Practica 05 Dna

PRACTICA 05:
EXTRACCIÓN DE ADN
La extracción de ADN es una técnica fundamental en el campo de la
bioquímica y la biología molecular, ya que permite aislar y purificar el
material genético de organismos vivos. Esta práctica de laboratorio se
centra en la extracción de ADN de vegetales, proporcionando una
comprensión práctica y teórica de los métodos empleados para obtener
ADN. En el contexto agrícola, la extracción de ADN vegetal es crucial para
el desarrollo de cultivos mejorados mediante técnicas de ingeniería
genética y selección asistida por marcadores moleculares. Estas técnicas
permiten identificar y seleccionar características deseables, como
resistencia a enfermedades, tolerancia a condiciones ambientales adversas
y mejoras en el rendimiento de los cultivos. Además, el análisis de ADN
extraído de plantas facilita estudios de biodiversidad y conservación, así
como la identificación de especies y variedades a nivel genético.
El proceso de extracción de ADN implica una serie de pasos
cuidadosamente diseñados para romper las membranas celulares y
nucleares, liberar el ADN y eliminar contaminantes como proteínas, lípidos
y otras moléculas no deseadas. Este procedimiento requiere el uso de
reactivos específicos y condiciones controladas para garantizar la
integridad y pureza del ADN obtenido.
Dependiendo del tipo de célula que se esté estudiando, el aislamiento de
ácidos nucleicos requiere romper la membrana y la pared celular utilizando
métodos físicos, químicos o enzimáticos para liberar las moléculas de ADN
al medio extracelular. Luego, se purifican los ácidos nucleicos extrayendo
las proteínas y los lípidos con solventes orgánicos, y finalmente, se
recuperan mediante precipitación con alcohol (isopropanol o etanol).
OBJETIVOS:
• Aplicar técnicas sencillas de extracción de ADN
• Observar la estructura fribilar del ADN
• Adquirir habilidades prácticas en la manipulación de ADN
FUNDAMENTOS:
La extracción de ADN vegetal es un proceso bioquímico esencial que

permite obtener material genético puro y de alta calidad para diversos
estudios moleculares. Este proceso implica varias etapas clave, desde la
ruptura de las células vegetales hasta la purificación del ADN. A
continuación, se describen los pasos principales y las diferentes técnicas
empleadas en la extracción de ADN vegetal, que van desde métodos simples
utilizando detergentes caseros hasta técnicas más avanzadas como la
extracción con CTAB.
1
1. Ruptura de Células Vegetales: El primer paso en la extracción de
ADN vegetal es la ruptura de las células vegetales para liberar el contenido
intracelular, incluyendo el ADN. Este proceso puede lograrse mediante
varios métodos:
Métodos Físicos: La molienda de tejidos vegetales en nitrógeno líquido
usando un mortero y una mano de mortero es un método común. El
nitrógeno líquido congela las células, facilitando su ruptura mecánica.
Métodos Químicos: Se pueden emplear detergentes para disolver las
membranas celulares y liberar el ADN. Los detergentes caseros, como el
detergente para platos, pueden utilizarse en métodos sencillos. Estos
detergentes ayudan a romper las membranas lipídicas y liberar el ADN en
solución.
2. Lisis Celular y Desnuclearización:
Uso de Detergentes Caseros: En métodos caseros, una mezcla de
detergente, sal y agua se utiliza para lisar las células. El detergente rompe
las membranas celulares y nucleares, mientras que la sal ayuda a
desestabilizar las proteínas que pueden estar unidas al ADN.
Buffer de Lisis: En métodos más avanzados, se utiliza un buffer de lisis
específico que contiene detergentes más potentes como el SDS (dodecil
sulfato sódico), que ayuda a desnaturalizar las proteínas y solubilizar los
lípidos.
3. Eliminación de Contaminantes:
Tratamiento con Solventes Orgánicos: Para purificar el ADN, se eliminan
las proteínas y los lípidos utilizando solventes orgánicos como fenol-
cloroformo. Este tratamiento separa el ADN en una fase acuosa, mientras
que las proteínas y los lípidos se concentran en la fase orgánica o en la
interfase.
Precipitación de ADN: Una vez que el ADN está en la fase acuosa, se
precipita usando alcoholes como isopropanol o etanol. El alcohol provoca
la deshidratación del ADN, haciéndolo insoluble y permitiendo su
recuperación mediante centrifugación.
4. Técnicas Avanzadas: Extracción con CTAB
La extracción con CTAB (bromuro de cetiltrimetilamonio) es una técnica
avanzada que se utiliza para obtener ADN de alta pureza, especialmente
útil para plantas con altos contenidos de polifenoles y polisacáridos, sin
embargo es una técnica mas larga que las anteriores.
Lisis Celular con CTAB: El CTAB es un detergente catiónico que precipita
los polisacáridos y otros contaminantes, permitiendo la purificación del
ADN. En esta técnica, se utiliza un buffer de lisis que contiene CTAB, junto
con sal y otros componentes que facilitan la disolución de las membranas
celulares y nucleares.
Purificación con Solventes Orgánicos: Al igual que en otros métodos, se
utiliza una fase de extracción con fenol-cloroformo para eliminar proteínas
y lípidos.
Precipitación y Lavado del ADN: El ADN se precipita con isopropanol o
etanol, y se lava con etanol al 70% para eliminar cualquier residuo de sales
y solventes.
2
MATERIAL Y MÉTODOS
• Muestras vegetales. (fresas y hojas de espinaca).
• Zumo de piña.
• Cucharillas o baguetas
• Agua mineral.
• Sal común. (NaCl).
• Bolsas de plástico zip / batidora.
• Detergente líquido.
• Papel filtro de baja densidad
• Vasos de precipitado.
• Alcohol 96º frío
• Buffer de extracción de ADN (8.8 g de cloruro de sodio, 44 g de
citrato de sodio disueltos en 1 litro de agua destilada)
• SDS (Dodecil sulfato de sodio)al 10%
• Beakers
• Morteros
Experimento 1: Extracción de ADN de fresas

Moler las fresas en mortero y añadir un poco de sal, seguir moliendo
hasta obtener una papilla de fresas.
Colar con el papel filtro sobre un vaso de precipitado.
Añadir 1 cucharada de detergente liquido al filtrado y remover
suavemente 30 segundos.
Dejar reposar 10 minutos la mezcla.
Añadir alcohol de 96° con mucho cuidado, dejándolo resbalar por las
paredes para que forme una capa sobre el filtrado. Dejar reposar 10
minutos. Éste crea una capa por encima del agua, de tal forma que el ADN
es capaz de flotar entre las dos capas.
En caso de que el ADN de la muestra vegetal no se pueda apreciar muy
claramente. Agitar el tubo un poco para poderlo apreciarlo mejor.
Experimento 2: Extracción de ADN de espinacas

Cortar aproximadamente 1 g de tejido vegetal fresco (por ejemplo hojas
de espinaca) en trozos pequeños.
Colocar en un mortero limpio y agregue 2-3 ml de buffer de extracción de
ADN.
Triturar el tejido con el mortero y el pistilo hasta obtener una suspensión
homogénea.
Transferir la suspensión a un beaker limpio.
Agregar 1-2 ml de SDS al beaker y mezclar suavemente.
Calentar la muestra a fuego lento (sin hervir) durante 10-20 minutos para
desnaturalizar las proteínas y romper las membranas celulares. Continuar
agitando suavemente.
Dejar enfriar a temperatura ambiente después de la incubación.
3
A medida que la muestra se enfrie, se verá un precipitado blanco, que es
el ADN.
Elabore un flujograma con los pasos a seguir para la extracción
de ADN y presente sus resultados.
BIBLIOGRAFÍA
• Lehninger. (2004). Principios de Bioquimica. 4ta ed. Nelson y Cox.M Editorial Omega
• Correa-Salgado, M. Herrera-Feijo, R. Ruiz-Sánchez, C & Guaman-Rivera, S. (2024).
Fundamentos de Bioquímica vegetal.Ed. Grupo AEA.
• Ologhono, A.; Ogunrinde, S. &Mundi, N. (2018). Introduction to agricultural biochemistry
National. Ed. National Open University of Nigeria
• Esteban, R., Marcos-Merino, J. M. y Ochoa de Alda, J. A. G. (2019). Extracción de ADN
con material cotidiano: diseño, implementación y validación de una intervención
activa interdisciplinar. Educación Química, 30(1), 42-57.
CONCLUSIONES
Extraiga tres conclusiones de la práctica.
1.
2.
3.
CUESTIONARIO
En base a lo tratado en la práctica, la información brindada e información
que Ud. Consulte responda las siguientes preguntas:
1. ¿Cómo afecta la presencia de compuestos fenólicos y polisacáridos
en las plantas a la calidad del ADN extraído?
2. ¿Qué pasos específicos se deben seguir para asegurar la pureza del

ADN vegetal durante el proceso de extracción, y cómo se pueden
evaluar los resultados?
3. ¿Qué papel juegan los solventes orgánicos en la purificación del ADN

vegetal y cuáles son los solventes más comúnmente utilizados?
4. Cual fue el objeto de utilizar jugo de piña en la práctica?

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PRACTICA 05:

La extracción de ADN vegetal es un proceso bioquímico esencial que

Experimento 1: Extracción de ADN de fresas

Experimento 2: Extracción de ADN de espinacas

2. ¿Qué pasos específicos se deben seguir para asegurar la pureza del

3. ¿Qué papel juegan los solventes orgánicos en la purificación del ADN

4. Cual fue el objeto de utilizar jugo de piña en la práctica?

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