UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN

FACULTAD DE EDUCACIÓN
Especialidad: Biología, Química y Tecnología de los Alimentos

ENSAYOS PARA RECONOCIMIENTO DE AMINOACIDOS

I. EL PROBLEMA.- El carácter único de cada α aminoácido se debe a la estructura del grupo R. En
los polipéptidos los grupos R de los aminoácidos a menudo se denominan cadenas laterales y
pueden variar desde un átomo de hidrógeno, hasta estructuras complejas como el grupo
guanidina, el propósito de esta práctica es identificar algunos aminoácidos que presentan
grupos característicos en las cadenas laterales utilizando ensayos cualitativos y específicos para
cada función.
II. FUNDAMENTO TEÓRICO.- Los aminoácidos tienen un papel primordial en la formación de los
seres vivos, puesto que constituyen los bloques fundamentales con que se forman las proteínas.
Entre las principales reacciones de identificación de los aminoácidos se encuentran las
siguientes:
a) Reacción con la ninhidrina.- El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma complejos
coloreados con la ninhidrina: violeta azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo grupo
amino es primario, amarillo para la prolina e hidroxiprolina y café para la asparagina que tiene
un grupo amido en la cadena lateral. Esta reacción también identifica los grupos alfa-amino
libres presentes en péptidos y proteínas.
b) Reacción de Millón.- El anillo fenólico tiene un comportamiento característico frente a las
sales de Mercurio a pH ácido, formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenólico de la
tirosina y las proteínas que la contienen.
c) Reacción Xantoproteica.- Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos
reaccionan con ácido nítrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo o
anaranjado por lo cual esta reacción permite reconocer la presencia de Tirosina, Fenilalanina y
Triptófano.
d) Reacción de Sakaguchi.- El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina
reacciona con soluciones de alfanaftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando
complejos coloreados rosados o rojos.
e) Reacción de Ehrlich.- La presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados en la cadena
lateral de los Aminoácidos se puede identificar mediante la reacción con ácido sulfanílico y
nitrito de Sodio por formación de sales de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo así
detectar la presencia de Tirosina e Histidina libres o formando péptidos y proteínas.
f) Reacción de Hopkins Cole.- El anillo indólico presente en la cadena lateral de los alfa-
aminoácidos libres o haciendo parte de péptidos y proteínas se puede reconocer mediante
reacción con el ácido glioxílico a pH ácido, puesto que forma complejos de coloración violeta o
amarillo violeta, permitiendo así identificar al triptófano.
g) Reacción con acetato de Plomo alcalino.- Los Aminoácidos azufrados como Metionina,
Cisteina y Cistina se reconocen por la formación de precipitados de Sulfuro de Plomo de color
gris oscuro o negro que se forman cuando reacciona con Acetato de Plomo en medio alcalino.
III. TEMAS DE CONSULTA
El preinforme debe contener los siguientes aspectos: Investigar la clasificación de los
aminoácidos desde los siguientes puntos de vista: Esenciales y no esenciales para el hombre,
ácidos y básicos en forma molecular, polares con carga y sin carga, apolares. Estudiar las
estructuras, nombres y abreviaturas para los veinte aminoácidos que son usados en la
biosíntesis de proteínas. Para cada aminoácido señale la cadena lateral o el grupo R e
identifique las funciones presentes. Defina proteínas Estudie que aminoácidos están presentes
en las siguientes proteínas: Colágeno, albúmina,
IV. MATERIALES Y REACTIVOS
Las soluciones están propuestas para cada grupo de trabajo en el laboratorio, por ejemplo 10 ml
de ninhidrina para un grupo, si el curso es de 8 grupos se requieren máximo 80 mL de
ninhidrina.
Materiales 15 Tubos de ensayo, 2 Pipetas graduadas de 1 mL, 2 Pipetas graduadas de 2 mL, 2
Pipetas graduadas de 5 mL, 2 Vasos de precipitados de 250 mL, 1 Vasos de precipitados de 600
mL, 1 Embudo ordinario, 1 Erlenmeyer de 125 mL, 1 Gradilla para tubo de ensayo, 1 Pinza
metálica para tubo de ensayo, 1 Placa refractaria, 1 El profesor le asignará alguna proteína para
su experiencia en el laboratorio. 1 Aro con nuez, Material general Soportes.
Para prevenir la contaminación de los reactivos: las soluciones que no estén en frasco gotero
deben tener una pipeta exclusiva y el monitor debe estar pendiente, que las pipetas no sean
intercambiadas durante al práctica.
Reactivos por cada grupo de trabajo: 10 mL de Ácido sulfúrico concentrado, 12 mL de Ácido
nítrico concentrado, 10 mL de Ácido acético concentrado.
Se requiere la preparación de los siguientes reactivos:
10 ml de Reactivo de ninhidrina: disolver 100 mg. de nilhidrina en 10 mL, de etanol a 95% y
completar a 100 mL con agua destilada
10 ml de Reactivo de Millon: disolver 1 g de mercurio en 1 mL, de ácido nítrico concentrado,
calentar suavemente, dejar enfriar y completar a 60 mL con agua.
5 ml de Reactivo de sakaguchi: cuidadosamente disolver 2 g. de bromo en 100 mL. De NaOH al
5%
10 ml de Reactivo de Hopkins cole: ácido acético impurificado con trazas de ácido glioxílico.
Soluciones: 30 mL de Hidróxido de sodio 40%, 20 mL de Hidróxido de sodio 10 %, 10 mL de
Hidróxido de amonio 10%, 20 mL de Ácido clorhídrico 2%, 20 mL de Acetato de plomo 10%, 20
mL de Sulfato de cobre 0.5%, 10 mL de Nitrito de sodio 0.5% (fresco), 10 mL de Ácido sulfanílico
0.5% en HCl, 50 mL de Alfa-naftol 0.15%, 15 mL de Soluciones al 0.1% en agua acidulada de los
siguientes aminoácidos: Cisteína o metionina. Glutamina o asparragina. Lisina u ornitina.
Tirosina. Fenil-alanina. Prolina. Arginina. Histidina. Triptófano. Alanina. Albúmina de huevo:
separar la clara de un huevo y diluir en relación 1:10 con agua destilada Harina de trigo:
dispersar 10 g. de harina de trigo en 100 ml. de agua caliente y filtrar a través de gasa doble. No
olvide pedir al profesor la muestra problema que va a analizar Soluciones problema sugeridas:
colágeno, albúmina, gelatina, y las que el profesor considere
V. PROCEDIMIENTO.- Realice todos los ensayos en tubos limpios y secos.
a) Ensayo con Ninhidrina.- Rotule cinco tubos de ensayo identificando cada uno como: blanco,
alanina, problema, albúmina de huevo, y proteína de trigo. A cada uno de los tubos de ensayo
agregue 1 mL. de las respectivas sustancias que indica el rótulo usando agua destilada para el
tubo marcado como blanco. Adicione a cada tubo 1 mL. de reactivo de Ninhidrina, caliente en
baño de agua a ebullición por 10 min. Observe los colores desarrollados y anote los resultados.
b) Ensayo de Millon.- Rotule 6 tubos de ensayo identificados cada uno como: blanco, tirosina,
fenil-alanina, problema, albúmina de huevo y proteína de trigo. A cada uno de ellos agregue 2
mL. de la solución correspondiente y 1 mL. de reactivo de Millon. Caliente en baño de agua en
ebullición por 10 min. observe los colores desarrollados y anote los resultados.
c) Ensayo Xantoprotéico.- Rotule 6 tubos de ensayo de la misma manera que para el ensayo de
Millon. Agregue a cada tubo 2 mL. de la solución correspondiente y 2 mL. de ácido nítrico
concentrado. Caliente en baño de agua a ebullición, la aparición de una coloración amarilla es
una prueba positiva para aminoácidos aromáticos. Deje enfriar y agregue a cada tubo de ensayo
1.5 mL. de NaOH 40%, el cambio de color a anaranjado confirma la prueba.
d) Reacción de Sakaguchi.- Rotule 5 tubos de ensayo como: blanco, arginina, problema,
albúmina de huevo y proteína de trigo. Agregue a cada uno 5 mL. de las soluciones
correspondientes, enfríe en baño de hielo por 10 min. y luego adicione 1 mL. de NaOH 40%,
deje enfriar 10 min. más y luego agregue 5 mL. de α-naftol y 3 gotas de Reactivo de Sakaguchi,
la aparición de un color rosado o rojo es prueba positiva para el grupo guanidinio.
e) Reacción de Ehlrich.- En 5 tubos de ensayo rotulados como: blanco, triptófano, problema,
albúmina de huevo, proteína de trigo. Agregue a cada tubo en el siguiente orden: 1 mL de ácido
sulfanilico 0.5% y 1 mL. de Nitrito de sodio, mezcle bien y deje en reposo durante 15 min. luego
a cada tubo agregue 1 mL. de la solución correspondiente al rótulo. Mezcle y adicione a cada
tubo 0.5 mL. de NH4OH 10%. Observe y anote los resultados.
f) Reacción de Hopkins Cole.- Rotule 5 tubos de ensayo como: blanco, triptófano, problema,
albúmina de huevo y harina de trigo. Adicione a cada uno 2 mL. de la solución correspondiente y
2 mL. del reactivo de Hopkins Cole. Mezcle bien el contenido y adicione a cada tubo por las
paredes lenta y cuidadosamente, sin mezclar 1 mL. de ácido sulfúrico concentrado, la formación
de un anillo violeta en la interfase es prueba positiva para el triptófano.
g) Reacción con acetato de Plomo alcalino.- Rotule 6 tubos de ensayo como: blanco, metionina,
cisterna, problema, albúmina de huevo y proteína de trigo. En cada uno agregue 2 mL. de la
solución correspondiente, 2 mL. de NaOH 10% y 0.5 mL. de acetato de Plomo al 10%. Caliente
en baño de agua a ebullición por 5 min. La formación de un precipitado gris oscuro o negro es
prueba positiva para aminoácidos azufrados.
VII. PARA EL ANÁLISIS DE LA PRÁCTICA.- Con base en los resultados obtenidos para la solución
problema, indique las características estructurales e identifique hasta donde sea posible el tipo
de aminoácidos que contienen las proteínas analizadas. Con base en los resultados obtenidos
para los materiales biológicos que se ensayaron indique qué tipo de aminoácidos se encuentran
presentes. Escriba las estructuras de los aminoácidos que analizó en cada prueba e identifique
el grupo que estaba reaccionando o el responsable de la coloración positiva del ensayo.