PRÁCTICA 04: REACCIONES CUALITATIVAS (DE COLORACIÓN) III.

MATERIALES Y REACTIVOS
SOBRE GRUPOS FUNCIONALES DE PROTEÍNAS Y 3.1. MUESTRAS:
AMINOÁCIDOS. Solución de proteína de huevo (la proteína de huevo de gallina la separan de la
I. OBJETIVOS yema, la disuelven en un volumen 20 veces mayor de agua destilada, filtran a
1.1. Realizar reacciones cualitativas (de coloración) sobre grupos funcionales de través de varias capas de gasa y la conservan en la refrigeradora.
proteínas y aminoácidos. Proteína de un huevo fresco no diluida.
1.2. Identificar y diferenciar las proteínas de los aminoácidos. 3.2. MATERIALES
1.3. Identificar las aplicaciones de esta práctica en el ámbito profesional. Tubos de ensayo, goteros, pipetas de 1 y 5 mL, probetas de 10 mL, baño de
agua, termómetro, pinzas para tubos de ensayo.
II. PRINCIPIOS TEÓRICOS 3.3. REACTIVOS:
Las proteínas son polímeros de aminoácidos de origen animal vegetal o microbiano, Reactivo de Biuret (contiene NaOH y iones Cu2+); ninhidrina, solución acuosa al
que contienen siempre los elementos C, H, O, N y S. Por hidrolisis liberan 0,5 %; ácido nítrico concentrado; hidróxido de sodio al 10, 20 y 40 %; reactivo
aminoácidos que varían en número, cantidad y posición en cada especie proteica. Las Millon*; ácido acético glacial; ácido sulfúrico concentrado y al 2,5 %; acetato de
proteínas poseen un P.M. elevado el cual conduce a soluciones acuosas coloidales, plomo 5 %; nitroprusiato de sodio 5 %; -naftol (0,2 %)' en alcohol; hipobromito
su poder rotatorio levógiro y el carácter ANFOLITO en solución. Para su estudio es de sodio; ácido sulfanílico (1 %) en ácido clorhídrico (5 %); nitrito de potasio (0,5
necesario descomponerlos en sus aminoácidos que los constituyen para lo cual se %); carbonato de sodio (10 %); sulfato de cobre (0,04 M); izatina (0,03 %);
recurre a la hidrólisis acida, alcalina y enzimática. solución acuosa recién preparada de dialdehído o-ftálico (disolver 2 g de
Los aminoácidos son compuestos nitrogenados de gran importancia que como parte dialdehído o - ftálico en 300 mL de agua destilada y luego destilan la solución
de las proteínas están en continuo intercambio respecto a su síntesis y degradación. acuosa), CuSO4 1%, reactivo de Pauly, carbonato de sodio 15 %, nitrito de sodio
Son solubles en medio acuoso y poco solubles en solventes orgánicos, tienen puntos 5 %.
de fusión muy altos aproximadamente 200º C debido a ello se requiere alta energía
para romper los enlaces iónicos en la red cristalina. Casi todos los aminoácidos, IV. PROCEDIMIENTO
alifáticos existen como zwitterions. 4.1. REACCIÓN DE BIURET
NATURALEZA QUÍMICA DE LAS PROTEÍNAS SIMPLES. La presencia de En un tubo de ensayo colocar V gotas de solución de proteína de huevo.
sustancias de naturaleza proteica en el material biológico se puede identificar con la Agregar II gotas del reactivo de Biuret, agitar suavemente y observar la aparición
ayuda de reacciones cualitativas sobre los grupos componentes de la proteína y sus de la coloración.
grupos funcionales. Todas las reacciones conocidas de revelación de proteínas y Tomar 2 mL de solución proteica; agregar 1 mL de NaOH 10%, mezclar.
péptidos se pueden dividir en tres tipos: Añadir V gotas de CuSO4 1%, mezclar y observar el cambio a color violeta. Esta
1. Reacción sobre el enlace peptídico, específica de la cadena polipeptídica y no reacción es útil para reconocer la presencia de los enlaces peptídicos en las
propia para otras sustancias biológicas. La reacción es específica para proteínas y proteínas.
péptidos. 4.2. REACCIÓN DE LA NINHIDRINA SOBRE EL GRUPO AMINO.
2. Reacciones sobre grupos terminales α-amino o α -carboxilo. Esta reacción, la dan En un tubo de ensayo colocar V gotas de solución de proteína de huevo. Luego
también los a-aminoácidos libres y algunos otros compuestos. agregar II gotas de solución de ninhidrina 5%, calentar hasta ebullición y, después
3. Reacciones sobre ciertos radicales laterales o grupos de aminoácidos, que están en de 1-3 minutos, sacar enfriar y observar la aparición de la coloración azul. Esta
polipéptidos. Estas reacciones son específicas también para los α-aminoácidos libres reacción es útil para reconocer los alfa-aminoácidos presentes en las proteínas,
y otras sustancias, que contienen el grupo funcional correspondiente en la molécula. excepto la prolina e hidroxiprolina que dan coloración amarilla.

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 4.3. REACCIÓN XANTOPROPETICA SOBRE EL ANILLO 4.8. REACCIÓN DE SAKAGUCHI (CARACTERÍSTICA DE LAS
AROMÁTICO DE AMINOÁCIDOS CÍCLICOS GUANIDINAS COMO LA ARGININA)
Colocar en un tubo ensayo, X gotas de solución de proteína de huevo. Tomar 2 mL de solución proteica, añadir 1 mL de NaOH 2 M, luego 1 mL de alfa
Añadir V gotas de ácido nítrico concentrado, observar el precipitado blanco y naftol 1%. Mezclar bien y enfriar el tubo en hielo (2 min) luego añadir 1 mL de
denso, y calentarlos hasta ebullición por un minuto (¡cuidado! Usar lentes hipoclorito de sodio (V gotas) sin sacar del hielo. Si la reacción es positiva aparece
protectores). Observar la aparición de la coloración amarilla. un color rojo brillante, pues indica la presencia del aminoácido arginina.
El contenido se enfría bajo chorro de agua, luego por gotas, añadir solución de 4.9. PRUEBA DE PAULY (CARACTERÍSTICA LA HISTIDINA)
hidróxido de sodio 40 % (V gotas aproximadamente) y observar la aparición de Tomar 2 mL de solución proteica y añadir 1 mL de ácido sulfanílico al 1% en
color naranja (no agitar el tubo). Esta reacción es útil para reconocer los medio clorhídrico (agregar III gotas de HCl concentrado) y enfriar en hielo, por 2
aminoácidos Tir, Fen y Trp. minutos. Añadir 1 mL de NaNO2 al 5 %, mezclar bien y dejar en frio por 3
4.4. REACCIÓN DE MILLÓN SOBRE LA TIROSINA minutos. Alcalinizar con 2 mL de Na2CO3 al 10 % y observar el color rojo. Esta
En un tubo de ensayo colocar V gotas de solución de proteína de huevo. Añadir reacción es útil para reconocer la presencia de Histidina y tirosina
III gotas del reactivo Millón y cuidadosamente, calentar en baño de agua (no
mayor de 50° C), observando la aparición de la coloración roja. V. RESULTADOS
4.5. REACCIÓN DE HOPKINS-COLE (ADAMKIEWICZ) SOBRE Después de cada reacción, emitir su conclusión acerca de su especificidad para la
TRIPTÓFANO sustancia investigada y, de la presencia de los grupos funcionales correspondientes
En un tubo de ensayo, colocar II gotas de proteína no diluida de huevo fresco. en la proteína de huevo. Presentar los resultados en forma de tabla, anotando con los
Agregar X gotas de ácido acético glacial y caliente, cuidadosamente hasta signos más (+) o menos (-) el resultado de la reacción.
disolución del precipitado formado, después de lo cual, se enfría su contenido. Reacciones

Muestra Problema
Con mucho cuidado, después de inclinar el tubo, agregar por la pared de este,

Xantoproteica

Adamkiewics

Zimmermann

Nitroprusiato

Sa0kaguchi
aproximadamente de 1 mL de ácido sulfúrico concentrado, cuidando de que los

Ninhidrina

Izatina
Millon
Biuret

Pauly
líquidos no se mezclen. En el límite de las dos capas surge un anillo coloreado

Foly
(rojo-violeta), característico que difunde por toda la solución.
4.6. REACCIÓN DE FOLY SOBRE AMINOÁCIDOS QUE
CONTIENEN AZUFRE (CISTEÍNA, CISTINA).
En un tubo de ensayo, colocar X gotas de solución de acetato de plomo 2 M y, Albúmina de Huevo
por gotas añadir hidróxido de sodio 10 %, hasta la disolución del precipitado
formado al principio. Agregar V gotas de solución de proteína de huevo. Hervir VI. DISCUSIÓN
las mezclas 1 – 2 minutos y observar los cambios de color y formación del VII. CONCLUSIONES
precipitado (negro plomo). VIII. RECOMENDACIONES
4.7. REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS QUE CONTIENEN AZUFRE IX. BIBLIOGRAFÍA
CON NITROPRUSIATO SODIO X. ANEXOS
En un tubo de ensayo colocar V gotas de albúmina fresca no diluida. Agregar X CUESTIONARIO:
gotas de solución de hidróxido de sodio y hervir por 3 minutos, luego enfriar el Indique 4 pruebas adicionales para reconocer aminoácidos
contenido. Después a la mezcla de cada tubo, añadir II – III gotas de solución de Defina: Compuesto diazonio y Compuesto AZO
nitroprusiato de sodio y observar la aparición de la coloración rojo-violeta. ¿Que aminoácidos no están presentes en las seguientes proteínas? Caseína y
Gelatina

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