Pre Informe UV-Vis Curva de Calibración
Pre Informe UV-Vis Curva de Calibración
Pre Informe UV-Vis Curva de Calibración
Para el análisis de muestra moleculares se usan los mismos principios de emisión y absorción
atómica, cada molécula absorbe ciertas longitudes de onda bien definidas que dan a lugar al
espectro de la molécula. Su método de análisis se realiza por medio de espectroscopio UV-Vis, el
cual consta de un haz de luz monocromática que incide sobre la muestra en un recipiente
transparente, de manera que, al pasar por la muestra, se hace una relación de la intensidad de luz
saliente con la entrante, la diferencia será la luz absorbida por la muestra y será un indicador de la
cantidad de sustancia presente (Douglas A. Skoog, 2008). Cuantitativamente, se halla esta
concentración por la ley de Beer, que se establece como:
𝐴 = 𝜀𝑏𝑐
Donde 𝑐 es el camino óptico o grosor de la cubeta donde se deposita la muestra, 𝑏 es la
concentración de la muestra y 𝜀 es una constante conocida como absortividad molar. Es conocido,
que para valores bajos de concentración (del orden de 10−4M) esta relación exhibe un
comportamiento lineal entre la absortividad y la concentración cuando 𝜀 es una constante. Gracias
a esto, es posible realizar una curva de calibración del método. Como se está trabajando con datos
experimentales, los datos obtenidos están sujetos a fuentes de error que no permiten obtener en
su mayoría una relación perfectamente lineal, para estos casos es necesario usar la teoría de
regresión lineal.
En principio se hacen unos supuestos para el modelo, de manera que no se obtenga poca fiabilidad
y sea simple el método. El primer supuesto plantea que sólo se consideran los errores en la
respuesta del equipo o la absorbancia obtenida y no en las concentraciones de la solución. Este tipo
de error está bien definido estadísticamente y puede calcularse su valor, lo que da una estimación
de la incertidumbre en la respuesta y se puedan hallar otras magnitudes como el LOQ y LOD.
Para la práctica se utilizará el método de adición de estándar, que consiste en diluir al mismo
volumen distintas cantidades de analito o solución patrón y después leer sus absorbancias. Estos
datos se grafican según la ley de Beer, de donde se obtiene la curva de calibración del método
METODOLOGÍA
Primero se coloca una cantidad de una muestra comercial de azul de metileno en un balón aforado
y se procede a aforar, obteniendo una solución de concentración 10 milimolar. Seguidamente se
hacen 5 diluciones de la muestra madre a concentraciones diferentes en balones aforados de 20
mL, la cantidad de volumen extraído de la solución madre se hallará con la ecuación de dilución y su
volumen se sacará con micropipetas. Posteriormente se aforan las alícuotas y se llevan a la sala de
equipo instrumental. Se toma una cubeta de cuarzo con agua y se coloca en el espectrofotómetro
para medir la señal del blanco. Luego en esa cubeta se coloca respectivamente una muestra de cada
balón aforado donde están las alícuotas y se toman su lectura en el espectroscopio por triplicado.
Los datos obtenidos se irán recolectando en una hoja de Excel para su posterior análisis.
BIBLIOGRAFIA