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    INGENIERÍA BIOMÉDICA

    LABORATORIO DE BIOLOGÍA ESTRUCTURAL

    Practica de extracción de ADN de Fresa

    1. Fundamentos Teóricos

    El ADN o ácido desoxirribonucleico, es el material hereditario en humanos y casi todos los demás organismos.
    Hay diferencias obvias entre plantas y animales, pero a nivel químico las células de todas las plantas y todos
    los animales contienen ADN de doble hélice, y los mismos cuatro bloques de construcción químicos llamados
    nucleótidos. Lo que hace que estas plantas y animales sean diferentes son cómo se organizan estos cuatro
    nucleótidos en el ADN. Es su secuencia la que determina qué proteínas se producen, y la información que
    codifican decide el destino del organismo si producir escamas u hojas; piernas o un tallo.

    Para obtener un ADN de una célula, los científicos generalmente utilizan kits de
    extracción de ADN disponibles de las compañías de biotecnología. Para la extracción
    de ADN, el detergente se usa para lisar la célula de modo que el ADN se libere en la
    solución. Luego se agrega alcohol para hacer que el ADN precipite. Este es un
    protocolo simple y efectivo para la extracción de ADN. Las fresas se eligen para este
    experimento en particular porque son una excelente fuente para extraer ADN porque
    son fáciles de macerar y contienen enzimas llamadas pectinasas y celulasas que
    ayudan a romper las paredes celulares y de esta manera liberar el contenido del
    núcleo en donde se encuentra el ADN. Además, la célula de fresa tiene ocho copias
    del genoma, y sería más fácil extraer el ADN debido a la cantidad considerable que
    contiene por célula, mientras que la mayoría de los organismos solo tendrían una
    copia del genoma por célula. Figura 1. ADN de Fresa
    precipitado.

    Champú o jabón de lavar platos: Ayuda a disolver la membrana celular, la cuál es una membrana lipídica.

    Cloruro de Sodio: Ayuda a remover las proteínas que están unidas al ADN. Además, ayuda a mantener las
    proteínas disueltas en la fase acuosa para que no precipiten junto con el ADN.

    Etanol o isopropanol: Hace que el ADN precipite. Cuando el ADN sale de la solución, tiende a agruparse,
    haciéndolo visible. Los largos hilos de ADN se envolverán alrededor del agitador o se transferirán a la pipeta
    cuando enrollado en la interfaz entre las dos capas.

    2. Objetivos

    • Comprender el uso de compuestos químicos como jabones, sales y alcoholes para la extracción de
    ADN.
    • Familiarizarse con los métodos básicos de extracción de ADN.
    • Entender el papel de cada uno de los reactivos químicos en el proceso de extracción de ADN dentro
    de la célula.

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    INGENIERÍA BIOMÉDICA
    LABORATORIO DE BIOLOGÍA ESTRUCTURAL

    3. Metodología

    Tampón de extracción de ADN

    • Champú de 10 ml (3/8 taza) (sin acondicionador) o detergente para lavavajillas de 20 ml


    • 5 a 8 gramos de cloruro de sodio (2 cucharaditas)
    • Agua destilada

    Materiales por grupo de estudiantes

    • 1-3 fresas (aproximadamente el volumen de una pelota de golf). Las fresas congeladas deben ser
    descongelado a temperatura ambiente.
    • Tampón de extracción de ADN de 10 ml (agua salada jabonosa)
    • Alrededor de 20 ml de helado 91% o 100% de alcohol isopropílico
    • 1 bolsa Ziploc TM
    • 1 tubo de ensayo transparente
    • 1 embudo forrado con una toalla de papel humedecida o gasa (apósitos)
    • 1 agitador de café o pipeta de transferencia

    Procedimiento

    1. Retire los sépalos verdes de las fresas.


    2. Coloque las fresas en una bolsa Ziploc TM y selle.
    3. Macere con ayuda de un mortero por unos minutos para aplastar por completo la fruta.
    4. Agregue 10 ml de tampón de extracción de ADN (agua salada jabonosa) y apriete por algunos más
    minutos. Trate de no hacer muchas burbujas de jabón.
    5. Filtre a través de una toalla de papel humedecida colocada en un embudo y recolecte el líquido en
    un tubo transparente. No apriete la toalla de papel. Recoge unos 3 ml de líquido.
    6. Agregue 2 volúmenes (el doble d la cantidad de líquido que obtuvo en el ítem anterior) de alcohol
    isopropílico helado al líquido de fresa en el tubo. Verter el alcohol isopropílico cuidadosamente por
    el costado del tubo para que forme un Capa en la parte superior del líquido de fresa.
    7. Observe aproximadamente un minuto. ¿Que ves? Deberías ver una nube blanca esponjosa en La
    interfaz entre los dos líquidos. ¡Eso es ADN!
    8. gire y revuelva el agitador de café o transfiera la pipeta en la maraña de ADN, envolviendo el ADN
    alrededor del agitador.
    9. Saque el agitador y transfiera el ADN a una lámina de vidrio o tubo limpio. Las fibras son miles y
    millones de hilos de ADN.
    10. Para ver en un microscopio, coloque las fibras en una lámina portaobjeto.
    11. Enjuague su embudo. Coloque la bolsa Ziploc TM y la toalla de papel en la basura.

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    INGENIERÍA BIOMÉDICA
    LABORATORIO DE BIOLOGÍA ESTRUCTURAL

    4. Referencias

    o Nelson, D. L. (2007) Lehninger: Principios de Bioquímica. Editorial Omega. 5a Edición.


    o Adapted from Chemistry The Central Science, Laboratory Experiments, 6th Edition, by J.H. Nelson and
    K.C. Kemp and Laboratory Inquiry in Chemistry, by R. C. Bauer, J. P. Birk, and D. J. Sawyer.
    o MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO I DE QUÍMICA. Código: MX-no asignado-.01. página de 87 a
    96.
    o The GENETICS Project Department of Genome Sciences University of Washington
    http://chroma.mbt.washington.edu/outreach/genetics

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