TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO EN CELAYA

DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA

“IDENTIFICACIÓN DE COMPUESTOS CON ACTIVIDAD

ANTIMICROBIANA Y ANTIOXIDANTE DE EXTRACTOS DEL
ESCAPO FLORAL DE Agave salmiana”

T E S I S

QUE PARA OBTENER EL GRADO DE DOCTORA EN CIENCIAS EN

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

PRESENTA:
M. en C. MARIA IVETTE MEDINA GALVÁN

DIRECTOR:
DRA. AUREA BERNARDINO NICANOR

CO-DIRECTOR:
DR. JAVIER CASTRO ROSAS
NOVIEMBRE, 2018 CELAYA, GTO., MÉXICO
DEDICATORIA

A Dios ser maravilloso que me dió fuerza y fe para creer lo que me parecía imposible de
terminar, porque al trabajar bajo su mano, recibí aliento y consuelo para vencer los obstáculos
que encontré en el camino.

A mi esposo Francisco Gómez, por su paciencia, su comprensión, por su amor, por apoyarme y
cuidarme en esos malos ratos, porque tú sabes lo difícil que fue y siempre estuviste conmigo
para alentarme durante todo este trabajo.

A mis hijos Santiago y Gabriel, que a pesar de su corta edad, mostraron madurez para entender
lo complicado de este trabajo, brindándome paciencia y muchos abrazos. Son mi mayor
motivación para nunca rendirme en los estudios y espero poder llegar a ser un ejemplo para
ustedes.

A mis padres J. Félix y Silva Galván, por su comprensión y ayuda en los malos y buenos
momentos. Me han enseñado a encarar las adversidades sin perder nunca la dignidad ni
desfallecer en el intento. Me han dado todo lo que soy como persona, mis valores, mis principios,
mi perseverancia y mi empeño, y todo ello con una gran dosis de amor y sin pedir nunca nada a
cambio. Así también por apoyarme en cuidar de mis hijos mientras yo realizaba investigaciones
y por estar a mi lado en cada momento de mi vida.

A mis hermanos Xochitl, Michelle e Iván, por las risas y los buenos momentos que me ayudaron
sobrellevar el estrés del trabajo y su apoyo con mis hijos cuando más lo necesitaba.

A mi otra familia, Gómez Olvera, por su apoyo y aliento en todos los aspectos de mi vida,
incluyendo el término de este proyecto profesional.

A todos ellos,
Muchas gracias de todo corazón.
AGRADECIMIENTOS

Agradezco sinceramente a mi directora y tutora de Tesis, la Dra. Aurea Bernardino Nicanor y

al Dr. Leopoldo González Cruz por su esfuerzo y dedicación en este proyecto. Sus
conocimientos, consejos, su guía, su manera de trabajar, su persistencia, su paciencia y su
motivación han sido fundamentales para mi formación como doctora en ciencias.

También me gustaría agradecer el apoyo y consejos recibidos a lo largo de estos 4 años y medio
al Dr. José Mayolo Simitrio Juárez Goíz, que me ayudo a no decaer en el proceso.

De igual manera agradecer al Dr. Javier Castro Rosas y a al Dr. Carlos Alberto Gómez aldapa,
profesores investigadores de la UAEH, por su cálido recibimiento en mis estadías en la
universidad, por su apoyo, por su paciencia, por su trato humano y su visión crítica de muchos
aspectos cotidianos de la vida, que ayudaron a formarme como persona e investigador.

A la Ing. Eva y familia, por su amistad y apoyo total en la estancia que realicé en Pachuca,
Hidalgo. Les agradezco sus grandes atenciones y hospitalidad.

Y por último, pero no menos importante, estaré eternamente agradecida a todos mis compañeros
de trabajo, al M. en C. Gerardo Teniente, a la M. en C. Jocelyn Hernández, a la Ing. Iraida, y a
las personas de servicio social que me apoyaron bastante. Para mí, son los mejores compañeros
que se pueden tener. El ambiente de trabajo creado fue simplemente perfecto, y su visión,
motivación y optimismo me ayudaron en momentos muy críticos de la tesis.

Para ellos,
muchas gracias por todo.
ÍNDICE GENERAL

ÍNDICE DE TABLAS……………………………………………………………………………………..………….iv

ÍNDICE DE FIGURAS…………………………………………………………………………………….………….v

RESUMEN…………………………………………………………………………………………………….………..vi

ABSTRACT……………………………………………………………………………………………………………vii

INTRODUCCIÓN ..................................................................................................................... 1

CAPÍTULO 1 ANTECEDENTES ........................................................................................... 3

1.1 Importancia de los agaves en México ........................................................................... 3
1.2 Especie Agave salmiana ................................................................................................ 7
1.2.1 Taxonomía .................................................................................................................. 7
1.2.2 Distribución geográfica ............................................................................................... 7
1.2.3 Importancia socioeconómica....................................................................................... 8
1.2.4 Morfología .................................................................................................................. 9
1.2.5 Sistemas de reproducción.......................................................................................... 10
1.2.6 Crecimiento y maduración ........................................................................................ 11
1.3 Escapo floral .................................................................................................................. 13
1.3.1 Escapo floral en el género Agave .............................................................................. 14
1.4 Compuestos bioactivos a partir de fuentes vegetales ................................................ 17
1.4.1 Compuestos biactivos en el género Agave ................................................................ 19
1.5 Compuestos con actividad antioxidante y compuestos fenólicos en plantas ........... 22
1.5.1 Compuestos con actividad antioxidante y compuestos fenólicos en el género
Agave… ..................................................................................................................... 25
1.6 Compuestos con actividad antimicrobiana en plantas .............................................. 26
1.6.1 Compuestos con actividad antimicrobiana en el género Agave ................................ 30
1.7 Procesos de extracción de compuestos con actividad biológica ................................ 31
1.7.1 Efecto del uso de disolventes en la obtención de extractos con actividad biológica 35
1.7.2 Tipos de interacción entre el disolvente extractor y materia prima vegetal.............. 40
1.7.2.1 Interacción individual .......................................................................................... 40
1.7.2.2 Interacción dual ................................................................................................... 41

i
 1.7.2.3 Interacción secuencial.......................................................................................... 41
1.8 Microorganismos patógenos de interés en la industria alimentaria ........................ 42

JUSTIFICACIÓN.................................................................................................................... 45

HIPÓTESIS.............................................................................................................................. 46

OBJETIVOS ............................................................................................................................ 47

CAPÍTULO 2 METODOLOGÍA........................................................................................... 48
2.1 Material vegetal ............................................................................................................ 48
2.2 Obtención de extractos y rendimiento ........................................................................ 48
2.2.1 Extracto crudo ........................................................................................................... 48
2.2.2 Extracción individual (etanol o agua) ....................................................................... 49
2.2.3 Extracción dual (etanol-agua) ................................................................................... 49
2.2.4 Extracción dual-secuencial ....................................................................................... 49
2.2.5 Extracción secuencial ................................................................................................ 50
2.3 Determinación de la actividad antioxidante ............................................................... 50
2.3.1 DPPH ........................................................................................................................ 50
2.3.2 FRAP ......................................................................................................................... 51
2.3.3 ABTS+ ....................................................................................................................... 51
2.4 Identificación y extracción de grupos de compuestos bioactivos ............................. 52
2.4.1 Determinación de contenido de fenoles totales ........................................................ 52
2.4.2 Fenoles simples ......................................................................................................... 52
2.4.3 Flavonoides ............................................................................................................... 53
2.4.4 Taninos ...................................................................................................................... 53
2.4.5 Alcaloides.................................................................................................................. 54
2.4.6 Saponinas .................................................................................................................. 55
2.4.7 Determinación de proteína ........................................................................................ 56
2.4.8 Precipitación de proteína ........................................................................................... 56
2.5 Actividad antimicrobiana ............................................................................................ 57
2.5.1 Cepas bacterianas ...................................................................................................... 57
2.5.2 Preparación del inóculo ............................................................................................. 57

ii
 2.5.3 Técnica de difusión en placa ..................................................................................... 57
2.5.4 Concentración mínima inhibitoria ............................................................................ 58
2.6 Desarrollo experimental ............................................................................................... 58

CAPÍTULO 3 RESULTADOS ............................................................................................... 61

3.1 Efecto de los disolventes y método de extracción sobre el rendimiento de
extracción...................................................................................................................... 61
3.2 Efecto de los disolventes y método de extracción sobre la actividad antioxidante en
los extractos .................................................................................................................. 64
3.3 Identificación de los principales grupos de compuestos bioactivos presentes en los
extractos ........................................................................................................................ 68
3.4 Cuantificación de los principales grupos de compuestos presentes en los
extractos… .................................................................................................................... 72
3.5 Efecto de los disolventes y método de extracción sobre la actividad antioxidante de
los compuestos bioactivos presentes en los extractos de Agave salmiana ................. 82
3.6 Efecto de los disolventes y método de extracción sobre la actividad antimicrobiana
en los extractos................................................................................................................ 97
3.7 Concentración mínima inhibitoria (CMI) de los extractos ....................................... 99
3.8 Efecto de los disolventes y método de extracción sobre la actividad antimicrobiana
en los compuestos bioactivos ....................................................................................... 102
3.9 Concentración mínima inhibitoria (CMI) de los compuestos bioactivos .............. 106

CONCLUSIONES ................................................................................................................. 115

BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................................... 116

iii
ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1.1 Principales usos del género Agave ............................................................................. 4

Tabla 1.2 Especies de Agave estudiadas por sus propiedades biológicas .................................. 6
Tabla 1.3 Clasificación taxonómica del Agave salmiana ........................................................... 7
Tabla 1.4 Composición porcentual de escapo de Agave salmiana ........................................... 16
Tabla 1.5 Determinación de la actividad antioxidante promedio de escapos florales de Agave
salmiana ............................................................................................................................. 16
Tabla 1.6 Comparación de CMI de diferentes plantas y escapos de Agave salmiana ............. 17
Tabla 1.7 Principales compuestos bioactivos presentes en plantas .......................................... 18
Tabla 1.8 Compuestos aislados de plantas del género Agave y sus actividades biológicas..... 22
Tabla 1.9 Mecanismo de acción de los principales grupos de compuestos con actividad
antioxidante aislados de plantas ......................................................................................... 24
Tabla 1.10 Mecanismo de acción de los principales grupos de compuestos con actividad
antimicrobiana aislados de plantas ..................................................................................... 29
Tabla 1.11 Principales parámetros de solubilidad de algunos disolventes ............................... 38
Tabla 1.12 Disolventes utilizados para la extracción de compuestos bioactivos a partir de
plantas................................................................................................................................. 39
Tabla 1.13 Características generales de los principales microorganismos patógenos de interés
en la industria alimentaria .................................................................................................. 44
Tabla 1.14 Preparación de reactivos para la cuantificación de taninos .................................... 54
Tabla 1.15 Capacidad de extracción de los disolventes sobre compuestos de los escapos
florales de Agave salmiana ................................................................................................ 63
Tabla 1.16 Determinación de la actividad antioxidante y fenoles totales de extractos del
escapo floral de Agave salmiana ........................................................................................ 66
Tabla 1.17 Contribución porcentual de los compuestos bioactivos presentes en el escapo de
Agave salmiana .................................................................................................................. 67
Tabla 1.18 Identificación de los principales compuestos bioactivos presentes en los extractos
del escapo floral de Agave salmiana .................................................................................. 71
Tabla 1.19 Determinación de actividad antioxidante de compuestos bioactivos de extractos de
escapo floral de Agave salmiana ........................................................................................ 94
Tabla 1.20 Determinación de la actividad antimicrobiana de los extractos del escapo floral de
Agave salmiana .................................................................................................................. 99
Tabla 1.21 Determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) de los extractos del
escapo floral de Agave salmiana ...................................................................................... 102
Tabla 1.22 Determinación de la actividad antimicrobiana de los compuestos bioactivos
presentes en los extractos del escapo floral de Agave salmiana ...................................... 105
Tabla 1.23 Determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) de los compuestos
bioactivos presentes en los extractos del escapo floral de Agave salmiana ..................... 109
Tabla 1.24 Comparación de CMI de diferentes plantas ......................................................... 114

iv
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1.1 Distribución en México de Agave salmiana ............................................................. 8
Figura 1.2 Morfología de los dos tipos de escapo del género Agave A) tipo paniculado, B)
tipo espigado. ....................................................................................................................... 9
Figura 1.3 Componentes de Agave salmiana A) Flores, B) Escapo, C) Fruto y D) Semilla ... 10
Figura 1.4 Agentes polinizadores de género Agave. A) Murciélago, B) Colibrí ..................... 11
Figura 1.5 Desarrollo en Agave salmiana A) Yemas auxiliares, B) Hijuelos por
enraizamiento. .................................................................................................................... 11
Figura 1.6 Marcas desarrolladas durante el proceso de crecimiento de la hoja de Agave
salmiana ............................................................................................................................. 12
Figura 1.7 A) Inflorescencia de Agave salmiana, B) Flores de Agave salmiana ..................... 13
Figura 1.8 Proceso de extracción vegetal por el método de maceración. 1.- Maceración, 2.-
Filtración y 3.-Recolección ................................................................................................ 32
Figura 1.9 Equipo de extracción tipo percolador A) Partes principales, B) Montaje en
laboratorio .......................................................................................................................... 33
Figura 1.10 Tipos de equipo para los métodos de destilación por arrastre de vapor A) Método
directo, B) Método de vapor vivo ...................................................................................... 35
Figura 2.1 Escapo floral de mediana madurez (250 cm) de Agave salmiana y sus secciones . 48
Figura 2.2 Secuencia para determinar la inhibición microbiana de los extractos, A)
distribución de los sitios de aplicación de los extractos, B) superficie de acción de los
extractos colocados en el agar, C) halos de inhibición producidas por extractos contra E.
coli (círculos rojos)............................................................................................................. 57
Figura 2.3 Procedimiento de diluciones de muestras en la técnica de CMI ............................. 58
Figura 2.4 Esquema general del proceso del proyecto. ............................................................ 60

v
RESUMEN

Agave salmiana ha tomado gran importancia en el área de investigación, debido a las

aplicaciones nutracéuticas, que muchos de sus compuestos han mostrado, sin embargo los
análisis realizados hasta el momento, se han enfocado únicamente a sus flores, raíces y hojas,
sin considerar la estructura floral, la cual en un estudio reciente se logró demostrar que tanto la
longitud del escapo floral como la sección analizada, son parámetros que influyen sobre la
composición química proximal, actividad antioxidante y actividad antimicrobiana, siendo los
escapos de 250 cm y la sección media, las estructuras que mostraron mayor concentración de
compuestos bioactivos, los cuales, podrían tener impacto en la industria alimentaria, sin
embargo, hasta el momento se desconoce que compuesto o grupo de compuestos son los
responsables de dichas actividades, lo cual es parte fundamental en el proceso de caracterización
y aplicación de compuestos de interés industrial, es por ello que el objetivo del presente trabajo
consistió en, identificar los principales grupos de compuestos responsables de la actividad
antimicrobiana y antioxidante del extracto obtenido del escapo floral de Agave salmiana, así
como evaluar el efecto de los disolventes y tipo de extracción sobre la capacidad antioxidante y
antimicrobiana de los extractos obtenidos. Para lo cual, se utilizó la sección media del escapo
floral con altura aproximada de 250 cm, a partir de la cual se realizaron 15 extracciones usando
técnicas de interacción de tipo dual y secuencial entre disolventes, utilizando 5 disolventes de
diferente polaridad. Se determinó la actividad antioxidante y antmicrobiana de los extractos, se
seleccionó aquellos que obtuvieron los mejores resultados en ambas determinaciones y se
identificó en fresco los principales grupos de compuestos responsables de dichas propiedades
bioactivas, clasificadas como compuestos fenólicos (fenoles simples, flavonoides y taninos),
compuestos que contieen nitrógeno (alcaloides y proteínas) y saponinas (terpenos y otros). Los
resultados indican que tanto el tipo de extracción como la polaridad de los disolventes utilizados
influyen en la extracción, actividad antioxidante y actividad antimicrobiana de los metabolitos
analizados, donde la estructura del compuesto, tipo, posición y cantidad de grupos secundarios
unidos a los compuestos y polaridad de los compuestos fueron factores importantes en la
variabilidad de los resultados.

vi
ABSTRACT

Agave Salmiana it is a plant with great importance in the research area, due to the various
nutraceutical applications of their isolated compounds, however the analyzes carried out so far,
have focused only on its flowers, roots and leaves, without considering the floral structure,
which in a recent study it was demonstrated that both the length of the floral scape and the
section analyzed, are parameters that influence the proximal chemical composition, antioxidant
activity and antimicrobial activity, being the escapes of 250 cm and the middle section, the
structures that showed a higher concentration of bioactive compounds, which could have an
impact on the food industry, however, until now it is unknown which compound or group of
compounds are responsible for these activities, which is a fundamental part in the process of
characterization and application of compounds of industrial interest, that is why the objective of
the present work consisted in identifying the main groups of compounds responsible for the
antimicrobial and antioxidant activity of the extract obtained from the Agave salmiana floral
scape, as well as evaluating the effect of the solvents and type of extraction on the antioxidant
and antimicrobial capacity of the extracts. obtained. For this, the middle section of the floral
scape with an approximate height of 250 cm was used, from which 15 extractions were made
using dual and sequential type interaction techniques between solvents, using 5 solvents of
different polarity. The antioxidant and antimicrobial activity of the extracts was determined, the
extracts with the best results in both determinations were selected and the main groups of
compounds responsible for these bioactive properties were identified in fresh, classified as
phenolic compounds (simple phenols, flavonoids and tannins), compounds that contain nitrogen
(alkaloids and proteins) and saponins (terpenes and others). The results indicate that the type of
extraction and the polarity of the solvents used influence the yield extraction, antioxidant
activity and antimicrobial activity of the analyzed metabolites, where the structure of the
compound, type, position and number of secondary groups bound to the compounds and polarity
of the compounds were important factors in the variability of the results.

vii
INTRODUCCIÓN

El escapo floral es un tallo, que emerge del rizoma de una planta, no presenta hojas, sin embargo,
puede desarrollar inflorescencias en el ápice. Sus características morfológicas como altura,
grosor, coloración, incluso desarrollo de la inflorescencia dependerán de la familia a la que
pertenezca la planta, siendo las principales en presentar esta estructura las Violaceae, Liliaceae,
Amaryllidaceae, Agavaceae, Papaveraceae, Droseraceae, y Bromeliaceae (Lira et al., 2016). En
la planta, el desarrollo del escapo floral indica madurez vegetativa, debido a que una vez que
inicia su desarrollo comienza la etapa de floración, por lo cual en diversos estudios han
empleado parámetros de crecimiento de esta estructura como indicativos de producción vegetal
(Proença et al., 2008; Ahmed et al., 2013; Alves et al., 2013). En el género Agave el escapo,
nace de la parte media del meristemo central (“piña o cabeza”) como una larga porción terminal
recta que puede alcanzar hasta 18 m de largo dependiendo la especie (Nava-Cruz et al., 2015).
Debido a su estructura fibrosa, es utilizado principalmente como material de construcción, sus
flores son utilizadas como ingrediente para la elaboración de platillos tradicionales en diferentes
regiones del país y en algunos lugares se utiliza tradicionalmente como desparasitante para
rumiantes (Escamilla-Treviño, 2012), aun cuando el escapo presenta algunas aplicaciones, son
pocos los estudios realizados para el análisis de esta estructura, quizá debido a que es poco
conocida y porque sus usos principales no representan beneficios económicos importantes.
Estos estudios en su mayoría, han sido de tipo exploratorios iniciando en 1953 y 1954 Srinivasan
y Bhatia analizaron la naturaleza y distribución de los carbohidratos presentes en el escapo de
Agave vera cruz, seguido de un estudio realizado por Bhatia et al. (1955), en el cual se aisló y
examinaron las propiedades de la enzima trans-fructosidasa, la cual interviene en la síntesis de
glucofructanos a partir de sacarosa, Figueredo en 2011 se enfocó a la fenología de floración y
fructificación del escapo de Agave cocui, Brena-Bustamante 2013, analizaron el escapo de
Agave kerchovei, para establecer el uso tradicional. En Agave salmiana no se tienen reportes
sobre estudios realizados al escapo, sin embargo, García-Herrera et al. (2010) mencionan que
esta estructura se ha utilizado tradicionalmente como agente desparasitante de rumiantes lo cual
es un indicio de la posible presencia de compuestos con actividad biológica, que podrían ser
aprovechados en el área de alimentos. Estudios efectuados a hojas y flores de Agave salmiana
indican la presencia de diversos compuestos bioactivos como saponinas (triterpenos),

1
alcaloides, taninos, triterpenos glicosilados (Fernández, 2008; Calange, 2011) y flavonoides que
poseen propiedades antioxidantes, antifúngicas y antimicrobianas (Castillo et al., 2007), lo cual
sugiere que posiblemente durante el desarrollo de la planta estos compuestos también se
encuentren en el escapo floral.
Cuando se realiza la obtención de compuestos nutracéuticos, a partir de fuentes vegetales existen
factores que pueden afectar la actividad biológica de los compuestos extraídos, tales como;
naturaleza química del disolvente, relación sólido/líquido, temperatura, tiempo y tipo de
extracción y tratamiento posterior a la extracción, los cuales influyen directamente en la
concentración y composición de los compuestos obtenidos (Háuad-Marroquín et al., 2010;
Złotek et al., 2013) provocando cambios en sus actividades biológicas. Considerando lo
anteriormente mencionado, la selección adecuada del método de extracción así como el
disolvente utilizado, se tornan dos de los factores determinantes para la obtención de
compuestos con una actividad biológica específica, por lo que el objetivo del presente trabajo,
fue seleccionar el método y disolvente para la obtención de extractos con actividad antioxidante
y antimicrobiana a partir del escapo floral de Agave salmiana.

2
CAPÍTULO 1 ANTECEDENTES

1.1 Importancia de los agaves en México

En México, el género Agave tiene gran importancia cultural, sin dejar de lado su impacto social,
económico, agrícola y ecológico, debido a sus múltiples usos. Su aprovechamiento se remonta
a la época prehispánica, cuando los pueblos indígenas y mestizos del centro y norte del país lo
utilizaban como fuente de alimento, bebida, medicina, combustible, cobijo, ornato, fibras duras
extraídas de la hojas (ixtle), abono, construcción de viviendas y elaboración de implementos
agrícolas, entre otros (Tabla 1.1) (García, 2007).

De la planta se utilizan; las hojas y la cabeza (piña) para potencializar el contenido nutrimental,
al proporcionar las cantidades necesarias de azúcares, fibra cruda y minerales (Ca, Mg, Zn, Fe
y Cu), que satisfacen los requerimientos diarios del ganado; por otro lado se ha reportado que
la adición de las partes aéreas como la inflorescencia (sistema de ramificación que produce
flores) y la flor, en la dieta, mejoran la digestibilidad del rumiante (García-Herrera et al., 2010,
Santos-Zea et al., 2012).

Ciertas partes del Agave, han sido utilizadas en la obtención de productos específicos, tal es el
caso de las hojas o pencas, las cuales se usan para la obtención de fibra, dirigida a la confección
de cuerdas, telas, redes y bolsas; el escapo ha sido utilizado como material de construcción; y la
planta entera se ha manejado como barrera natural que alcanza una altura de hasta 6 m, actuando
como rompe vientos y barreras contra la arena del desierto (Vargas, 2009).

Los agaves, son utilizados como hospederos o sustratos para la producción de insectos
comestibles, entre los cuales se encuentran los escamoles, que son larvas de la hormiga
Liometopun apiculatum y Liometopun occidentale; el gusano blanco (Acentrocneme
hesperiaris), el cual posee un elevado valor nutrimental y socioeconómico para las familias que
se dedican a su recolección; y el gusano rojo (Hypopta agavis B.), también llamado chinicuil,
que se consume frito o molido para la elaboración de salsas (García-Herrera et al., 2010).

3
 Tabla 1.1 Principales usos del género Agave
Usos Producto Parte de la planta
Azúcar Tallo (cabeza de agave o piña)
Guisos Flores y frutos
Dulce Flores y frutos
Envoltura (barbacoa) Hojas
Mixiotes Cutícula de las hojas
Alimentario
Gusanos blancos Cutícula de cogollo
Gusanos rojos Hojas
Pan de pulque Tallo (cabeza de agave o piña)
Perianto (envoltura que rodea a los
Tortillas
órganos sexuales) de flores
Aguamiel, miel, atole de
aguamiel, pulque, mezcal,
Bebidas Tallo (cabeza de agave o piña)
tequila, sotol, bacanora, vinagre
y jarabe.
Cerca viva Planta completa
Evita erosión como formadora
Planta completa
Agrícola de suelo fértil.
Abono orgánico (fertilizante) Composta de hojas
Planta líder de ecosistemas Planta completa
Hojas, escapo floral, flores y
Forrajero Bovinos, caprinos y porcinos.
bagazo.
Diuréticos, antisifilítico, laxante,
antiescorbútico, anticancerígeno Hojas y escapo.
Medicinal
y producción de esteroides.
Desparasitante de rumiantes Escapo
Cercas, casas, corrales. Escapo y hojas.
Canales para colectar agua de Hojas
Construcción
lluvia.
Aditivo para mezcla. Extracto de hojas.
Escobetillas y cepillos para
Fibras Fibras de hojas
limpieza.
García-Herrera et al., 2010.

La importancia socioeconómica del Agave es evidente por el uso que se le da para producir
bebidas alcohólicas como el Mezcal (Agave angustifolia, Agave potatorum, Agave salmiana),
Sotol (Agave dasylirion, Agave dasilyrion ssp.), Bacanora (Agave angustifolia, Agave
potatorum, Agave pacifica), Pulque (Agave salmiana) y Tequila (Agave tequilana) (Santos-Zea

4
et al., 2012). Los desechos fibrosos del Agave también pueden ser utilizados como una excelente
opción forrajera, sobre todo en las zonas semidesérticas (García-Herrera et al., 2010).

Además de los usos tradicionales que se les da a los agaves, recientemente se han realizado
estudios a diversas especies de este género indicando la presencia de compuestos
biológicamente activos, que por su amplio espectro de acción en áreas como la medicina y la
alimentaria se propone como uno de los géneros más prometedores en el área de investigación.
En la tabla 1.2 se presenta un resumen de las diversas especies de Agave estudiadas por su
composición de compuestos fenólicos, así como su concentración, además de otros compuestos
bioactivos y su propiedad biológica.

Algunos de estos estudios incluyen el análisis de los subproductos del género Agave, como lo
indican Uribe et al (2017), quienes al utilizar la savia de Agave spp. (Agave atrovirens, Agave
salmiana y Agave lehmanni) almacenada por al menos 8 semanas, mencionan que tiene
compuestos bioactivos del grupo de flavonoides, policosanoles y sapogeninas, que pueden servir
para tratar el cáncer en humanos, reduciendo el crecimiento de estas células en colon, por la
inhibición mostrada en células Caco-2 del colon (84.8%) y en células HepG2 de hígado (67.9%).
Otro estudio realizado con la savia de Agave atrovirens mostró que los extractos metanólicos
de la savia de esta planta presentaron actividad antidiabética al promover la secreción de insulina
en células pancreáticas (línea celular RIN-5F) (Cerda-De los Santos, 2011).

Por otro lado, algunos estudios mostraron que productos derivados del agave como el mezcal,
tienen propiedades antioxidantes, en diferentes etapas de maduración de la bebida, indicando
los resultados que los mezcales en todo el proceso de maduración presentaron elevada capacidad
antioxidante y los compuestos reportados fueron principalmente ácidos fenólicos y flavonoides
(Ávila-Reyes et al., 2010); Por otra parte, el aguamiel y el pulque (Agave salmiana), mostraron
que son bebidas inocuas para alimentar a los animales, que le confieren algunas propiedades
benéficas y que podrían considerarse como productos nutracéuticos, los estudios se enfocaron a
evaluar el efecto de estas bebidas sobre la biometría hemática en conejos y su actividad
antioxidante (Tovar-Robles et al., 2011).

5
 Algunas otras propiedades biológicas observadas en el género Agave son, la capacidad
antimicrobiana, observada en los extractos acuosos y metanólicos de las hojas de Agave sisalana
contra Shigella dysenteriae (Ade-Ajayi et al., 2011) y en extractos metanólicos de las hojas de
Agave attenuata contra microorganismos como Bacillus subtilis, Pasteurella multocida,
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Aspergillus niger y Aspergillus flavus (Rizwan et al.,
2012); la capacidad antiparasitaria, la cual presentaron los extractos acuosos y extractos de
acetato de etilo obtenidas de residuos de Agave sisalana contra nematodos gastrointestinales de
cabras (Botura et al., 2013); y capacidad inmunomoduladora observada en 3
homoisoflavonoides aislados a partir del extracto metanólico de las hojas de Agave sisalana
Perrine ex Engelm, los cuales inhibieron significativamente la producción de IL-2 e IFN-γ
(citoquininas que promueven la división y la diferenciación celular) en PBMC (Preparación de
células mononucleares de sangre periférica humana) activadas de una manera dependiente de la
concentración (Chen et al., 2009).

Tabla 1.2 Especies de Agave estudiadas por sus propiedades biológicas

Tipo de tejido o
Propiedad biológica Especie Referencia
producto analizado
Agave spp. Savia Uribe et al., 2017
Anticancerígeno A. schotti Inflorescencias Bianchi et al., 1969
A. intermixta Hojas Sáenz et al., 2000
A. duranguensis Mezcal Ávila-Reyes et al., 2010
A. salmiana Aguamiel y pulque Tovar-Robles et al., 2011
Antioxidante
A. atrovirens Aguamiel Cerda-De los Santos, 2011
A. americana Flores Subramamanian y Nair, 1970
Quelante A. salmiana Aguamiel Tovar-Robles et al., 2011
A. salmiana Jugo de agave García-Pedraza et al., 2009
A. atrovirens Savia Cerda-De los Santos, 2011
Antidiabético A. angustifolia Fructanos de agave Rendón-Huerta et al., 2012
A.lechuguilla Escapo macerado Andrade-Cetto y Heinrich, 2005
A. sisalana Hojas Ade-Ajayi et al., 2011
Antimicrobiano A. attenuata Hojas Rizwan et al., 2012
A. picta Hojas y escapo Verástegui et al., 2008
A. sisalana Hojas Botura et al., 2013
Antiparasitario
A. salmiana Escapo García-Herrera et al., 2010
Inmunomodulador A. sisalana Hojas Chen et al., 2009

6
1.2 Especie Agave salmiana

1.2.1 Taxonomía

La clasificación taxonómica de la especie salmiana ha sido objeto de controversias debido a su

gran variación fenotípica y genotípica incluso dentro de una misma población, sin embargo
Gentry en 1982 logró hacer concurrir en su libro “Agaves of Continental North America” (Los
Agaves de Norteamérica Continental) la mayor cantidad de elementos biológicos,
correlacionando caracteres anatómicos muy detallados, logrando relacionar aspectos del
desarrollo y distribución geográfica del Agave salmiana, actualmente considerados como la
mejor forma para identificar a esta especie. Según la clasificación taxonómica (Tabla 1.3) el
Agave salmiana pertenece a la división Magnoliophyta, a la cual pertenecen las plantas con
estructura de cormo (raíz, tallo y hojas); de la clase Liliopsida; orden Liliales, las cuales poseen
características de ser plantas generalmente herbáceas y perennes (Muñiz-Márquez et al., 2013).

Tabla 1.3 Clasificación taxonómica del Agave salmiana

Reino Plantae
Filo Magnoliophyta
Clase Liliopsida
Orden Liliales
Familia Agavaceae
Género Agave
Especie A. salmiana
Subespecie A. salmiana
UNIBIO, 2010.

1.2.2 Distribución geográfica

El Agave salmiana se puede encontrar en el área central de México, crece como planta silvestre
en los estados de Durango, Hidalgo, Puebla, Querétaro y San Luis Potosí; como planta cultivada
su distribución es más amplia, en Coahuila, Zacatecas y Nuevo León (Reynoso et al., 2012)
(Figura 1.1). Prospera con éxito entre los 1000 y los 2250 m sobre el nivel del mar, en climas
que van de semiseco a seco y con una precipitación pluvial de 320 a 720 mm anuales; del 90 al
95% incide en verano y el resto en invierno (Gentry, 1982). El régimen térmico puede ser
templado a semicálido extremo y la temperatura promedio anual puede ser de 16 a 22°C, las
temperaturas mínimas hasta -12°C (pueden dañar las puntas de las hojas); en primavera y verano
tolera temperaturas promedio de 26°C o extremas diarias de hasta 35°C. Pueden crecer en pisos

7
de valles rocosos, laderas de cerro, bajadas o abanicos aluviales, excepto en lugares propensos
a inundaciones o con problemas de sales de sodio en el suelo (Vargas, 2009).

Figura 1.1 Distribución en México de Agave salmiana

(modificada de CONABIO, 2008)

1.2.3 Importancia socioeconómica

Uno de los usos de mayor importancia socioeconómica que tiene el Agave salmiana, es la
elaboración de mezcal, generando ganancias en Oaxaca, de aproximadamente 8008 millones de
pesos anuales, abarcando el 69% del mercado de bebidas alcohólicas (SIAP, 2015); otro uso
importante es la producción de aguamiel, a partir de cuya fermentación se elabora el pulque,
que además de emplearse como bebida alcohólica, también es utilizado en la elaboración de pan
de pulque principalmente en el estado de Hidalgo. Entre otros usos vigentes se encuentra el
empleo de la cutícula de la hoja (penca), en la elaboración de algunos platillos culinarios
regionales como el mixiote; así mismo la piña o cabeza es utilizada para la elaboración de
dulces, debido a que esta sección de la planta posee cantidades elevadas de azucares (García-
Herrera et al., 2010).

Por otro lado, en el estado de Oaxaca, el Agave salmiana es utilizado como cobertura vegetal
para la reducción de la erosión, para la conservación de la humedad, así como barreras vivas a
diferentes altitudes. Actualmente, es utilizado como modelo de estudio, para determinar los

8
mecanismos de tolerancia al déficit prolongado de agua, siendo las plántulas de 6 meses de edad,
las que toleran la sequía discontinua hasta por más de 100 días (Verduzco et al., 2008).

1.2.4 Morfología

Las plantas de Agave salmiana son perennes, robustas, clasificadas como monocotiledóneas,
poseen raíces duras y fibrosas. La superficie de la hoja puede ser muy áspera al tacto, de 1 a 2.2
m de largo por 20 a 35 cm de ancho, ampliamente lanceoladas, color verde claro a verde
amarillento y se encuentran dispuestas en rosetas basales de 1.5 a 2.8 m de alto, con espinas
laterales y en las puntas. La espina terminal puede llegar a medir hasta a 9 cm de largo, acanalada
con sección transversal, aplanada y generalmente de color negro con perímetro rojizo (Flores et
al., 2010).

Al madurar (8 a 10 años), el Agave desarrolla una inflorescencia de hasta 9 m de altura, contorno

generalmente piramidal, con capacidad de floración en el tercio o cuarto superior de la estructura
(Fernández, 2008). Esta inflorescencia en la subespecie Agave, presenta forma paniculada, a
diferencia de los Agaves del subgénero Littaea que desarrollan una inflorescencia espigada
(Figura 1.2) (Muñiz-Márquez et al., 2013).

Figura 1.2 Morfología de los dos tipos de escapo del género Agave A) tipo paniculado, B)
tipo espigado.
(modificado de CONABIO, 2008).

Las flores poseen un largo de 6 a 9 cm, generalmente de color amarillo intenso (Figura 1.3A),
son protándricas, hermafroditas, autocompatibles con poca fertilización, actinomorfas, tienen
seis tépalos (a diferencia de los pétalos poseen forma puntiaguda), imbricadas y asimétricas,

9
presentan seis estambres, filamentos insertados en el tubo o en las bases, el tubo del perianto
corto, ovario trilocular, pistilo alargado y estigma trilobular. Los frutos del Agave salmiana
(Figura 1.3C) al madurar producen numerosas semillas (hasta 30000) en forma de disco, negras
y brillantes cuando son fértiles y blancas cuando son estériles (Figura 1.3D) (Flores et al.,
2010).

Su propagación asexual a través de hijuelos, suele ser la más común, debido a que la
reproducción por semilla requiere más cuidados y alarga el periodo de maduración de la planta
(Fernández, 2008).

A B

C D

Figura 1.3 Componentes de Agave salmiana A) Flores, B) Escapo, C) Fruto y D) Semilla

(Cortés et al., 2009).

1.2.5 Sistemas de reproducción

La reproducción de Agave salmiana puede ser por dos vías, sexual o asexual, cuando se lleva a
cabo por la vía sexual, la fecundación se realiza por medio de la polinización que realizan
algunos animales, principalmente murciélagos (Leptonycteris curasoae, L. nivalis,
Choeronycteris mexicana y Glossophaga sp.) y en menor grado insectos, que pueden ser diurnos
o nocturnos (palomillas, abejas, abejorros) además de aves (colibríes) (Figura 1.4) (Muñiz-
Márquez et al., 2013). Una vez realizada la polinización, el desarrollo de la semilla es modulada
por factores involucrados en el éxito de la germinación, como son la temperatura, la especie,
contenido de humedad, tipo de sustrato y el ambiente de origen (ráfagas de aire, frecuencia de
las precipitaciones, etcétera). Sin embargo, la baja disponibilidad de humedad y las elevadas

10
temperaturas en las zonas áridas y semiáridas en que se encuentran las plantas de Agave, hacen
que el proceso de germinación sea esporádico, con rendimientos entre 25 a 32% (García, 2007).

A A B

Figura 1.4 Agentes polinizadores de género Agave. A) Murciélago, B) Colibrí

(Melton, 2008).

Por otra parte, la reproducción asexual implica el enraizamiento y la separación de una parte de
la planta original, de ésta manera, las células, tejidos u órganos desprendidos se desarrollan
directamente en nuevos individuos conocidos como hijuelos (Figura 1.5).

Las estructuras a partir de las cuales puede ocurrir la separación pueden ser, los bulbillos (yemas
auxiliares de consistencia carnosa que almacenan reservas) de la planta, o puede darse la
fragmentación de una planta debida al deterioro y muerte del individuo parental o bien de los
tejidos de interconexión, como en el caso de los brotes de las raíces (García, 2007).

A A B

Figura 1.5 Desarrollo en Agave salmiana A) Yemas auxiliares, B) Hijuelos por

enraizamiento.
(Hernández, 2011)
1.2.6 Crecimiento y maduración

Durante el crecimiento y maduración de Agave salmiana, se generan cambios en cada estructura

de la planta, de esta manera las hojas, en las primeras etapas de su crecimiento, se caracterizan
por poseer forma lanceolada, entre 5 a 10 cm de largo y 3 a 7 cm de ancho, la aparición de las

11
espinas sucede de manera gradual, siendo al comienzo muy cortas y delgadas de hasta 1 cm de
largo, su coloración es grisácea tornándose a café-rojizo con la maduración y se disponen en el
perímetro de la hoja de forma acanalada, al llegar a la madurez la hoja desarrolla una textura
áspera al tacto, cambiando su coloración verde claro característico por tonalidades verdes
oscuros inclusive grisáceas dependiendo la variedad y tamaño llegando a alcanzar hasta 1.5 m
de largo y de 25 a 47 cm de ancho (Fernández, 2008).

La disposición de las hojas comienza con la formación del cono central o cogollo, formado por
hojas tiernas centrales las cuales posteriormente se organizan en forma de empalme para formar
la roseta, este proceso requiere entre 8 y 10 años aproximadamente, tiempo suficiente para su
maduración y desenvolvimiento sucesivo, dejando en las hojas externas una marca o impresión
sobre el envés de la hoja con la que tiene contacto directo, dándole un aspecto particular a la
roseta, marca que perdura hasta que la planta muere (Figura 1.6) (Muñiz-Márquez et al., 2013).

Figura 1.6 Marcas desarrolladas durante el proceso de crecimiento de la hoja de Agave

salmiana
(Martínez, 2012)

Antes de iniciar la etapa de floración, las hojas de la parte terminal de la roseta cambian, se
hacen más delgadas, pierden las espinas laterales y posteriormente se transforman en brácteas
(hojas originadas sobre el tallo floral), las cuales disminuyen gradualmente su tamaño conforme
se localizan hacia la parte apical del pedúnculo floral (Cortés et al., 2009). Después de la etapa
de adelgazamiento y formación de brácteas, comienza la formación del escapo floral, justo en
la parte central de la planta y en el extremo del escapo se origina la inflorescencia que se
desarrolla en forma paniculada (Figura 1.7) (Coleman-Derr et al., 2016).

12
 A B

Figura 1.7 A) Inflorescencia de Agave salmiana, B) Flores de Agave salmiana

(Herrera, 2014).

La coloración junto con la producción del polen de las flores de la planta de Agave salmiana,
representan los factores principales de atracción de los agentes polinizadores (murciélagos y
aves), éstos inician el proceso de polinización, al transportar el polen a los órganos sexuales
femeninos de la planta, localizados en la parte aérea de la misma; una vez fecundados los óvulos,
se desarrolla el fruto, que al llegar a la madurez produce las semillas que servirán luego para el
desarrollo de una planta nueva (Fernández, 2008).

1.3 Escapo floral

En botánica el escapo floral es el tallo que nace del bulbo o rizoma de una planta, no presenta
hojas y desarrolla flores o inflorescencias en el ápice. Sus características morfológicas como
altura, grosor, coloración, incluso desarrollo de su inflorescencia dependerán de la familia a la
que pertenezca la planta, siendo las principales en presentar esta estructura las Violaceae,
Liliaceae, Amaryllidaceae, Balsaminaceae, Agavaceae, Papaveraceae, Droseraceae, y
Bromeliaceae (Lira et al., 2016).

Por otro lado en la planta, el desarrollo del escapo floral indica madurez vegetativa, debido a
que una vez que inicia su desarrollo comienza la etapa de floración y por consiguiente de
reproducción. Por lo anterior en diversos estudios realizados a esta parte de la planta utilizaron
sus parámetros de crecimiento como indicativos de fertilidad o de producción vegetal. (Puri et
al., 2016)

Ejemplo de ello es un análisis realizado a las flores de Gerbera jamesonii, en el cual se evaluaron
distintas dosis de dos hormonas de crecimiento (ácido giberélico y salicílico) aplicadas al follaje
y sustrato con la finalidad de aumentar la producción de flores en la planta. Para ello se tomaron
como parámetros principales la longitud y diámetro del escapo, así como el número de escapos

13
florales por planta, indicando los resultados que la aplicación al follaje favoreció el número de
escapos florales por planta, mientras que, la aplicación al sustrato aumentó, la longitud y
diámetro del escapo, favoreciendo ambos el aumento en el rendimiento de flores por planta
(Morales-Pérez et al., 2014).

En el 2008 Cruz-Castillo et al también consideraron parámetros como elongación y grosor del

escapo como indicadores de crecimiento vegetal. En este estudio se analizó el efecto del uso de
varios tipos de lombricomposta sobre el desarrollo de la planta alcatraz “Green Goddess”
(Zantedeschia aethiopica (L) K. Spreng), concluyendo que el uso de la lombricomposta
propuesta favoreció la elongación del escapo floral en comparación a las plantas tratadas con
fertilizantes comerciales.

En otro estudio realizado a Encyclia adenocaula, planta perteneciente a la familia de las

Orquidáceas, se muestra que, características principales como longitud y grosor del escapo,
coloración de las antocianinas del escapo, intensidad de esta coloración, número de ramas,
número de flores y consistencia (verrugosidad) del escapo permiten eficazmente la
identificación de las propiedades reproductivas de la planta (Laguna et al., 2012).

Otro ejemplo es el estudio realizado a los escapos de la planta de cebolla Allium cepa L, en el
cual uno de los objetivos fue identificar la etapa de mayor producción de semilla en la planta
bajo condiciones mínimas de insumo, tomando como referencia principal la longitud del
vástago. Los resultados mostraron que es posible utilizar la altura del escapo de la planta como
parámetro para identificar su periodo más reproductivo (De la Fé et al., 2014).

1.3.1 Escapo floral en el género Agave

En el género Agave el escapo también es nombrado como quiote, nace de la parte media del
meristemo central (“piña” del Agave), como una larga porción terminal recta de hasta 12 m de
largo, en el cual se desarrollan los capullos indicando el inicio de la etapa de floración de la
planta (Coleman-Derr et al., 2016). Debido a su estructura fibrosa es utilizado como material de
construcción u ornamental, también se ha empleado como ingrediente para la elaboración de
platillos tradicionales (Vargas, 2009), sin embargo son pocos los estudios realizados a esta
estructura, quizá debido a que es poco conocida y porque sus usos principales no representan
beneficios económicos importantes.

14
La mayoría de estos estudios efectuados al escapo floral del género Agave han sido de tipo
exploratorios como el realizado al escapo de Agave kerchovei, localizado en Puebla y Oaxaca
principalmente, en el cual el objetivo principal fue obtener información acerca del conocimiento
y uso tradicional de los recursos derivados de esta estructura, así como de los botones florales
de la planta. El estudio se basó en varias entrevistas realizadas a hombres y mujeres del lugar,
relacionados con las actividades del hogar y del campo, a quienes se les aplicó un cuestionario
estructurado en función al desarrollo y usos principales del Agave (Brena-Bustamante, 2013).

Otro ejemplo, es el estudio realizado al escapo de Agave lechuguilla, en el cual el objetivo del
trabajo fue investigar las propiedades nutricionales de esta estructura, para proponer su consumo
como una fuente más de nutrimentos y difundir entre la población su valor nutricional. Para ello
se realizó una colecta de 300 g de escapo del maguey en el municipio de Tolcayuca, Hidalgo
realizando la identificación taxonómica y análisis químico proximal de macro y micronutrientes
en base seca de acuerdo a las técnicas de la AOAC de 1995 (Santos et al., 2006).

En otro estudio se determinó el desarrollo reproductivo del Agave cocui, enfocado en la

fenología de floración y fructificación de la estructura del escapo. Este estudio se realizó en
ocho localidades de Venezuela. En cada una de las localidades se seleccionó un área con
presencia de Agave cocui en la que al menos algunos de los individuos presentaran escapo en
su fase inicial y se le dio seguimiento a su desarrollo a lo largo de un año (Figueredo, 2011).

Por otro lado, además de los usos tradicionales del escapo, esta parte de la planta también se ha
utilizado como agente desparasitante de rumiantes (García-Herrera et al., 2010), lo cual ha
despertado interés en la investigación por la presencia potencial de compuestos con posibles
actividades biológicas, convirtiéndolo en una nueva vertiente de estudio vegetal dentro del área
de alimentos. Ejemplo de ello es el estudio fitoquímico realizado al escapo floral de la especie
A. salmiana, en el que se determinó la composición química proximal del vástago y se evaluó
el efecto producido por la etapa de desarrollo del escapo sobre el contenido de los compuestos
químicos presentes en la estructura, para lo cual se consideraron tres diferentes alturas de escapo
y tres diferentes secciones de los mismos (Tabla 1.4) (Medina, 2016).

15
 Tabla 1.4 Composición porcentual de escapo de Agave salmiana
Contenido E1 E2 E3
a a a
Proteína 1.18 ± 0.68 1.48 ± 0.72 2.16 ± 1.03
Fibra 19.73a ± 4.95 16.87a ± 4.34 12.32a ± 3.60
Humedad 63.11a ± 3.16 67.71a,b ± 3.20 74.00b ± 1.38
Extracto etéreo 4.52a ± 0.83 5.30a ±0.65 6.03a ± 0.60
Cenizas 3.43a ± 1.46 4.33a ± 1.13 2.29a ± 0.81
Carbohidratos 8.01a ± 1.18 4.31b ± 1.35 3.20b ± 0.17
Prueba de Tukey. Columnas con la misma letra no tienen diferencia significativa a un p=0.05.
Los valores se expresan como la media ± D.S de nueve repeticiones. El contenido de carbohidratos
se calculó por diferencia. E1=escapo de 300 cm, E2= escapo de 250 cm, E3= escapo de 200 cm.

Otro de los resultados obtenidos en el estudio realizado al escapo floral de Agave salmiana
indicó que esta parte de la planta es una fuente importante de compuestos antioxidantes (Tabla
1.5) y fenólicos. Los cuales en su mayoría se concentran en la parte media del vástago y son
extraídos con facilidad por medio de disolventes polares como el agua y el etanol (Medina,
2016).

Tabla 1.5 Determinación de la actividad antioxidante promedio de escapos florales de Agave salmiana
Extracto E1 E2 E3
CRUDO 47.75a,B,C ± 18.42 57.51b,A,B ± 15.41 58.35c,A,B ± 15.32
HEXANO 22.67a,D ± 10.21 29.78b,C ± 13.99 31.25c,C ± 13.45
ACETONA 28.53a,D ± 13.04 34.21b,C ± 10.88 37.38c,C ± 9.64
ETANOL 62.26a,B ± 8.36 60.56b,B ± 14.09 62.97a,A ± 13.36
METANOL 42.26a,C ± 14.12 49.97b,B ± 13.52 52.03c,B ± 14.07
AGUA 57.22a,A,B ± 17.97 61.40b,A ± 16.94 63.01c,A ± 16.15
Los datos son en porcentaje.
Prueba de Tukey. Los valores se expresan como la media ± D.S de nueve repeticiones. Valores con
diferente letra mayúscula en la misma columna son significativamente diferentes a un p=0.05. Valores
con diferente letra minúscula en la misma fila con significativamente diferentes a un p=0.05

También se determinó que el escapo de Agave salmiana posee compuestos antimicrobianos que
exhiben un amplio espectro de acción contra microorganismos como Escherichia coli, Shigella
sonnei y Salmonella typhimurium (Medina, 2016). En la tabla 1.6 se reúnen los valores de CMI
(concentración mínima inhibitoria) de diversos géneros de plantas, donde se puede observar que
el género agave presenta CMI muy bajas en comparación a las otras plantas, lo cual hace que
esta estructura tenga potencial para ser utilizada dentro del área de alimentos.

16
 Tabla 1.6 Comparación de CMI de diferentes plantas y escapos de Agave salmiana
Parte de la Tipo de Microorganismo que CMI
Especie vegetal
planta extracto afecta (mg*mL-1)
E1 y E3 Acuoso Escherichia coli 7.81
E1 Etanólico Shigella sonnei 7.81
Agave salmiana Escapo
Metanólicos Salmonella typhi 10.42
E2 y E3
Hexanólicos Listeria monocytogenes 10.42
Hojas Bacillus cereus 14.2
Agave lechuguilla1 Metanólicos
Staphylococcus aureus 28.5
Aloe vera3 Hojas Acuoso Listeria monocytogenes 100
Azadirachta indica4 Hojas Acuoso Escherichia coli 150
Larrea tridentata1 Hojas Metanólicos Escherichia coli 7.1
Centaurea calcitrapa 5 Hojas Metanólicos Salmonella typhi 612
Perejil2 (Petroselinum Hojas y raíz Agua-Etanol Staphylococcus aureus 2.77
sativum) (50:50, v/v)
Amaranthus hybridus7 Hojas Hexanólico Listeria monocytogenes 35.5
Rosmarinus officinalis L.6 Hojas Etanólico Shigella sonnei 1.02
1) Castro-Franco, et al., 2001, 2) García et al., 2009, 3) Guillermo et al., 2012, 4) Yumar et al., 2012, 5) Toribio et al., 2004,
6)Castaño et al., 2010, 7) Orozco et al., 2011. E1= escapo de 300 cm, E2= escapo de 250 cm, E3= escapo de 200 cm.

1.4 Compuestos bioactivos a partir de fuentes vegetales

En el área de la alimentación y específicamente, en alimentos funcionales, los compuestos

bioactivos se definen como, aquellos compuestos químicos que ejercen un efecto benéfico para
alguna función corporal de la persona, produciendo una mejora en la salud o reduciendo un
riesgo de enfermedad, exhibiendo también propiedades farmacológicas. Este tipo de
compuestos al ser extraídas de vegetales se les denomina fitoquímicos (Leonov et al., 2015) y
el estudio de estas sustancias se le conoce como fitoquímica.

Debido al impacto de estas sustancias en la mejora de la calidad de vida, actualmente existen

diversos estudios fitoquímicos enfocados en la búsqueda de nuevas fuentes naturales que
provean de este tipo de sustancias con propiedades de importancia biológica, como actividad
antimicrobiana, antioxidante, efecto antifúngico, efecto antiviral y anticancerígeno (Tabla 1.7),
entre los principales, que finalmente benefician a diversas áreas como la medicina, la
cosmetología y la industria alimentaria (Sharapin, 2010).

17
 Tabla 1.7 Principales compuestos bioactivos presentes en plantas
Grupo químico Compuesto Planta Actividad
Matricaria chamomilla Antimicrobiana contra S. aureus, S.
Ácido antémico
Fenoles simples (manzanilla) typhimurium
Terpenoide Ocimun basilicum Antimicrobiana contra Salmonella
Hypericum perforatum
Quinonas Hipericina Antiviral contra VIH
(hipérico)
Taninos Quercus rubra (roble) Antioxidante, antimicrobiana y antiviral
Antimicrobiana contra Shigella, Vibrio,
Catequina Camelia sinensis
Flavonas S. mutans
Quercitina Quercus rubra (roble) Antioxidante, antiinflamatorio
Erythroxylum coca Antioxidante, antimicrobiana contra
Alcaloides Coca
(coca) Cocos Gram positivos
Piperina Piper nigrum Antifúngica
Aldehído Hexanal Olea europea (olivo) Antimicrobiana contra Shigella
Antimicrobiana contra E. coli y S.
Panax ginseng
aureus. Antifúngica
Saponinas
Esmilagenina y
Agave lechuguilla Antioxidante y antiinflamatorio
gitogenina
Sulfóxidos Alicina Allium sativum (ajo) Antimicrobiana contra H. pylori
Mezcla Antimicrobiana contra
Látex Aloe vera (aloe)
compleja Corynebacterium, Salmonella
Antimicrobiana contra S. aureus, B.
Alcanos Poliacetileno Bupleurum salicifolium
subtilis
Domingo et al., 2003

Globalmente las plantas producen más de 100,000 productos naturales de bajo peso molecular,
también conocidos como metabolitos secundarios, sin embargo hasta ahora se han aislado
alrededor de 12,000, por lo que varias investigaciones han optado por la utilización de
metodologías de extracción más complejas, además de la selección de disolventes que permitan
al mismo tiempo, un mayor rendimiento de obtención y el aislamiento de una molécula
biológicamente viable (Franco et al., 2013).

Dentro de estos estudios se encuentra el realizado en los extractos etanólico y hexánico de hoja
y corteza de las plantas guayaba agria (Psidium friedrichsthalianum L.), palo de sangre
(Pterocarpus hayesii L.), chichimecate (Tynanthus guatemalensis L.) y ciruela (Spondias
purpurea L.) contra Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium y Bacillus cereus
mediante el método de difusión en agar. Los resultados indican que el extracto hexánico de cada
una de las plantas presentaron actividad antimicrobiana al menos en uno de los microorganismos

18
evaluados (Miranda et al., 2012).

Por otro lado Salinas et al (2009) determinaron la actividad antimicrobiana de veintidós

extractos orgánicos de nueve especies vegetales medicinales, que son comúnmente empleadas
por los habitantes de las comunidades de Morelos, para tratar diferentes padecimientos
infecciosos. Los microorganismos empleados fueron: Staphylococcus aureus, Streptococcus
faecalis, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Salmonella typhi y la levadura Candida albicans,
siendo los extractos hexánicos y acetónicos los que mostraron las menores concentraciones
mínimas inhibitorias (CMI) frente a los microorganismos utilizados.

Además del estudio antimicrobiano también se han analizado las propiedades antifúngicas de
los compuestos extraídos de plantas, como la investigación realizada por Ruíz et al en el 2009,
donde probaron extractos metanólicos, etanólicos e hidroalcohólicos de cuatro plantas peruanas
contra las bacterias Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas
aeruginosa, Bacillus subtilis y Escherichia coli; y los hongos Candida albicans, Aspergillus
niger y Microsporum canis. Los resultados mostraron que los extractos hidroalcohólicos
presentaron actividad antimicrobiana significativa frente a Staphylococcus aureus,
Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, Candida albicans y Microsporum canis (Ruíz et
al., 2009).

1.4.1 Compuestos biactivos en el género Agave

En México existe la mayor diversidad de especies de Agave en el mundo y considerando sus
usos en la medicina tradicional, estas plantas podrían ser una fuente importante de compuestos
bioactivos, como fenoles, alcaloides, saponinas, terpenos y flavonoides, los cuales poseen
diferentes efectos biológicos como lo demuestran estudios realizados en in vitro y en vivo como
puede ser: efecto antimicrobiano, antimicóticos, antioxidantes, antinflamatorios,
antihipertensivos, inmunomodulador, antiparasitario, antiviral y anticancerígeno (Tabla 1.8)
(Santos-Zea et al., 2012, López-Romero et al., 2018).

Los diferentes grupos de compuestos identificados en las especies de Agave poseen un

mecanismo de acción específico, sin embargo dentro de cada grupo, se han aislado compuestos
que ejercen diversos efectos biológicos debido a cambios en la configuración de su estructura
química o incluso debido solo a fracciones del mismo. Un ejemplo son las saponinas aisladas
de Agave sisalana, estos compuestos son derivados glicosilados de esteroides de plantas tales

19
como tigogenina, smilagenina, gitogenina, clorogenina, hecogenina, sarsapogenina,
neotigogenina y honguangenina. En este caso la fracción de azúcar ejerce un papel importante
en las actividades anticancerígenas, antimicrobianas y antiinflamatorias de las saponinas. La
aglicona hecogenina, por ejemplo, no mostró actividad contra la línea celular de cáncer de
pulmón NCI-H460, la línea celular de cáncer de mama MCF-7 o la línea celular de glioblastoma
SF268, a diferencia de la citotoxicidad observada de sus glucósidos: hecogenina 3-O-!-D-glu-
(1 2)-[!-D-xyl-(1 3)]-!-D-glu-(1 4)-!-D-gal y hecogenina 3-O-"-L-rha-(1 3)-!-D-xyl-
(1 2)-[!-D-xyl-(1 3)-!-D-glu-(1 3)]-!-D-glu-(1 4)-!-D-gal (Chen et al., 2011).

Otro ejemplo sobre la diferencia en bioactividad debido a la fracción de azúcar se observó con
Agamenósidos D, E y F aislados de Agave americana. Mientras que los tres tienen propiedades
antifúngicas, cinco azúcares Agamenósidos (E y F) mostraron un efecto más elevado en
comparación con la cadena de azúcar Agamenósido D (Jin et al., 2003). En otro caso observado
en Agave utahensis, incluso la misma aglicona con el mismo resto de azúcar puede tener
diferente actividad dependiendo de la unión entre azúcares del glucósido de smilagenina donde
(25R)-5!-spirostan-3!-yl O-!-D-glu-(1 4)-!-D-gal y (25R)-5!-spirostan-3!-yl O-!-D-glu-
(1 3)-!-D-gal tuvieron actividad citotóxica contra las células HeLa con IC50 de 4.9 y 7 g*mL-
1
, respectivamente (Yokosuka et al., 2009).

Otro estudio sobre las saponinas fue realizado en las hojas de Agave brittoniana, donde se
observó que las saponinas esteroidales extraídas (clorogenina, hecogenina, tigogenina,
rockogenina, β-sitosterol, diosgenina y yucagenina) actúan como antiparasitarios en contra de
Trichomona vaginalis, un protozoo patógeno flagelado, que provoca la enfermedad conocida
como trichomonosis o tricomoniasis, que es una infección de los genitales (Orestes et al., 2008).

En las hojas y flores de Agave lechuguilla también se han aislado saponinas esteroidales como
esmilagenina y gitogenina, los cuales son utilizados como precursores esteroidales,
antiinflamatorios o bien como suplemento alimenticio en la engorda de borregos (Soto et al.,
2005).

Por otro lado, también se han realizado estudios a los grupos fenólicos presentes en la planta de
Agave. Chen et al (2009) encontraron que las flavonas y homoisoflavonas aisladas de Agave
sisalana afectaron la proliferación de células mononucleares de sangre periférica (PBMC)

20
donde el efecto podría estar relacionado con la inhibición de la producción de citocinas ya que
IL-2 e IFN se inhibieron mediante la adición de estos compuestos, indicando que un grupo C-4
metoxilo y un grupo hidroxilo C-5 fueron necesarios para ejercer actividad inmunomoduladora.
Otro de los efectos observados en las flavonas y homoisoflavonas obtenidas del Agave son su
elevada capacidad antioxidante que podría deberse al grupo hidroxilo C-5 en su estructura
(Masaoud et al., 1995).

También se ha encontrado que varios glucósidos como el Kaempferol y Kaemp-ferol-3-O-

glucósido aislados de Agave duranguensis son los principales compuestos responsables de
ejercer propiedades antiinflamatorias y analgésicas con resultados satisfactorios (Almaraz-
Abarca et al., 2009; Parveen et al., 2009). En el caso de Agave intermixta el efecto
antiinflamatorio se debió a los esteroles, quinonas y compuestos fenólicos presentes en la
infusión de las hojas de la planta, el estudio analizó in vivo dos modelos de ratones albinos,
donde en el primer modelo una dosis de 300 mg*kg-1 fue tan efectiva como el fármaco
(dexametasona) en su dosis recomendada (0,8 mg*kg-1) y en el segundo modelo se obtuvo un
efecto del extracto aplicado tópicamente sobre el edema inducido de la oreja de ratón a dosis de
3.0 y 5.0 mg*oreja-1 (Almaraz-Abarca et al., 2009)

En la planta de Agave salmiana, los estudios se han realizado principalmente, en raíz, hojas, y
flores, de las cuales se han identificado varias saponinas, relacionadas con hormonas
esteroideas, esteroides diuréticos y con la vitamina D, por lo que tiene efectos sobre el
crecimiento y salud, en seres humanos y cerdos (Ventura et al., 2010); algunos triterpenos que
han sido utilizados como antileucémicos, antiinflamatorios y en tratamientos contra la disenteria
(es un trastorno inflamatorio del intestino, especialmente del colon, que produce diarrea)
(Calange, 2011); la identificación de taninos catéquicos, utilizados como antidiarreicos y para
el tratamiento de intoxicación por metales pesados, principalmente aquellos que poseen mayor
unidades de catequinas, lo que brinda una mayor resistencia a la hidrólisis ácida en el aparato
digestivo (Castillo et al., 2007); mientras que algunos estudios también sugieren su uso como
antioxidante, antitumoral e inhibidor de enzimas (Hipólito, 2007); y algunos flavonoides que
poseen actividad antioxidante, antiinlfamatoria, anticancerígena (especialmente el cáncer de
mamá y de próstata) y antiviral (Perricone, 2004 y Causse, 2010).

21
 Tabla 1.8 Compuestos aislados de plantas del género Agave y sus actividades biológicas
Grupo del
Actividad Especie Referencia
compuesto
Saponinas Anticancerígeno A. fourcroydes Ohtsuki et al., 2004
Saponinas Antifúngico A. americana Yang et al., 2006
Yang et al., 2006; Sati et al.,
Saponinas Anticancerígeno A. americana y A. cantala
1985.
Saponinas Anticancerígeno A. utahensis Yokosuka et al., 2009
Saponinas Anticancerígeno A. sisalana Chen et al., 2011
Saponinas Antiinflamatorio A. lechuguilla Soto et al., 2005
Saponinas Antiinflamatorio A. attenuata da Silva et al., 2002
Saponinas Antiparasitario A. brittoniana Orestes et al., 2008
Saponinas Antiparasitario A. salmiana Wina et al., 2005
Saponinas y
Antifúngico A. asperrima Lozano et al., 2011
alcaloides
Saponinas y
Antihipertensivo A. americana L. Semenya et al., 2012
esteroles
Antiinflamatorio y Almaraz-Abarca et al., 2009;
Flavonoles A. duranguensis
antioxidante Parveen et al., 2009
Flavonoles Inmunomodulatorio A. sisalana Chen et al., 2009
Fenoles Antiparasitario A. sisalana Botura et al., 2013
Fenoles y
Antioxidante A. americana Hamissa et al., 2012
flavonoides
Fenoles y Antioxidante y
A. attenuata Rizwan et al., 2012
flavonoides antimicrobiano
Flavonoides Antioxidante A. durangensis Barriada-Bernal et al., 2014
Antimicrobiano
Flavonoides A. salmiana Castillo et al., 2007
Antioxidante y
Perricone, 2004 y Causse,
Flavonoides Antiinflamatorio A. salmiana
2010
Alcaloides Antifúngico A. americana Rosas et al., 2011
Taninos Antimicrobiano y A. salmiana
Hipólito, 2007
antiviral
Polisacáridos Antioxidante A. sisalana Zhang et al., 2014
Terpenos Antiinflamarorio A. salmiana Calange, 2011

1.5 Compuestos con actividad antioxidante y compuestos fenólicos en plantas

Los antioxidantes se definen como aquellos compuestos que pueden inhibir o retardar la
oxidación de otras moléculas inhibiendo el inicio y/o propagación de las reacciones en cadena
de los radicales libres. Los beneficios que ofrecen este tipo de compuestos dentro de la salud

22
humana se conocen desde la antigüedad en conjunto con el nacimiento de disciplinas como la
farmacopea y la fitoterapia en el siglo XV, atendiendo padecimientos como hipertensión,
problemas renales, problemas inflamatorios, patologías cardiovasculares, enfermedades
tumorales entre otros, por ello su importancia dentro de la investigación. Los estudios realizados
a diversas plantas de tipo medicinal y alimentaria indican que los compuestos antioxidantes más
representativos son los polifenoles con un gran potencial antioxidante, ya que engloban un gran
grupo de compuestos como flavonoides, quinonas, ácidos fenólicos, flavonoles, flavonas y
taninos, también se han aislado compuestos como aceites esenciales, terpenos, saponinas,
alcaloides, proteínas y polipéptidos que ejercen la misma actividad bajo mecanismos de acción
diferentes (Tabla 1.9) (Coronado et al., 2014).

Por ejemplo en un estudio se demostró que los flavonoides catequina, epicatequina, epiga-
locatequina, epicatequina-galato y epigalo-catequina ejercen su actividad antioxidante
mediante una combinación de sus propiedades quelantes de hierro y secuestradoras de especies
reactivas del oxígeno (ERO), además de la inhibición de enzimas, tales como: lipoxigenesa,
ciclo- oxigenasa, mieloperoxidasa y NADPH oxidasa (Garrido et al,. 2013), así mismo y por
pertenecer al mismo grupo de los fenoles, las quinonas ejercen su acción de manera muy similar
que los flavonoides con una unión específica en los aniónes superóxidos (Mansour et al., 2002).
Por otro lado dentro de este mismo grupo también se ha encontrado que los ácidos fenólicos,
los flavonoles, las flavonas y los taninos ejercen su acción antioxidante donando su ion de H
disponible en tanto su estructura química lo permita, es así que las flavonoles (galangina,
kaempferol, quercetina miricetina) lo realizan por sustitución del ion H del anillo B de su
estructura (Brewer, 2011).

Por su parte los alcaloides, terpenos, aceites esenciales, deben su actividad antioxidante a la
inhibición por uniones específicas a ciertas enzimas oxidantes (lipoxigenasa) (Yanishlieva et
al., 1999; Mišík et al., 1995; Rackova et al., 2007).

23
Tabla 1.9. Mecanismo de acción de los principales grupos de compuestos con actividad antioxidante aislados de
plantas
Clase Subclase Ejemplo Mecanismo
Catequina, Epicatequina
Propiedades quelantes de hierro e
Epiga-locatequina,
Flavonoides inhibición de enzimas1,2
Epicatequina-galato
Epigalo-catequina
Unión específica para anión
Quinonas Timoquinona superóxido y quelante generale de
radicales libres4
Ácido gálico
Ácidos Ácido protocatecúico,
Donación del ion H5.
fenólicos Ácido cafeico
Ácido rosmarínico
Fenoles
Captación de radicales libres por
Galangina, Kaempferol,
Flavonoles sustitución del anillo B de su
Quercetina Miricetina
estructura5.

Unión preferentemente a metales en

Flavonas Naringenina
los grupos 5-hidroxilo y 4-oxo5.

Oxidación de lípidos, captación de

oxígeno y radicales derivados del
Taninos Ácido tánico
oxígeno por los radicales OH
expuestos6.
Berberina Inhibición de enzimas oxidantes
Oxyberberina como la lipoxigenasa por unión
Alcaloides
Jatrorrhizina específica con el átomo de hierro en
Columbamina el centro catalítico de la enzima7,8.
Terpeno, Inhiben la peroxidación de los
Timol
aceites fosfolípidos liposómicos en función
Carvacrol
esenciales a la concentración3
La fracción glucosídica elimina
Saponinas Soyasaponinas superóxidos formando compuestos
intermedios de hidroperóxido9.
Oxidación de lípidos mediante
Secuencias de
inactivación de especies reactivas
polipéptidos: Pro-Tir-
Proteínas y de oxígeno, eliminación de
Ser-F-Lis, Gli-F-Gli-Pro-
polipéptidos radicales libres, quelación de
Glu-Leu y Val-Gli-Gli-
metales de transición prooxidativos
Arg-Pro
y reducción de hidroperóxidos10,11.
1) Garrido et al,. 2013, 2) Pérez, 2003, 3) Yanishlieva et al., 1999, 4) Mansour et al., 2002, 5) Brewer, 2011, 6) Kim et al.,
2010, 7) Mišík et al., 1995, 8) Rackova et al., 2007, 9) Francis et al., 2002, 10) Elias et al, 2008, 11) Zou et al., 2016.

24
Actualmente el aumento de enfermedades crónico degenerativas como la diabetes, cáncer,
enfermedades cardiovasculares y enfermedades neurodegenerativas vinculadas a la necesidad
del ser humano de optar por una alimentación más saludable, ha despertado interés en las fuentes
naturales de compuestos nutracéuticos como los antioxidantes. Tan solo en México, durante los
últimos años se ha incrementado el consumo de hierbas aromáticas, tanto en la condimentación
de comidas como en forma de infusiones o bebidas con fines terapéuticos, identificadas como
una valiosa fuente de diversos fitoquímicos (González-Jiménez et al., 2015).

Por lo anterior, existen recientemente diversos estudios enfocados en la búsqueda de nuevas

fuentes naturales que provean de este tipo de compuestos y en la búsqueda de compuestos
nuevos con mejores propiedades antioxidantes.

1.5.1 Compuestos con actividad antioxidante y compuestos fenólicos en el género

Agave

El género Agave, ha tomado importancia en el área de la fitoquímica debido a los compuestos

antioxidantes aislados de las distintas partes de la planta y de sus productos. Por ejemplo, Reyes-
Munguía et al (2009) evaluaron el potencial redox de la capacidad antioxidante de los fenoles
totales presentes en los extractos acuosos obtenidos a partir de hojas frescas y de hojas secas de
maguey morado (Rhoeo discolor), esto con el fin de determinar el tratamiento con mayor
actividad antioxidante. Los resultados mostraron que el extracto de hojas frescas obtuvo un alto
contenido de antioxidantes significativamente mayores que en el extracto de hojas secas.

En otro estudio se analizaron las flores comestibles de Agave durangensis evaluando las
propiedades antioxidantes y composición de flavonoides de extractos de diferente
hidrofobicidad. El análisis cromatográfico reveló la presencia de ocho flavonoles (cinco
glicósidos de quercetina y tres glicósidos de canferol), que variaron en número y concentración
en los extractos, siendo los extractos de las flores los que tuvieron el contenido más alto de
flavonoides (1210.4 µg/g extracto seco) en comparación a los extractos blanco (crudo)
(Barriada-Bernal et al., 2014).

Por otra parte, también se han analizado las propiedades antioxidantes de productos populares
obtenidos del Agave como el mezcal, el aguamiel y el pulque. Como muestra un análisis
realizado al aguamiel obtenido del Agave atrovirens, en el cual se indica la presencia de

25
saponinas y compuestos fenólicos los cuales mostraron elevada actividad antioxidante (Romero-
López-Romero et al., 2015).

En otro estudio también se analizó el mezcal obtenido a partir de Agave duranguensis, en este
caso se evaluó la actividad antioxidante, la concentración de fenoles totales y los principales
componentes fenólicos con respecto al tiempo de maduración de la bebida en barricas de roble
americano. Los resultados mostraron incremento en todas las determinaciones, siendo
mayoritarios en las bebidas que permanecieron por más tiempo en las barricas (207 días) y se
observó una mayor complejidad de los compuestos fenólicos (11 ácidos fenólicos y 3
flavonoides) en el mezcal añejado (Ávila-Reyes et al., 2010).

Por otro lado en el aguamiel se han realizado estudios de actividad antioxidante en las especies
A. salmiana y A. atrovirens. En A. salmiana se determinó tanto la actividad antioxidante como
el contenido de fenoles totales, encontrándose un valor de 1096.8 µmol TE y 904.8 µM GAE,
respetivamente (Tovar-Robles et al., 2011). Y en A. atrovirens, a la bebida se le realizaron
extracciones con metanol y acetona, evaluando luego su actividad antioxidante y contenido de
fenoles totales. En este caso ambos resultados fueron mayores en el extracto acetónico (182.10
µM TE/g de extracto y 19.26 mg GAE/g de extracto, respectivamente) (Santos-Zea et al., 2012).

Otra de las bebidas populares del Agave a la que también se le han evaluado sus propiedades
antioxidantes es el pulque. Tovar-Robles et al (2011) evaluaron la actividad antioxidante
(técnica de DPPH) así como el contenido de fenoles totales de dicha bebida, obteniendo 567.2
µmol TE y 452 µM GAE respectivamente.

1.6 Compuestos con actividad antimicrobiana en plantas

Las especies vegetales poseen de manera natural mecanismos de resistencia ante el ataque de
patógenos los cuales pueden ser constitutivos (histológicas o químicas) o defensas inducidas por
factores externos. Los constitutivos comprenden barreras físicas, procesos de lignificación,
suberización y formación de calosa así como la formación de metabolitos secundarios con
propiedades antimicrobianas como parte de la estructura de los tejidos. Las defensas inducidas
por su parte, son un proceso complejo que parte desde la señal química o elicitor que
desencadena la producción de enzimas del metabolismo secundario, cuyo resultado final sería

26
la síntesis de compuestos antimicrobianos, los cuales afectan además de los patógenos, a los
consumidores de las plantas y a sus enemigos naturales (Montes-Belmont, 2009).

La defensa mediante compuestos químicos tiene dos vertientes; aquellos compuestos

antimicrobianos de bajo peso molecular, que están estructuralmente presentes en todas las etapas
del desarrollo de la planta, en alguna fase de su ciclo biológico, o bien que son producidos
después de una infección pero a partir de compuestos ya existentes y que algunos autores llaman
“inhibitinas” o también “compuestos constitutivos”.

Los compuestos antimicrobianos constitutivos se pueden encontrar siempre en concentraciones

suficientes para inhibir el desarrollo de patógenos o bien, pueden encontrarse en las plantas
sanas en una forma inactiva y después de la infección son convertidas en productos
antimicrobianos por medio de reacciones bioquímicas cortas y simples, como la hidrólisis
enzimática (Pedras et al., 2015). Dichos compuestos pertenecen a las principales clases de
metabolitos secundarios, como son, terpenos, fenoles y compuestos que contienen nitrógeno,
los cuales se presume ejercen una función directa con el crecimiento y desarrollo de la planta,
como la fotosíntesis, respiración, transporte de solutos, síntesis de proteínas, asimilación de
nutrientes y formación de carbohidratos, proteínas y lípidos (Taiz et al., 2010).

Los metabolitos procedentes de plantas que actúan como inhibidores de microorganismos lo

realizan bajo mecanismos de acción dependiente de la estructura del compuesto (Tabla 1.10).
Siendo en las plantas el grupo de los fenoles los que se encuentran en mayor proporción, existen
diversos estudios sobre al respecto. Por ejemplo Gyawali R. e Ibrahim S. (2014) sugieren que
el sitio y el número de grupos hidroxilo del grupo fenol están relacionados con su toxicidad
relativa para los microorganismos, con evidencia de que el aumento de la hidroxilación da como
resultado un aumento de la toxicidad. Por ello se cree que los mecanismos responsables de la
toxicidad fenólica a los microorganismos incluyen la inhibición enzimática por los compuestos
oxidados, posiblemente a través de la reacción con grupos sulfhidrilo o a través de interacciones
más inespecíficas con las proteínas externas del microorganismo (Lima et al., 2016).

Otro grupo de compuestos con elevada actividad antimicrobiana son los alcaloides, estos
compuestos especialmente los alcaloides cuaternarios (berberina y harmina) ejercen su
capacidad inhibitoria al intercalarse con el ADN del microorganimo (Upadhyay et al., 2014).

27
El siguiente grupo de compuestos antimicrobianos son los terpenos, que pese a la falta de
información que explique el mecanismo de acción, se tienen algunos estudios que sugieren su
intervención en la disrupción de la membrana bacteriana por los compuestos lipófilos. Lo cual
se corrobora en el estudio realizado por López-Romero et al (2015), donde aislaron carveol,
carvona, citronelol y citronelal, los cuales ejercieron actividad antibacteriana al interactuar con
los fosfolípidos de la membrana y los grupos fosfato del microrganismo (Escherichia
coli y Staphylococcus aureus) para después dañar las estructuras de la membrana celular,
provocando muerte celular.

Por su parte las saponinas, también consideradas como parte metabolitos con elevada actividad
antimicrobiana ejercen su acción inhibitoria al formar complejos con los esteroles de las
membranas celulares del microorganismo a la cadena de azúcares unida al carbono-3 de la
estructura del compuesto, generando grandes poros en las mismas, provocando cambios en su
permeabilidad y lisis celular (Díaz, 2009).

Por otro lado están los compuestos que se encuentran en menor proporción en las plantas, las
proteínas y polipéptidos, cuyo mecanismo de acción puede deberse a la formación de canales
iónicos en la membrana microbiana (Nawrot et al., 2014) o la inhibición competitiva de la
adhesión de proteínas microbianas a los receptores de polisacáridos del hospedador
(Mardirossian et al., 2014).

Finalmente además de los compuestos ya mencionados, otros estudios sugieren que los
poliacetilenos, también son un grupo de compuestos que si bien no se encuentran en todas las
plantas, son metabolitos que cabe mencionar por sus efectos antimicrobianos de elevado
espectro (Negri, 2015). Lo cual se corrobora con el estudio realizado a la esponja del Mar Rojo,
Xestospongia sp (Ayyad et al., 2015), del cual se aislaron 2 poliacetilenos: Acil-glicerolípido,
R-galactopiranosilglicerol y xestospongiamida, que presentaron actividad inhibitoria frente
diversas bacterias y hongos (Acinetobacter baumannii, Escherichia coli, Klebsiella
pneumoniae, P. aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Aspergillus
niger y Candida albicans).

28
Tabla 1.10 Mecanismo de acción de los principales grupos de compuestos con actividad antimicrobiana aislados
de plantas

Clase Subclase Ejemplo Mecanismo

Fenoles Privación de sustrato y
Catcol y epicatequina
simples disrupción de la membrana
Ácidos Aumenta la permeabilidad de la
Ácido clorogénico
fenólicos membrana externa y plasmática1.
Se une a las adhesinas, complejo
Flavonoides Crisina con la pared celular, inactiva las
enzimas
Inactiva las enzimas e
Flavones Abisinona inhibe la transcriptasa inversa del
Fenoles VIH
Alteración en la integridad y
Flavonoles Totarol permeabilidad de las membranas
celulares 2.
Enlace a las proteínas, unión a
adhesinas, inhibición enzimática,
Taninos Eligitanina
privación de sustrato e
interrupción de la membrana.
Interacción con ADN eucariótico
Cumarinas Warfarina
(actividad antiviral)
Terpenos,
aceites Capsaicina Disrupción de la membrana
esenciales
Interacción en la pared celular
Alcaloides Berberina y piperina
y/o ADN
Forma complejos con los
esteroles de las membranas
Saponinas Tomatina
celulares a la cadena de azúcares
unida al carbono-33.
Proteínas y Impide la formación de puentes
Aglutinina
polipéptidos disulfuro
Acil-glicerolípido, 2'-O-(7E,17E-
18-bromo-octaoctadeca-7,17-
dien-5,15-dinoil)-3'-O-
(9E,13E,17E)-18-bromo-
Poliacetilenos4 octaoctadeca-9,13,17-dien-7,15- ¿?
dinoil-1'-O-β-D-
galactopiranosilglicerol y
xestospongiamida.
Adaptado de Cowan, 1999. 1) Lou et al., 2011, 2) Shi et al., 2018, 3) Díaz, 2009, 4) Ayyad et al., 2015

29
 1.6.1 Compuestos con actividad antimicrobiana en el género Agave
Diversos metabolitos que ejercen actividad antimicrobiana, se han aislado de diversas fuentes
vegetales con un especial atención al género de Agave, debido a que se han realizado diversos
estudios a sus hojas, flores y raíz indicando que esta planta es una fuente importante de
compuestos con acción biológica de índole fitoquímico y de sensibilidad antimicrobiana. Las
técnicas más utilizadas para este propósito han sido las extracciones con disolventes orgánicos,
mostrando una concentración mínima inhibitoria (CMI) contra una gran variedad de
microorganismos, que incluyen bacterias, hongos y algunas levaduras (Lozano et al., 2011).

Por ejemplo, se ha reportado que los extractos metanólicos y etanólicos de las hojas y flores del
Agave aspérrima, poseen elevadas concentraciones de saponinas y alcaloides, que inhiben el
crecimiento fúngico y la producción de aflatoxinas (B1, B2, G1 y G2) en Aspergillus parasiticus
y Aspergillus flavus, dos hongos que se clasifican como potenciales hepatocarcinógenos
(Lozano et al., 2011). Mientras que los extractos metanólicos del Agave americana, poseen
principalmente alcaloides que afectan de manera importante la producción de aflatoxinas del
hongo Aspergillus parasiticus (Rosas et al., 2011).

Otro estudio sugiere que el extracto metanólico de las hojas del Agave attenuata ejerce efectos
inhibitorios moderados en bacterias como Escherichia coli y Staphylococcus aureus (Rizwon
et al., 2012); Agave americana, Agave ferox, Agave montana, Agave marginata y Agave scabra,
mostraron hasta un 69.31% de inhibición en el crecimiento de hifas del hongo Postia placenta
(Siddhapura et al., 2011), finalmente extractos etanólicos de las hojas y el escapo del Agave
picta, expresaron inhibición en bacterias como Escherichia coli, Listeria monocytogenes,
Staphylococcus aureus y Vibrio cholerae (Verástegui et al., 2008).

En la planta Agave salmiana, los análisis realizados tanto en hojas como en flores indican la
presencia de varias saponinas, como la hecogenina, manogenina, yuvagenina, agavogenina,
sarsasapogenina, texogenina, esmilagenina, gotogenina, tigogenina y clorogenina, las cuales
presentan actividad para desparasitar animales, al generar una interacción con el colesterol
localizado en la membrana plasmática del protozoo, provocando la disrupción celular (Wina et
al., 2005). En la misma estructura también se han identificado taninos, que han sido utilizados
como agentes antibacterianos, en contra de S. aureus, y como coadyuvantes en el tratamiento
contra el virus de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) (Hipólito, 2007). Por último, se han

30
aislado flavonoides de las hojas y flores de ésta planta presentado actividad antimicrobiana
(abisinona I y V) frente a Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis (Castillo et al., 2007).

A pesar de sus resultados positivos en ensayos biológicos, los extractos de Agave no han sido
ampliamente evaluados en sistemas de alimentos y áreas farmacéuticas, y estos campos
representan una ruta potencial para mejorar el uso de plantas de Agave como aditivos
alimentarios y agentes para el tratamiento de enfermedades médicas.

1.7 Procesos de extracción de compuestos con actividad biológica

El proceso de extracción de compuestos funcionales procedentes de especies vegetales tiene sus
inicios en la medicina antigua aproximadamente en el siglo XV, en el desarrollo de disciplinas
farmacológicas como la farmacopea o fitoterapia, en las cuales era primordial la obtención
principalmente de aceites esenciales a los cuales se les adjudico diversas funciones benéficas
para la salud (Castillo, 2007), sin embargo a través de los años los procedimientos extractivos
se vieron modificados tanto por la especificidad de los compuestos bioactivos presentes en las
plantas así como por las propiedades físicas de las fuentes vegetales, de tal manera que se
aprovechan las propiedades químicas de diversos disolventes para extraer por afinidad química
una mayor cantidad y variedad de compuestos bioactivos así como la aplicación de
procedimientos más adecuados para aumentar la extractibilidad de dichos compuestos, siendo
útil aplicar procedimientos mecánicos en las partes fibrosas de la plantas (raíces y tallos) y
menos agresivas (percolación, decocción, arrastre de vapor o extracción con equipo Soxhlet),
en las partes suculentas de las mismas (hojas, flores y fruto) (Gennaro, 2009).
Seguido se describen los principales procedimientos extractivos utilizados en plantas
(maceración, percolación y arrastre de vapor) por su fácil aplicación, alto rendimiento y bajo
costo:
La maceración; es un proceso extractivo en el cual la muestra vegetal puede utilizarse ya sea
en estado seco o en fresco y es indispensable el uso de disolventes que logren solubilizar los
compuestos activos de interés, permitiendo liberar los compuestos por fragmentación del tejido.
En este proceso existe un equilibrio de concentración entre el tejido vegetal y el disolvente, que
va a depender de factores relacionados al material vegetal como su naturaleza, el tamaño de
partícula, su contenido de humedad y cantidad, además de factores relacionados con el
disolvente, como la selectividad, cantidad y concentración. La velocidad con que se obtiene este

31
equilibrio está en función del tamaño de partícula del tejido vegetal y de las propiedades del
disolvente como su viscosidad y polaridad (Sharapin, 2010).

El proceso clásico de maceración consiste en dejar a temperatura ambiente la muestra triturada

en contacto con el disolvente, sin renovación del líquido extractor por tiempos prolongados y
en agitación ocasional por al menos 24 h, pudiéndose extender hasta 7 días, a excepción del
disolvente del agua, ya que el tiempo debe ser corto de 24 a 36 horas, para evitar fermentación
o formación de moho. Transcurrido ese tiempo, se obtiene el extracto filtrando la mezcla y se
elimina el residuo vegetal (Sharapin, 2010) (Figura 1.8). Este proceso, también conocido como
maceración simple o estática, es sumamente lento. Para acortar el tiempo de operación, el
material vegetal y el disolvente deben mantenerse en movimiento constante, procedimiento que
se describe como maceración dinámica (Castillo, 2007).

1 2 3

Figura 1.8 Proceso de extracción vegetal por el método de maceración. 1.- Maceración, 2.-
Filtración y 3.-Recolección

Las desventajas del proceso de maceración son; el tiempo y el rendimiento, ya que no es posible
alcanzar la extracción completa del 100% de los principios activos, debido a la saturación del
líquido extrayente y el establecimiento de un equilibrio difusional entre medio extractor y el
interior de la célula, por lo que para eficientar la extracción la operación de maceración (estática
o dinámica) puede repetirse varias veces, después de escurrido el disolvente de la extracción
anterior (Bagué, 2012).

Los compuestos antimicrobianos que se pueden extraer por medio de la maceración son
principalmente aquellos de naturaleza termolábil, como las proteínas y aminoácidos ya que el
proceso se realiza a temperatura ambiente, sin embargo no resulta útil para la extracción de
compuestos volátiles como los terpenos debido a que los tiempos de exposición del material
vegetal y el disolvente son prolongados, favoreciendo la liberación de los mismos (Castillo,
2007).

32
La percolación; es un procedimiento de extracción que implica el uso de aparatos específicos
de cuerpo cilíndrico o cónico, denominados percoladores, provistos de un grifo en la parte
interior para regular el flujo del disolvente (Figura 1.9). El proceso consiste en hacer pasar el
disolvente a través del material vegetal seco y molido colocado previamente en el percolador,
hasta su extracción completa debido a que, constantemente se adiciona disolvente puro por la
parte superior del aparato, de tal manera que se compensa la cantidad de disolvente que sale por
la parte inferior (Gennaro, 2009) El material vegetal comprende una etapa preliminar en la que
se humedece con el disolvente antes de colocarlo en el percolador. Lo cual tiene como objetivo
aumentar la superficie de contacto, facilitando el paso del disolvente y evitando la formación de
falsas vías, que finalmente perjudican la eficiencia del proceso. Es así que el humedecimiento
del material vegetal aumenta la porosidad de la pared celular y facilita la difusión de las
sustancias extraíbles hacia el exterior de las células (Sharapin, 2010).

A B

Figura 1.9 Equipo de extracción tipo percolador A) Partes principales, B) Montaje en

laboratorio
(Sharapin, 2010 y Porroche, 2013)

De igual manera que el proceso de maceración, la percolación se realiza a temperatura ambiente

facilitando la extracción de compuestos antimicrobianos termolábiles como proteínas,
aminoácidos y algunas hormonas. Sin embargo en este proceso a diferencia de la maceración se
favorece la separación de los compuestos funcionales, ya que eluirán primero los compuestos
que tengan mayor solubilidad con el disolvente y se colectarán al inicio, representados en forma
de fracciones del extracto, dejando al final a los compuestos que tienen menor solubilidad con
el disolvente, permitiendo de esta manera ser analizados de manera individual (Sharapin, 2010).

33
La desventaja del proceso de percolación es el consumo elevado de disolvente. Por ello es
aconsejable hacer recircular el mismo disolvente a través del material vegetal, varias veces,
aumentando el tiempo de contacto del material vegetal con el disolvente así como la eficiencia
de la operación. Este proceso de recirculación representa una variante de la percolación en el
cual el aparto de extracción más utilizado es el Soxhlet (Lamarque, 2012).

Dentro de un mismo tejido vegetal existen compuestos antimicrobianos de diversa naturaleza,

los principales son altamente solubles en agua como son; fenoles, carbohidratos, proteínas,
aminoácidos, saponinas, taninos y glucósidos (Raaman, 2006), sin embargo también se
encuentran compuestos como esteroides, terpenos y alcaloides que son fácilmente extraíbles con
disolventes orgánicos poco polares, como hexano y acetona. Para este último caso, el
procedimiento de extracción más utilizado es la destilación por arrastre de vapor (Ringuelet
et al., 2010).

El proceso de destilación por arrastre de vapor permite aislar compuestos antimicrobianos

insolubles en agua de punto de ebullición elevado mediante una destilación a baja temperatura
(siempre inferior a 100ºC). Para ello existen dos métodos, el método directo y el método de
vapor vivo. En el primer método, el vapor se genera in situ (en el mismo matraz) por
calentamiento del matraz de ebullición que contiene agua y el material vegetal. En el segundo
método, el vapor se hace pasar dentro del matraz de ebullición usando un tubo de interconexión.
(Figura 1.10). La técnica consiste básicamente en colocar el material vegetal seco y triturado
en el matraz de ebullición con la cantidad suficiente de agua que lo cubra en su totalidad. Esta
mezcla se somete a ebullición constante hasta que el vapor junto con los componentes volátiles
de la muestra pasan a través del condensador y fluyen hacía el matraz colector, dejando en el
matraz de ebullición los compuestos no volátiles y solubles en agua. Finalmente los compuestos
insolubles en agua son fácilmente extraídos del agua condensada al decantar o filtrar (Ocampo,
2008).

34
 Termómetro A Termómetro B

Matraz de Refrigerante
Vaso
ebullición colector
Refrigerante
Vaso
colector
Matraz de
ebullición

Fuente de
calor
Fuente de calor
Figura 1.10 Tipos de equipo para los métodos de destilación por arrastre de vapor A) Método
directo, B) Método de vapor vivo
(Parra, 2013).

Es importante considerar que para hacer más eficiente la concentración de compuestos

bioactivos es necesario determinar experimentalmente el número de extracciones, el tiempo de
extracción, la concentración y selección del disolvente para cada tipo de extracción, debido a
que estos requerimientos se modificarán en función a las características generales del material
vegetal así como del compuesto de interés (Bagué, 2012).

1.7.1 Efecto del uso de disolventes en la obtención de extractos con actividad

biológica
En un proceso de extracción, la elección y concentración adecuada del disolvente extractor así
como la forma en que interactúan entre sí varios disolventes, son factores importantes que
influyen en la obtención de los principios activos contenidos en plantas así como en la posible
modificación de estos durante el proceso extractivo, donde la selección del disolvente estará en
función de la naturaleza química de las sustancias benéficas, por lo cual resulta importante
conocer tanto las características químicas como las propiedades principales de disolución de los
compuestos a extraer (Sharapin, 2010).

Una de las propiedades importantes que brindan características químicas de disolución a los
diversos compuestos es, la solubilidad, la cual se define como la capacidad que tienen las
sustancias de poder formar un sistema homogéneo con un disolvente. Algunos de los factores
que afectan dicha propiedad son, superficie de contacto, grado de agitación, temperatura,

35
presión y naturaleza del disolvente. Los primeros cuatro son factores que se determinarán de
acuerdo al proceso mecánico, químico o físico de la extracción, en cuanto a la naturaleza del
disolvente, se trata de un análisis más profundo, en el cual se analiza la selección más adecuada
del disolvente extractor en función a la posible interacción química entre los compuestos
bioactivos y el disolvente, con base en sus propiedades químicas como la polaridad, constante
dieléctrica y miscibilidad, principalmente (Autino et al., 2013). A continuación se describe
brevemente cada uno de ellos.

La polaridad se define como la capacidad de una molécula para ejercer interacciones

intermoleculares de naturaleza electrostática, debidas a una distribución asimétrica de las cargas
eléctricas entre sus átomos, lo cual confiere a la molécula propiedades de solubilización ante
diferentes solutos. Y existen varios parámetros para medir la capacidad de la polaridad de una
sustancia como son la diferencia de electronegatividad y el índice de polaridad principalmente
(Ballesteros et al., 2013).

El primer parámetro se refiere a la diferencia de electronegatividad, la cual se define como la

capacidad de los átomos para atraer hacia sí los electrones de los enlaces de una molécula, que
puede ser medida con la escala de Pauling, de esta manera, cuando existe una diferencia mínima
o nula de electronegatividad entre los átomos enlazados (∆X<4) se considera que existe una
enlace covalente puro o covalente apolar (como el CH4, el H2 o el Cl2) y al no ejercer fuerzas
intermoleculares eléctricas significativas las moléculas poseen bajos puntos de fusión y
ebullición, por lo cual son volátiles además de ser insolubles en agua, dos características que
resultan importantes a considerar durante el proceso extractivo. En cambio cuando la diferencia
de electronegatividad es moderada (4<∆X<1.7) (como el NH3 o el H2O) los enlaces covalentes
tienen una distribución asimétrica de la densidad electrónica generando que los enlaces
presenten polaridad y produciendo moléculas con propiedades hidrosolubles y menos volátiles
(Autino et al., 2013).

El segundo parámetro que permite cuantificar la polaridad de las moléculas se denomina índice
de polaridad (P´), desarrollada por Snyder en 1978, mide la atracción intermolecular entre un
soluto y un disolvente y, se basa en las medidas de solubilidad para la sustancia en función de
tres disolventes: dioxano (un aceptor de protones de dipolo débil), nitrometano (un aceptor de
protones de dipolo intenso) y etanol (un donador de protones de dipolo intenso), P’, por tanto,

36
es una medida numérica de la polaridad relativa de varios disolventes (McMurry, 2012) (Tabla
1.11).

Por otro lado, existe un tercer parámetro llamado momento dipolar (medida de la intensidad de
la fuerza de atracción entre dos átomos) el cual inicia en el proceso extractivo cuando el
disolvente seleccionado penetra la célula vegetal y expele el aire contenido en el citoplasma,
produciéndose cargas parciales positivas (d+) y negativas (d-) en el sistema, de esta manera las
sustancias extraíbles se adhieren a las moléculas del disolvente empleado y finalmente son
obtenidas del material vegetal (Rivas-Morales et al., 2016). La capacidad de asociación entre
estas moléculas y las moléculas del disolvente, puede expresarse en términos de la constante
dieléctrica (#), indicando que entre más polar sea un disolvente mayor será su constante
dieléctrica, siendo aquellos compuestos ionizables y/o altamente polares extraíbles fácilmente
con disolventes de elevada constante dieléctrica y los compuestos apolares por disolventes con
bajo valor en este parámetro (Ballesteros et al., 2013). En la tabla 1.11 se muestra los valores
de constante dieléctrica de algunos disolventes utilizados en extracciones vegetales.

Otro parámetro de los disolventes como el número de miscibilidad permitirá una selección
adecuada de disolventes para obtener una mezcla de dos disolventes en la extracción. La
miscibilidad de los disolventes es la propiedad que tienen estos para mezclarse con otro líquido
en cualquier proporción, formando una solución homogénea y su medición está dada por
diagramas de fases líquido-líquido, que se rigen por la regla de fases de Gibbs, que involucra
variables como temperatura y presión específicas a las cuales los disolventes presentan
miscibilidad entre sí, como se muestra en la siguiente ecuación (Atkins, 2008).

F=C-P+2
donde F = número de grados de libertad, C = número de componentes, P = número de fases
presentes y 2 = es el número de variables de estado del sistema (temperatura y presión).

Con base en lo anterior existen algunas consideraciones a tomar en cuenta para relacionar los
datos de número de miscibilidad entre disolventes, tales como, restar inicialmente el valor del
número M más pequeño del valor del número M más grande de los disolventes, si la diferencia
entre los números M es de 15 o menos, los dos líquidos son miscibles en todas proporciones a
15 ºC, en cambio sí resulta una diferencia de 16 indica una temperatura de solución crítica de
25ºC a 75 ºC, con 50ºC como temperatura óptima y al ser la diferencia de 17 o mayor, los

37
 líquidos no son miscibles o su temperatura de solución crítica es superior a los 75 ºC (Atkins,
2008) (Tabla 1.11).

Tabla 1.11 Principales parámetros de solubilidad de algunos disolventes

Constante Número de
Índice de polaridad
Disolvente dieléctrica (¢) a miscibilidad
(´P)
25ºC (M)
Hexano 1.89 0.0 29
Ciclohexano 2.02 0.0 28
Benceno 2.28 3 21
Tolueno 2.38 2.3 23
Acetonitrilo 3.88 6.2 11
Acetato de etilo 6.02 4.3 19
Ácido acético 6.15 6.2 14
Tetrahidrofurano 7.58 4.2 17
Piridina 12.3 5.3 16
2-propanol 18.3 4.3 15
1-propanol 20.1 4.3 15
Acetona 20.7 5.4 17
Etanol 24.3 5.2 14
Metanol 33.6 6.6 12
Agua 78.3 9.0 -
Modificado de Sharapin, 2010.

Con base en las diversas propiedades químicas de los disolventes existen diversos estudios que han
aprovechado estas características para la obtención de compuestos con actividad biológica, ya que
estos compuestos presentes en la materia vegetal permiten ser extraídos por disolventes con
propiedades químicas similares, tal es el caso de Azmir et al (2013), quienes indican que el agua es
el mejor disolvente para extraer antocianinas, taninos, saponinas y terpenoides; por su parte otro
estudio indica que el metanol debido a su polaridad media-alta (6.6) puede extraer compuestos como
alcaloides, aminoácidos, proteínas y flavonoides, principalmente (Swathi, 2016; Chakrabort et al.,
2010) y disolventes menos polares como el hexano y cloroformo has sido utilizados para extraer
alcaloides, terpenos y flavonoides como mayoritarios en plantas (Khanam et al., 2015; Swathi, 2016;
Naufalin et al., 2017) (Tabla 1.12). En la tabla 1.12 se concentran los principales disolventes
utilizados para extraer compuestos bioactivos de plantas, en la cual en primera instancia se puede
observar que cada grupo de compuesto posee características muy diferenciadas entre sí sin embargo,
estos pueden ser aislados de manera conjunta por medio de un disolvente en común debido
principalmente a fracciones de la estructura similares como se ha mencionado en estudios previos
realizados en las fracciones glucosídicas de las saponinas (Chen et al., 2011).

38
 Tabla 1.12 Disolventes utilizados para la extracción de compuestos bioactivos a partir de plantas
Acetato de
Agua Metanol Etanol Acetona Cloroformo Hexano
etilo
Antocianinas1 Antocianinas1 Taninos1 Flavonoides1,2,4,5 Terpenos7 Alcaloides4 Esteroides7,8
1 1 1
Taninos Saponinas Polifenoles Alcaloides3,5,6 Alcaloides7
Fenoles 4
Alcaloides5,7
1 1 1
Saponinas Taninos Terpenoides Proteínas4,5 Flavonoides 7
Flavonoides 4
Triterpenos7
1 1 3
Terpenoides Flavonas Saponinas Fenoles4,6 Saponinas 5
Terpenos 4
Glicósidos7
Almidón2 Polifenoles1 Flavonoides1,3,6 Carbohidratoss3,5 Taninos5 Saponinas5
2 1,4,5
Polipéptidos Terpenoides Alcaloides1,3,6 Saponinas3,5 Proteínas5
Taninos5
2 2 2
Lectinas Xantoxilinas Poliacetilenos Taninos3,5 Aminoácidos 5
Aminoácidos5
3 2 2 5
Alcaloides Totarol Esteroles Flavonoides Proteínas5
Glucósidos3 Quasinoide2 Propóleos2 Flavonoides5
Aminoácidos3 (triterpenos) Glucósidos2 Quinonas5
3 2
Proteínas Lactonas Cumarinas2 Terpenoides5
3 2
Fenoles Fenonas Aminoácidos3,6
3 5,6
Flavonoides Alcaloides Proteínas3,6
3 5,6
Cumarinas Aminoácidos
Proteínas4,5,6
Flavonoides4,5,6
1) Azmir et al., 2013, 2) Cowan, 1999, 3) Elsie et al., 2011, 4) Khanam et al., 2015, 5) Swathi, 2016,
6) Chakrabort et al., 2010, 7) Naufalin et al., 2017, 8) Ahmed et al., 2013

Por otro lado considerando lo anteriormente mencionado, algunos estudios muestran los grandes
cambios que pueden ocurrir en el proceso de obtención de compuestos bioactivos (incrementos
significativos en el rendimiento del extracto, la presencia de diferentes tipos de compuestos y
cambios en las propiedades bioactivas de estas sustancias) al modificar parámetros en el proceso
de extracción como, tipo de disolvente, la concentración del mismo, el tipo de proceso extractivo
así como modificaciones en la relación masa/disolvente. Lo cual se observó en el estudio
realizado por Háuad-Marroquín et al., 2010, quienes al obtener extractos a partir de las hojas de
Agave tequilana con diferentes disolventes (metanol, cloroformo y hexano) encontraron
cambios en su actividad citotóxica sobre células de linfoma murino B16F10, siendo el extracto
metanólico el que mostró mayor actividad (una concentración de 200 μL, dejando 55.55% de
células vivas viables). Otro estudio realizado con las hojas de Agave lechuguilla, mostró la
importancia del tipo de disolvente, relación sólido/líquido y temperatura óptima para aumentar
el rendimiento de extracción de saponinas, encontrándose que las condiciones óptimas para su
extracción son; metanol/agua como disolvente extractor en una relación 19:1 a 50ºC (Soto et
al., 2005).

Por otra parte, en otras especies, también se han reportado cambios en el efecto nutracéutico de
sus compuestos por efecto del proceso o disolvente utilizado para la extracción, tal es el caso

39
del chopé (Gustavia augusta L.), fruta nativa de la región amazónica, en la cual se observó un
efecto sinérgico entre el extracto (etéreo, alcohólico y acuoso) y el Butil hidroxitolueno (BTH),
al incrementar la actividad antioxidante de los extractos (García-Torres et al., 2009) y otro
estudio realizado en la corteza de Pinus durangensis y Quercus sideroxyla donde se analizaron
las propiedades antioxidantes y contenido total de fenoles utilizando diferentes concentraciones
de etanol (disolvente extractor) y diferentes relaciones masa/disolvente, encontrando que la
extractibilidad de fenoles incrementa con el aumento del contenido de agua (lo que puede
deberse a la facilidad de extracción por la solubilidad que presentan los compuestos fenólicos
en la muestra) y mayores rendimientos en relaciones masa/disolvente que involucraron mayor
volumen de disolvente, lo cual lo atribuyen a fenómenos de transferencia de masa característicos
(Soto-García et al., 2016).

1.7.2 Tipos de interacción entre el disolvente extractor y materia prima vegetal

Por otro lado, de acuerdo a diversos estudios fitoquímicos existen tres principales formas de
interacción entre el disolvente extractor y el tejido vegetal, una es la interacción con un solo tipo
de disolvente (Sharapin, 2010), otra consiste en colocar dos disolventes de diferente polaridad
junto con el material vegetal, en el cual es importante considerar diferentes concentraciones de
cada uno de los disolventes con la finalidad de hacer más eficiente la extracción de compuestos
bioactivos (Martínez-Ramírez, 2010). Y la forma de extracción secuencial, en la cual se utilizan
más de dos disolventes diferentes puestos en contacto con el material vegetal de manera
consecutiva iniciando con el disolvente menos polar y finalizando con el de mayor polaridad
(Lamarque, 2012).

1.7.2.1 Interacción individual

El utilizar un solo tipo de disolvente en el proceso de extracción, es una de las técnicas más
comunes en el estudio de un solo tipo de compuestos funcionales, debido a que la polaridad del
disolvente extractor seleccionado solubilizará solo aquellos compuestos que posean la misma
naturaleza, sin embargo, existe el inconveniente de obtener un gran conjunto de compuestos de
la misma polaridad y sería necesario realizar otro procedimiento de separación para evaluar un
solo tipo de compuesto. Además, es posible que durante la extracción algunos compuestos de
diferente polaridad al del disolvente eluyan al mismo tiempo, esto por la generación de uniones

40
interatómicas de tipo puente de hidrógeno, generando impurezas dentro de la extracción
(Ringuelet, 2010). Con el fin de minimizar estas impurezas es necesario determinar
experimentalmente otros factores que intervienen dentro del proceso de extracción como la
temperatura, pH y tamaño de partícula (Sharapin, 2010).

1.7.2.2 Interacción dual

Por otra parte, estudios en los que se han realizado extracciones de tipo dual, donde se utilizan
disolventes de diferente polaridad, sugieren que este tipo de técnica presenta mayor eficiencia
de extracción que al utilizar disolventes de manera individual, debido a que los disolventes
utilizados tienen diferente polaridad y al mezclarse en ciertas proporciones se incrementa la
capacidad de extracción, ya que se obtienen los compuestos bioactivos afines a cada disolvente
(Irianda, 2010). Este efecto también fue observado por Shene et al., (2009) quienes realizaron
extracciones de las hojas y del fruto de la murta, encontrando que una mezcla de 50%
etanol/agua resultó más eficiente en la extracción de compuestos funcionales que con los
solventes puros (agua y etanol). También Trabelsi et al., (2010) trabajando con hojas de
limoniastrum monopetalum observaron que la adición de un 20% de agua a otros disolventes
como el metanol, acetona o etanol incrementaba el poder de extracción de los compuestos
bioactivos.

1.7.2.3 Interacción secuencial

En la técnica de extracción secuencial, existen dos formas de obtener el extracto, con base en
los requerimientos del compuesto deseado. En el primer caso, se realiza la extracción secuencial
separando al final del proceso las fracciones obtenidas con cada disolvente, de esta manera se
aprovecha la separación selectiva de cada componente del material vegetal en función a su
polaridad y se colectan de forma separada para ser analizados individualmente. En el segundo
caso las extracciones realizadas con cada disolvente se colectan en una misma fracción,
obteniendo en el extracto un conjunto de compuestos funcionales de diversa polaridad, con la
finalidad de analizar de manera conjunta las capacidades funcionales de los compuestos del
material vegetal (Ringuelet, 2010). En ambos casos el uso de los disolventes es de polaridad
creciente, aumentando la eficiencia de obtención de compuestos en cada extracción consecutiva,
debido a que de realizarse el proceso de manera inversa se obtendrían impurezas dentro de los

41
primeros extractos polares por la posible extracción de compuestos de distinta polaridad a la del
disolvente (Lamarque, 2012).

Estudios que han utilizado esta técnica de extracción indican que es muy útil en la obtención de
compuestos bioactivos específicos dentro de un mismo grupo funcional, ya que el uso de
disolventes de manera consecutiva beneficia la obtención de un tipo de compuestos distinto
estructuralmente al compuesto obtenido por extracción individual o dual (Hernández, 2011).

1.8 Microorganismos patógenos de interés en la industria alimentaria

La salud y la vida de las personas dependen en gran parte de la calidad sanitaria de los alimentos
que consumen diariamente, por ello una de las principales preocupaciones en la industria
alimentaria, es aplicar un control sanitario adecuado, que evite el desarrollo y proliferación de
microorganismos indeseables (patógenos), que lejos de generar un producto de mala calidad,
repercuten directamente en la salud del consumidor, de manera individual o colectiva (Kopper
et al., 2009).
Algunas investigaciones indican que existen más de 250 tipos de enfermedades transmitidas por
alimentos (ETA), siendo la mayoría ocasionadas por bacterias, entre las que se encuentran,
Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Salmonela enteritidis, Shigella sonnei y
Staphylococcus aureus (González et al., 2005).

Escherichia coli pertenece a la familia Enterobacteriaceae, posee forma bacilar, con una
temperatura apta de crecimiento de 37°C, puede desarrollarse en medios carentes o escasos de
oxígeno y no esporula, coloniza el intestino del hombre y de los animales homeotermos y se le
considera un microorganismo de flora normal, pero existen cepas que pueden ser patógenas y
causar daño, como las enterotoxigénicas (ETEC), que provocan diarrea aguda y en pocos casos
fiebre y vómito, las enterohemorrágicas (EHEC) con brotes caracterizados por dolor abdominal,
diarrea acuosa con sangre y poco o nada de fiebre, las enteroinvasivas (EIEC), provocando
diarrea acuosa, con sangre y moco, las enteropatógenas (EPEC), que afectan principalmente a
niños menores de 6 meses, provocando diarrea aguda, fiebre baja y mala absorción, las
enteroagregativas (EAEC), que se manifiestan en diarrea líquida de color verde con moco sin
sangre y que en ocasiones puede llegar a ser severa; y las de adherencia difusa (DAEC),
provocando síntomas como diarrea acuosa sin sangre (Rodríguez, 2002) (Tabla 1.13).

42
Por otro lado, Listeria monocytogenes es una bacteria que no forma esporas y es considerada un
microorganismo anaerobio facultativo capaz de proliferar en un amplio intervalo de
temperaturas (1°C a 45°C). Esta bacteria se ha localizado de manera natural en al menos 37
especies de mamíferos, tanto domésticos como salvajes y en por lo menos 17 especies de aves
y por su fácil proliferación puede ser aislada del suelo, forraje y otras fuentes ambientales
(Carpentier et al., 2011). La principal vía de contagio es por la ingestión de agua y alimentos
contaminados, una vez que se está infectado por Listeria monocytogenes, se produce la
enfermedad conocida como listeriosis (Noriega, 2008) (Tabla 1.13).

Salmonella typhimurium, pertenece a la familia Enterobacteriaceae, son bacilos no

encapsulados que no producen esporas, capaces de crecer en un intervalo de temperatura de 35
a 37°C. Ésta bacteria se define como microorganismo ubicuo, que tienen como principal hábitat
el intestino de los animales homeotermos y poiquilotermos, sin embargo también se han aislado
de los más diversos hábitats, como aguas residuales, heces, suelos, entre otros (Cabello, 2008)
(Tabla 1.13). Esta bacteria es la causa principal de infecciones humanas de salmonelosis siendo
los huevos de gallina una de las principales fuentes del agente patógeno. La enfermedad que
provoca se caracteriza por diarrea, fiebre, dolores o calambres abdominales, vómitos, cefalea y
nauseas, afectando con mayor frecuencia a lactantes, ancianos y personas inmunodeprimidas
(Ruíz et al., 2008).

Shigella sonnei es un bacilo perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, que se encuentra

estrechamente relacionado con el género Escherichia, por sus propiedades bioquímicas,
serológicas y por similitudes genéticas. El intervalo óptimo para su crecimiento de 25 a 35ºC.
Se caracteriza por no formar esporas y por crecer de forma natural en los seres humanos y los
monos (Marco et al., 2008) (Tabla 1.13). La infección por Shigella sonnei normalmente es por
ingerir alimentos y agua contaminados, provocando la enfermedad conocida como shigelosis,
generando síntomas como diarrea, fiebre, náusea, vómitos y calambres estomacales (Martínez,
2011).
Finalmente Staphylococcus aureus es una especie bacteriana integrada por formas cocáceas, que
se encuentra microscópicamente aislado, en pares, tetrádas o formando racimos irregulares, no
forma esporas, crece en temperaturas de 35 a 40°C y generalmente no es encapsulado (Tabla
1.13), suele estar en la piel y en las membranas mucosas sin llegar a causar infección, pero

43
 cuando penetra en los tejidos (como puede ser en el caso de una herida), puede ocasionar una
amplia gama de síntomas debido a las toxinas producidas (Pascual, 2010). La difusión de esta
bacteria es de tipo alimentaria, provocando náuseas, vómito, arcadas (movimiento violento del
estómago que se produce antes de vomitar), calambres abdominales, postración; en casos
severos puede ocurrir dolor de cabeza, calambres musculares, cambios temporales en la presión
arterial y el pulso; y de tipo intrahospitalario, produciendo lesiones cutáneas (granos, impétigo
y piel escaldada), así como también osteomielitis, neumonía y endocarditis (Kumar et al., 2010).

Tabla 1.13 Características generales de los principales microorganismos patógenos de interés

en la industria alimentaria
Enfermedad que
Microorganismos Tinción Movilidad Vehículo de provoca
de Gram infección
Dependiendo del grupo,
Escherichia coli1 - Móvil Vía fecal-oral. generalmente diarrea.

Agua y Listeriosis
Listeria monocytogenes2 + Móvil alimentos
contaminados
Huevo de Salmonelosis (diarrea,
Salmonella - Móvil gallina fiebre, dolor estomacal)
typhimurium3 infectados
Shigelosis (fiebre,
Alimentos y diarrea y dolor
4
Shigella sonnei - Inmóvil agua estomacal)
contaminada
Alimentos
contaminados Náuseas, vómito, dolor
Staphylococcus aureus + Inmóvil (huevos, pollo, de cabeza y calambres
jamón, o musculares
lácteos)
1) Rodríguez, 2002, 2) Noriega, 2008, 3) Cabello, 2008, 4) Martínez, 2011.

44
JUSTIFICACIÓN

Actualmente, existe una creciente demanda en la industria alimentaria de nuevos compuestos

funcionales que proveean al consumidor de opciones más naturales que igualen o superen las
propiedades nutracéuticas de los compuestos bioactivos ya existentes. Ante esto, se han
analizado diferentes tipos de plantas, siendo Agave salmiana una de las especies más
prometedoras en este sentido, ya que además de representar una importante contribución
económica al país en la producción de bebidas alcohólicas como mezcal y pulque, se han aislado
de sus flores, raíz y hojas diversos compuestos bioactivos como fenoles, flavonoides, saponinas,
alcaloides y taninos, que presentan importantes efectos antioxidantes y antimicrobianos, sin
embargo la estructura del escapo no ha sido analizada desde este punto de vista, debido a que es
poco conocida conocida y porque sus usos principales no representan beneficios económicos
importantes, pero caracteristicas como actividad desparasitante en rumiantes ejercida de manera
tradicional y un efecto de pudrición sin aparente ataque bacteriano representan indicios de su
posible potencial como fuente de compuestos con actividad antimicrobiana que pueden ser
aprovechados en el área de alimentos. Por ello, se considera relevante analizar las propiedades
bioactivas de extractos obtenidos a partir del escapo floral, utilizando diferentes disolventes y
métodos de extracción que permitan establecer las condiciones más adecuadas para la obtención
de extractos nutracéuticos.

45
HIPÓTESIS

Los extractos obtenidos de la sección media del escapo de Agave salminana de 250 cm, poseen
propiedades antioxidantes o antimicrobianas, resultado de la presencia de los diferentes
compuestos bioactivos obtenidos, dependiendo del proceso de extracción y la polaridad del
disolvente utilizado.

46
OBJETIVOS

Objetivo general

Identificar los principales compuestos responsables de la actividad antimicrobiana y

antioxidante de los extractos obtenidos de la sección media del escapo floral de Agave salmiana
de 250 cm y evaluar el efecto de los disolventes y método de extracción sobre su actividad
antioxidante y antimicrobiana.

Objetivos específicos

• Determinar el efecto del método de extracción (extracción individual, dual, dual-

secuencial y secuencial) sobre el rendimiento de los extractos obtenidos a partir del
escapo floral de Agave salmiana.
• Identificar el efecto del método de extracción y los disolventes utilizados, sobre la
actividad antimicrobiana y antioxidante de los extractos obtenidos
• Identificar los grupos principales de compuestos bioactivos presentes en los extractos
que mostraron la mayor actividad antimicrobiana, el más amplio espectro de acción o la
mayor actividad antioxidante
• Cuantificar la concentración de los grupos de compuestos bioactivos identificados en los
extractos seleccionados.
• Determinar la actividad antimicrobiana y antioxidante de los compuestos bioactivos
obtenidos de los extractos seleccionados.

47
CAPÍTULO 2 METODOLOGÍA

2.1 Material vegetal

El escapo floral, se obtuvo de plantaciones ubicadas en el municipio de Singuilucan, Hidalgo,

México (altitud 2640 m; 19°59´20” N, 98°27´52¨O), considerando como parámetro de
referencia su altura (250 cm), se lavó y seccionó en tres partes, etiquetadas como; Sección 1, la
cual es la parte que se encuentra más cercana a la roseta, Sección 2, que representa la parte
intermedia del escapo y Sección 3, que es la parte en la cual se desarrollarán las flores (Figura
2.1), se seleccionó la parte media como material de estudio.
La sección de estudio se cortó en cubos de aproximadamente 1 cm de lado, y se almacenó en
lotes de 1 kg en bolsas de PVC, a 4°C, hasta su análisis (González-Cruz et al. 2011).
Para los análisis se realizaron tres repeticiones utilizando 3 escapos diferentes.

Figura 2.1 Escapo floral de mediana madurez (250 cm) de Agave salmiana y sus secciones

2.2 Obtención de extractos y rendimiento

2.2.1 Extracto crudo

El extracto crudo se obtuvo utilizando el jugo resultante de 100 g de material fresco macerado
con ayuda de una licuadora manual (Oster, BPST02-B00-013, México), se filtró a través de un
papel filtro (Whatman N°4), se concentró a sequedad en un rota vapor (DragonLab, RE100-Pro,
China), el extracto obtenido se colocó en un vial ámbar al cual se le inyectó nitrógeno (20
mL*min-1 por 2 min.) y se almacenó a 4°C hasta su análisis (Srinivasan et al., 1953, González-
Cruz et al., 2011), este extracto fue considerado el control y se etiquetó como EC (Extracto
Crudo).

48
 2.2.2 Extracción individual (etanol o agua)

Esta extracción se realizó utilizando una proporción del material vegetal:disolvente 1:2 p/v
(agua o etanol), se molió con una licuadora manual hasta lograr su completa homogenización,
se mantuvo en agitación con un agitador mecánico a temperatura ambiente (≈27ºC) por 24 h, se
filtró al vacío a través de un papel filtro, se concentró a sequedad en un rota vapor, el extracto
obtenido se colocó en un vial ámbar al cual se le inyectó nitrógeno (20 mL*min-1 por 2 min.) y
se almacenó a 4°C hasta su análisis (Centurión-Hidalgo et al., 2013), la muestra fue etiquetada
como EIA (Extracción Individual Acuosa) y EIE (Extracción Individual Etanólica).

2.2.3 Extracción dual (etanol-agua)

100 g de material vegetal se maceraron con 200 mL de etanol (concentraciones 60%, 50% y
40% por separado) se mantuvieron en agitación a temperatura ambiente (≈27ºC) durante 24 h,
se filtró al vacío a través de papel filtro, se concentró a sequedad en un rota vapor, se colocó en
un vial ámbar, se le inyectó nitrógeno (20 mL*min-1 por 2 min) y se almacenó a 4°C hasta su
análisis (Centurión-Hidalgo et al., 2013; Martínez-Ramírez et al., 2010; Alvis et al., 2012;
Chavely, 2009), los extractos se etiquetaron ED60/40 (Extracción Dual Etanol 60%: Agua
40%), ED50/50 (Extracción Dual Etanol 50%: Agua 50%) y ED40/60 (Extracción Dual Etanol
40%: Agua 60%).

2.2.4 Extracción dual-secuencial

100 g de material vegetal fueron colocados con 200 mL de etanol absoluto (Fermont, México),
se maceró y se mantuvo en agitación durante 24 h a temperatura ambiente (≈27ºC), se filtró al
vacío a través de papel filtro, se concentró a sequedad en un rota vapor, se colocó en un vial
ámbar, se le inyectó nitrógeno (20 mL*min-1 por 2 min) y se almacenó a 4°C hasta su análisis,
obteniendo el extracto EDSE (Extracción Dual Secuencial Etanólica). La fase sólida remanente
de la primera extracción, se colocó con agua destilada en una proporción 1:2 (p/v), se mantuvo
en agitación a temperatura ambiente (≈27ºC) durante 24 h, se filtró al vacío a través de papel
filtro, se concentró a sequedad en un rota vapor, se colocó en un vial ámbar, se le inyectó
nitrógeno (20 mL*min-1 por 2 min) y se almacenó a 4°C hasta su análisis (Centurión-Hidalgo
et al., 2013 y Lamarque, 2012), obteniendo el extracto EDSA (Extracción Dual Secuencial
Acuosa).

49
Se realizó la combinación de EDSE y EDSA para generar el extracto EDSEA (Extracción Dual
Secuencial Etanol-Agua).

2.2.5 Extracción secuencial

Se utilizaron como disolventes de extracción; hexano (Fermont, México, concentrado), acetona

(Fermont, México, concentrado), metanol (Fermont, México, concentrado), etanol absoluto
(Fermont, México) y agua destilada de manera secuencial.
100 g de material vegetal fueron colocados en 200 mL de hexano, se maceró y se mantuvo en
agitación durante 24 h a temperatura ambiente (≈25ºC), se filtró al vacío a través de papel filtro,
se concentró a sequedad en un rota vapor, se colocó en un vial ámbar, se le inyectó nitrógeno
(20 mL*min-1 por 2 min) y se almacenó a 4°C hasta su análisis, obteniendo el extracto ESH
(Extracción Secuencial con Hexano). El remanente de esta extracción se utilizó para la
obtención del extracto ESAc (Extracción Secuencial con Acetona) siguiendo la metodología
anterior, el remanente generado de la extracción de ESAc fue utilizado para la obtención del
extracto ESM (Extracción Secuencial con Metanol), el remanente obtenido ESM se utilizó para
obtener el extracto ESE (Extracción Secuencial con Etanol), finalmente se obtuvo el extracto
ESA (Extracción Secuencial con Agua) utilizando el remanente de ESE y agua como disolvente
de extracción, en cada proceso se utilizó una proporción de 1:2 (p/v) del material con respecto
al disolvente utilizado (modificado de Dai et al., 2006). El extracto ESC (Extracción Secuencial
Combinado) es la combinación de los 5 extractos obtenidos.

2.3 Determinación de la actividad antioxidante

Se determinó la actividad antioxidante de los extractos y de los compuestos bioactivos que se

obtuvieron en cada caso.

2.3.1 DPPH

Se utilizó la técnica de DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo), descrita por Brad-Williams et al

(1995), en la cuál se evalúa la actividad antioxidante de sustancias frente a una disolución
alcohólica de DPPH de color violeta intenso, cuya intensidad disminuye de acuerdo con la
cantidad de sustancias que contenga la muestra con capacidad de neutralizar a este radical libre.
Se preparó una disolución metanólica de DPPH 0.1 mM y se construyó una curva patrón a partir
de la medición de la absorbancia del radical DPPH a diferentes concentraciones (0.1, 0.08, 0.06,

50
0.04, 0.02 y 0 mM) a una longitud de onda de 514 nm. Una alícuota de 0.05 mL del extracto (en
diferentes concentraciones utilizadas) se agregó a 2 mL de disolución metanólica de DPPH 0.1
mM. La reacción se midió́ a 514 nm cada 10 minutos hasta completar 1 hora en oscuridad. A
partir de la ecuación de la curva se determinó la concentración a la cual se redujo el DPPH. El
porcentaje de DPPH inhibido (% DPPH) se calculó con la ecuación:

+,-./0-1 − +3456/07
% &''( = * 8 9 100
+,-./0-1

Donde +,-./0-1 es la absorbancia del DPPH control y +3456/07 es la absorbancia de la muestra.

Los valores de CE50 (concetración efectiva, cantidad de antioxidante necesaria para reducir en
un 50% la concentración inicial de DPPH) se calcularon a partir de gráficos del porcentaje de
inhibición y las concentraciones de los tratamientos. Los resultados se expresaron en g de
extracto seco/g DPPH.

2.3.2 FRAP

Se utilizó la técnica descrita por Benzie y Strain (1996), la cual se basa en el poder reductor de
un antioxidante que reduce el ion férrico (Fe3+) al ion ferroso (Fe2+) formando un complejo azul.
A 100 μg de la muestra, se adicionaron 300 μL de agua destilada y 3000 μL del reactivo FRAP
(2.5 mL de la solución 2,4,6-tri(2-piridil)-s-triazina; Sigma-Aldrich, USA; 10 mM en HCl 40
mM; 2.5 mL FeCl3´H2O; Golden Bell, México; 20 mM y 25 mL de buffer de acetatos (Fermont,
México) 300 mM a un pH 3.6). La absorbancia se midió a 593 nm después de 30 minutos de
incubación a 37ºC. Se utilizó una curva de calibración de Trolox en un intervalo de 20 a 400
μM, las actividades de los extractos se expresaron en µg TE/g de extracto.

2.3.3 ABTS+

La actividad antioxidante de los extractos se determinó por el método de ABTS (Re et al., 1999),
con algunas modificaciones de Choi et al (2014), el cual se basa en la reducción de la coloración
verde/azul producida por la reacción del radical ácido 2,2 ́-azino-bis-3-etilbenzotiazolina-6-
sulfónico (ABTS*+) con el antioxidante presente en la muestra. El radical catión ABTS
(ABTS*+) se preparó a partir de la disolución estándar de ABTS (7 mM) en buffer de acetato de
sodio (Fermont, México) 20 mM (pH 4.5) y persulfato de potasio (Sigma-Aldrich, USA) 2.45
mM, incubados a temperatura ambiente, en oscuridad por 16 h, la muestra se diluyó en etanol

51
absoluto hasta obtener la absorbancia de 0.70 (± 0.02) a 734 nm. 0.03 mL del extracto analizado
previamente reconstituido con agua destilada (1:105 p/v), se hace reaccionar con 3 mL de radical
ABTS*+ diluido, se incubó durante 30 min y se midió la absorbancia a 734 nm. Los resultados
se expresaron en µg TE/g extracto seco a partir de la curva de calibración de Trolox (0 a 400
μM).

2.4 Identificación y extracción de grupos de compuestos bioactivos

2.4.1 Determinación de contenido de fenoles totales

Se utilizó la técnica de Folin-Ciocalteau de Singleton et al., 1999 con algunas modificaciones

de Rojas-Barquera et al., 2009. Se colocaron 20 μL del extracto previamente reconstituido con
agua destilada (1:500 p/v), 1580 μL de agua destilada y 100 μL de reactivo de Folin-Ciocalteau
1N (HYCEL, México), se dejó reposar 5 min, se agregaron 300 μL de disolución de Na2CO3
(20%) (Fermont, México), se agitó hasta su completa homogeneización, se dejó reaccionar 30
min a 40°C y se leyó la absorbancia a 765 nm. Paralelamente, se realizó la curva de calibración
de ácido gálico (Fermont, México) (0 y 5 mg*L-1). Los resultados se expresaron como mg de
GAE/g de extracto de extracto.

2.4.2 Fenoles simples

Identificación: Para la determinación de fenoles totales se utilizó la técnica de Folin-Ciocalteau
adaptada para alimentos por Singleton et al en 1999, descrita en el punto 2.5 del documento.

Extracción: se adicionaron 2 mL de una disolución de metanol:agua (50:50, v/v) a 1 g de

muestra, se agitó, se mantuvo a 50 °C durante 30 min, se centrifugó a 5000 rpm durante 30 min.,
sobrenadante se colecto, el residuo se sometió a dos extracciones sucesivas con 2 mL de
acetona:agua (80:20, v/v) cada vez, se agitó, se mantuvo a 50 °C durante 30 min y se centrifugó
a 5000 rpm durante 20 min. Los tres sobrenadantes se colectaron en un mismo frasco, se eliminó
el disolvente a sequedad con rota vapor (DragonLab, RE100-Pro, China), se almacenó a 4 °C
hasta su cuantificación (Cuellar et al, 2013; Chavely et al., 2009; Medini et al., 2014).

Cuantificación: Se utilizó la técnica de Folin-Ciocalteau de Singleton et al., 1999 con algunas

modificaciones de Rojas-Barquera et al., 2009. Se colocaron 20 μL del extracto previamente
reconstituido con agua destilada (1:500 p/v), 1580 μL de agua destilada y 100 μL de reactivo de
Folin-Ciocalteau 1N (HYCEL, México), se dejó reposar 5 min, se agregaron 300 μL de

52
disolución de Na2CO3 (20%) (Fermont, México), se agitó hasta su completa homogeneización,
se dejó reaccionar 30 min a 40°C y se leyó la absorbancia a 765 nm. Paralelamente, se realizó
la curva de calibración de ácido gálico (Fermont, México) (0 y 5 mg*L-1). Los resultados se
expresaron como mg de GAE/g de extracto de extracto.

2.4.3 Flavonoides

Identificación: Se realizó de forma cualitativa con base en la prueba de Shinoda. 1 mg de la

muestra se diluyó en una disolución etanólica en agua (1:7), se trató térmicamente a 60ºC, se
filtró y luego se colocó en un tubo de ensayo con 0.5 g de magnesio en polvo. Se adicionó HCl
concentrado, gota a gota, hasta el desprendimiento de hidrógeno. La presencia de flavonoides
es positiva al observar la aparición de una coloración rojiza, violeta o naranja (Ruíz et al., 2013).

Extracción: Se adicionó 20 mL de disolvente hidroalcohólico (etanol al 70%) a 1 g de muestra

seca, se mantuvo en agitación constante a 50ºC por 60 min, se filtró, se eliminó el disolvente y
se almacenó en un vial ámbar a 4ºC (Al-Rimawi et al., 2017; Victório et al., 2010)

Cuantificación: Se utilizó el método descrito por Soto (2015). Se reflujó por 2 h 0.5 g de
muestra con 20 mL de ácido sulfúrico al 10 % y 20 mL de etanol al 50 %, se enfrío y se filtró al
vacío. Se realizó un lavado al residuo con 30 mL de etanol al 50 %, y el líquido se adicionó al
filtrado inicial. El filtrado total se evaporó en baño de agua hasta la mitad del volumen inicial,
se enfrío sobre baño de hielo durante 30 min, se filtró y se lavó el precipitado formado con
cuatro porciones de 10 mL de agua destilada fría (10-15 °C). Se eliminaron los filtrados y se
colecto el precipitado generado, estos residuos se disolvieron con 70 mL de etanol al 96 % a
50ºC, la disolución se completó a un volumen de 100 mL con etanol al 96 %, se lee la
absorbancia a 258 nm. Los resultados se expresaron en mg de quercetina (QE)/g extracto seco
a partir de la curva de calibración de quercitina diluida en etanol al 50 % (0 a 400 mM). El
blanco consistió en una solución de etanol al 50 %.

2.4.4 Taninos

Identificación: Se realizó con base en la prueba de dicromato de potasio, para la cual se

utilizaron 2 mL de extracto previamente reconstituidos en agua destilada a una concentración
de 0.002 g*mL-1, a los cuales se les agregó 1 mL de una disolución de dicromato de potasio
0.025 M, se consideró positiva la presencia de precipitado café-rojizo (Kasay et al., 2013).

53
Extracción: Se desengraso 1 g de muestra con éter de petróleo, a la muestra desengrasada se le
adicionaron 10 mL de acetona (70%) manteniendo en agitación constante durante 60 min a
60ºC, se filtró, se centrifugó a 3000 rpm durante 10 min., se colectó el sobrenadante y se eliminó
el disolvente por evaporación. El extracto se almacenó a 4 °C en oscuridad para su cuantificación
(Raisa et al., 2015; Karamać et al, 2007).

Cuantificación: Se agita 1 g de muestra con 50 mL de etanol al 50 % durante 6 h, se deja en

reposo 8 h, se agita nuevamente por 30 min y se filtra. Se transfieren 0.3 mL del filtrado a un
matraz aforado de 5 mL y se diluye con agua. Se prepara la disolución de referencia de ácido
tánico (se disuelven 2.5 mg de ácido tánico en 10 mL de agua destilada, se toman 2 mL y se
completa el volumen hasta 10 mL) y el reactivo para taninos (1 g de tungstato de sodio
dihidratado, 0.02 g de ácido fosfomolíbdico y 0.5 mL de ácido fosfórico al 85 % en 7.5 mL de
agua destilada. Se refluja 2 h y se completa a 10 mL con agua destilada). A partir de las
disoluciones se preparan las muestras considerando la tabla 1.14:

Tabla 1.14 Preparación de reactivos para la cuantificación de taninos

Reactivos Blanco Patrón Muestra
Sm - - 0.1 mL
Disolución de referencia de ácido tánico - 0.3 mL -
Agua destilada 0.5 mL 0.2 mL 0.4 mL
Reactivo para taninos 0.2 mL 0.2 mL 0.2 mL
Se agita y se deja en reposo 5 min
Disolución de carbonato de sodio 20% 0.1 mL 0.1 mL 0.1 mL

Se mezcla bien y se lee cada uno a 700 nm. Los resultados se expresan en mg de taninos
(expresados como ácido tánico)/g extracto seco a partir de la curva de calibración de ácido tánico
a concentraciones de 0.025 – 0.15 mg*mL-1 (Ruíz et al., 2013; Gutiérrez et al., 2000).

2.4.5 Alcaloides

Identificación: Se realizó la identificación de alcaloides utilizando la prueba del reactivo de

Mayer (1.36 g of HgCl2 y 5 g de KI en 100 mL de agua destilada, ambas marca Meyer). Se
reconstituyeron los extractos utilizando agua destilada para obtener muestras a una
concentración de 0.5 g*mL-1, a 1 mL de cada muestra preparada se le agregaron 5 mL del
reactivo de Mayer, considerando como prueba positiva la generación de un precipitado de color
blanco crema (Coy et al., 2014).

54
Extracción: Los extractos de alcaloides totales se obtuvieron según el método de Harborne con
ligeras modificaciones. Se adicionó 2 mL de una disolución de ácido acético al 10% (2 mL) en
etanol a 1 g de muestra, se agitó durante 24 h, se filtró y el sobrenadante se concentró a sequedad.
El pH se ajustó a 9 con disolución concentrada de hidróxido de amonio, se realizó una extracción
con cloroformo (0.5 mL) tres veces, se colectó la fracción orgánica en cada extracción, se
eliminó el disolvente y se almacenó en viales ámbar a 4ºC en oscuridad para su cuantificación
(Shoaib et al., 2016; Harbone, 1984; Azmir et al., 2013).

Cuantificación: Se utilizó el método basado en la reacción con verde de bromocresol (BCG)

(Jaramillo et al., 2016), a partir de una disolución de atropina (1 mg*mL-1), diluida 1:10, se
prepararon seis disoluciones (0.01-0.1 mg*mL-1) para la elaboración de la curva de calibración.
5 mL de cada extracto diluido 1:5, se transfirieron a un embudo de separación, al cual se le
agregaron 5 mL de disolución de BCG y 5 mL una disolución buffer de fosfato a pH 4.7. La
mezcla se agitó, y el complejo formado fue extraído con cloroformo. Los extractos se recogieron
en un matraz aforado de 10 mL y se completó a ese volumen con cloroformo. Todo este proceso
fue realizado por triplicado para cada extracto de hojas de planta. Las absorbancias del complejo
en cloroformo fueron medidas a una longitud de onda de 470 nm.

2.4.6 Saponinas

Identificación: Se identificó cualitativamente la presencia de saponinas en los extractos por

medio de la prueba de Rosenthaler, que consistió en añadir una gota de reactivo Rosenthaler (se
diluye 1 g de vainillina en 100 mL de etanol), una gota de ácido sulfúrico concentrado a 10 mg
de extracto reconstituido previamente con agua destilada (1:10 p/v). La presencia de saponinas
generó un color violeta en la solución (Kujur et al., 2010).

Extracción: 5 mL de etanol (20%) en un 1 g de muestra, se agitó y se colocó la mezcla en baño

maría (55ºC) por 4 horas. El extracto se filtró y el residuo se volvió a extraer con 10 mL de
etanol (20%). Se colectaron ambos extractos en un mismo recipiente y se concentró en baño
maría hasta reducir el volumen a 2 mL, se adicionó 1 mL de éter dietílico, se agitó
vigorosamente y se colectó la fracción acuosa. A esta fracción se añadieron 60 mL de n-butanol,
se agitó vigorosamente y se adicionó 0.5 mL de disolución de NaCl al 5%. La disolución
resultante se concentró y almacenó en viales ámbar a 4ºC para su cuantificación (Mukarram et
al., 2014)

55
Cuantificación: Se realizó con la metodología establecida por Monje y Raffaillac (Lozano et
al., 2012; Guzmán et al., 2013) en el cual se utiliza el reactivo de Lieberman-Burchard (LB)
para formar productos coloridos al reaccionar con saponinas. Se preparó el reactivo LB (16.7%
de anhídrido acético en ácido sulfúrico concentrado), se agregó 1 mL a 0.6 mL de muestra
diluida (1:5), se agitó, se dejó en reposo por 37 min y se leyó la absorbancia a 528 nm. Los
resultados se expresaron en mg saponinas (basado en saponina estándar)/g extracto seco a partir
de la curva de calibración de saponina quillaja a concentraciones de 0.4 a 10 mg*ml-1.

2.4.7 Determinación de proteína

Se realizó un análisis electroforético SDS-PAGE de los extractos con base en la metodología
descrita por Laemmli, 1970. La muestra (1μg de proteína*mL-1) se solubilizó en disolución
reguladora (0.1M Tris-HCl, pH 6.8, 2% SDS), se agitó y se colocó en baño maría a 96°C durante
5 minutos. Se aplicaron 10 μL de muestra en cada pozo del gel de poliacrilamida. La
electroforesis se realizó con equipo Mini Protean® Tetra cell de BioRad a 120 V durante 1 h.
La tinción se realizó con Coomassie Brilliant Blue R 250.

Los resultados se reportaron de acuerdo a la intensidad de las bandas como, presencia ausencia
del compuesto (+ y -, respectivamente).

2.4.8 Precipitación de proteína

200 µL de muestra se adicionan a 200µL de ácido tricloroacético (TCA) al 20 % en frío (4ºC ±

1), después se dejó reposar en baño maría por 1 h a 4ºC, se centrifugó por 20 minutos a 4ºC a
10 000 rpm y se eliminó el sobrenadante por decantación. Se realizan dos lavados al material
orgánico residual con 250µL de etanol al 75% frío (-20ºC ± 1), se centrifuga por 15 minutos a
4ºC a 10 000 rpm, eliminando cada vez el sobrenadante. Se realiza un tercer lavado con 250µL
de etanol al 95% en frío (-20ºC± 1), se centrifugó por 15 minutos a 10 000 rpm, se eliminó el
sobrenadante y se dejó secar el material residual con agua destilada hasta eliminar los residuos
del etanol (Kim et al, 1990).

56
2.5 Actividad antimicrobiana

2.5.1 Cepas bacterianas

Se utilizaron bacterias Gram positivo; Staphylococcus aureus (ATCC 25923); Listeria

monocytogenes (ATCC 19115) y bacterias Gram negativo; Escherichia coli O157:H7 (E09 de
la Universidad Autónoma de Querétaro); Shigella sonnei (ATCC 25931); Salmonella
typhimurium (ATCC 14028). Cepas con resistencia a la rifampicina (R+), (Sigma-Aldrich,
USA). Las cepas R+ se mantuvieron en tubos de agar inclinados con agar soya de tripticaseína
(Bioxon, México) a 3-7 ºC (Cruz et al., 2013).

2.5.2 Preparación del inóculo

Se cultivó cada cepa en tubos con 3 mL de caldo de soya tripticaseína (TSB, Bixon, Becton
Dickinson, México), incubando a 35°C por 18 h en una incubadora (Arsa AR-130AD, México),
se realizaron diluciones consecutivas 1:10, en peptona de caseína (Bioxon, México),
aproximando una concentración celular de 106 a 107 UFC/mL.

2.5.3 Técnica de difusión en placa

100 µL del inóculo en placas con agar de métodos estándar (Bioxon, México), conteniendo 100
mg*L-1 de rifampicina, se distribuyó sobre el agar utilizando la técnica de extensión en placa.
Se reconstituyeron los extractos en agua destilada en una relación 1:5 p/v, se colocaron 5 µL de
este extracto sobre el agar (Figura 2.2), se incubaron a 35°C por 18h Pasado este tiempo, se
evaluó la generación de halos de inhibición (Modificado de Cruz et al., 2013). Se realizaron
triplicados por cada extracto.

A B C

Figura 2.2 Secuencia para determinar la inhibición microbiana de los extractos, A) distribución
de los sitios de aplicación de los extractos, B) superficie de acción de los extractos colocados en
el agar, C) halos de inhibición producidas por extractos contra E. coli (círculos rojos).

57
 2.5.4 Concentración mínima inhibitoria

La Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de cada extracto se determinó mediante el método

de diluciones seriadas en medio líquido (Taroco et al., 2006) utilizando peptona de caseína. Los
extractos se reconstituyeron con agua destilada en relaciones 1:20, 1:40, 1:60, 1:80, 1:120, 1:160
y 1:320 tal como se muestra en la figura 2.3. Los inóculos bacterianos se prepararon en tubos
con caldo de soya de tripticaseína, se incubaron a 35°C por 18 h y se realizaron diluciones con
peptona de caseína hasta llegar a la concentración de 1:200 (correspondiente a 104 a 105
UFC/mL). El control negativo fue un tubo con caldo de soya tripticaseína y el control positivo
el inóculo correspondiente a cada bacteria utilizada. 250 µL de inóculo bacteriano fueron
adicionados a cada tubo con extracto, se incubó a 35°C por 18 h. Los resultados se reportaron
como valores “+” o “-” de acuerdo a la presencia o ausencia de turbidez respectivamente.

Figura 2.3 Procedimiento de diluciones de muestras en la técnica de CMI

2.6 Desarrollo experimental

El presente proyecto se realizó en 5 etapas, las cuales se muestran en la figura 2.4.

La primera etapa contempló el acondicionamiento de la materia prima, el cual consistió en la

recolección del escapo con una altura aproximada de 250 cm, utilizando solo la parte media de
dicha estructura, la cual fue cortada en cubos de aproximadamente 1 cm de lado, los cuales se
almacenarón en refrigeración (4°C) en lotes de 1 kg hasta su análisis.

En la segunda etapa se realizarón los cuatro diferentes métodos de extracción. En los primeros
tres métodos se consideraron como disolventes; el agua y etanol, utilizando en el cuarto método
de extracción 5 disolventes de diferente polaridad (hexano, acetona, metanol, etanol y agua).

58
En la cuarta etapa los extractos obtenidos se evaluaron para determinar su actividad
antimicrobiana, actividad antioxidante y concentración de compuestos fenólicos. Con base en
estos resultados se seleccionaron los extractos que mostraron mayor actividad antimicrobiana y
el más elevado espectro de acción inhibitorio ante microorganismos de interés en la industria
alimentaria.

Finalmente en la quinta etapa en los extractos seleccionados se analizaron el contenido de

compuestos bioactivos (fenoles, flavonoides, taninos, alcaloides, saponinas y proteínas), se
evaluó a cada uno su actividad antimicrobiana y actividad antioxidante.

59
 Recolección de escapo
Selección de parte media del escapo
Extracción individual Extracción dual Extracción dual Extracción secuencial de
(agua-etanol) secuencial (agua/etanol) polaridad creciente
100 g escapo
100 g escapo 100 g Hexano 100 g escapo
Etanol ESH
EC EA EE ED ED ED escapo
Crudo 60/40 50/50 40/60 Extracción Almacenaje
Agua Etanol 60/40 50/50 40/60 Extracción
(control)
Material
EDSE Acetona
Material vegetal
Extracción Agua Almacenaje ESAc
vegetal
Exprimir y Extracción Almacenaje
Concentrado
colectar el jugo
Extracción Material
resultante Metanol
Almacenaje EDSA vegetal
ESM
Almacenaje
Extracción Almacenaje
EDSEA
Material
Etanol
vegetal
ESE
Extracción Almacenaje
material
Agua
vegetal
ESA
15 extractos Extracción Almacenaje
ESC
Actividad antioxidante y actividad antimicrobiana de los extractos obtenidos
Selección de los extractos que muestren la mayor actividad antimicrobiana , antioxidante y el más amplio espectro de acción
Identificación, extracción y cuantificación de compuestos bioactivos presentes en los extractos
Actividad antioxidante y actividad antimicrobiana de los compuestos bioactivos
Figura 2.4 Esquema general del proceso del proyecto.
60
CAPÍTULO 3 RESULTADOS

3.1 Efecto de los disolventes y método de extracción sobre el rendimiento de

extracción

El rendimiento de los extractos obtenidos (Tabla 1.15) muestran que existe influencia tanto
por el método de extracción como por la polaridad del disolvente utilizado. Se observa que
existe una tendencia que indica que a mayor número de disolventes utilizados para la
extracción con diferentes polaridades, los rendimientos disminuyen, por esta razón el orden
de rendimientos decrece de la siguiente manera, extracción individual acuosa ≥ extracción
dual secuencial > secuencial, este patrón aparentemente es derivado de la presencia del agua
en las primeras etapas, lo que indica que el orden de los disolventes utilizados en la extracción
afecta el rendimiento, siendo el agua el mejor disolvente para la extracción de los compuestos
presentes en el escapo floral de Agave salmiana, dicho efecto, puede ser corroborado con lo
reportado en extractos de hojas de Lippia sidoides Cham., del pericarpio del maíz morado
(Zea mays L.) y en semillas de la uva (Vitis) donde se encontró que el rendimiento disminuye
hasta un 50% con extracciones secuenciales, en comparación con las extracciones con los
disolventes absolutos respectivos (Garmus et al., 2015, Monroy et al., 2016 y García-Marino
et al., 2006).

Por otra parte, los resultados indican que no existe diferencia estadísticamente significativa
entre el rendimiento generado en la extracción individual con agua (EIA) y la extracción dual
secuencial (EDSEA), lo cual podría ser debido al uso del agua como segundo disolvente para
la extracción, sin embargo, se observó que el rendimiento de los extractos disminuyó hasta
un 38% cuando se realizó la combinación agua/etanol independientemente de la proporción
de cada uno, lo que indica que la presencia del etanol disminuye la polaridad del agua,
reduciendo la capacidad de extracción del medio, por otra parte, se podría estar provocando
la formación de una red en la estructura del escapo, que evita la extracción de los compuestos,
este mismo efecto se observó en extractos de hojas de Phyllanthus niruri, de Lippia sidoides
Cham. y cortezas de Azadirachta indica. donde el rendimiento disminuye hasta 20% en las
extracciones duales (50/50 y 30/70, agua/etanol, v/v) en comparación con las extracciones
con los disolventes absolutos respectivos (Markom et al., 2007 y Sultana et al., 2009)

61
Mientras que, un efecto contrario fue observado en extractos de las cortezas de Acacia
nilotica, Eugenia jambolana, Terminalia arjuna, en hojas y raíces de Moringa oleifera, en el
fruto de Ficus religiosa, en hojas de Aloe barbadensis y la pulpa de café (Coffea) (Sultana et
al., 2009, Flores-Agüero et al., 2016), donde los rendimientos obtenidos son más elevados
utilizando combinaciones agua/etanol en proporciones 80/20 y 60/40, v/v respectivamente,
en comparación al uso de agua o etanol absoluto, esta discrepancia puede ser atribuida a
diferentes factores, entre ellos, la naturaleza del material vegetal, el tipo de extracción, la
naturaleza de los compuestos que conforman el material analizado, sin embargo se podría
considerar que uno de los factores principales es la proporción de agua utilizada, ya que en
éstos últimos extractos, se trabajó con altas proporciones de agua con respecto al etanol, lo
que indica que éste disolvente es el responsable del rendimiento obtenido en la extracción
(Azmir et al., 2013 y Pandey et al., 2014).

Los resultados indican que el escapo floral de Agave salmiana cuenta con mayor proporción
de compuestos polares fácilmente extraídos con agua, dicho comportamiento también fue
observado en Cassia fistula, Heliotropium indicum, Rhinacanthus nasutus, Mimosa púdica,
Vernonia zeylanica, Pongamia pinnata y en la nuez (Juglans regia L.) donde el mayor
rendimiento es obtenido al utilizar agua como agente extractor (Jeyaseelan et al., 2012,
Fernández-Agulló et al., 2013).

La extracción secuencial (ESC), por su parte, fue el método con el cual se obtuvo el menor
rendimiento de 24% y 21% con respecto a las extracciones individuales con agua y dual
secuencial, respectivamente. Con base en los resultados obtenidos, para la extracción
secuencial de compuestos a partir del escapo floral del Agave salmiana, es necesario utilizar
los disolventes de mayor polaridad al inicio, ya que aparentemente los disolventes de baja
polaridad provocan la generación de una red de compuestos no polares que evitan la
penetración de los disolventes polares, los cuales fueron utilizados en la última etapa del
proceso de extracción (Hirner, 1992, Smolskaitė et al., 2015 y Adebayo et al., 2017).

62
 Tabla 1.15 Capacidad de extracción de los disolventes sobre compuestos de los escapos florales de Agave
salmiana
Incremento en el
Rendimiento
Extracto rendimiento de
(%)
extracción*
EC 1.151d ± 0.03 1.00
EIA 3.773a ± 0.40 3.28
EIE 2.204c ± 0.18 1.92
ED60/40 2.707b,c ± 0.13 2.35
ED50/50 2.343b,c ± 0.14 2.04
ED40/60 2.499b,c ± 0.10 2.17
EDSEA 3.638a ± 0.24 3.16
ESC 2.874b ± 0.05 2.50
Valores en g/100g de muestra fresca. * Con base en el extracto crudo. Los valores se expresan como la media ± D.S del
triplicado de los análisis. Valores con diferente letra en la misma fila son significativamente diferentes a un p=0.05.
EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol
(60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol (50/50), ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual
secuencial combinación etanol y agua, ESC-extracto secuencial combinado.

En comparación con extractos reportados en las hojas de menta verde (Mentha spicata L), el
extracto crudo del escapo floral de Agave salmiana, presenta un rendimiento hasta 90%
menor, debido posiblemente a que el escapo presenta una estructura fibrosa que impide
mayor penetración de los disolventes y por ende se genera menor rendimiento en la
extracción, a diferencia del tejido suave de las hojas de menta, que pueden llegar a tener hasta
10% de agua (Pérez et al., 2017), lo cual aumenta la extractabilidad en este tipo de extracción
(Bimakr et al., 2011).

En las extracciones acuosas el rendimiento en el escapo de Agave salmiana, es 78% mayor

en comparación al rendimiento obtenido en la planta Quercus resinosa (Rocha-Guzman et
al., 2007) y similar en las extracciones etanólicas en comparación a lo reportado en los
extractos de la corteza de Eugenia jambolana (Sultana et al., 2009) con una diferencia de
0.6% a lo obtenido en el escapo de Agave salmiana, sin embargo en las extracciones
secuenciales los rendimientos obtenidos se encuentran por debajo a lo reportado en extractos
de las hojas de Combretum vendae y de manrubio blanco (Ageratum conyzoides L.) (un tipo
de maleza originaria de Argentina, Brasil, Paraguay) (Okunade, 2002) donde sus
rendimientos son 70% (Komape et al., 2014) y 14%, respectivamente, superiores a los
extractos del escapo de Agave salmiana obtenidos en el presente trabajo (Mesa et al., 2015).

63
3.2 Efecto de los disolventes y método de extracción sobre la actividad antioxidante
en los extractos

Se ha demostrado, que la actividad antioxidante del material vegetal, varía dependiendo la

técnica utilizada para su determinación (Hwang et al., 2014, Zengin et al., 2015 y Floegel et
al., 2011), y en el escapo floral de Agave salmiana no es la excepción (Tabla 1.16), sin
embargo, los resultados obtenidos, mostraron una tendencia semejante, independientemente
de la técnica utilizada, donde la extracción secuencial fue la que generó extractos con mayor
actividad antioxidante, seguido por la extracción dual 50/50.

Es importante mencionar que las técnicas FRAP y ABTS expresan los valores en
equivalentes Trolox (TE), basándose en diferentes reacciones de los antioxidantes, siendo un
proceso de óxido-reducción del ion férrico (Fe3+) al ion ferroso (Fe2+) en el primer caso y de
transferencia de electrones del compuesto antioxidante con el complejo ABTS+, en el
segundo caso (Mercado-Mercado et al., 2013), mientras que la técnica DPPH, al reflejar
parámetros cinéticos, índica los gramos de muestra necesarios para inhibir al radical DPPH,
por lo que, cuanto menos cantidad de muestra se requiera más actividad antioxidante tendrá
la muestra, es decir menor será su valor de IC50 (Bondet et al., 1997, Xie et al., 2014).

En el presente trabajo se observó que aún cuando la extracción secuencial fue la que generó
el menor rendimiento de los extractos, fue la que presentó la mayor actividad antioxidante,
lo que podría indicar que la combinación de los disolventes permiten la extracción de
compuestos que podrían estar interactuando de manera sinérgica y generar mayor capacidad
para captar radicales libres, lo cual se corrobora al determinar la presencia de 5 metabolitos
bioactivos en el extracto (fenoles simples, flavonoides, taninos, saponinas y alcaloides), cuyo
contenido indica que los fenoles simples son los compuestos que presentan la mayor
contribución con hasta 98% en el extracto secuencial respecto con los demás metabolitos
analizados (flavonoides, taninos, saponinas y alcaloides, 0.42%, 0.41% 0.44 y0.36%
respectivamente), demostrando que posiblemente estos metabolitos son los responsables de
la actividad antioxidante del extracto (tomando como un 100% la sumatoria del contenido de
cada uno de los metabolitos en el extracto) (Tabla 1.17), este comportamiento también fue
observado en los extractos secuenciales de las raíces de Curcuma caesia, hongo comestible
Pleurotus eous y orujo de uva (Vitis vinifera), donde se reportan bajos rendimientos (0.18 a

64
4 %) y elevada actividad antioxidante con hasta el 92%, 83% y 96% respectivamente,
utilizando la técnica de DPPH, (Reenu et al., 2015, Sudha et al., 2012, de Campos et al.,
2008).

Por otra parte, los resultados obtenidos en el escapo floral de Agave salmiana difieren de los
resultados reportados para extractos de Agave attenuata, Agave sisalana y en otras plantas
como Inonotus hispidus, Hydnellum ferrugineum, Tricholoma columbeta y Agaricus
bisporus, donde los rendimientos más bajos (0.30 % a 2.15 %) también generaron la menor
actividad antioxidante (hasta 97% menos actividad antioxidante, en comparación a los
extractos que obtuvieron mayor rendimiento) (Santos-Zea et al., 2012, Smolskaitė et al.,
2015). Lo anterior corrobora que, la naturaleza del material vegetal representa el parámetro
más importante para la obtención de compuestos con actividad biológica (Tansaringkarn et
al., 2008).

Por otro lado, se observa que el uso de agua o etanol como únicos disolventes para la
extracción favorece la obtención de compuestos responsables de la actividad antioxidante,
principalmente fenoles, saponinas, flavonoides, antocianinas y taninos, los cuales son
solubles en medios polares (Shukla et al., 2008), sin embargo, al combinar el agua con el
etanol considerando una mayor proporción de uno de los dos disolventes se genera un
decremento de hasta el 68% de la actividad antioxidante, lo cual podría ser debido a que las
combinaciones provocan cambios en la polaridad del medio (7.84 y 6.66 en ED60/40 y
ED40/60, respectivamente) lo cual al parecer disminuyó la extracción de compuestos
antioxidantes, dicho efecto se corrobora al analizar el contenido y contribución de los
compuestos bioactivos presentes en el extracto, donde el extracto ED60/40 (agua/etanol)
presentó una disminución en el contenido de alcaloides y saponinas con hasta 88%, con
respecto al extracto secuencial, el cual presentó la mayor actividad antioxidante, indicando
que dichos metabolitos ejercen un efecto sinérgico con los demás compuestos presentes en
el escapo de Agave salmiana aumentando la actividad antioxidante del extracto, propiedad
que puede verse afectada al modificarse la contribución de alguno de estos compuestos
(Tabla 1.17); un efecto similar se observo en el extracto ED40/60 (agua/etanol) donde los
alcaloides presentaron un aumento en su contenido de hasta 54% respecto al extracto
secuencial, que provoco una disminución en la actividad antioxidante del extracto ya que

65
estos metabolitos a diferencia de los fenoles presentan menos grupos OH y ejercen menos
actividad antioxidante (Tsoi et al., 2015). Un comportamiento semejante se ha reportado en
la obtención de diferentes extractos a partir de fuentes vegetales, tales como los extractos del
té negro (Camellia sinensis), propóleo (Turkmen et al., 2006 y Zhang et al., 2015), lo cual
indica la importancia de establecer tanto el método como el disolvente más adecuado para la
obtención de compuestos con actividades biológicas (Santos et al., 2016).

Tabla 1.16 Determinación de la actividad antioxidante y fenoles totales de extractos del escapo floral de
Agave salmiana
CE50 (g extracto seco/g FRAP (µmol TE/g de ABTS (µmol TE/g
Extracto
DPPH) extracto) extracto seco)
EC 111.26b ± 1.18 185.58g ± 1.06 95.53g ± 1.07
EIA 85.81e ± 1.15 242.77d ± 1.05 154.48d ± 0.93
EIE 89.61d ± 0.60 230.76e ± 1.94 141.80e ± 0.99
ED60/40 96.02c ± 1.39 211.43f ± 1.94 123.37f ± 0.76
ED50/50 40.50g ± 1.43 385.53b ± 1.09 295.92b ± 0.83
ED40/60 125.56a ± 0.96 178.05h ± 0.72 88.55h ± 0.93
EDSEA 47.31f ± 1.13 377.77c ± 1.46 290.34c ± 1.28
ESC 10.42h ± 0.53 408.67a ± 0.60 320.84a ± 1.56
Los valores se expresan como la media ± D.S del triplicado de los análisis. Valores con diferente letra en la misma fila son
significativamente diferentes a un p=0.05. EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual
etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol (50/50), ED40/60-extracto dual
agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-extracto secuencial combinado.

En comparación a otras especies de Agave, los resultados de los extractos secuenciales de

Agave salmiana superan la actividad antioxidante reportada para hojas de Agave sisalana y
Agave americana (25% y 60% respectivamente) (Ribeiro et al., 2013 y Chirinos et al., 2013),
lo cual podría ser debido a que en el escapo se requiere mayor concentración de compuestos
con actividad antioxidante, toda vez que en ésta estructura se generan las flores, frutos y
semillas, por lo que el escapo floral produce los diferentes compuestos con actividad
antioxidante como un mecanismo de defensa contra los depredadores naturales, así como
contra microorganismos (Taiz et al., 2010), por otra parte, se ha reportado que factores como
estructura de la planta, localización geográfica de la planta, cantidad de lluvia y
disponibilidad de nutrientes, influyen en la concentración de este tipo de metabolitos en las
plantas, por ejemplo, en las hojas y flores de Agave tequilana y Agave lechuguilla, el
contenido de compuestos antioxidantes presentó una diferencia de hasta 32% respecto a la
región donde se desarrolló la planta (Silvia-Montellano et al., 2003).

66
 Por otra parte, los extractos de flores de las especies Agave durangensis, Agave attenuata y
Agave sisalana, presentan mayor actividad antioxidante que la obtenida para el escapo floral
de Agave salmiana (85%, 90% y 82%, respectivamente) (Barriada-Bernal et al., 2014,
Rizwan et al., 2012 y Chen et al., 2009), lo cual podría ser un indicio de que los compuestos
antioxidantes son transportados a través del escapo hacia las flores y frutos, las cuales son
los receptores finales (Leal-Díaz et al., 2015), cuya concentración de compuestos
antioxidantes está influida principalmente por el estado de maduración de la planta, como se
observó en hojas de Agave tequilana, Agave salmiana y Agave americana (Arrizon et al.,
2010, Pinos-Rodríguez et al., 2008 y Leal-Díaz et al., 2015).

De acuerdo con la clasificación propuesta por Kuete y y Efferth (2010), donde las muestras
con EI50 > 50 µg/mL se identifican como moderadamente activas y las muestras con CE50<50
µg/mL como de alta capacidad antioxidante, los extractos del escapo floral de Agave
salmiana se ubican dentro del grupo de moderada actividad antioxidante con un CE50 > 7.5
mg/mL.
En plantas provenientes de otros géneros, al igual que en el escapo floral de Agave salmiana,
la actividad antioxidante es variable, aparentemente en función al tipo y sección de la planta
así como del tipo de extracción y uso de disolventes (Tansaringkarn et al., 2008), sin embargo
de manera general, los resultados obtenidos en el presente trabajo se encuentran dentro de
los intervalos reportados para especies vegetales como Anadenanthera peregrina,
Pseudopiptadenia contora, Albizia procera, ramas de Acacia catechu y corteza de Pinus
marítima (Mensor et al., 2001 y Dudonné et al., 2009).

Tabla 1.17 Contribución porcentual de los compuestos bioactivos presentes en el escapo de Agave salmiana
Extracto Fenoles Flavonoides Taninos Alcaloides Saponinas
EC 98.92 ± 0.10 0.51b,B ± 0.05
a,B
0.49b,E ± 0.04 n.d 0.07c,D ± 0.002
EIA 99.22a,A ± 0.15 0.28b,F ± 0.01 0.26b,c,E ± 0.07 0.02d,B ± 0.001 0.21c,B ± 0.03
EIE 45.88b,D ± 0.21 0.41c,D ± 0.08 53.71a,B ± 2.53 n.d n.d
ED60/40 98.98a,B ± 0.07 0.44b,C ±0.02 0.36b,E ± 0.06 d,B
0.04 ± 0.001 c,C
0.17 ± 0.02
b,E
ED50/50 35.89 ± 0.13 0.30c,F ± 0.05 63.76a,A ± 2.81 0.02d,B ± 0.002 0.03d,D ± 0.001
b,F
ED40/60 22.30 ± 0.09 0.35c,E ± 0.01 23.34b,C ± 1.73 54.01a,A ± 2.31 n.d
EDSEA 92.88a,C ± 0.18 1.05c,A ± 0.02 6.00b,D ± 0.09 n.d d,D
0.06 ± 0.001
ESC 98.37a,B ± 0.13 0.42b,c,C,D ± 0.04 0.41c,E ± 0.05 d,B
0.36 ± 0.07 0.44b,A ± 0.05
Los valores se expresan como la media ± D.S del triplicado de los análisis. n.d-no detectado. Valores con diferente letra mayúscula en
la misma columna y diferente letra minúscula en la misma fila son significativamente diferentes a un p=0.05. EC-extracto crudo, EIA-
extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual
agua/etanol (50/50), ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-
extracto secuencial combinado.

67
3.3 Identificación de los principales grupos de compuestos bioactivos presentes en
los extractos

El escapo floral de Agave salmiana, mostró la presencia de los tres grupos de metabolitos
secundarios vegetales (Tabla 1.17), grupos fenólicos (fenoles simples, flavonoides y
taninos), compuestos que contienen nitrógeno (alcaloides y proteínas) y saponinas (terpenos
y otros).

Los resultados indican que los compuestos fenólicos, flavonoides, taninos y proteínas se
encuentran presentes en los extractos obtenidos del escapo floral de Agave salmiana,
independientemente del método de extracción y tipo de disolvente utilizado (Tabla 1.17). El
conjunto de compuestos fenólicos en los que se incluye a los fenoles simples, flavonoides y
taninos, es el grupo más abundante de metabolitos secundarios en el género Agave, estos se
encuentran distribuidos en toda la planta, donde los fenoles simples y flavonoides se
concentran en mayor proporción en las hojas y los taninos en raíces y corteza. Sus funciones
son diversas, pueden ser de tipo estructural (lignina y suberina), de protección ante las
radicaciones ultravioleta, de formación de pigmentos naturales (antocianinas, flavonas y
flavonoles), como reguladores de interacciones planta-microorganismos (rizobios,
Agrobacterium spp), como efectores de crecimiento (ácido cafeico, ácido ferúlico), de
defensa ante microorganismos (los taninos furanocumarinas) y de atracción a polinizadores)
(Hamissa et al., 2012, Almaraz-Abarca et al., 2013), mientras que las proteínas que se
encuentran en menor proporción en la planta en comparación a los demás metabolitos, se
vinculan a procesos metabólicos de la planta formando parte del conjunto de enzimas que
modulan dichos procesos (Bhatia et al., 1955, Du Toit et al., 1978, Díaz-Tenorioa et al.,
2015, González-Cruz et al., 2012, Srinivasan et al., 1953).

Algunas referencias indican que la mayoría de los compuestos fenólicos y flavonoides son
extraídos con facilidad utilizando disolventes polares (agua y etanol) (Do Toit et al., 2014,
Ghitescu et al., 2015, Drosou et al., 2015), sin embargo, en algunas otras investigaciones se
sugiere el uso de disolventes menos polares como la acetona, metanol o el hexano para la
extracción de estos compuestos (Złotek et al., 2016, García et al., 2016, Roby et al., 2013),
esta discrepancia se debe principalmente a que éstos compuestos tienen estructuras químicas
diversas que las hacen afines a diferentes disolventes (Jayaprakasha et al., 2001, Alberti et

68
al., 2014, Roby et al., 2013), los taninos, también muestran un comportamieno semejante,
donde el grupo glucosídico (generalmente glucosa), presente en los taninos hidrolizables, es
fácilmente extraído con disolventes polares (Markom et al., 2007, Do Toit et al., 2014),
mientras que el grupo de la catequina, presente en los taninos condesados tiene mayor
afinidad con los disolventes menos polares como metanol o acetona (Trabelsi et al., 2010 y
Tatiya et al., 2011).

Otro grupo de compuestos, encontrados en el escapo de Agave salmiana, son los compuestos
nitrogenados, los cuales pueden incluir péptidos, aminoácidos, aminas y algunas enzimas,
que cumplen funciones estructurales y de aporte energético dentro del escapo floral, ya que
es una sección del Agave que se encuentra en constante crecimiento además de ser la zona
donde se generarán las flores, frutos y semillas, por lo que sus necesidades metabólicas
demandan la presencia de enzimas que catalizan las reacciones para la síntesis de los
diferentes biocompuestos, así como la elongación del tejido vegetal, y generación de nuevas
estructuras, es por ello que en los extractos se detectó la presencia de proteínas, las cuales, se
ha demostrado, pueden ser extraídas con agua o mezclas agua/etanol (Chel et al., 2003).
Algunas de las enzimas extraídas a partir de la piña, hojas y escapo floral de diferentes
especies de Agaves (Agave vera cruz Mill, Agave americana, Agave tequilana, Agave
angustifolia y Agave atrovirens Karw) son; fructosiltransferasa (sacarosa:sacarosa fructosil-
transferasa y 1,2-β- fructano 1-fructosiltransferasa), aminopeptidasas y las metalotioneínas
(Bhatia et al., 1955, Du Toit et al., 1978, Díaz-Tenorioa et al., 2015, González-Cruz et al.,
2012, Srinivasan et al., 1953)

De los metabolitos secundarios encontrados en el escapo floral de Agave salmiana, los

alcaloides y saponinas fueron los que mostraron mayor efecto tanto por el disolvente como
por el método utilizado en el proceso. Se ha reportado que en el género Agave, tanto los
alcaloides como las saponinas representan una parte importante dentro de la planta como
agentes de protección ante hongos, bacterias y depredadores naturales o como parte de
mecanismos de supervivencia ante competencia vegetal. Los alcaloides debido a su
naturaleza alcalina (presencia del grupo amina o imina) que genera un sabor amargo al
consumirlo como la quinolizidina, actúa principalemtne como defensa ante herbivoros e
insectos sin embargo la presencia de nitrógeno en su estructura sugiere también su

69
participación como producto de desecho, almacenamiento y transporte del nitrógeno no
metabolizado y como regulador de crecimiento (alcaloides derivados de la putrescina) (Singh
et al., 2018, Fallon et al., 2014, Wink et al., 2017). Mientras que las saponinas de tipo
esteroidal aisladas del género Agave (Agave sisalana, Agave americana, Agave angustifolia
y Agave offoyana) como tigogenina, neotigogenina, hecogenina, neohecogenina,
rockogenina, cantalasaponina-1, Agabrittonósido E, Magueyosides A, Agabrittonosides D y
cantalasaponina, que se encuentran en mayor proporción en la planta en comparación a las
saponinas terpénicas, realizan principalmente funciones fitotóxicas (contra Lactuca sativa,
Lycopersicum esculentum, Lepidium sativum, Allium spp.), antifungicas (Cercospora
agavicola, Fusarium oxysporum y Aspergillus niger) y antimicrobianas (Pectobacterium
carotovora), como mecanismo de supervivencia ante competencia vegetal, ataque fúngico y
bacteriano (Chen et al., 2011, Pérez et al., 2014, Pereira et al., 2017).

Los resultados mostraron que el uso del etanol como único o primer disolvente evita la
extracción de los alcaloides, lo cual podría ser debido a reacciones de oxido-reducción donde
el grupo OH del etanol sustituye el grupo alcoxi (grupo alquilo unido a un átomo de oxígeno)
presente en los alcaloides, por grupos hidroxilo, provocando cambios en la estructura que
afectan su actividad y por ende su disponibilidad (Crow et al., 1949). Este comportamiento
también fue observado en extractos de Melicope fareana, Eugenia caryophyllata y en
cortezas de Terminalia avicennoides, Entada africana, Mitragyna stipulosa y Lannae acida,
donde los extractos obtenidos con etanol no mostraron la presencia de alcaloides (Crow et
al., 1949, Joshi et al., 2011 y Aboaba et al., 2006).

Por su parte, las saponinas al estar conformadas por una estructura glucósido-esteroidal,
donde el glucósido (azúcar) es fácilmente extraído por disolventes polares y la parte
esteroidal o triterpénica soluble en disolventes orgánicos, hace propensos a este tipo de
compuestos a cambios en su estructura al interactuar con diferentes disolventes para su
extracción bajo mecanismos de acción que aún no están del todo claros, sin embargo un
estudio realizado con saponinas aisladas del frijol (Phaseolus vulgaris) indica que la aglicona
(grupo no glucídico) sufre desprotonación (cesión de un catión hidrógeno) al interactuar con
el etanol en su extracción, haciendo inestable la molécula de la saponina (Heng et al., 2006
y Sidana, et al., 2016), por lo que, la presencia de etanol en elevadas concentraciones se

70
 convierte en un limitante para la obtención de éste tipo de compuestos (Ko et al., 1992). Otra
explicación de la poca o nula extracción de saponinas por la presencia del etanol en altas
concentraciones, es debido a que a mayor proporción de etanol utilizado en la extracción se
favorece la obtención de componentes lipídicos, aumentando la resistencia a la difusión y
disminuyendo la extracción de saponinas (Chen et al., 2009). De tal manera que la solubilidad
de las saponinas en presencia de etanol dependerá principalmente de las características
estructurales de su grupo esteroidal (Ozlem et al., 2007).

Un comportamiento semejante, fue observado en los extractos de Ginseng rojo coreano

(Panax ginseng) y de soya (Glycine max), donde la extracción de saponinas se vio reducida
al aumentar la proporción del etanol en la extracción (Lee et al. y 2016 y Ozlem et al., 2007).

Tabla 1.18 Identificación de los principales compuestos bioactivos presentes en los extractos del escapo floral
de Agave salmiana
Compuestos bioactivos
Extracto Fenólicos Grupos con N Saponinas
Fenoles simples Flavonoides Taninos Alcaloides Proteína (terpenos y otros)
EC + + + - + +
EIA + + + + + +
EIE + + + - - -
ED60/40 + + + + + +
ED50/50 + + + + + +
ED40/60 + + + + - -
EDSEA + + + - + +
ESC + + + + + +
(-) indica ausencia del compuesto, (+) indica presencia del compuesto. Los valores se expresan como la media del triplicado
de los análisis. EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto
dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol (50/50), ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-
extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-extracto secuencial combinado.

Los resultados obtenidos en los extractos etanólicos del escapo de Agave salmiana son
similares a los reportados para los extractos de pétalo de Crocus sativus L., donde el análisis
fitoquímico de sus principales compuestos bioactivos (flavonoides, taninos y saponinas)
tienen el mismo patrón de presencia y ausencia en los compuestos respectivos (Hosseinzadeh
et al., 2002), de manera similar, los extractos acuosos de Cleome rutidosperma, Ettlingera
coccinea, Paracoccidioides bransilensis, Psidium gujauva y Adiantum capillus mostraron la
presencia de flavonoides, alcaloides, taninos y saponinas al igual que los extractos obtenidos
del escapo floral de Agave salmiana (Edeoga et al., 2005, Wadood et al., 2013 e Ishaq et al.,
2014).

71
Por el contrario, en las extracciones duales, la presencia de los metabolitos secundarios en el
escapo de Agave salmiana difiere a lo reportado para los extractos de Acanthospermum
hispidum, donde las saponinas se encuentran presentes en extractos que tienen mayor
proporción de etanol con respecto al agua (30/70, agua/etanol) (Roy et al., 2010), de igual
manera se observó que en los extractos etanólicos al 50% de Gymnema sylvestere y Tagetes
erecta Linn no hubo presencia de flavonoides y alcaloides (Kiranmai et al., 2011), mientras
que en el escapo de Agave salmiana se muestra la presencia de todos estos metabolitos
secundarios y en los extractos de hojas de Psidium guajava L. al aumentar la proporción de
agua (80%) se limitó la extracción de alcaloides y proteínas (Arya et al., 2012), siendo estos
compuestos extraídos en condiciones similares en los extractos del escapo de Agave
salmiana, indicando que la presencia o ausencia de éstos compuestos, dependerá de
diferentes factores como son el tipo y sección de la planta analizada además del tipo de
disolvente de extracción.

En cuanto a las extracciones secuenciales de este tipo de metabolitos, a diferencia de los

resultados obtenidos en los extractos de Agave salmiana, se reporta que para extractos de
gingsen brasileño (Panax ginseng), fibra de alfalfa (Medicago sativa) y hojas de Agave
sisalana y Ziziphus joazeiro, el uso de disolventes de diferente polaridad no interfirió en la
extracción de las saponinas, encontrándose diferentes tipos en cada uno de los extractos
obtenidos, aquellos solubles en agua (con un mayor grupo glucósidico), los solubles en
disolventes menos polares como la acetona (con un mayor grupo de esteroides) y aquellos
extraídos con disolventes de polaridad media (combinaciones de agua/etanol) (Bitencourt et
al., 2014, Malinow et al., 1979 y Ribeiro et al., 2013).

3.4 Cuantificación de los principales grupos de compuestos presentes en los

extractos

Entre los metabolitos secundarios presentes en el escapo floral de Agave salmiana, la familia
de los Compuestos Fenólicos fueron los que mostraron mayor concentración en todos los
extractos obtenidos (Tabla 1.18), alcanzando concentraciones hasta de 6208.66 ± 39.62 µg
AG/g extracto seco, cuando se realiza la extracción secuencial, lo cual es debido a que en
esta extracción se utilizaron disolventes con diferentes polaridades y considerando la
variabilidad de la estructura química de los compuestos fenólicos, los disolventes permitieron

72
la extracción de diferentes grupos que conforman esta familia de compuestos, aunado a que
la técnica utilizada para su cuantificación (Folin-Coiocalteu) permite identificar los
Compuestos Fenólicos Totales, es decir aquellos compuestos que comparten cierta similitud
estructural como son anillos de benceno y grupos hidroxilados (Ikawa et al., 2003 y Pękal et
al., 2014), por lo que en este caso los fenoles simples, flavonoides y taninos así como otros
compuestos fenólicos no cuantificados en este trabajo, se encuentran incluidos en los
resultados.

Los resultados indican que tanto el tipo de extracción como la polaridad de los disolventes
utilizados influyen en la extracción de compuestos fenólicos, presentándose variabilidad en
los resultados obtenidos. El valor máximo fue obtenido cuando se utilizó la extracción
secuencial, seguido por las extracciones dual 50/50 y dual secuencial, las cuales fueron 29 y
34% menores con respecto a la extracción secuencial, lo cual indica que el uso de polaridades
diferentes en la extracción permite la separarción de mayor cantidad de compuestos fenólicos
(Smolskaitė et al. 2015 y Gajera et al., 2017), lo cual se ve corroborado comparando los
resultados de los extractos obtenidos con un solo disolvente donde la concentración de
compuestos fenólicos se disminuye hasta un 74% con respecto a la extracción secuencial.
Dicho comportamiento también ha sido observado en los extractos de grosella roja (Ribes
rubrum), grosella negra (Ribes nigrum), uva (Vitis vinifera var. Pinot Noire) y el durazno
(Prunus persica L.), donde el Contenido de Fenoles Totales disminuye 66%, 75%, 97% y
51% respectivamente, en comparación a los extractos en los que se utilizó varios disolventes
(Lapornik et al. 2005 y Mokrani et al., 2016).

Por otra parte, la concentración de Compuestos Fenólicos Totales presentes en los extractos
del escapo floral de Agave salmiana es menor respecto a lo reportado para los extractos
metanólicos y acuosos de hojas de Agave attenuata y Agave americana con un 41% y 20%
respectivamente (Rizwan et al., 2012 y Nasri et al., 2012), pero es mayor a lo reportado para
los extractos metanólicos de hojas de Agave americana y bagazo de Agave tequilana con un
28% y 95% respectivamente (Hamissa et al., 2012 y Arreola et al., 2016). Lo que índica que,
dentro del mismo género, se presentan diferencias en cuanto a concentración de compuestos
fenólicos, lo cual depende, además de los disolventes y los métodos de extracción, de

73
características botánicas (especie, estructura y sección de la planta) y parámetros externos
(lugar de procedencia de la planta, técnicas de cultivo), (Almaraz-Abarca et al., 2013).

En comparación a otras fuentes de origen vegetal, el Contenido de Fenoles Totales del escapo
floral de Agave salmiana se posiciona dentro de las plantas clasificadas como herbales y
medicinales con el mayor contenido de este tipo de metabolitos, en un intervalo de 400 a
7400 µg GAE/g extracto, debajo de los frutos rojos (Empetrum nigrum, Aronia melanocarpa,
Fragaria ananassa, Malus pumila y Rubus idaeus) con hasta 87% y por encima de algunos
cereales (Avena sativa, Triticum aestivum y Hordeum sativum), plantas (Pinus sylvestris ,
Betula pendula y Salix alba) y vegetales (Daucus carota, Pisum savitum, Solanum
tuberosum, y Lycopersicum esculentum) hasta con un 95% (Kähkönen et al., 1999, Marinova
et al., 2005 y Sengul et al., 2009).

Entre los compuestos fenólicos presentes en los extractos del escapo floral de Agave
salmiana, los taninos fueron los compuestos que mostraron mayor concentración, lo cual era
de esperarse si se considera que el escapo floral es una estructura vegetal que ha mostrado
empíricamente baja contaminación por insectos, hongos o bacterias (Chortoicetes
terminifera, Fusarium oxysporum y Pectobacterium atrosepticum, respectivamente), lo cual
es un indicio de la presencia de taninos en altas concentraciones, ya que éstos compuestos se
caracterizan por tener efecto en la prevención de la contaminacion, derivada de su actividad
sobre enzimas de adhesion y proteínas de transporte de envoltura celular, mediante
interacciones moleculares formando complejos con las proteínas a través de las fuerzas no
específicas, tales como enlaces de hidrógeno y efectos hidrófobos, así como por la formación
de enlaces covalentes, provocando cambios de permeabilidad de la membrana y lisis celular
(Medini et al, 2014, Cowan, 1999, Shafique et al., 2018, Shikano, 2017 y Meziani et al.,
2015).

Los resultados indican que, en la extracción de taninos al igual que en los demás compuestos,
existe influencia tanto por el método de extracción como por el disolvente utilizado,
mostrando las mayores concentraciones de taninos con la extracción dual 50/50, seguido de
la extracción dual 40/60 y la extracción individual con etanol, las cuales disminuyeron 62%
y 69% respectivamente, en relación a la mayor concentración obtenida, lo que indica que
aparentemente la presencia del etanol en mayor proporción o como único disolvente,

74
favorece la obtención de los taninos, específicamente del tipo condensados
(proantocianidinas, prodelfinidinas, profisetinidinas y prorobinetinidinas) (Klongsiriwet et
al., 2015 y Schofield et al., 2001), los cuales tienden a formar fácilmente complejos con
moléculas proteínicas y son preferentemente extraídos con disolventes menos polares
(etanol, etanol/agua, acetona) (Madrigal-Carballo et al., 2016), por lo que en los extractos de
Agave salmiana la presencia del etanol rompe las posibles interacciones de los taninos
condensados con las proteínas presentes, liberando así los metabolitos y haciéndolos más
accesibles para su extracción (Hagerma et al., 1980 y Madrigal-Carballo et al., 2016), lo cual
también fue observado en extractos de sorgo (Sorghum spp.), de hollejo y semilla de uva
(Vitis vinifera) (Hagerma et al., 1980, Downey et al., 2016 y Roumeas et al., 2013).

Por otra parte, la extracción donde el agua está presente como único disolvente o disolvente
mayoritario, se obtuvieron extractos con las menores concentraciones de taninos, lo cual
indica que los extractos del escapo floral, presentan menor proporción de taninos
hidrolizables, que pueden ser fácilmente extraídos con agua debido a la presencia de un grupo
glucosídico en su estructura (Madrigal-Carballo et al., 2016, Downey et al., 2016 y Roumeas
et al., 2013).

La extracción secuencial, generó extractos con una concentración 98% menor con respecto a
la extracción dual 50/50, lo cual podría ser debido a que el uso de los disolventes con
polaridades crecientes, pudo haber generado una red que evitó la extracción y subsecuente
cuantificación de los taninos, este mismo comportamiento fue observado en extractos
secuenciales de Cichorium intybus, Carya illinoinensis y sorgo (Sorghum bicolor L.)
(Muthusamy et al., 2008, Hahn et al., 1986 y Pinheiro et al., 2009).

En comparación a lo reportado para el escapo de Agave salmiana, los extractos de Agave

lechuguilla, Agave americana y Agave angustifolia se encuentran por debajo del contenido
total de taninos con hasta 98%, 15% y 93% respectivamente (Mendez et al., 2012, Nasri et
al., 2012 y López-Romero et al., 2017). Mientras que si se comparan los extractos de Agave
salmiana con otras fuentes vegetales, se pueden observar una gran variabilidad en los
resultados, por ejemplo; los extractos de hojas de las plantas como Garcinia cola,
Azadirachta indica y Carica papay mostraron 98%, 96% y 87% menos concentración de
taninos que el escapo floral de Agave salmiana (Eleazu et al., 2012), mientras que los

75
extractos de plantas como Suaeda fruticosa y Drynaria fortunei (Oueslati et al., 2012 y
Chang et al., 2012) reportan concentraciones similares y extractos de plantas como Ficus
decora y Ficus virnes muestran concentraciones mayores a los obtenidos en el presente
trabajo hasta en un 83% (Abdel-Hameed, 2009), finalmente, con relación al contenido de
taninos en frutas (Astrocaryum aculeatum, Juniperus excelsa y Punica granatum) éstas
superan los valores obtenidos en el escapo de Agave salmiana hasta con un 77% (Sagrillo et
al., 2015, Nabi et al., 2012 y Saad et al., 2012).

Los flavonoides, fueron los compuestos pertenecientes a la familia de los Compuestos

Fenólicos, que presentaron menor concentración en los extractos, siendo la extracción dual
40/60 la que generó mayor concentración de flavonoides, seguido de la extracción dual 50/50
y la extracción dual secuencial, estos resultados podrían indicar que, el agua y el etanol
realizan una interacción sinérgica, debido a la polaridad resultante (6.6-7.84), valor que ha
demostrado ser favorable para la extracción de dichos compuestos (Bimakr et al., 2011), es
por ello que las extracciones individuales de agua y etanol mostraron valores más bajos (64%
y 59% respectivamente), con respecto a la extracción dual 40/60. Los resultados obtenidos
en el presente trabajo, son semejantes a lo que se ha reportado para extractos de las plantas
Radix Astragali, Mentha spicata L. y Hieracium pilosella L. donde las combinaciones de
agua/etanol (50/50, 30/70 y 50/50 respectivamente) generaron polaridades entre 6-8, fueron
las que permitieron la extracción de mayor concentración de este tipo de compuestos (Xiao,
2008, Bimakr et al., 2011 y Stanojević et al., 2009).

Respecto a otros Agaves, el contenido de flavonoides en los extractos de escapo de Agave

salmiana están por debajo de los valores reportados para las especies Agave lechuguilla,
Agave durangensis y Agave attenuata, por 98.1%, 98.6% y 97.6% respectivamente (Hamissa
et al., 2012, Barriada-Bernal et al., 2014 y Rizwan et al., 2012).

Comparado con otras fuentes de origen vegetal, los extractos del escapo floral de Agave
salmiana, presentó menores concentraciones de flavonoides, tal es el caso de extractos de
Ruta montana, Artemisia arboresens, Thapsia garganica y Juniperus oxycedrus, donde los
valores obtenidos están por debajo hasta en un 98% (Djeridane et al., 2006), de igual manera
para para extractos de frutas como la mora (Rubus ulmifolius), fresa (Fragaria vesca) y
manzana (Pyrus malus L.) donde el contenido de flavonoides supera lo obtenido en el

76
presente trabajo con hasta 99% (de Souza et al., 2014 y Pękal et al., 2014) , indicando que el
escapo de Agave salmiana no es una fuente potencial de este tipo de metabolitos.

Además de los taninos y los flavonoides existe una gran variedad de compuestos que
pertenecen a la familia de los Compuestos Fenólicos, como los fenoles simples (tienen dos o
tres grupos hidroxilo en el anillo aromático, ejemplo; catecol, resorcinol, hidroquinona y
floroglucinol), los ácidos fenólicos (ácidos hidroxibenzoicos y ácidos hidroxicinámicos),
cumarinas (tienen un anillo aromático unido a un heterociclo oxígeno), xantonas, estilbenos,
benzofenonas (dos anillos aromáticos unidos por cetona), quinonas (un anillo orto-
benzoquinona completamente conjugado), lignanos y ligninas (compuestos fenólicos
dímeros derivados de fenilalanina y alcoholes cinámicos presentes en varios alimentos)
(Peñarrieta et al., 2014), los cuales fueron cuantificados en conjunto, encontrando que pueden
representar hasta el 75% del total de los compuestos fenólicos presentes en los extractos, este
porcentaje de extracción dependerá del tipo de extracción y disolvente utilizado. El extracto
que presentó mayor concentración de compuestos fenólicos simples fue el obtenido con la
extracción individual con agua como disolvente, seguido de la extracción dual 60/40
(agua/etanol), lo que indica que la mayoría de los compuestos fenólicos presentes en el
escapo, son de naturaleza polar (Gu et al., 2014).

Se ha reportado mayor concentración de compuestos fenólicos simples en extractos de Agave

americana (4.49 mg*g-1) y Agave atrovirens (6.64 mg*g-1) en comparación a lo obtenido
para los extractos del escapo floral de Agave salmiana, mientras que ectractos de Agave
attenuata y Agave durangensis presentaron una concentración de contenido de fenoles
simples del 95% y 89% menor a lo reportado en el presente trabajo (Hamissa et al., 2012,
Rizwan et al., 2012, Santos-Zea et al., 2012), en otras plantas el contenido de estos
metabolitos en los extractos se supera con 88%, 91% y 57%, en especies como Amaranthus
caudatus, Chenopodium quinoa y Oxalis tuberosa respectivamente, mientras que en relación
a los extractos frutales como manzana (Pyrus malus L.), toronja (Citrus maxima) y ciruela
pasa (Prunus domestica) el valor obtenido para los extractos del escapo de Agave salmiana
se encuentra por debajo con 37%, 60% y 52% respectivamente (Balasundram et al., 2006 y
Chirinos et al., 2013).

77
El segundo grupo de metabolitos secundarios presente en el escapo floral de Agave salmiana
son las saponinas, siendo la extracción secuencial la que permitió la mayor extracción, lo
cual podría deberse a la versatilidad de la estructura de estos compuestos, al contener dos
elementos, la aglicona también denominada sapogenina soluble en lípidos (esteroides o
triterpenos) y los glucósidos solubles en agua (arabinosa, glucosa, y galactosa), permitiendo
su extracción por una mayor variedad de disolventes (Rezgui et al., 2016 y Cheok et al.,
2014).

Al utilizar agua como único disolvente o disolvente mayoritario (EIA y ED60/40) se extrae
menor concentración de éstos compuestos, lo cual puede indicar que en los extractos se
encuentra menor concentración de saponinas tipo triterpénicas en el escapo, las cuales en
comparación a las saponinas tipo esteroidales son favorablemente solubles en medios polares
y se encuentran en menor proporción en el género Agave, lo cual podría explicar el bajo
contenido de este tipo de metabolitos en los extractos más polares y un mayor contenido en
extractos en los que se utilizó disolventes menos polares (Chen et al., 2011, Martini, 2017 y
Rodríguez et al., 2014), el mismo efecto se observó al utilizar etanol como único disolvente
o en combinación con el agua donde se extraen las bajas concentraciones de este metabolito
(ED50/50, EDSEA) e inclusive en algunos casos sólo se obtienen trazas de saponinas por lo
que no pudieron cuantificarse (EIE, ED40/60), este comportamiento puede ser explicado
debido a que el etanol podría formar enlaces con los esteroides del grupo aglicona de la
saponina por enlaces no covalentes lo que impide su completa extracción e identificación
(Moreaua et al., 2003).

Los contenidos de saponinas del escapo floral de Agave salmiana obtenidos son 94%, 96%
y 95% menores a lo reportado para extractos de Agave americana, Agave decipiens y Agave
attenuata respectivamente (Leal-Díaz et al., 2015, Abdel-Gawad et al., 1999 y da Silva et
al., 2002) y semejantes a las encontradas en los extractos de Agave offoyana (2.4-18.8 µg/g)
y Agave macroacantha (4-7.5 µg/g) (Pérez et al., 2013, Eskander et al., 2010). Mientras que
en comparación con otras fuentes vegetales los valores reportados en el presente trabajo son
superiores que los extractos de plantas como Chenopodium quinoa, Clematis chinensis y
Clematis hexapetala con hasta 87% (Szakiel et al., 2011) y más bajos respecto a los extractos

78
de los frutos de Sapindus saponaria, Enterolobium cyclocarpum y Pithecellobium saman con
más del 98% (Hess et al., 2003).

El tercer grupo de metabolitos secundarios presente en el escapo floral de Agave salmiana es

el de los compuestos que contienen nitrógeno, en este caso, se cuantificó la presencia de
alcaloides, los cuales presentaron las menores concentraciones en comparación con los
demás compuestos cuantificados, siendo la extracción secuencial la que permitió la mayor
extracción, lo cual podría deberse al grupo nitrogenado de los alcaloides que permite una
mayor extracción con disolventes menos polares (Anulika et al., 2016), este comportamiento
se corrobora al observar la disminución del contenido de alcaloides de hasta el 96% al utilizar
disolventes polares (agua y etanol), ya sea como único disolvente (EIA y EIE) o en
combinación (ED60/40, ED50/50 y ED40/60), indicando que los disolventes polares no
favorecen la extracción de este tipo de compuestos. Este mismo comportamiento se observo
en los extractos de Claviceps purpurea, Solanum nigrum y Dissotis rotundifolia, donde el
contenido de alcaloides disminuyó al aumentar la polaridad del medio extractivo (Hafner et
al., 2008, Jasim et al., 2015 y Darkwah et al., 2018).

El contenido de alcaloides del escapo floral de Agave salmiana está por debajo de lo
reportado para extractos de hojas, flores y raices de plantas (Albizia amara, Achyranthes
aspera, Cassia fistula, Cassia auriculata, Datura stramonium, Moringa concanensis,
Mahonia spp., Dendrobium thyrsiflorum, Aniba rosaeodora, Capparis spinosa) hasta en 99%
(Kumar et al., 2008, Santhi et al., 2016, Ji et al., 2000, Bhattacharyya, et al., 2015, Chevalier
et al., 2014, Khatib et al., 2016), esta gran diferencia podría deberse a que en las plantas los
alcaloides son sintetizados principalmente en las hojas, flores y en algunos casos raíces,
actuando en hojas y flores como parte del mecanismo de defensa ante herbivoros e insectos
debido a su naturaleza alcalina (presencia del grupo amina o imina) que genera un sabor
amargo al consumirlo y en las raíces desempeñando funciones como producto de desecho,
almacenamiento y transporte del nitrógeno no metabolizado, asi como regulador de
crecimiento (alcaloides derivados de la putrescina) (Singh et al., 2018, Fallon et al., 2014,
Wink et al., 2017), siendo el tallo y semillas las partes con un menor contenido de este
metabolito, ya que el nitrógeno en éstas estructuras es utilizado principalmente para la
síntesis de proteínas (Yadav et al., 2015), dicho comportamiento también se ha obervado en

79
las plantas Moringa concanensis, Mahonia spp. y Solanum tuberosum donde al analizar
diferentes secciones, se observó una concentración elevada de alcaloides en tejidos suaves
(hojas, flores, raicez y frutos) con relación al conteido obtenido en semillas y tallo de hasta
64%, 73% y 82% respectivamente, (Santhi et al., 2016, Ji et al., 2000, Hossain et al., 2016).

La concentración de alcaloides obtenida en el presente trabajo indica que el escapo de Agave

salmiana no es una fuente importante de este tipo de alcaloides.

80
 Tabla 1.18 Determinación del contenido de compuestos bioactivos presentes en los extractos del escapo floral de Agave salmiana
Contenido de Compuestos Saponinas
Flavonoides Taninos Alcaloides
Fenoles totales Fenólicos Simples (µg saponina
Extracto (µg QE/g (µg AT/g (µg atropina/g
(µg AG/g extracto (µg AG/g extracto estándar/g
extracto seco) extracto seco) de extracto seco)
seco)* seco) extracto seco )
EC 1776.13a,G ± 29.02 1246.67b,D ± 51.32 6.47c,D,E ± 0.45 6.23c,E ± 0.35 n.d 0.85c,D ± 0.04
EIA 1917.25b,F ± 18.31 2113.33a,A ± 61.10 6.07c,E ± 0.25 5.53c,E ± 0.25 0.43c,B,C ± 0.03 4.53c,B ± 0.47
EIE 1660.10a,H ± 44.40 783.31c,F ± 25.17 6.97d,D,E ± 0.25 916.90b,C ± 5.29 n.d n.d
ED60/40 2138.59a,D ± 30.02 1953.33b,B ± 55.08 8.17c,D ± 0.25 7.63c,E ± 0.40 0.84c,B,C ± 0.03 3.40c,C ± 0.40
ED50/50 4380.74a,B ± 20.13 1662.07c,C ± 41.03 13.77d,B ± 0.45 2952.50b,A ± 36.15 0.93d,B ± 0.03 1.41d,D ± 0.38
ED40/60 2060.90b,E ± 31.40 1060.26c,E ± 66.25 16.83d,A ± 1.02 1110.03c,B ± 13.49 0.26a,C ± 0.04 n.d
EDSEA 4073.33a,C ± 19.74 1033.18b,E ± 60.28 11.73c,C ± 1.37 66.77c,D ± 0.35 n.d 0.71c,D ± 0.02
ESC 6208.66a,A ± 39.62 1763.45b,C ± 45.09 7.60c,D,E ± 0.44 7.40c,E ± 0.30 6.40c,A ± 0.50 7.87c,A ± 0.25
*Tomado del extracto total. Prueba de Tukey. n.d-compuesto bioactivo no detectado.
Los valores se expresan como la media ± D.S del triplicado de los análisis.
Valores con diferente letra mayúscula en la misma columna y diferente letra minúscula en la misma fila son significativamente diferentes a un p=0.05
EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol (50/50),
ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-extracto secuencial combinado.
81
3.5 Efecto de los disolventes y método de extracción sobre la actividad antioxidante de
los compuestos bioactivos presentes en los extractos de Agave salmiana

Los resultados obtenidos indican que tanto el tipo de extracción como los disolventes utilizados
influyen en la actividad antioxidante de los metabolitos presentes en el escapo de Agave
salmiana (Tabla 1.19). El agua como disolvente mayoritario favoreció la extracción de
compuestos que presentaron elevada actividad antioxidante, observándose la siguiente
tendencia, flavonoides > taninos > fenoles simples > alcaloides, indicando que los compuestos
antioxidantes presentes en el escapo de Agave salmiana son fácilmente extraíbles en disolventes
de naturaleza polar, sin embargo en el caso particular de las proteínas y saponinas, se observó
un incremento de la actividad antioxidante al ser extraídas a partir del extracto crudo, es decir
en ausencia de disolventes (EC), lo cual puede ser debido a que estos últimos metabolitos tienen
grupos nitrogenados y esteroidales respectivamente, que interaccionan con mayor facilidad con
disolventes bajo reacciones de oxido reducción modificando la estructura de los compuestos o
bien formando enlaces inespecíficos (fuerzas de Van der Waals o puentes de hidrógeno) que
impiden la interacción con los radicales oxidantes utilizados en el análisis de actividad
antioxidante (DPPH, ABTS y FRAP) disminuyendo en ambos casos sus propiedades
antioxidantes en los extractos en los que se utilizo disolventes (Huang et al. 2015). Este mismo
comportamiento se observó para los extractos crudos de Atriplex laciniata, Datura metel e
Isodon rugosus en donde las saponinas, péptidos y algunas enzimas mostraron mayor actividad
antioxidante en comparación a los extractos donde se utilizó disolvente en la extracción (hexano,
metanol, etanol, acetato de etilo y agua) (Kamal et al., 2015, Alabri et al., 2014 y Zeb et al.,
2014).

La familia de compuestos fenólicos en la que se incluyen los fenoles simples, flavonoides y

taninos, son el grupo de metabolitos más estudiado en el ámbito fitoquímico, los cuales en su
mayoría presentan una elevada actividad antioxidante en comparación a otros metabolitos
(saponinas, alcaloides, taninos, terpenos y péptidos) debido a que tienen grupos hidroxilo, los
cuales interaccionan fácilmente con los compuestos oxidantes por medio de reacciones de óxido
reducción (Nimse et al., 2015).

En el escapo de Agave salmiana este grupo fenólico presentó 97%, 98% y 94% mas actividad
antioxidante en relación a los alcaloides, proteínas y saponinas respectivamente, este

82
comportamiento también se observo en los extractos de hoja de Agave lechuguilla, Agave
sisalana y Agave salmiana, donde los metabolitos que comparten el grupo OH pertenecientes al
conjunto de fenoles, presentaron hasta 86% mayor actividad antioxidante en comparación a los
metabolitos que carecen o presenten menor cantidad de este grupo hidroxilado (alcaloides,
saponinas y terpenos) (Sidana et al., 2016 y Carmona et al., 2017), sin embargo, estos últimos
compuestos si bien no presentan elevada actividad antioxidante, se ha encontrado que tienen
otras propiedades importantes como antinflamatorios, antihipertensivos, inmunomodulatorios,
antiparasiticos y antifúngicos (López-Romero et al., 2018).

Entre el grupo de compuestos fenólicos presentes en los extractos del escapo de Agave salmiana,
los flavonoides fueron los que presentaron mayor actividad antioxidante con 95% y 96% en
comparación a los fenoles simples y taninos respectivamente, lo cual puede ser debido a que los
flavonoides en comparación a los fenoles simples y taninos, ejercen su actividad antioxidante
por otros mecanismos además de donar el electrón hidrógeno del grupo OH (comportamiento
propio del grupo de fenoles), como la capacidad de quelar metales (cromo, manganeso, hierro,
cobalto, níquel, cobre) asociado a grupo catecol (posiciones 3 ́ y 4 ́) en el anillo B y 5 hidroxilo
en el anillo C de los flavonoides e inhibición de enzimas (lipoxigenesa, ciclo-oxigenasa,
mieloperoxidasa y NADPH oxidasa) evitando así la formación de especies reactivas de
oxígeno e hidroxi-peróxidos orgánicos (Kasprzak et al., 2015, Cherrak et al., 2016), como se
observo en los extractos de Opuntia streptacantha y Opuntia ficus (Mabrouki et al., 2015).

Los resultados indican que, la actividad antioxidante al igual que análisis anteriores esta influida
por el método de extracción y por el disolvente utilizado, mostrando los extractos de flavonoides
una mayor actividad antioxidante al aumentar el número de disolventes utilizados en la
extracción, de acuerdo con la siguiente tendencia, secuencial agua-etanol > extracción dual
50/50 > extracción dual 60/40 > individual agua, con una disminución en la actividad
antioxidante hasta 90% al realizar extracciones en combinación agua/etanol y hasta 93% al
realizar extracciones individuales con disolventes absolutos con respecto al valor más elevado
(extracción secuencial EDSEA) en esta determinación.

También es importante mencionar que no existe diferencia estadística significativa al realizar

extracciones secuenciales con dos o 5 disolventes de diferente polaridad, indicando que el
proceso secuencial independientemente del disolvente utilizado favorece el aumento de la

83
actividad antioxidante de los flavonoides, lo cual puede ser debido a que se provocan cambios
de oxido-reducción en la estructura de estos compuestos al interactuar con los disolventes en
alguna de las etapas secuenciales de la extracción, formando complejos más antioxidantes como
quinonas y pironas (Kruk et al., 2016), lo cual también fue observado en extractos de Salvia
miltiorrhiza, Alchemilla vulgaris, Sambucus ebulus L., Mentha spicata L. y Fragaria vesca L.
(Weng et al., 1992 y Kiselova et al., 2006).

Por otra parte, las extracciones donde el agua está presente como único disolvente o disolvente
mayoritario aumentó hasta 90% la actividad antioxidante en los extractos de flavonoides, en
comparación al valor más elevado obtenido en este metabolito (EDSEA), lo cual puede ser
debido a un mayor contenido de flavonoides unidos a azúcares (glicósidos o heterósidos;
hesperidina, naringina, rutina, quercitrina y antocianinas) en el extracto, los cuales a diferencia
de los flavonoides que carecen de este grupo (agliconas o geninas; flavonona, flavona, flavonol,
isoflavonoide, aurona y antocianidina), son altamente hidrosolubles (Lou et al., 2016 y Xiao,
2017).

Mientras que los extractos en los que se utilizó etanol como disolvente único presentó la menor
actividad antioxidante al disminuir 93% respecto al extracto secuencial, el cual mostró la mayor
actividad antioxidante, indicando que la presencia de etanol en la extracción afecta las
propiedades antioxidantes de los flavonoides, debido a que la baja polaridad del etanol en
comparación al agua (5.2 y 9, etanol y agua respectivamente) (Sharapin, 2010) posiblemente
logró extraer flavonoides menos polares (luteonina, hesperidina y naringina), los cuales a
diferencia de los flavonoides polares (isoquercitina, quercetrina, canferol y Orientina), presentan
menos grupos hidroxilo y por ende su actividad antioxidante disminuye (Kasote et al., 2015).

En comparación a otros Agaves, la actividad antioxidante de los flavonoides obtenidos en el

escapo de Agave salmiana es inferior a lo reportado para los extractos de hojas de Agave
americana, Agave duranguensis y Agave rzedowskiana en 66%, 52% y 48%, respectivamente
(Dif, 2017, Barriada-Bernal et al., 2014 y Ahumada-Santos et al., 2013), lo cual puede deberse
a que los flavonoides presentes en dichos Agaves, son de tipo geninas (carecen de uniones con
monosacáridos), los cuales tienen mayor actividad antioxidante con relación sus respectivos
heterósidos (flavonoides que presentan el grupo glúcido) (Oliveira et al., 2017), que de acuerdo
a los resultados en el presente trabajo están en mayor proporción en los extractos del escapo de

84
Agave salmiana. Mientras que, en comparación a los resultados obtenidos en otras especies de
planta, los extractos del escapo de Agave salmiana superan a lo reportado para los extractos de
Arisaema jacquemontii, Limnophila aromatica y Cyclocarya paliurus, con 46%, 61% y 35%
respectivamente (Baba et al., 2015, Do et al., 2014 y Xie et al., 2015) y permanece debajo de
los valores con respecto a extractos de frutas cítricas y de frutas de las plantas Zizyphus
mauritiana y Aristotelia chilensis hasta con 86%, debido a estos este tipo de fuentes vegetales
son consideradas de elevada actividad antioxidante por su elevado contenido de flavonoides con
relación a diversas especies vegetales (Koley et al., 2016, Genskowsky et al., 2016 y Zou et al.,
2016).

Los fenoles simples, fueron los compuestos pertenecientes a la familia de los compuestos
fenólicos, que presentaron menor actividad antioxidante, siendo las extracciones duales
(agua/etanol) las que presentaron mayor actividad antioxidante (1.41 ± 0.03 a 3.23 ± 0.02 g
extracto seco*g DPPH-1) seguido de las extracciones individuales y las extracciones
secuenciales, las cuales presentaron una disminución de 69% y 73% respectivamente, en
relación con la mayor actividad antioxidante obtenida. Lo cual indica que el uso de disolventes
absolutos elevada polaridad y de baja polaridad en secuencia, disminuyen la actividad
antioxidante de los fenoles simples extraídos, lo cual puede ser debido a la susceptibilidad de
estos compuestos a la interacción con los disolventes utilizados en cada caso, donde la presencia
de disolventes absolutos (etanol y agua) pueden provocar cambios de dimerización y
glicosilación (Beelders et al., 2014), mientras que la secuenciación de disolventes menos polares
(hexano, acetona y metanol) genera cambios estructurales de tipo oxido reducción, metilación
de grupos hidroxilos o del núcleo fenólico y metilación de grupos hidroxilos en posición orto,
que afectan las propiedades antioxidantes de los fenoles simples presentes en los extractos
(Dryhurst, 2015). Este comportamieto también se observo en los extractos hidroalcohólicos
(agua/etanol) de las plantas Zizyphus mauritiana, Baccharis dracunculifolia, Capparis spinosa
y Eugenia uniflora, donde la actividad antioxidante de los fenoles simples disminuyó hasta 41%
en los extractos que se utilizó los disolventes absolutos respectivos y hasta 73% en los que se
realizó extracciones secuenciales del metabolito (Koley et al., 2016, Veiga et al., 2017, Mansour
et al., 2016 y Garmus et al., 2014).

85
Los resultados obtenidos en los extractos de escapo de Agave salmiana son similares a lo
reportado para otros Agaves, como Agave lechuguilla y Agave americana en un intervalo de 1.5
a 9 g DDPH/g de extracto (Morales-Luckie et al., 2016 y Singh et al., 2018), bajos en
comparación a Agave sisalana (Santos et al., 2015) con hasta 26% y superiores con respecto a
los extractos de Agave duranguensis (Barriada-Bernal et al., 2014) en 15%. Esta variabilidad
de la actividad antioxidante dentro del mismo género Agave, puede deberse diversos factores
entre los cuales se incluyen, la sección de la planta analizada, localización geográfica, tipo de
extracción y disolvente utilizado, como se observo en la actividad antioxidante de las plantas
Merremia borneensis y Chenopodium murale, donde se presentó una diferencia de actividad
antioxidante de los extractos de los compuestos fenólicos simples de hasta 37% debido a los
disolventes empleados y a la tierra de cultivo en la que se desarrollaron las plantas (Hossain et
al., 2015 y Abdel-Aziz et al., 2014).

Respecto a otro tipo de plantas, la actividad antioxidante de los extractos de Agave salmiana
supera la actividad antioxidante de una gran variedad de especies (Semecarpus anacardium,
Humulus lupulus, Curcuma longa Linn, Styrax spp., Apium graveolens L., Calamus scipionum
y Raphanus sativus L.) con hasta 18% (Daniel, 2016 y Asif, 2015), es similar a lo reportado
para algunos cereales (sorgo, trigo y cebada; Sorghum bicolor, Triticum aestivum y Hordeum
vulgare respectivamente) (Masisi et al., 2016) y menor a las frutas tropicales como aguacate,
piña, plátano, papaya, maracuyá, sandía y melón (Persea americana, Ananas comosus, Musa
paradisiaca, Carica papaya, Passiflora edulis, Citrullus lanatus y Cucumis melo) con 31%,
94%, 71%, 45%, 55%, 37% y 42% respectivamente (Morais et al., 2015).

El siguiente grupo de compuestos fenólicos, los taninos, al igual que los metabolitos que
pertenecen a dicho grupo, el proceso de extracción y disolvente utilizado fueron factores
determinantes en la actividad antioxidante de los extractos, mostrando una tendencia en el que
la presencia de varios disolventes en la extracción produce un aumento en la actividad
antioxidante en los extractos, como sigue, extracción secuencial > extracción dual 40/60 >
extracción dual 50/50 > extracción dual 60/40 > extracto etanólico absoluto, indicando que los
disolventes utilizados en los procesos extractivos en forma secuencial favorecen la actividad
antioxidante en los taninos, lo cual puede ser debido a que, estos metabolitos al pertenecer al
grupo de compuestos fenólicos y compartir estructuras como anillos de benceno y grupos

86
hidroxilados (Pękal et al., 2014), también presentan cambios conformacionales al interactuar
con disolventes menos polares en alguna de las etapas secuenciales de la extracción donde se
presenta una aumento en la actividad antioxidante al generarse compuestos más oxidados que
presentan mayor actividad antioxidante a los compuestos originales (Nimse et al., 2015).

En cuanto al efecto producido por el disolvente, los resultados indican que el contenido de agua
en la extracción es inversamente proporcional a la actividad antioxidante en los extractos de
taninos, siendo los extractos en los que se utilizó agua como primer disolvente o disolvente
mayoritario los que presentaron menor actividad antioxidante con una disminución hasta 90%,
respecto al valor más elevado en la determinación, indicando que los disolventes polares afectan
la actividad antioxidante de estos metabolitos, debido a que los taninos en presencia de agua o
etanol pueden sufrir cambios conformacionales en el número y posición de los grupos hidroxilo
además de mecanismos de glicosilación, relacionada a la extracción de monosacáridos de
polaridad similar al disolvente, lo cual disminuyó la actividad antioxidante en los taninos
(Yokozawa et al., 1998). Este comportamiento también se observo en los extractos de las plantas
Eugenia caryophyllus, Coriandrum sativum L. y Limnophila aromatica, donde la actividad
antioxidante disminuyó respecto al aumento de la polaridad del medio extractivo (Hemalatha et
al., 2016, Msaada et al., 2017 y Do et al., 2014).

Mientras que los extractos secuenciales en los que se utilizaron disolventes menor polares
(hexano, acetona y metanol), presentaron mayor actividad antioxidante, lo cual puede ser debido
a la presencia de taninos condensados, los cuales, a diferencia de los taninos hidrolizables, son
fácilmente extraídos en medios menos polares (Mohammed et al., 2014).

En comparación a otros Agaves, la actividad antioxidante de los taninos del escapo de Agave
salmiana, es inferior a lo reportado para Agave impressa y Agave ornithobroma con hasta 37%
(Ahumada-Santos et al., 2013), lo cual puede ser debido a que los disolventes polares utilizados
en las extracciones de dichos Agaves favorecieron la obtención de taninos hidrolizables que a
diferencia de los taninos condensados presentes en el escapo de Agave salmiana, son fácilmente
extraídos por disolventes polares y presentan mayor actividad antioxidante (Muhacir-Güzel et
al., 2014).

Por otro lado, la actividad antioxidante de los taninos de extractos del escapo de Agave salmiana
en comparación a otras especies vegetales es inferior a lo reportado para extractos de las plantas

87
Limonium delicatulum, Datura metel, Psychotria carthagenensis y Strychnos minor, con 48%,
51%, 42% y 69% respectivamente (Medini et al., 2014, Alabri et al., 2014, Formagio et al.,
2014 y John et al., 2015), superior a extractos de cereales de sorgo (Sorghum bicolor) y mijo
(Panicum miliaceum), con hasta 38% (Rao et al., 2018 y Shahidi et al., 2015) e inferior con
relación a extractos de las frutas de las plantas Coriandrum sativum L., Ficus carica y
Lepisanthes amoena, con 76%, 65% y 82% respectivamente (Msaada et al,. 2017, Harzallah et
al., 2016 y Salusu et al., 2017).

En cuanto a los compuestos que contienen nitrógeno en su estructura (alcaloides y proteínas)

los resultados de actividad antioxidante indican que este grupo presentó los valores más bajos
con una disminución de hasta 98%, en comparación a lo reportado para los compuestos con
mayor actividad antioxidante (flavonoides), siendo las proteínas los compuestos que mostraron
menor actividad antioxidante respecto a los alcaloides en 88%. Indicando que aparentemente la
presencia del nitrógeno en la estructura de las proteínas esta relacionada con la disminución de
la actividad antioxidante en los extractos respectivos. Lo cual puede deberse a que la efectividad
de la actividad antioxidante de las proteínas se basa principalmente al sinergismo con otros
compuestos antioxidantes, bajo mecanismos de atrapamiento de las trazas metálicas que
catalizan la oxidación, reacción con compuestos prooxidantes o regeneración de antioxidantes
que ya habían sido oxidados (Nicklisch et al., 2014), por ello la actividad antioxidante de estos
metabolitos se ve disminuida al analizarlas de manera individual hasta 27% en comparación a
los extractos en los que se encuentra combinado con otros metabolitos (ESC).

Por otro lado los resultados obtenidos en los extractos de proteína, a diferencia de los demás
metabolitos analizados (fenoles, flavonoides y taninos) no presentaron un comportamiento que
indicara relación entre el tipo de extracción o disolvente empleado y las propiedades
antioxidantes del metabolito, aparentemente debido a interacciones inespecíficas (iónicas e
hidrófobas) del grupo nitrogenado de las proteínas con los disolventes utilizados (Ma et al.,
2015), lo cual se corrobora en el aumento de la actividad antioxidante en el extracto que no se
utilizo disolvente para la extracción (EC). Este mismo efecto se observo en los extractos
peptídicos de las plantas Emblica officinalis L., Curcuma longa L. y Leucas linifolia, donde la
actividad antioxidante fue similar entre extractos en lo que se utilizo diferentes disolventes

88
(etanol, metanol y acetona) y mayor hasta 27% en los extractos crudos (Scartezzini et al., 2000
y Ramakrishna et al., 2012).

En el género Agave existe muy poca información acerca de las propiedades antioxidantes de las
proteínas presentes en la planta, lo cual podría ser debido a que estos realizan como función
principal procesos metabólicos formando parte del conjunto enzimático de la planta
(sacarosa:sacarosa fructosil-transferasa, 1,2-β- fructano 1-fructosiltransferasa, aminopeptidasas
y las metalotioneínas) (Bhatia et al., 1955, Du et al., 1978, Díaz-Tenorioa et al., 2015, González-
Cruz et al., 2012, Srinivasan et al., 1953) además de realizar funciones estructurales y de aporte
energético (Jones et al., 2006). Sin embargo, se ha reportado que estos metabolitos al tener un
mayor contenido de grupos nitrogenados en comparación a otros compuestos bioactivos son
reconocidos por otras propiedades bioactivas como inmunomodulatorios, antimicrobianos y
antihipertensivos (Sanjukta et al., 2016).

En otras plantas, la actividad antioxidante esta limitada a metabolitos nitrogenados de bajo peso
molecular como péptidos (500 a 1800 Da) o aminoácidos (70-200 Da), que tienen grupos
azufrados (metionina y cisteína), aromáticos (triptófano, tirosina y fenilananina) o anillo
imidazol (histidina) en el primer caso y secuencias específicas de aminoácidos (valina o leucina
en el amino terminal o prolina, histidina, tirosina, triptófano, metionina y cisteína en sus
secuencias) en el segundo caso (e Silva et al., 2017).

En comparación a lo reportado para el escapo de Agave salmiana, los extractos proteínicos de

las plantas Amaranthus hypochondriacus y Spirulina platensis, superan la actividad
antioxidante en 58% y 37% respectivamente (Delgado et al., 2015 y Yu et al., 2016), al igual
que los extractos de las leguminosas como el garbanzo (Cicer arietinum) o caupí (Vigna
unguiculata) con hasta 69% (Marques et al., 2015 y Torres-Fuentes et al., 2015), mientras que
los extractos peptídicos de la papa (Solanum tuberosum) y el arroz (Oryza sativa) presentan
18% menos actividad antioxidante con relación a lo reportado en el presente trabajo (Zou et al.,
2016 y Wattanasiritham et al., 2016).

Por su parte, los alcaloides, a diferencia de las proteínas, sí presentaron una relación entre la
actividad antioxidante de los extractos en función al tipo de extracción y disolvente utilizado,
donde se observó aumento en la actividad antioxidante de los extractos al utilizar varios
disolventes en la extracción, siendo la extracción secuencial la que mostró la mayor actividad

89
antioxidante, seguido las extracciones duales agua/etanol y extracción acuosa individual, con
una disminución de 82% y 84% respectivamente, indicando que el uso subsecuente de
disolventes en la extracción aumenta las propiedades antioxidantes en los alcaloides, debido
posiblemente a que, además de la obtención de alcaloides el uso de disolventes con un amplio
rango de polaridades (0-9, hexano-agua respectivamente) en la extracción favoreció la
formación de compuestos tipo pseudoacaloides los cuales a diferencia de los alcaloides
verdaderos (biosintetizado a partir de un aminoácido), se obtienen por transferencia de un grupo
nitrógeno a un compuesto de origen terpénico, esteroide, monosacárido o a un ácido graso, los
cuales pudieron extraerse en conjunto con los alcaloides por afinidad a alguna de las polaridades
de los disolventes utilizados, que finalmente en conjunto tanto los alcaloides verdaderos y los
pseudoalcaloides ejercieron un efecto sinérgico y aumentaron la actividad antioxidante en este
extracto. Este comportamiento también se observó en los extractos secuenciales de alcaloides
de las hojas de las plantas Piper nigrum L. y Fumaria capreolata, que presentaron mayor
actividad antioxidante que los extractos en los que se utilizó los disolventes absolutos (Sruthi et
al., 2017 y Contreras et al., 2017).

Por otra parte, el efecto producido por el tipo de disolvente utilizado, presentó un efecto donde
se observo un incremento en la actividad antioxidante en los extractos en los que se utilizó
disolventes menos polares, (ESC), mientras que los extractos duales (60/40, 50/50 y 40/60,
agua/etanol) e individual acuoso disminuyeron su actividad antioxidante hasta 84%, respecto
con el extracto secuencial, lo cual indica que polaridades elevadas en el medio extractivo afecta
significativamente la actividad antioxidante de estos metabolitos. Lo cual puede ser debido a
posibles enlaces no covalentes como puentes de hidrógeno o interacciones hidrofóbicas de los
disolventes polares con el grupo nitrogenado de estos metabolitos, ejerciendo impedimento
estérico del compuesto con los radicales oxidantes en las determinaciones de actividad
antioxidante (DPPH, ABTS y FRAP), que provocaron la disminución de dicha propiedad
(Sacconnay et al., 2015). Este mismo efecto se reportó en los extractos acuosos y etanólicos de
Musa paradisiaca y Vetiveria zizanioides Linn, los cuales presentaron hasta 76% menos
actividad antioxidante en comparación a los extractos en los que se utilizó disolventes menos
polares (acetona, acetato de etilo y hexano) (Maity et al., 2016, Muthukrishnan et al., 2018).

90
En el género Agave, la actividad antioxidante de los alcaloides es superior a lo obtenido en el
presente trabajo, en las especies Agave americana, Agave cupreata y Agave attenuata, con 36%,
68% y 19%, respectivamente, mientras que los extractos de hojas del Agave sisalana, la
actividad antioxidante es inferior en 13% (Singh et al., 2018, Salazar-Pineda et al., 2017,
Hossain et al., 2014 y Jajere et al., 2016). Aparentemente al igual que en otros metabolitos
(fenoles, flavonoides y taninos) esta variabilidad en el mismo género puede ser debido a factores
como, sección de la planta analizada, localización geográfica de la planta, tipo de extracción y
disolvente empleado que favorecen la obtención de cierto tipo de alcaloides, lo cuales en función
a estos factores presentan diversas estructuras con afinidad a un amplio intervalo de polaridades.

En comparación a otras especies de planta, la actividad antioxidante de los alcaloides es similar

entre las plantas Peltophorum africanum, Zanthoxylum capense y Clausena anisata
consideradas con baja actividad antioxidante en un intervalo de 2 a 15 g extracto seco*gDPPH-
1
bajo la técnica de DPPH (Adebayo et al., 2015), inferior a los reportado para frutas como
carambola (Averrhoa carambola L.) marolo (fruta de Brasil, Annona crassiflora) y el fruto
cítrico de Nitraria tangutorum, en 57%, 72% y 48% respectivamente (Yang et al., 2015, Pereira
M. et al., 2017 y Zhao et al., 2017) y superior a algunos vegetales y cereales como calabaza
(Lagenaria siceraria), pepino (Cucumis sativus), sorgo (Sorghum bicolor) y trigo (Triticum
aestivum), con hasta 23% (Yadav et al., 2016 y Nayak et al., 2015).

Por su parte, las saponinas presentaron una disminución de actividad antioxidante de 90%, con
relación al compuesto de mayor actividad antioxidante (flavonoides), representado el cuarto
grupo de compuestos bioactivos con mayor actividad antioxidante dentro de los metabolitos
analizados (Tabla 1.19).

En los resultados obtenidos en los extractos de saponinas al igual que los demás metabolitos
analizados, el tipo de extracción y disolvente utilizado permanecieron como factores
determinantes en los resultados de actividad antioxidante, siendo los extractos individuales los
que presentaron la mayor actividad antioxidante, mientras que los extractos secuenciales,
seguido de los extractos duales mostraron los valores más bajos con una disminución de 61% y
53% respectivamente, en comparación al extracto con el valor más elevado en esta
determinación. Indicando que el utilizar dos o más disolventes en la extracción disminuye la
actividad antioxidante en las saponinas, lo cual puede ser debido a posibles cambios

91
estructurales de tipo metilación o glicosilación en el grupo que ejerce mayormente la actividad
antioxidante en este metabolito (aglicona que podría ser un esteroide o terpeno) (Weng et al.,
2014), en alguna de las etapas secuenciales de la extracción. Este mismo efecto se observo en
los extractos secuenciales de las plantas Aralia taibaiensis y Bituminaria bituminosa, las cuales
mostraron una disminución de 49% y 31% respectivamente, en comparación a los extractos en
los que no se utilizó una secuenciación de disolventes (Weng et al., 2014 y Llorent-Martínez et
al., 2015).

En cuanto al efecto producido por el disolvente, se observó que el uso de disolventes en la

extracción disminuyó la actividad antioxidante en las saponinas, siendo el extracto crudo el que
presento un aumento hasta de 61% en la actividad antioxidante con relación a los extractos en
los que se utilizó disolvente en la extracción. Debido posiblemente a que en el extracto crudo al
no utilizar disolvente extractor que favorezca la obtención de un solo tipo saponina, se tiene la
presencia de ambos tipos, tanto la esteroidal como la triterpénica, las cuales presentan actividad
antioxidante de manera individual y en conjunto podrían haber ejercido un efecto sinérgico que
favoreció sus propiedades antioxidantes. Este comportamiento se reporto también en los
extractos crudos de las hojas de Agave salmiana y Agave atrovirens, donde las saponinas
presentaron un aumento en la actividad antioxidante hasta de 53%, en comparación a los
extractos en los que se utilizó disolvente (Leal-Díaz et al., 2016 y Olvera-Garcia et al., 2017).

También se observó que en los extractos en los que se utilizó disolventes, la actividad
antioxidante de las saponinas aumentó 50% en medios polares (agua y etanol) y disminuyó 55%
en los extractos en los que se utilizó disolventes menos polares (hexano, acetona y metanol),
ambos respecto al valor más elevado de las extracciones con disolventes. Indicando que el uso
de disolventes de diferente polaridad favorece la extracción de cierto tipo de saponinas, que en
función a su grupo aglicona (tepreno o esteroide) presentan mayor o menor actividad
antioxidante, siendo los extractos acuosos los que mostraron una mayor actividad antioxidante
respecto a los extractos en los que se utilizó disolventes menos polares, al extraer
favorablemente las saponinas tipo triterpenoide que a diferencia de los tipo esteroidal, son de
naturaleza polar y presentan mayor actividad antioxidante (Junior et al., 2016).

La actividad antioxidante de las saponinas del escapo floral de Agave salmiana es 12%, 8% y
17% menor a lo reportado para los extractos de hojas de Agave salmiana, Agave lechuguilla y

92
Agave americana (Puente-Garza et al., 2018, Carmona et al., 2017 y Singh et al., 2018). Estas
diferencias mínimas entre los Agaves podrían deberse a que posiblemente estas plantas
comparten un contenido similar de saponinas tipo esteroidal al encontrado en el escapo de Agave
salmiana.

En comparación a lo reportado para el escapo de Agave salmiana, los extractos de las plantas
Atriplex laciniata L., Solanum anguivi y Polygonum hydropiper L., se encuentran por debajo de
la actividad antioxidante de saponinas con 36%, 51% y 79% respectivamente (Kamal et al.,
2015, Elekofehinti, 2015 y Ayaz et al., 2014). Mientras que al compararlo con extractos de
algunos frutos de las plantas Averrhoa carambola L. y Argania spinosa, el valor es mayor con
un 16% y 9% a los reportado en el presente trabajo (Khanam, Z. y Sam, K. et al., 2015 y
Khallouki et al., 2017).

93
 Tabla 1.19 Determinación de actividad antioxidante de compuestos bioactivos de extractos de escapo floral de Agave salmiana
Compuestos bioactivos
Fenólicos Grupos con Nitrógeno Saponinas
Fenoles simples Flavonoides Taninos Alcaloides Proteínas Terpenos y otros
Actividad antioxidante
Extracto CE50 (g extracto seco*g DPPH-1)
EC 4.68b,B ± 0.06 2.07d,C ± 0.07 3.66c,D ± 0.04 n.d 9.67a,H ± 0.02 1.43e,F ± 0.04
EA 3.80d,D ± 0.10 0.94f,D ± 0.04 6.03c,A ± 0.09 10.32b,A ± 0.05 11.30a,E ± 0.04 1.66e,E ± 0.03
EE 4.03b,C ± 0.06 3.43d,A ± 0.04 3.89c,C ± 0.04 n.d 14.19a,A ± 0.03 n.d
ED60/40 1.41e,G ± 0.03 0.53f,E ± 0.04 3.51c,E ± 0.04 9.00b,B ± 0.03 11.02a,F ± 0.02 1.73d,D ± 0.04
ED50/50 2.13e,F ± 0.04 0.42f,F ± 0.04 2.74d,F ± 0.06 5.19b,C ± 0.07 10.09a,G ± 0.04 2.98e,C ± 0.04
ED40/60 3.23b,E ± 0.02 2.24c,B ± 0.05 1.67d,G ± 0.05 3.38b,D ± 0.05 12.33a,C ± 0.03 n.d
EDSEA 3.77c,D ± 0.03 0.22e,G ± 0.02 5.50b,B ± 0.04 n.d 12.62a,B ± 0.04 3.34d,B± 0.03
ESC 5.24b,A ± 0.06 0.23f,G ± 0.03 0.57e,H ± 0.04 1.60d,E ± 0.0 12.02a,D ± 0.04 3.70c,A ± 0.03
*Tomado del extracto total. Prueba de Tukey. n.d-compuesto bioactivo no detectado.
Los valores se expresan como la media ± D.S del triplicado de los análisis.
Valores con diferente letra mayúscula en la misma columna y diferente letra minúscula en la misma fila son significativamente diferentes a un p=0.05
EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol (50/50),
ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-extracto secuencial combinado.
94
Continuación de tabla 1.19
Compuestos bioactivos
Fenólicos Grupos con N Saponinas
Fenoles simples Flavonoides Taninos Alcaloides Proteínas Terpenos y otros
Actividad antioxidante
Extracto FRAP (µmol TE*g de extracto-1)
EC 880.89c,G ± 1.69 1121.95b,E ± 1.41 975.66d,E ± 2.00 n.d 530.71e,A ± 1.31 1181.38a,A ± 1.41
EA 962.10c,E ± 1.32 1226.33a,D ± 1.26 757.14d,H ± 1.18 362.53f,E ± 1.69 493.50e,D ± 1.18 1159.68b,B ± 1.77
EE 941.31c,F ± 1.69 997.66a,G ± 2.12 955.64b,F ± 1.57 n.d 425.82d,H ± 1.34 n.d
ED60/40 1180.69b,A ± 1.99 1264.73a,C ± 1.57 990.59d,D ± 1.77 484.73f,D ± 1.57 500.69e,C ± 1.77 1153.01c,B ± 1.32
ED50/50 1117.45b,B ± 1.57 1273.21a,B ± 2.73 1059.88c,C ± 2.23 835.64e,C ± 1.57 521.29f,B ± 1.09 1038.79d,C ± 1.31
ED40/60 1016.23c,C ± 3.34 1105.33b,F ± 2.57 1158.67a,B ± 1.29 1001.70d,B ± 2.23 468.77e,F ± 1.21 n.d
EDSEA 965.54c,D ± 2.06 1291.60a,A± 1.52 804.32d,G ± 1.21 n.d 463.52e,G ± 1.29 1004.73b,D ± 1.57
ESC 829.58e,H ± 1.29 1292.61a,A ± 1.29 1261.90b,A ± 2.25 1166.34c,A ± 2.79 477.45f,E ± 1.29 972.40d,E ± 1.77
*Tomado del extracto total. Prueba de Tukey. n.d-compuesto bioactivo no detectado.
Los valores se expresan como la media ± D.S del triplicado de los análisis.
Valores con diferente letra mayúscula en la misma columna y diferente letra minúscula en la misma fila son significativamente diferentes a un p=0.05
EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol (50/50),
ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-extracto secuencial combinado.
95
Continuación de tabla 1.19
Compuestos bioactivos
Fenólicos Grupos con N Saponinas
Fenoles simples Flavonoides Taninos Alcaloides Proteínas Terpenos y otros
Actividad antioxidante
Extracto ABTS (µmol TE*g extracto seco-1)
EC 659.83d,G ± 1.24 839.85b,E ± 1.44 729.98c,E ± 0.67 n.d 398.89e,A ± 1.34 883.18a,A ± 1.02
EA 720.21c,E ± 1.06 917.97a,D ± 1.18 566.90d,H ± 1.13 271.84f,E ± 0.84 370.61e,D ± 1.52 867.58b,B ± 1.34
EE 704.39c,F ± 0.89 747.04a,G ± 1.34 714.71b,F ± 1.52 n.d 318.98d,H ± 1.28 n.d
ED60/40 883.51b,A ± 1.50 947.26a,C ± 0.79 740.42d,D ± 1.38 363.98f,D ± 0.89 375.54e,C ± 1.92 862.41c,C ± 0.94
ED50/50 835.70b,B ± 1.25 952.87a,B ± 1.14 793.95c,C ± 1.06 625.60e,C ± 1.14 389.24f,B ± 1.14 778.24d,D ± 1.14
ED40/60 760.06c,C ± 1.61 826.27b,F ± 0.79 865.89a,B ± 1.01 749.06d,B ± 0.71 350.97e,F ± 1.35 n.d
EDSEA 723.58c,D ± 1.25 967.91a,A ± 1.24 602.03d,G ±2.50 n.d 347.49e,G ± 1.18 751.19b,E ± 0.98
ESC 620.33e,H ± 1.81 967.13a,A ± 1.83 943.33b,A ± 1.52 871.50c,A ± 0.94 357.47f,E ± 2.14 728.86d,F ± 1.34
*Tomado del extracto total. Prueba de Tukey. n.d-compuesto bioactivo no detectado.
Los valores se expresan como la media ± D.S del triplicado de los análisis.
Valores con diferente letra mayúscula en la misma columna y diferente letra minúscula en la misma fila son significativamente diferentes a un p=0.05
EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol (50/50),
ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-extracto secuencial combinado.
96
3.6 Efecto de los disolventes y método de extracción sobre la actividad antimicrobiana
en los extractos

Los resultados indican que solo el 38% de los extractos analizados presentan actividad
antimicrobiana contra uno de los microorganismos patógenos utilizados para el análisis. Siendo
las extracciones individuales con agua y etanol (EIA y EIE) los que mostraron actividad contra
Escherichia coli, mientras que el extracto crudo (EC) mostró actividad contra Shigella sonnei
(Tabla 1.20), lo que indica que los disolventes polares y la extracción individual son las
condiciones más adecuadas para la obtención de los compuestos antimicrobianos presentes en
el escapo floral de Agave salmiana.

En este análisis resultó evidente un efecto producido por el tipo de proceso de extracción, debido
a que se observan cambios significativos entre los extractos obtenidos con el mismo disolvente
bajo procedimientos extractivos distintos (Tabla 1.20). Por ejemplo, tanto los extractos EIA
como EIE presentan inhibición contra el mismo microorganismo, sin embargo, los extractos
obtenidos por combinación de agua/etanol (ED60/40, ED50/50 y ED40/60) no mostraron efecto
sobre algún microorganismo. Este comportamiento podría deberse a la contribución de los
compuestos presentes en los extractos agua/etanol, siendo los taninos y los alcaloides los
metabolitos que presentaron un aumento en 98% y 99% respectivamente, con relación a los
extractos individuales (EIA y EIE), presentando aparentemente un efecto antagónico sobre los
demás compuestos presentes en el extracto (fenoles, flavonoides y saponinas) (Tabla 1.17). Este
efecto es semejante al reportado para los extractos hidroalcohólicos (agua/etanol) de las plantas
Punica granatum L. y Apium graveolens, los cuales no presentaron inhibición contra
Escherichia coli en comparación a sus extractos absolutos respectivos (Pagliarulo et al., 2016 y
Sarshar et al., 2018).

Por otra parte, los extractos que fueron obtenidos utilizando métodos secuenciales, ya sea dual
o de polaridad creciente, no presentaron actividad antimicrobiana, lo cual podría ser indicio que
existe un efecto antagónico entre los disolventes, esto concuerda con lo observado en la
contribución de los metabolitos presentes en estos extractos, donde los flavonoides, taninos,
alcaloides y saponinas presentan un aumento de 73%, 95%, 94%, y 52% respectivamente a los
extractos individuales (EIA y EIE) (Tabla 1.17), los cuales de manera similar que en los
extractos hidroalcohólicos (agua/etanol) posiblemente ejercieron un efecto antagónico en la

97
actividad antimicrobiana del extracto. Este comportamiento también se reportó en los extractos
de las plantas of Paganum harmala, Embothrium coccineum y Piper nigrum L., donde el
proceso secuencial de extracción disminuyó las propiedades antimicrobianas de los extractos
respecto al proceso en los que se utilizó los disolventes de forma indiviudal (Afzal et al., 2014,
Leyton et al., 2015 y Sruthi et al., 2017).

Es importante mencionar que los resultados obtenidos no tienen correlación con los compuestos
antioxidantes presentes en el escapo, lo cual concuerda con lo reportado en los extractos de las
hojas de las plantas Arisaema jacquemontii, Atrocarpus altilis, Chenopodium murale y Myrtus
communis L., debido posiblemente al tipo y contenido de compuestos bioactivos presentes en
los extractos de las plantas, los cuales pueden ejercer un efecto antagónico o sinérgico en función
a la contribución que presenten en la planta, donde un mayor contenido de compuestos fenólicos
(fenoles simples, flavonoide y taninos) y alcaloides, favorecen la efectividad de las propiedades
antioxidantes y antimicrobianas en plantas (Baba et al., 2015, Ravichandran et al,. 2016, Abdel-
Aziz et al., 2014 y Aleksic et al., 2014).

Respecto a otros Agaves, los resultados del escapo de Agave salmiana no presentaron inhibición
contra Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus y Listeria monocytogenes en
comparación a lo reportado para Agave sisalana, Agave americana y Agave lechuguilla (Ade-
Ajayi et al., 2011, Vega-Menchaca et al., 2013 y Verástegui et al., 2008) respectivamente,
debido posiblemente a un efecto antagónico de alguno de los compuestos presentes en el escapo
de Agave salmiana, siendo los compuestos fenólicos (fenoles simples, flavonoides y taninos)
los metabolitos que minimizan las propiedades antimicrobianas de los alcaloides y saponinas al
presentar una mayor contribución de hasta 99%, 95% y 97% respectivamente, cuando los
alcaloides y las saponinas son los metabolitos que presentan mayor actividad antimicrobiana
respecto a los fenoles por la presencia de estructuras nitrogenadas y grupos monosacáridos
respectivamente, que a diferencia de los grupos hidroxilo de los fenoles, ejercen mayor espectro
de acción contra bacterias gram positivas (Staphylococcus aureus y Listeria monocytogenes) y
bacterias gram negativas (Staphylococcus aureus) (Karou et al, 2006).

En comparación a otras especies vegetales, la actividad antimicrobiana de los extractos de Agave

salmiana es similar a lo reportado para Withania somnifera y Melissa officinalis L., donde el
tipo de extracción utilizada semeja las condiciones realizadas en el presente trabajo (Mehrotra

98
et al., 2017 y Skotti et al., 2014), mientras que en comparación a especies como Thymus
vulgaris, Amomum kerervanh, Origanum syriacum L. y Syzygium aromaticum L. el espectro de
acción es inferior, debido posiblemente al tipo de compuestos presentes en estas plantas, siendo
en mayoría aceites esenciales extraídos de las flores y semillas, los cuales presentan un mayor
especetro de acción al inhibir bacterias y hongos bajo mecanismos relacionados en la interacción
con las proteínas de la membrana del microrganismo provocando inestabilidad en la estructura
y lisando la célula (Akthar et al., 2014 y Al-Mariri et al., 2014).

Tabla 1.20 Determinación de la actividad antimicrobiana de los extractos del escapo floral de Agave salmiana
Microorganismos
Extracto Escherichia Salmonella Shigella Staphylococcus Listeria
coli typhimurium sonnei aureus monocytogenes
EC - - + - -
EIA + - - - -
EIE + - - - -
ED60/40 - - - - -
ED50/50 - - - - -
ED40/60 - - - - -
EDSEA - - - - -
ESC - - - - -
+, indica que la muestra generó inhibición y –, indica que la muestra no generó inhibición contra los microorganismos en
cuestión. Los valores se expresan como la media del triplicado de los análisis. EC-extracto crudo, EIA-extracto individual
acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol
(50/50), ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-
extracto secuencial combinado.

3.7 Concentración mínima inhibitoria (CMI) de los extractos

En los resultados se observó un efecto producido por el tipo de extracción y disolventes

utilizados (Tabla 1.21), donde los extractos obtenidos por extracción individual además del
extracto crudo, fueron los que presentaron inhibición, mientras que los procesos duales y
secuenciales anularon la actividad antimicrobiana del extracto, indicando que estos
procedimientos de extracción afectan la actividad antimicrobiana del extracto, lo cual puede ser
debido a posibles cambios estructurales en los compuestos, producidos por reacciones de óxido-
reducción, metilación o glicosilación al interactuar con los disolventes durante el proceso, que
modifica la interacción con el microorganismo en cuestión así como a efectos antagónicos donde
una mayor contribución de algunos de los compuestos presentes en el extracto minimizan y en
este caso anulan la propiedades antimicrobianas de los compuestos presentes en menor cantidad.

99
Este comportamiento también se observó en el extracto acuoso de la planta Zingiber officinale
y extracto etanólico de la planta Psidium guajava, donde al utilizar en cada caso un proceso de
extracción combinado de disolventes (agua/etanol) impidió la inhibición contra Salmonella
typhi y Acinetobacter baumannii respectivamente (Valle et al., 2015 y Ekwenye et al., 2005).

Por otro lado la concentración mínima inhibitoria (CMI) de los extractos obtenidos de la
extracción individual con agua o etanol, mostraron inhibir al mismo microorganismo
(Escherichia coli), sin embargo, al usar etanol como único disolvente, se requiere mayor
concentración del extracto para llevar a cabo la inhibición del microorganismo, indicando que
el etanol afecta la actividad antimicrobiana del extracto, debido a que este disolvente a diferencia
del agua no extrae alcaloides y saponinas, los cuales aparentemente en el extracto acuoso ejercen
un efecto sinérgico con los demás metabolitos presentes en el escapo (fenoles, flavonoides y
taninos) aumentando la actividad antimicrobiana en 34% con respecto al extracto etanólico y la
ausencia o menor contribución de alguno de estos metabolitos se vió reflejada en la disminución
de la actividad antimicrobiana en el extracto etanólico al requerir un mayor CMI del extracto
contra un mismo microorganismo, lo que sugiere que los alcaloides y saponinas son los
principales compuestos presentes en el escapo de Agave salmiana que favorecen las propiedades
antimicrobianas de los extractos acuosos al interactuar de manera sinérgica con otros
metabolitos. Mientras que el extracto crudo presentó inhibición contra Shigella sonnei con un
CMI similar al reportado para el extracto acuoso contra Escherichia coli (Tabla 1.21).

También se observó que las bacterias gram negativas (Shigella sonnei y Escherichia coli)
presentaron mayor sensibilidad ante los extractos analizados en comparación a las bacterias
gram positivas (Staphylococcus aureus y Listeria monocytogenes), siendo los extractos acuoso,
etanólico y crudo los que lograron inhibir a Escherichia coli y Shigella sonnei respectivamente,
indicando que estos microorganismos son sensibles a los compuestos extraídos por dichos
extractos, siendo los fenoles simples el grupo de compuestos que presenta la mayor contribución
con hasta 98%, con respecto a los demás metabolitos presentes en los extractos. De tal manera
puede decirse, que los fenoles simples son los metabolitos que ejercen principalmente la
actividad antimicrobiana contra las bacterias gram negativas en dichos extractos.

Por otra parte, es importante mencionar que, del grupo de las bacterias gram negativas
(Escherichia coli, Shigella sonnei y Salmonella typhimurium), Escherichia coli y Shigella

100
sonnei fueron los microrganismos que presentaron inhibición a los extractos analizados,
mientras que Salmonella typhimurium no fue inhibida por ningún extracto, lo cual puede ser
debido a que Escherichia coli y Shigella sonnei comparten una similitud en su ADN de hasta
75%, que las hacen vulnerables ante mecanismos de acción similares de los compuestos
presentes en dichos extractos, no siendo así en la bacteria Salmonela typhimurium que no
comparte esta característica (Hazen et al., 2016).

En comparación a otros Agaves, los resultados obtenidos en el escapo de Agave salmiana

presentan mayor actividad antimicrobiana contra Escherichia coli que lo reportado para los
extractos etanólicos de Agave lechuguilla y extracto acuoso de Agave sisalana con una
diferencia de hasta 25% y 47% respectivamente (Verástegui et al., 1996 y Santos et al., 2009),
indicando que el escapo de Agave salmiana es una fuente importante de compuestos
antimicrobianos entre el género Agave. Mientras que, en comparación a otras plantas, la
actividad antimicrobiana contra Shigella sonnei del presente trabajo es inferior a lo reportado
para los extractos crudos de las plantas Diospyros peregrina, Coccinia grandis y Swietenia
macrophylla, en 36%, 68% y 51% respectivamente (Dewanjee et al., 2007), observándose un
comportamiento similar en la inhibición de Escherichia coli, donde la cantidad de extracto
necesario para inhibir dicho microorganismo es menor en el extracto acuoso de la planta Punica
granatum y extracto etanólico de la planta Landolphia owerrience, en 66% y 74%
respectivamente, en comparación a lo reportado en el presente trabajo (Voravuthikunchai et al.,
2004 y Okeke et al.,2001), esta diferencia en la actividad antimicrobiana podría ser debido a
que dichas plantas presentan adicionalmente a los compuestos fenólicos, saponinas y alcaloides,
algunos aceites esenciales, terpenos y sulfóxidos, los cuales aparentemente ejercieron un efecto
sinérgico con los demás metabolitos presentes, provocando un aumento en la actividad
antimicrobiana en las plantas mencionadas, al requerir menor cantidad de extracto para inhibir
el microorganismo en cuestión en comparación a los extractos del escapo de Agave salmiana
(Knezevic et al., 2016).

De acuerdo a la clasificación de bacterias en función a su sensibilidad antimicrobiana reportada

por Cruz-Carillo et al. (2010), donde clasifica una cepa bacteriana como sensible cuando la
sustancia evaluada presenta una CMI inferior a 12.5 mg/ml, de mediana sensibilidad
antimicrobiana, entre 12.5 y 50 mg/mL y de baja sensibilidad antimicrobiana cuando la CMI

101
está entre 50 a 100 mg/mL, se tiene que Escherichia coli y Shigella sonnei presentan elevada
sensibilidad antimicrobiana por los extractos acuoso y crudo con un CMI de 10.42 ± 1.12
mg*mL-1 y 10.23 ± 1.36 mg*mL-1 respectivamente, mientras que el extracto etanólico mostró
un moderado espectro de acción al inhibir Escherichia coli con mayor CMI respecto al extracto
acuoso (Tabla 1.21).

Tabla 1.21 Determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) de los extractos del escapo floral de
Agave salmiana

Extracto Microorganismo CMI (mg*mL-1)

EC Shigella sonnei 10.23b ± 1.36
EIA Escherichia coli 10.42b ± 1.12
EIE Escherichia coli 15.63a ± 0.86
Los valores se expresan como la media ± D.S del triplicado de los análisis a un p=0.05
EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico,

3.8 Efecto de los disolventes y método de extracción sobre la actividad antimicrobiana

en los compuestos bioactivos

Los resultados obtenidos indican que no existe un efecto observable por el tipo de extracción o
disolvente utilizado sobre la sensibilidad antimicrobiana de los microorganismos analizados, sin
embargo se observó que los flavonoides inhibieron en mayor cantidad con hasta 64% en relación
con los extractos de fenoles simples, taninos, alcaloides, saponinas y proteínas, siendo los
extractos de saponinas los que presentaron menor espectro de acción inhibitorio, indicando que
los flavonoides independientemente del tipo de extracción o disolvente utilizado presentan un
mayor espectro de acción al inhibir diversas bacterias patógenas (Escherichia coli, Salmonella
typhimurium, Shigella sonnei y Listeria monocytogenes) (Tabla 1.22).

Este comportamiento en los flavonoides, se debe a que estos compuestos a diferencia de otros
metabolitos (fenoles simples, taninos, alcaloides, saponinas y proteínas), presentan una dualidad
en su conformación estructural que los hace eficaces contra una amplia gama de
microorganismos, siendo la presencia de grupos hidroxilo en el anillo B de la estructura del
metabolito, los que interaccionan fácilmente con los fosfolípidos y proteínas solubles de la
membrana plasmática de las bacterias gram negativas (Escherichia coli, Salmonella
typhimurium y Shigella sonnei), mientras que la presencia del grupo metoxilo, aumenta la
lipofilia (afinidad por grasas y lípidos de alta solubilidad) del compuesto, favoreciendo
interacciones con las proteínas presentes en la pared celular de las bacterias gram positivas

102
(Listeria monocytogenes) (Cushnie et al., 2005). Dicho efecto también se observo en los
extractos de la fruta de la planta Trigonosciadium brachytaenium, donde los flavonoides
presentaron inhibición contra 6 bacterias (Bacillus subtilis, Enterococcus faecalis,
Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, Pseudomonas
aeruginosa and Klebsiella pneumoniae) y contra tres hongos (Candida albicans,
Saccharomyces cerevisiae and Aspergillus niger), en comparación a los fenoles, alcaloides y
saponinas que lograron inhibir solo un microorganismo (Pseudomonas aeruginosa, Echerichia
coli y Bacillus subtiIis, respectivamente) (Akhavan et al., 2015, Kabesh et al., 2015 y Jasim et
al., 2015).

Por otro lado, se observó un aumento del 50% en el espectro de acción de los extractos de los
metabolitos en comparación a los extractos que contienen los metabolitos en forma conjunta
(EC, EIA y EIE), al inhibir las 4 bacterias de prueba, lo cual podría deberse a varios factores,
en los que se destaca un efecto de concentración de los compuestos bioactivos al analizarlos en
forma aislada que permite mayor espectro de acción inhibitorio de estos contra las bacterias
patógenas al interaccionar con mayor especificidad bajo mecanismos propios de cada metabolito
(Paz et al., 2015); y por otra parte a efectos antagónicos producidos en los extractos que tienen
el aglomerado de compuestos bioactivos, relacionado a una mayor contribución de alguno de
los compuestos bioactivos que minimiza las propiedades antimicrobianas de los compuestos que
presentan menor cantidad dentro del extracto en cuestión (Valle et al., 2015).

De las bacteria analizadas, Listeria monocytogenes presentó mayor sensibilidad antimicrobiana

ante los extractos analizados hasta en 31% en comparación a Escherichia coli, Salmonella
typhimurium y Shigella sonnei, lo cual podría deberse a que Listeria monocytogenes presenta
una estructura celular distinta al resto de las bacterias analizadas, la cual consiste en una capa
peptidoglicano con proteínas y polisacáridos expuestos en la parte externa que aparentemente
interactuaron con mayor facilidad con los metabolitos extraídos del escapo de Agave salmiana,
siendo el grupo de compuestos fenólicos (fenoles simples, flavonoides y taninos), los
metabolitos que mostraron mayor contribución y mayor espectro de acción inhibitorio con
respecto a las saponinas y alcaloides (Belhadj et al., 2016). De tal manera puede decirse que,
los compuestos fenólicos (fenoles simples, flavonoides y taninos) son el principal grupo de
metabolitos resposables de la actividad antimicrobiana tando de las bacterias gram positivas

103
como de las gram negativas analizadas (Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Shigella
sonnei y Listeria monocytogenes).

Hasta el momento el estudio de la actividad antimicrobiana del grupo de compuestos extraídos

en el género Agave es limitado al análisis por extracto en conjunto, sin embargo en comparación
a otras plantas se tiene que los compuestos fenólicos de los extractos de la planta Filipendula
ulmaria, Epilobium angustifolium L., Rubus chamaemorus L. y Rubus idaeus L. presentaron un
espectro de acción inhibitorio contra Escherichia coli, Shigella sonnei y Listeria monocytogenes
similar a lo reportado en el presente trabajo (Rauha et al., 2000); mientras que la actividad
antimicrobiana de las saponinas obtenidas a partir de las plantas Quillaja saponaria y Pulsatilla
chinensis, difieren de lo obtenido en el escapo de Agave salmiana al presentar mayor espectro
de acción (de hasta 45%) contra Escherichia coli, Shigella sonnei y Salmonella typhimurium
respectivamente (Sewlikar et al., 2017 y Fong et al., 2016), siendo los alcaloides extraídos de
las plantas Crinum angustum y Toddalia asiatica, los metabolitos que superaron lo reportado
para los alcaloides del escapo de Agave salmiana al exhibir mayor espectro de acción al inhibir
tanto bacterias (Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa,
Escherichia coli y Streptococcus mutans) como hongos (Candida albicans, Candida tropicalis)
(Iannello et al., 2014 y Hu et al., 2014). Esta variabilidad en los resultados podría ser debido a
un diferente contenido de compuestos bioactivos en los extractos, a diversas conformaciones de
los compuestos presentes en las plantas producidos por el tipo de extracción o disolvente
utilizado y a posibles efectos sinérgicos o antagónicos atribuidos a una mayor contribución de
alguno de los compuestos presentes en las especies vegetales mencionadas.

104
Tabla 1.22 Determinación de la actividad antimicrobiana de los compuestos bioactivos presentes en los extractos del escapo floral de Agave salmiana
Compuestos bioactivos
Flavonoides

Flavonoides

Flavonoides

Flavonoides
Alcaloides

Alcaloides

Alcaloides

Alcaloides
Saponinas

Saponinas

Saponinas

Saponinas
Proteínas

Proteínas

Proteínas

Proteínas
Taninos

Taninos

Taninos

Taninos
Fenoles

Fenoles

Fenoles

Fenoles
Microorganismos de prueba
Extracto Escherichia coli Salmonella typhimurium Shigella sonnei Listeria monocytogenes
EC - + + n.d - + - + - n.d - + - + + n.d - + + + + n.d - +
EA - - - + - + + + + + - - - - - + - - + + + + + -
EE + + - n.d n.d - + + + n.d n.d - + + + n.d n.d - + - + n.d n.d -
ED60/40 + + + + - - + + - + + - - + - + + + + + + + + +
ED50/50 + + - + - - + + - + - - + + + + + - - + + + - +
ED40/60 + + - + n.d - + + - + n.d + - - - + n.d + + + + + n.d -
EDSEA + + - n.d - - - + - n.d - + - - - n.d - + - + - n.d + +
ESC + - - + + + + - + - + + + + + + - + + + + + + -
+, indica que la muestra generó inhibición y – indica que la muestra no generó inhibición contra los microorganismos en cuestión. n.d-compuesto bioactivo no detectado.
Los valores se expresan como la media del triplicado de los análisis.
EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol (50/50),
ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-extracto secuencial combinado.
105
3.9 Concentración mínima inhibitoria (CMI) de los compuestos bioactivos
Los resultados obtenidos en la CMI de los compuestos bioactivos analizados (fenoles simples,
flavonoides, taninos, alcaloides, saponinas y proteínas) indican que no existe un efecto por el
tipo de extracción o disolvente utilizado sobre la actividad antimicrobiana de estos metabolitos,
sin embargo se observa que la sensibilidad antimicrobiana de los microorganismos probados es
influenciada por los mecanismos de acción inhibitorios específicos de cada tipo de compuesto
extraído. Siendo la posición y numéro de grupos OH presentes en los fenoles simples lo que
favoreció la inhibición de Salmonella typhimurium con 20.82 ± 1.59 mg*mL-1 (Nitiema et al.,
2012), Escherichia coli fue más sensible a los flavonoides con 30.69 ± 1.64 mg*mL-1 por la
presencia del grupo metoxilo que favorece las interacciones con las proteínas y polisacáridos
presentes en la pared celular de este tipo de bacterias (Cushnie et al., 2005), el grupo nitrogenado
característico de los alcaloides que interacciona con el ADN de las bacterias, favoreció la
inhibición de Shigella sonnei y Listeria monocytogenes con 2.17 ± 0.54 mg*mL-1 y 6.67 ± 0.35
mg*mL-1 respectivamente (Abdallah et al., 2018), y las proteínas presentaron menor la actividad
antimicrobiana, con los valores más elevados de CMI, con una disminución de hasta 96%, en
comparación a los compuestos que mostraron mayor actividad antimicrobiana
independientemente de microorganismo analizado, lo cual pudo ser debido a la inactivación de
este metabolito al ser sometido a elevadas temperaturas durante la extracción (Tabla 1.23).

Por otro lado Listeria monocytogenes presento los valores más bajos de CMI en un intervalo de
6.67 ± 0.35 y 62.68 ± 0.56 mg*mL-1 (Tabla 1.23), lo cual indica que este microorganismo
exhibe mayor sensibilidad antimicrobiana ante los extractos analizados en comparación a
Escherichia coli, Shigella sonnei y Salmonella typhimurium con una diferencia de hasta 87%.
Lo cual puede ser debido a que Listeria monocytogenes a diferencia de Escherichia coli,
Shigella sonnei y Salmonella typhimurium presenta una capa de peptidoglicano que le confiere
otras formas de interacción con los compuestos de prueba (Belhadj et al., 2016), siendo los
alcaloides y los flavonoides los compuestos que inhibieron con mayor eficacía a Listeria
monocytógenes al presentar los valores más bajos de CMI en comparación a los fenoles simples,
taninos, saponinas y proteínas con una diferencia hasta de 89%. Este comportamiento también
se observo en los extractos de la planta Sida acuta, Schima wallichii, Phlogocanthus thyrsiflorus

106
donde los alcaloides presentaron menor CMI contra Listeria monocytogenes en comparación a
los fenoles o saponinas (Karou et al., 2006 y Sarbadhikary et al., 2015).

También es importante mencionar que se observó un contraste en los resultados de actividad

antioxidante y actividad antimicrobiana de los compuestos analizados en función al tipo de
extracción o disolventes utilizados, los cuales fueron factores determinantes en la eficacia
antioxidante de los metabolitos extraídos e intransendentes en la actividad antimicrobiana de
dichos metabolitos. Lo cual puede ser debido a que dichos factores al provocar modificaciones
en la estructura del compuesto por cambios en la electronegatividad, cambios de óxido-
reducción y cambios conformacionales de tipo metilación o glicolización, afectan en mayor
grado las propiedades antioxidantes de los compuestos (Weng et al., 2014), mientras que las
propiedades antimcrobianas de los extractos se relacionan mayormente al tipo de estructura
celular del microorganismo en cuestión, en el cual se pueden presentar compuestos de diversa
estructura con base en la serología y virulencia bacteriana que influye en la sensibilidad
antimcrobiana ante cierto compuesto antibacteriano y en menor grado a la interacción de los
grupos bioactivos con los compuestos hidrofílicos (proteínas globulares, monosacáridos,
fosfolípidos) y lipofílicos (proteínas, lipoproteínas, esteroles) presentes en el entorno celular
(Chen et al., 2016 y Cushnie et al., 2005).

En el mismo contexto, también se observó que la actividad antioxidante y actividad

antimicrobiana de los extractos analizados es influída por la disponibilidad de los compuestos
bioactivos, siendo EC, EIA y EIE donde los compuestos se encuentran en conjunto, los extractos
que mostraron menor actividad antioxidante con una disminución de hasta 97% y mayor
actividad antimicrobiana contra Escherichia coli con hasta 66%, en comparación a los extractos
de los metabolitos, debido posiblemente a efectos antagónicos y sinérgicos respectivamente,
relacionado en ambos casos a una mayor contribución de los compuestos fenólicos (fenoles
simples, flavonoides y taninos) de hasta 99%, 95% y 97% respectivamente en comparación los
alcaloides y saponinas; mientras en comparación a los extractos EC, EIA y EIE, los extractos
de fenoles simples, flavonoides, taninos, alcaloides, proteínas y saponinas presentaron mayor
espectro de acción al inhibir las 4 bacterias de prueba Escherichia coli, Salmonella typhimurium,
Shigella sonnei y Listeria monocytogenes, sin embargo los valores de CMI de los metabolitos
fueron menores con una disminución de hasta 83%, debido posiblemente a una compensación

107
de estos metabolitos al efecto sinérgico producido por el algomerado de compuestos en los
extractos EC, EIA y EIE, viéndose aumentada la cantidad de extracto necesario para inhibir el
microorganismo en cuestión (Baba et al., 2015), solo a excepción de los alcaloides, los cuales
presentaron una disminución en la CMI de hasta 78% y 21% contra Shigella sonnei y Listeria
monocytogenes respectivamente, indicando que estos últimos metabolitos aumentan su
actividad antimicrobiana al ser concentrados (alcaloides).

De tal manera se puede decir que, el extraer los compuestos en conjunto (EC, EIA y EIE)
favorece la inhibición contra Escherichia coli y afecta las propiedades antioxidantes en el
extracto, mientras que los extractos individuales de los alcaloides inhiben con mayor eficacia a
Listeria monocytogenes y Shigella sonnei respectivamente.

Por otro lado de acuerdo a la clasificación de bacterias en función a su sensibilidad

antimicrobiana ante un compuesto antimicrobiano reportada por Cruz-Carillo et al. (2010),
donde clasifica una cepa bacteriana como sensible, de mediana sensibilidad antimicrobiana y de
baja sensibilidad antimicrobiana cuando la CMI es inferior a 12.5 mg/ml, entre 12.5 y 50 mg/mL
y entre 50 a 100 mg/mL respectivamente, se tiene que de manera general ante los extractos
analizados, Escherichia coli presenta baja sensibilidad antimicrobiana, Salmonella typhimurium
y Shigella sonnei mostraron moderada sensibilidad antimicrobiana y Listeria monocytógenes es
una bacteria sensible.

108
Tabla 1.23 Determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) de los compuestos bioactivos presentes en los extractos del escapo floral de Agave
salmiana
Compuestos bioactivos
Fenoles Flavonoides Taninos Alcaloides Saponinas Proteínas
Microorganismos de prueba
Extracto Escherichia coli
EC - 62.74a,A ± 1.30 63.08a,A ± 0.52 n.d - 62.17a,A ± 0.21
EA - - - 31.69b,B ± 0.44 - 61.90a,A ± 1.47
EE 30.96b,B ± 0.88 61.86a,A ± 0.76 - n.d n.d -
ED60/40 31.55b,B ± 1.61 31.38b,B ± 1.57 31.21b,B ± 1.69 62.35a,A ± 1.45 - -
ED50/50 61.89a,A ±0.92 31.73b,B ± 0.85 - 61.86a,A ± 1.79 - -
ED40/60 62.91a,A ± 1.01 30.69b,B ± 1.64 - 31.21b,B ± 0.65 n.d -
EDSEA 32.16b,B ± 1.25 32.11b,B ± 0.39 - n.d - -
ESC 62.40a,A ± 1.35 - - 31.47b,B ± 0.87 62.85a,A ± 0.73 62.62a,A ± 1.50
Valores representados como mg*mL-1. Prueba de Tukey. – indica que la muestra no generó inhibición contra los microorganismos en cuestión. n.d-compuesto bioactivo
no detectado. Los valores se expresan como la media ± D.S del triplicado de los análisis.
Valores con diferente letra mayúscula en la misma columna son significativamente diferentes a un p=0.05
Valores con diferente letra minúscula en la misma fila son significativamente diferentes a un p=0.05
EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol
(50/50), ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-extracto secuencial combinado.
109
Continuación de la tabla 1.23
Compuestos bioactivos
Fenoles Flavonoides Taninos Alcaloides Saponinas Proteínas
Microorganismos de prueba
Extracto Salmonella typhimurium
EC - 62.82a,A ± 0.97 - n.d - 61.35a,A ± 0.43
EA 62.59a,A ± 0.58 61.83a,A ± 0.88 61.24a,A ± 1.38 61.39a,A ± 0.76 - -
EE 31.78b,B ± 1.34 62.44a,A ± 0.47 62.99a,A ± 0.31 n.d n.d -
ED60/40 62.55a,A ± 0.45 61.48a,A ± 1.04 - 62.54a,A ± 1.08 61.33a,A ± 1.15 -
ED50/50 63.82a,A ± 1.97 61.81a,A ± 0.51 - 31.25b,B ± 0.40 - -
ED40/60 61.28a,A ± 1.31 31.19b,B ± 1.32 - 62.47a,A ± 1.47 n.d 30.57b,B ± 0.56
EDSEA - 61.38a,A ± 1.41 - n.d - 61.34a,A ± 1.13
ESC 20.82c,C ± 1.59 - 61.27a,A ± 1.89 - 62.45a,A ± 1.10 31.55b,B ± 0.54
Valores representados como mg*mL-1. Prueba de Tukey. – indica que la muestra no generó inhibición contra los microorganismos en cuestión. n.d-compuesto bioactivo
no detectado. Los valores se expresan como la media ± D.S del triplicado de los análisis.
Valores con diferente letra mayúscula en la misma columna son significativamente diferentes a un p=0.05
Valores con diferente letra minúscula en la misma fila son significativamente diferentes a un p=0.05
EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol
(50/50), ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-extracto secuencial combinado.
110
Continuación de la tabla 1.23
Compuestos bioactivos
Fenoles Flavonoides Taninos Alcaloides Saponinas Proteínas
Microorganismos de prueba
Extracto Shigella sonnei
EC - 62.33a,A ± 1.53 32.04b,B ± 1.47 n.d - 31.25b,A ± 1.25
EA - - - 15.64a,C ± 0.13 - -
EE 61.22a,A ± 0.87 62.31a,A ± 0.41 21.60b,C ± 0.72 n.d n.d -
ED60/40 - 61.46a,A ± 0.82 - 31.23b,A ± 1.33 31.27b,B ± 0.57 21.35c,B ± 0.56
ED50/50 31.18b,B ± 0.57 31.35b,B ± 1.94 62.36a,A ± 1.30 31.19b,A ± 1.83 61.33a,A ± 1.10 -
ED40/60 - - - 2.17b,D ± 0.54 n.d 31.25a,A ± 1.85
EDSEA - - - n.d - 20.46c,B ± 0.93
ESC 62.46a,A ± 0.98 31.73b,B ± 0.52 31.47b,B ± 0.64 20.67c,B ± 0.83 - 30.76b,A ± 1.75
Valores representados como mg*mL-1. Prueba de Tukey. – indica que la muestra no generó inhibición contra los microorganismos en cuestión. n.d-compuesto bioactivo
no detectado. Los valores se expresan como la media ± D.S del triplicado de los análisis.
Valores con diferente letra mayúscula en la misma columna son significativamente diferentes a un p=0.05
Valores con diferente letra minúscula en la misma fila son significativamente diferentes a un p=0.05
EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol
(50/50), ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-extracto secuencial combinado.
111
Continuación de la tabla 1.23
Compuestos bioactivos
Fenoles Flavonoides Taninos Alcaloides Saponinas Proteínas
Microorganismos de prueba
Extracto Listeria monocytógenes
EC 31.49b,B ± 0.60 61.34a,A ± 0.32 62.45a,A ± 1.38 n.d - 62.43a,A ± 1.70
EA 32.15a,B ± 1.07 21.48b,C ± 1.66 31.26a,B ± 1.19 6.67c,E ± 0.35 20.89b,B ± 1.45 -
EE 61.34a,A ± 1.63 - 31.46b,B ± 0.86 n.d n.d -
ED60/40 62.68a,A ± 0.56 15.64d,D ± 1.42 20.73c,C ± 1.08 30.61b,A ± 0.86 20.47c,B ± 1.39 30.54b,B ± 0.54
ED50/50 - 8.32d,F ± 0.73 62.58a,A ± 0.69 11.22c,C ± 1.23 - 32.19b,B ± 1.91
ED40/60 31.24a,B ± 0.67 11.29b,E ± 1.29 32.23a,B ± 0.73 8.33c,D ± 0.84 n.d -
EDSEA - 60.23a,A ± 1.05 - n.d 32.11b,A ± 1.01 31.22b,B ± 0.29
ESC 60.57a,A ± 1.72 30.85b,B ± 1.27 60.73a,A ± 0.79 21.51c,B ± 0.33 20.67c,B ± 1.74 -
Valores representados como mg*mL-1. Prueba de Tukey. – indica que la muestra no generó inhibición contra los microorganismos en cuestión. n.d-compuesto bioactivo
no detectado. Los valores se expresan como la media ± D.S del triplicado de los análisis.
Valores con diferente letra mayúscula en la misma columna son significativamente diferentes a un p=0.05
Valores con diferente letra minúscula en la misma fila son significativamente diferentes a un p=0.05
EC-extracto crudo, EIA-extracto individual acuoso, EIE-extracto individual etanólico, ED60/40-extracto dual agua/etanol (60/40), ED50/50-extracto dual agua/etanol
(50/50), ED40/60-extracto dual agua/etanol (40/60), EDSEA-extracto dual secuencial combinación etanol y agua, ESC-extracto secuencial combinado.
112
Debido a que el estudio del género Agave en la investigación fitoquímica de compuestos
enfocada a la actividad antimicrobiana es relativamente reciente, información como CMI de
compuestos se limita a extractos en conjunto donde la polaridad del disolvente utilizado es la
base de comparación. De tal manera que en comparación a otros Agaves, la CMI de los extractos
acuosos obtenidos del escapo de Agave salmiana contra Escherichia coli, es mayor a lo
reportado para los extractos de Agave americana, Agave cupreata y Agave tequilana, con hasta
25% (Ahmad, et al., 2016, Salazar-Pineda et al., 2017 y Ávila‐Fernández et al., 2016), mientras
que, contra Salmonella typhimurium y Shigella sonnei la CMI de los extractos etanólicos de las
hojas de Agave angustifolia y Agave sisalana son similares en el intervalo de 18 a 72 mg*mL-1
(López-Romero et al., 2018 y Araldi et al., 2018); y menor contra Listeria monocytógenes en
comparación a los extractos secuenciales con disolventes menos polares (Hexano y acetona) de
Agave bracteosa y Agave tequilana con hasta 39% (Ullah et al., 2016 y Arrizon et al., 2014).
La variablidad en los resultados puede ser debido a la sección de la planta analizada, al tipo de
extracción y disolventes utilizados, al tipo de compuesto presente en el extracto y a la cepa
bacteriana, la cual puede variar dentro de una misma especie en función a características como
serología y virulencia bacteriana que influencia la sensibilidad o resistencia del microorganismo
(Chen et al., 2016 y Cushnie et al., 2005).

Por otro lado a diferencia del género Agave, otras especies vegetales presentan una gran
cantidad de valores de CMI de compuestos en específico para la inhibición de diversos
microorganismos, por lo cual se concentra la información más relevante en la tabla 1.24, en la
cual se puede observar que la CMI de los alcaloides de Agave salmiana contra Shigella sonnei
es menor a lo reportado para los alcaloides del tamarindo (Tamarindus indica) y los terpenos de
la planta Pelargonium luridum con hasta 91% y 68% respectivamente, mientras que la CMI de
los fenoles obtenidos en el presente trabajo contra Salmonella typhimurium es similar a lo
reportado para los fenoles de la granada (Punica granatum) y los flavonoides de la planta
Pelargonium luridum en el intervalo de 20 a 31 mg*mL-1, indicando que Salmonella
typhimurium es sensible a el grupo de compuestos fenólicos; y los terpenos, aceite escencial y
fenoles de Hypericum roeperianum, la granada (Punica granatum), Pelargonium luridum
respectivamente, contra Escherichia coli presentaron mayor actividad antimicrobiana en

113
comparación a los flavonoides del escapo de Agave salmiana con una diferencia en la CMI de
hasta 97%.
Tabla 1.24 Comparación de CMI de diferentes plantas

Compuesto Tipo de Microorganismo CMI

Especie vegetal
bioactivo extracto que afecta (mg*mL-1)
Polaridad Salmonella
Fenoles simples 20.82 ± 1.59
ascendente typhimurium
Agua-Etanol
Flavonoides Escherichia coli 30.69 ± 1.64
(40:60)
Agua-Etanol
Shigella sonnei 2.17 ± 0.54
(40:60)
Agave salmiana Alcaloides
Listeria
Acuosa 6.67 ± 0.35
monocytogenes
Agua-Etanol Listeria
Taninos 20.73 ± 1.08
(60:40) monocytogenes
Agua-Etanol Listeria
Saponinas 20.47 ± 1.39
(60:40) monocytogenes
Hypericum
Terpenos Acetónicos Escherichia coli 0.13 ± 0.04
roeperianum1
Guayaba (Psidium
Flavonoides Etanólico Escherichia coli 41.78 ± 1.28
guajava)2
Salmonella
Fenoles4 Acuoso 27.86 ± 0.61
typhimurium
Granada (Punica
Agua-Etanol Listeria
granatum) Flavonoides7 32.77 ± 2.67
(50:50) monocytogenes
Aceite escencial7 Acuoso Escherichia coli 0.87 ± 0.14
Tamarindo Flavonoides Acuoso Escherichia coli 6.25 ± 0.76
(Tamarindus
Alcaloides Metanólico Shigella sonnei 25.01 ± 1.03
indica)5
Frambuesa (Rubus Salmonella
Fenoles Acuosos 142.58 ± 2.55
idaeus) 6 typhimurium
Ferula Agua-Etanol Listeria
Taninos 32.50 ± 1.96
assafoetida8 (30:70) monocytogenes
Terpenos Acetona Shigella sonnei 6.89 ± 0.37
Pelargonium Fenoles Acuoso Escherichia coli 2.78 ± 1.04
luridum9 Salmonella
Flavonoides Etanólico 31.52 ± 2.14
typhimurium
1.- Elisha, et al., 2017. 2.- Valle, et al., 2015. 3.- Guillermo et al., 2012. 4.- Wafa et al., 2017. 5.- Abdallah et al. 2018. 6.-
Cetin-Karaca et al. 2015. 7.- Xylia et al., 2018. 8.- Akhlaghi et al., 2018. 9.- Saheed et al., 2018.

114
CONCLUSIONES

Se extrajeron y analizaron las propiedades antioxidantes y antimicrobianas de los principales

grupos bioactivos presentes en el escapo de Agave salmiana, siendo los flavonoides extraídos
favorablemente en agua mediante un proceso individual los que presentaron mayor actividad
antioxidante mientras que los alcaloides y flavonoides extraídos por una combinación
agua/etanol (40/60 y 50/50 respectivamente) mostraron mayor actividad antimicrobiana contra
Shigella sonnei y Listeria monocytógenes respectivamente.

Tanto en los resultados de actividad antioxidante como en actividad antimicrobiana se

presentaron efectos sinérgicos y antagónicos medidados por la contribución mayoritaria del
grupo de compuestos fenólicos (fenoles simples, flavonoides y taninos) y se identificó que las
propiedades antioxidantes de los extractos obtenidos son influídas principalmente por el proceso
de extracción y disolvente utilizados mientras que las propiedades antimicrobianas de los
extractos se relacionan mayormente al tipo de estructura celular del microorganismo en cuestión
y a la interacción de los grupos bioactivos con los compuestos expuestos en el entorno celular
de las bacterias analizadas.

115
 BIBLIOGRAFÍA

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