Identificar coliformes totales y coliformes fecales para determinar su

presencia o ausencia en aguas de la quebrada Corrientillo, del centro poblado de

Zungarococha, de acuerdo a los valores de referencia establecidos en la Ley General de

aguas; para poder orientar a la población de su uso adecuado.

Materiales y Metodos:

Muestra: A través de un muestreo aleatorio simple se obtuvo 100 muestras asumidas de 20

zonas de muestreo (5 muestras de cada zona de muestreo).

- Las muestras de agua de la quebrada de Corrientillo se realizaron sumergiendo un

frasco de vidrio estéril, de 250 ml. De capacidad, aproximadamente 15 cm. Debajo de

la superficie del agua, colocando la boca del frasco en sentido contrario de la

corriente, para evitar la contaminación de la muestra con gérmenes procedentes de la

mano y de la superficie del agua en un volumen de 150 ml, aproximadamente.

- Las muestras fueron transportadas en cajas térmicas con paquetes de hielo, y con un

termómetro en el interior para controlar la temperatura que estuvo entre 4°C a 10°C.

Posteriormente se transportó al Laboratorio de Microbiología y Parasitología de la

Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de la Amazonía para su

respectivo procesamiento en un tiempo no mayor de 6 horas

- Fase Presuntiva: Se utilizó inóculos de 10, 1 y 0.1 ml de la muestra original, en serie

de tres tubos, cada tubo contenía en su interior una campana de Durham invertida y 10

ml. De medio de cultivo. Para el inóculo de 10 ml, se empleó tres tubos con Caldo

Lauril Sulfato a doble concentración; para los inóculos de 1 y 0,1., se utilizó seis

tubos con el mismo medio de cultivo pero a concentración normal (tres tubos con

1ml. De inoculo y tres con 0,1., respectivamente). Se incubó a 37ºC durante 24 -48

horas, y se consideró como tubo positivo aquel que presento formación de gas en el

interior de la campana de Durham, en cualquier periodo de tiempo dentro de las 48

horas. (Desplazamiento del medio en la campana de Durham).

- Fase confirmativa: Confirmación de Coliformes Totales Para confirmar la presencia

de coliformes totales, se pasó una azada a partir de los tubos con formación de gas de

la fase presuntiva, a tubos que contenían en su interior campanas de Durham

 invertidas y 1 ml, de Caldo Brila (Verde Brillante – Bilis – Lactosa). (APHA, 1998).

Los tubos fueron incubados a 37ºC durante 24 – 48 horas, después del tiempo de

incubación, se anotó el número de tubos que presentaron formación de gas en este

medio de cultivo para calcular el número de coliformes totales por 100 ml., utilizando

la tabla del NMP.

- Confirmación de coliformes fecales Para la confirmación de coliformes fecales, se

pasó una azada a partir de aquellos tubos positivos en la fase presuntiva; a tubos que

contengan en su interior campanas de Durham invertidas y 10 ml, de Caldo E, coli. Se

incubó a 44, 5ºC durante 24 – 48 horas en baño maría, posteriormente a partir de los

tubos que resultaron positivos, se procedió a determinar el número de coliformes

fecales por 100 ml.; con la ayuda de la tabla del NMP. (Anexo 05). Todos los

resultados se compararán con la Norma de los Estándares Nacionales de Calidad

Ambiental para Agua

Resultados

Las muestras presentaron valores de 845/100ml para coliformes totales y 616/100ml para

coliformes fecales.

Conclusiones

El agua de la Quebrada Corrientillo del Centro Poblado de Zungarococha se encuentra

contaminado con bacterias coliformes totales y coliformes fecales, siendo no apto para el

consumo humano y uso recreativos

(Susana A) Manuela de prácticas de microbiología. DETECCION Y RECUENTO DE

ENTEROBACTERIACEAE LACTOSA (COLIFORMES)

Método: Para la detección de coliformes utilizaron un caldo lactosado con sales biliares y verde

brillante, que es un colorante selectivo. Este medio, contenido en tubos, lleva una campana Durham para

la recogida de los gases desprendidos.

Resultado: La lectura consiste en observar si se ha producido desprendimiento de gas, por lo menos en

un 20 o/o del volumen de la campana de Durham, como consecuencia de la fermentación de la lactosa,

tras incubación de los tubos a 31 oC durante 24-48 h. En caso afirmativo, el resultado es positivo. Con

los resultados obtenidos se acude a las Tablas del Número Más Probable (NMP). Estos resultados se

expresarán como Número de Coliformes/gramo o mililitro de alimento.

DEECCION Y RECUENTO DE E. COLI

Método: Posteriormente Se siembran todos los tubos sobre agar Levine, de tal forma que se obtengan

colonias aisladas.

Resultado: Las colonias de E. coli en agar Levine presentan un centro azul-negro con brillo metálico

verdoso cuando se observan con luz refleja. A veces este brillo no se manifiesta

5 Marco teórico

5.1 Bacterias coliformes

Bajo este término se agrupa una serie de especies bacterianas que pertenecen en realidad a la

familia de Enterobacteriaceae y que comparten algunas características bioquímicas. Son

bacilos gramnegativos, aerobios y anaerobios facultativos, no esporulados.

Incluyen entre otras las clases: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Yersinia,

Serratia. Se caracterizan por ser barras anaerobias gramnegativas que no forman esporas,

definidas por su capacidad para fermentar la lactosa para producir ácido y / o dióxido de

carbono gaseoso.

5.2 Taxonomía

Reino: Bacteria
Filo: Proteo bacteria
Clase: Gamma Proteobacteria
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
Género:
Escherichia
Klebsiella
Enterobacter
Citrobacter

5.3 Coliformes totales

No todos los coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas

para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminación. Se

distinguen, por lo tanto, los coliformes totales que comprende la totalidad del grupo y los

coliformes fecales aquellos de origen intestinal.

Desde el punto de vista de la salud pública esta diferenciación es importante puesto que

permite asegurar con alto grado de certeza que la contaminación que presenta el agua es de

origen fecal.

5.4 Coliformes fecales

Los coliformes fecales se definen como el grupo de organismos coliformes que

pueden fermentar la lactosa a 44°-45°C, mayoritariamente comprenden el

género Escherichia. Son responsables de gastroenteritis, la infección puede ser adquirida por

el consumo de alimentos tales como vegetales frescos y agua. La dosis infectiva para adultos

ha sido calculada en aproximadamente 108 unidades formadoras de colonias, aunque en

jóvenes y ancianos la dosis infectiva puede ser más baja.

5.5 Coliformes termo tolerantes

Las bacterias coliformes termo tolerantes forman parte del total del grupo Coliforme. Son

definidas como bacilos gram-negativos, no esporulados que fermentan la lactosa con

producción de ácido y gas a 44.5 °C +/− 0.2 °C dentro de las 24 +/− 2 horas. La mayor

especie en el grupo de coliforme fecal es el Escherichia coli.12

La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de

agua puede estar contaminada con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposición.

Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa

superficial del agua o en los sedimentos del fondo.

5.6 Efluentes de industrias pesqueras

Los efluentes de las fábricas de pescado son los desechos líquidos resultantes de las

operaciones industriales relacionadas con el procesamiento y la producción de productos

derivados del pescado, como filetes, conservas, harina de pescado, entre otros. Estos

efluentes suelen contener una variedad de compuestos orgánicos e inorgánicos, incluyendo

restos de pescado, aceites y grasas, proteínas, compuestos nitrogenados y fosfatados, así

como productos químicos utilizados en los procesos de limpieza y desinfección de equipos y

instalaciones
6 Materiales

Medios de Materiales de Materiales de

Equipos Otros
cultivo Vidrio escritorio
Caldo Lauril Tubos de ensayo
Papel bond
Sulfato. Merck 16 x 150 mm
Tubos de ensayo Marcadores de
Caldo Brila. Merc Paquetes fríos
25 x 200 mm vidrio
Caldo EC (Caldo Campanas de Asas
Estufa Heraus Etiquetas
E, coli). Merck Durham Bacteriológicas
Baño María Matraz de 250 y
Gradillas
marca Thelco 500 ml.
Pipetas de 5 y 10
ml
Maldil de
Probeta de 100 ml
laboratorio
Termómetro Algodón
Alcohol de
Vaso precipitado
96ºC
Frascos colectores
de boca ancha y Encendedor
tapa rosca
Mechero de
Agua destilada
alcohol
Placas petri Hilo pabilo
Mandil
Lejía y
detergente

7 Metodología

7.1 Selección del área o ámbito de estudio

Los puntos de muestreo se escogieron por su accesibilidad y por la salud publica ya que

algunos chicos tiende a bañarse en las orillas de estas aguas, pudiéndoles causar

enfermedades.
7.2 Procedimiento para la recolección de la muestra.

Se transportara las muestras en envases de vidrio muy bien lavados a temperatura ambiente.

7.3 Análisis Bacteriológico

7.3.1 Fase Presuntiva

Se utilizaran diferentes volúmenes de la muestra original (10 ml, 5ml) como inóculo

Se prepararan dos tubos para cada inóculo.

Cada tubo contendrá 10 ml de medio de cultivo (en este caso, Caldo Lauril Sulfato).

7.4 Inoculación e incubación

Cada tubo se inoculara con el volumen correspondiente de la muestra original.

Se coloca una campana de Durham (se puede utilizar las puntas de las ampollas ya utilizadas

y muy bien lavadas) invertida dentro de cada tubo. Este dispositivo se utilizara para detectar

la producción de gas por parte de los microorganismos. Si se forma gas, este se acumula

dentro de la campana, desplazando el medio de cultivo.

Los tubos se incuban a 37ºC durante un período de 48 horas.

7.5 Interpretación de los resultados

Pasado el período de incubación, se observara cada tubo.

Se considera que un tubo es positivo si se observa desplazamiento del medio en la campana

de Durham, lo cual indicara la formación de gas por parte de los microorganismos presentes

en la muestra. El desplazamiento del medio puede ocurrir en cualquier momento dentro de las

48 horas de incubación.

7.5.1 Fase confirmativa de coliformes totales

Para confirmar la presencia de coliformes totales, se pasó una azada a partir de los tubos con

formación de gas de la fase presuntiva, a tubos que contenían en su interior campanas de

Durham invertidas y 1 ml, de Caldo Brila (Verde Brillante – Bilis – Lactosa). (APHA, 1998).

Los tubos fueron incubados a 37ºC durante 48 horas, después del tiempo de incubación, se

anotó el número de tubos que presentaron formación de gas en este medio de cultivo para

calcular el número de coliformes totales por 100 ml., utilizando la tabla del NMP. (Mossel y

Moreno, 1985).

7.5.2 Fase confirmativa de coliformes fecales

Para la confirmación de coliformes fecales, se pasó una azada a partir de aquellos tubos

positivos en la fase presuntiva; a tubos que contengan en su interior campanas de Durham

invertidas y 10 ml, de Caldo E, coli. Se incubó a 44, 5ºC durante 48 horas en baño maría,

posteriormente a partir de los tubos que resultaron positivos, se procedió a determinar el

número de coliformes fecales por 100 ml.; con la ayuda de la tabla del NMP. Todos los

resultados se compararán con la Norma de los Estándares Nacionales de Calidad Ambiental

para Agua El Peruano (2008).

8 Referencias

Scielo: http://www.scielo.org.pe/pdf/rins/v23n2/a06v23n2.pdf
https://scholar.google.es/scholar?hl=es&as_sdt=0%2C5&q=Determinaci
%C3%B3n+de+Escherichia+coli+enteropat%C3%B3gena+%28ECEP
%29+en+agua+de+mar+del+Circuito+de+Playas+de+la+Costa+Verde.&btnG=#d=gs_qabs&t=
1717045000057&u=%23p%3DpULzuaZDdy

Repositorio Institucional Digital:

http://repositorio.unapiquitos.edu.pe/handle/20.500.12737/4691
RCOS, P. M; AVILA, N. S; ESTUPIÑAN. T. S; GÓMEZ, P. A; 2005. Indicadores Microbiológicos de
Contaminación de las Fuentes de Agua.

División de Investigaciones, Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca. Colombia.

ANGELES, C. J. 2000. Evaluación de la Calidad Bacteriológica del Agua Potable de la Ciudad de

Iquitos. Tesis para Optar el Título Profesional de Biólogo. Universidad Nacional de la

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BARDALES, G. J. 1979. Control Bacteriológico de Aguas provenientes de pozos del pueblo joven
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CLARET, M,; URRUTIA, R.; ABARZUA, M.; PÉREZ, C.; PALACIOS, M.; 2003. Estudio de la
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