UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA
ESCUELA DE POSGRADO

MAESTRÍA EN TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS

“CAPACIDAD ANTIOXIDANTE Y COMPUESTOS

BIOACTIVOS EN EL PROCESADO DEL ZUMO DE HUITO
(Genipa americana L.)”

Presentada por:

DEYSI ROCÍO GUZMÁN LOAYZA

TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE

MAGISTER SCIENTIAE EN TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS

Lima - Perú

2021
 UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA
LA MOLINA

ESCUELA DE POSGRADO

MAESTRÍA EN TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS

“CAPACIDAD ANTIOXIDANTE Y COMPUESTOS

BIOACTIVOS EN EL PROCESADO DEL ZUMO DE HUITO
(Genipa americana L.)”

TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE

MAGISTER SCIENTIAE

Presentada por:
DEYSI ROCÍO GUZMÁN LOAYZA

Sustentada y aprobada ante el siguiente jurado:

Mg.Sc. Carlos Elías Peñafiel Dr. Américo Guevara Pérez

PRESIDENTE ASESOR

Dra. Ritva Repo de Carrasco Mg.Sc. Beatriz Hatta Sakoda

MIEMBRO MIEMBRO
Dedicado a Dios por su inmenso amor y por permitirme haber culminado a
pesar de todos los obstáculos.

Amén

“The fruit of silence is prayer.

The fruit of prayer is faith.

The fruit of faith is love.

The fruit of love es service.

The fruit of service es peace”.

Madre Teresa de Calcuta

 Agradecimientos

Al Dr. Américo Guevara Pérez por su asesoramiento en el presente trabajo de investigación.

Al Vicerrectorado Académico por el apoyo financiero para la culminación de esta

investigación.

Al Ing. Enrique Gonzales Mora PhD. en representación del Laboratorio de Pulpa y papel
por permitirme el uso de las instalaciones y equipos.

A mi madre por su inmenso amor y apoyo brindado, asistiendo a mis niñas para que pueda
desarrollar mi investigación.

Un agradecimiento al Sr. Luis Enrique Cabrera Vaquerizo. por su invaluable ayuda y

asistencia en cada etapa de desarrollo de esta investigación.
 ÍNDICE GENERAL

I.INTRODUCCION……...……………………………………………………………... ..1

II.REVISION DE LITERATURA ..................................................................................... 3

2.1 HUITO ....................................................................................................................... 3

2.1.1. Descripción ........................................................................................................... 3

2.1.2. Clasificación taxonómica. .................................................................................. 4

2.1.3. Distribución geográfica ........................................................................................ 4

2.1.4. Composición nutricional del fruto ........................................................................ 4

2.1.5. Usos ...................................................................................................................... 6

2.2 COMPUESTOS BIOACTIVOS ................................................................................ 6

2.2.1. Vitamina c............................................................................................................. 6

2.2.2 Compuestos iridoides ............................................................................................ 8

2.2.3 Compuestos polifenólicos.................................................................................... 10

2.3 CAPACIDAD ANTIOXIDANTE ............................................................................. 11

2.3.1. Mecanismos de reacción de los antioxidantes………………………………….12

2.3.2.Métodos ............................................................................................................... 14

2.3.3. Factores que influyen sobre los antioxidantes .................................................... 16

2.4 ZUMO DE FRUTAS ................................................................................................. 17

2.4.1 Definición ............................................................................................................ 17

2.4.2 Características físico y químicas para la obtención de zumos de fruta ............... 17

2.5 PASTEURIZACIÓN ................................................................................................. 17

2.6 SORBATO DE POTASIO ......................................................................................... 19

III. MATERIALES Y METODOS ……………………………..………………………………………….20

 3.1 LUGAR DE EJECUCIÓN ......................................................................................... 20

3.2 OBTENCION DE LA MATERIA PRIMA ............................................................... 20

3.3 MATERIALES UTILIZADOS.................................................................................. 20

3.4 EQUIPOS ................................................................................................................... 21

3.5 MÉTODOS DE ANÁLISIS ....................................................................................... 21

3.5.1 Fisicoquímicos ..................................................................................................... 21

3.5.2 Microbiológicos:………………………………………………………………...22

3.5.3 Análisis estadístico .............................................................................................. 23

3.6 METODOLOGÍA EXPERIMENTAL ...................................................................... 23

IV. RESULTADOS Y DISCUSION................................................................................. 29

4.1 CARACTERIZACIÓN DEL FRUTO DE HUITO ................................................... 29

4.2 OBTENCIÓN DEL ZUMO ....................................................................................... 31

4.3 SELECCIÓN DE LA MEJOR MUESTRA DE ZUMO OBTENIDO DESPUÉS DEL

ACONDICIONAMIENTO Y PASTEURIZACIÓN. ...................................................... 33

4.4 EFECTO DEL PROCESAMIENTO Y ESTABILIDAD EN LA CAPACIDAD

ANTIOXIDANTE Y COMPUESTOS BIOACTIVOS. .................................................. 36

4.5 ALMACENAMIENTO DEL ZUMO A TEMPERATURA AMBIENTE ................ 42

4.6 CARACTERIZACIÓN DEL PRODUCTO FINAL DESPUÉS DEL

ALMACENAJE….. ........................................................................................................ .43

V. CONCLUSIONES ........................................................................................................ 46

VI. RECOMENDACIONES ............................................................................................. 47

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .................................................................... 48

VIII. ANEXOS ................................................................................................................... 61

 ÍNDICE DE CUADROS

Cuadro 1: Proporciones del fruto de Genipa americana L. .................................................. 4

Cuadro 2:Composición del fruto de Genipa americana L. ................................................... 5

Cuadro 3:Características físicas del fruto in natura de Genipa americana L. ..................... 30

Cuadro 4: Composición química de la pulpa de huito......................................................... 31

Cuadro 5. Cuadro comparativo del análisis microbiológico de los diferentes tratamientos de

los zumos de Genipa americana L. ..................................................................................... 34

Cuadro 6:Capacidad antioxidante y Compuestos bioactivos de zumo Huito en los cuatro

tratamientos ......................................................................................................................... 35

Cuadro 7: Efecto del procesamiento sobre la Capacidad antioxidante ............................... 36

Cuadro 8: Efecto del procesamiento sobre los Compuestos Bioactivos. ............................ 38

Cuadro 9: Control microbiológico del zumo de huito hasta los 90 días de almacenamiento a

temperatura ambiente. ......................................................................................................... 42

Cuadro 10:Composición físico química del zumo de Genipa americana L. ...................... 44

Cuadro 11: Composición mineral del zumo de Genipa americana L…………………... 45

 ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 1: Estructuras isoméricas del ácido ascórbico. .......................................................... 7

Figura 2: Estructura básica de los iridoides: (A) simple; (B) glicosilado; (C) secoiridoide. 8

Figura 3:Vista de las partes internas del fruto de Huito (imagen propia).............................. 9

Figura 4: Iridoides presentes en Genipa americana L.: (A) genipina, (B) geniposido y (C)

ácido geniposidico ................................................................................................................. 9

Figura 5: Representacion de la reaccion de estabilizacion de un radical por un

antioxidante………………………………………………………………………………..14

Figura 6: Estructura del sorbato de potasio ......................................................................... 19

Figura 7:Flujo de operaciones para la obtención del zumo de huito ................................... 24

Figura 8:Esquema experimental para obtener el zumo de huito (Genipa americana L.) .... 28

Figura 9: Frutos de huito: (A) y (B) frutos de Bahía- Brasil (Souza, 2007); (C) Frutos en

estudio, origen Pucallpa – Perú. .......................................................................................... 29

Figura 10: Balance de materia del zumo de huito. .............................................................. 32

Figura 11: Variación de la Capacidad antioxidante (µmol/100mL) ………………………38

Figura 12: Variación del contenido de Vitamina C (g/100 mL)......................................... 39

Figura 13:Variación del contenido de Polifenoles totales (mg EAG/100g) ........................ 40

Figura 14:Variación del Contenido de Genipina (azul) y Ac. Geniposido (verde) (mg/100g)

............................................................................................................................................. 41
 ÍNDICE DE ANEXOS

Anexo 1: Métodos Analíticos…………………………………………………………. ….62

Anexo 2: Análisis de Genipina y Acido Geniposidico por Cromatografía UHPLC……... 68

Anexo 3: Norma sanitaria que establece los criterios microbiológicos de calidad

sanitaria e inocuidad para los alimento y bebidas de consumo humano ………………… ...71

Anexo 4: Análisis estadístico de los compuestos bioactivos en los tratamientos …….. … 72

Anexo 5: Análisis de minerales en el zumo de Huito………………………………………..102

 RESUMEN

El huito (Genipa americana L.) es una fruta con propiedades nutricionales, funcionales e
hipoglucemiantes, de allí el interés de realizar investigaciones para contribuir con su
conocimiento. Esta investigación tuvo como objetivo, determinar el efecto del
procesamiento sobre la capacidad antioxidante y compuestos bioactivos en el zumo de huito.
Primeramente, se caracterizó biométrica y fisicoquímicamente al fruto evaluando su
composición química proximal, vitamina C, polifenoles totales, genipina, ácido geniposidico
y capacidad antioxidante. Obtenido el zumo, con la finalidad de determinar su estabilidad
microbiológica, se trabajaron con cuatro tratamientos (con adición y sin adición de
conservante; con pasteurización y sin pasteurización), estos tratamientos fueron evaluados
en el tiempo cero, quince y treinta días de almacenamiento a temperatura ambiente, en
mohos y levaduras, aerobios mesófilos viables y coliformes totales; el mejor tratamiento,
fue almacenado por 90 días y posteriormente caracterizado en su composición química, pH,
acidez, vitamina C, polifenoles totales, capacidad antioxidante, genipina, ácido geniposidico
y contenido mineral. Se determinó que el huito es bajo en grasa y alto en carbohidratos 0,43
y 13,49 por ciento respectivamente, contiene 219,18 mg EAG/100g de polifenoles totales;
0,72 mg/100g de genipina; 1,64 mg/100g de ácido geniposidico y 1782,60 µmolTE/100g de
capacidad antioxidante. El zumo sometido a pasteurización y con conservador químico,
mostro estabilidad microbiológica en el tiempo. En el procesamiento la extracción y la
pasteurización aumentaron la capacidad antioxidante, pero redujeron la vitamina C y
polifenoles totales, aunque estos últimos no variaron significativamente, en cambio la
genipina y el ácido geniposidico se redujeron significativamente. La composición química
del zumo obtenido en porcentaje fue: humedad 82,80; grasa 3,19; proteína 1,94; cenizas
3,51; carbohidratos 8,56; brix 16,24; azucares reductores 6,94; acidez 1,58 g/100 mL de
ácido cítrico; vitamina C 0,53 g/100mL; polifenoles totales 115,42 mgEAG/100g; genipina
0,41 y ácido geniposidico 1,66 mg/100 mL; capacidad antioxidante 2013,40 µmolTE/100g.
En minerales calcio 96,37; fosforo 216,14; hierro 4,18; magnesio 260,61; potasio 3674,00;
sodio 25,57; zinc 0,68; silicio 9,91 (como oxido de silicio) y boro 6,66 por ciento,
componentes que otorgan a la bebida gran interés nutricional y funcional.

Palabras claves: Huito, capacidad antioxidante, compuestos bioactivos, genipina, ácido

geniposido, vitamina C, minerales, procesamiento.
 ABSTRACT

The huito (Genipa americana L.) is a fruit with nutritional, functional and hypoglycemic
properties, hence the interest in conducting research to contribute to its knowledge. This
research aimed to determine the effect of processing on the antioxidant capacity and
bioactive compounds in huito juice. First, the fruit was biometrically and physicochemically
characterized by evaluating its proximal chemical composition, vitamin C, total polyphenols,
genipin, geniposidic acid and antioxidant capacity. Once the juice was obtained, in order to
determine its microbiological stability, four treatments were used (with addition and without
the addition of preservative; with pasteurization and without pasteurization), these
treatments were evaluated at time zero, fifteen and thirty days of storage at room
temperature, in molds and yeasts, viable mesophilic aerobes and total coliforms; the best
treatment was stored for 90 days and subsequently characterized in its chemical composition,
pH, acidity, vitamin C, total polyphenols, antioxidant capacity, genipin, geniposidic acid and
mineral content. It was determined that huito is low in fat and high in carbohydrates 0.43
and 13.49 percent respectively, it contains 219.18 mg EAG / 100g of total polyphenols; 0.72
mg / 100g of genipin; 1.64 mg / 100g of geniposidic acid and 1782.60 µmolTE / 100g of
antioxidant capacity. The juice subjected to pasteurization and with a chemical preservative,
showed microbiological stability over time. In processing, extraction and pasteurization
increased the antioxidant capacity, but reduced vitamin C and total polyphenols, although
the latter did not vary significantly, whereas genipin and geniposidic acid were significantly
reduced. The chemical composition of the juice obtained in percentage was: humidity 82.80;
fat 3.19; protein 1.94; ash 3.51; carbohydrates 8.56; brix 16.24; reducing sugars 6.94; acidity
1.58 g / 100 mL of citric acid; vitamin C 0.53 g / 100mL; total polyphenols 115.42 mgEAG
/ 100g; genipin 0.41 and geniposidic acid 1.66 mg / 100 mL; antioxidant capacity 2013,40
µmolTE / 100g. In minerals calcium 96,37; phosphorus 216.14; iron 4.18; magnesium
260.61; potassium 3674.00; sodium 25.57; zinc 0.68; silicon 9.91 (as silicon oxide) and
boron 6.66 percent, components that give the drink great nutritional and functional interest.

Keywords: Huito, antioxidant capacity, bioactive compounds, genipin, geniposide acid,

vitamin C, minerals, processing.
 I. INTRODUCCIÓN

El Perú es un país con la mayor diversidad de productos alimenticios y agrícolas dentro de

estos se encuentran las frutas, con muchos atributos particulares y beneficios para la salud
(Pérez-Jiménez y Saura – Calixto 2007); la población solo se limita al consumo de frutas
conocidas o comunes, sin embargo nuestros bosques tropicales contienen una gran variedad
de frutas silvestres (MINAGRI 2015), los cuales juegan un rol importante en la dieta de las
comunidades nativas; algunas de estas frutas son fuente excepcional de vitaminas y otros
componentes bioactivos aún poco estudiados, con un gran potencial de aprovechamiento
(Álvarez 2013), por falta de investigaciones. El huito (Genipa americana L.), es una de estas
frutas, crece en la selva peruana, y es poco conocida.

Neta (2014) indica que este fruto tiene compuestos bioactivos importantísimos que podrían
aportar al restablecimiento de la salud. Kuskoski et al. (2005) menciona que el consumo de
frutas y verduras está asociado al bajo riesgo de incidencias y mortalidad de cáncer y a
menores índices de mortalidad por enfermedades coronarias para que se pueda mantener una
buena salud.

Por otro lado, los árboles frutales del bosque necesitan ser integrados, el valor económico de
estos productos no solo puede servir como un estímulo para la conservación de los bosques,
sino que también como una alternativa para generar el incremento de ingresos a las
comunidades locales. Bajo esta premisa se plantearon los siguientes objetivos:

Objetivo general:

Evaluar el efecto del procesamiento sobre la capacidad antioxidante y compuestos bioactivos

en el zumo de huito (Genipa americana L).

Objetivos específicos:

1
- Caracterizar fisicoquímicamente al fruto de huito en análisis biométrico, firmeza, color,
composición química proximal, pH, brix, acidez titulable, vitamina C, capacidad
antioxidante, polifenólicos totales, contenido de Genipina y ácido Geniposidico.

- Determinar el efecto del procesamiento en la capacidad antioxidante y en el contenido de

sus compuestos bioactivos (polifenoles totales, vitamina C, genipina y ácido geniposidico)
del zumo de huito.

- Caracterizar el zumo obtenido en Capacidad antioxidante, compuestos bioactivos,

composición química proximal y contenido mineral (calcio, fosforo, hierro, magnesio,
potasio, sodio, zinc, boro y oxido de silicio).

2
 II.REVISIÓN DE LITERATURA

2.1. HUITO

2.1.1. Descripción

Es un árbol de 20-50 cm de diámetro y 6-25 m de altura total, con fuste cilíndrico, regular,
la ramificación desde el segundo tercio, la base del fuste recta. Corteza externa lisa o
agrietada finamente, color grisáceo; corteza interna homogénea de color blanquecino.
Ramitas terminales con sección cuadrangular, de 4-7 cm de grosor, glabras.

Hojas simples opuestas y decusadas, el peciolo de 0.5-1 cm de longitud, las láminas de 22-
40 cm de longitud y de 7-11 cm de ancho, oblancioladas, entera a levemente sinuadas, la
nerviación pinnada, los nervios secundarios 10-20 pares, el ápice agudo a obtuso y
cortamente acuminado, la base decurrente, las hojas glabras, las estipulas triangulares a
lanceoladas, de 1.5–2.5 cm de longitud.

Inflorescencia cimas axilares o terminales de 3-9 cm de longitud, con pocas flores las que
son grandes y hermafroditas, actinomorfas, el pedicelo de 5-15 mm de longitud, el hipantio
más cáliz 8-20 mm de longitud, el cáliz de 5-6 dentado, la corola tubular campanulada, de
color blanco a amarillo, de 2-3 cm de longitud, resuelta en cinco pétalos seríceo-pubescentes,
los estambres 5, con las anteras sésiles en la garganta de la corola, el ovario 2-locular (Reynel
et al. 2016).

Frutos son bayas globosas a subglobosas de 5-9 cm de diámetro, con una protuberancia
apical corta y cilíndrica, la superficie lisa, color marrón claro, con lenticelas pequeñas, las
semillas numerosas, ovoides u oblongos-aplanadas, de 4-8 mm de longitud, color amarillo
claro cuando son frescas (Reynel et al. 2016). Estos frutos contienen cerca de 1200 semillas
/Kg (Pereira 1982) con 50% de pureza y CATIE (1999) reporta 14000-33700 semillas /Kg.
2.1.2. Clasificación taxonómica. Según Reynel et al. (2016), el huito tiene la siguiente
clasificación

Familia: Rubiaceae
Nombre científico: Genipa americana L.
Nombres comunes: huito, jagua, jenipapo o genipá(Brazil), caruto (Venezuela), bois
de fer (francés).
Sinónimos botánicos: Genipa excelsa Krause, Genipa oblongifolia R. et P.

2.1.3. Distribución geográfica

Esta especie se distribuye en selva baja, hasta 700 msnm, en bosques primarios. Cultivada
en la Amazonia por sus frutos comestibles. En condiciones silvestres, se le observa en
ámbitos con pluviosidad elevada y continua, aunque se adapta también en zonas con una
estación seca marcada; es una especie con tendencia heliófita, presente en bosques
secundarios tempranos o tardíos, en suelos con tendencia arenosa, a veces en condiciones
ribereñas y de inundación temporal (Reynel et al. 2003).

2.1.4. Composición nutricional del fruto

En el Cuadro 1 se muestran las proporciones de componentes del fruto de Genipa americana

Cuadro 1: Proporciones del fruto de Genipa americana L.

Constituyente Rezende Hamacek

(2010) (2013)
Cascara (%) 12,05 14,34
Pulpa (%) 47,81 47,36
Hueso (%) 40,61 38,30
Fuente: Rezende (2010), Hamacek (2013)

En el Cuadro 2 se presenta un resumen de la composición del fruto, reportados por varios

autores.

4
 Cuadro 2:Composición del fruto de Genipa americana L.

Constituyente/autor Morton Rezende Hamacek Porto Pacheco

(1987) (2010) (2013) (2014) (2014)

Humedad (%) 67,6 73,75 80,42 75,00 70.00

Proteínas (%) 5,2 0,68 1,59 0,67 0,5

Lípidos (%) 0,3 0,35 1,60 1,60 0,0

Carbohidratos (%) - 15,69 14,57 20,53 22,1

Fibra cruda (%) 9,4 2,03 1,09 - 6,3

Cenizas (%) 1,2 1,22 0,74 2,20 1,1

Valor calórico - - 76,92 99,00 90,7

(kcal/100g)
Solidos totales (Brix) - 18,34 11,40 - 15,20
(%)
Acidez titulable (% - 1,66 3,33 - 70,20
de ác. cítrico)
pH - 3,60 3,87 - 3,85
Otros componentes - - - - -

Vitamina C 33,0 - - - 26,00

(mg/100g)
Vitamina B (mg) 0,04 - - - -

Calcio (mg) 40,0 45,82 - - -

Fosforo (mg) 58,0 33,50 - - -

Hierro (mg) 3,6 0,80 - - -

Niacina (mg) 0,5 - - - -

Lisina (mg) 316,0 - - - -

Metionina (mg) 178,0 - - - -

Treonina (mg) 219,0 - - - -

Triptófano (mg) 57,0 - - - -

Glúcidos - - - - -

Fuente: Morton (1987), Rezende (2010), Hamacek et al. (2013), Porto et al. (2014),
Pacheco (2014)

5
2.1.5. Usos

Los frutos son comestibles de agradable sabor, se consumen frescos y se elabora con ellos,
aguardiente, una bebida alcohólica tradicional, el Huitochado. La fruta verde, tostada dentro
de hojas de plátano, produce un tinte de color negro, que algunos grupos nativos han
empleado tradicionalmente para la pintura facial y del pelo; el tinte desaparece solo, luego
de varios días. En la medicina tradicional, el tinte se usa para embellecer la piel, también se
le atribuye el sanar y mejorar la piel en las zonas donde se le aplica (Reynel et al. 2003). La
pulpa del fruto contiene pigmentos azules y morados, industrializados, con creciente
demanda.

2.2.COMPUESTOS BIOACTIVOS
Compuestos orgánicos que tienen una actividad biológica en el organismo, sus componentes
tienen una gran afinidad con sus moléculas, por lo que son altamente aprovechadas por
nuestras células, los organismos y los sistemas. Así las frutas son consideradas como fuente
importante de macro y micronutrientes, también poseen compuestos con propiedades
bioactivas que proveen beneficios adicionales a la salud protegiendo al cuerpo humano
contra diferentes dolencias crónicas como la obesidad, diabetes mellitus, dislipidemias,
canceres entre otros (Medeiros 2013).

La caracterización física y química de las frutas y la cuantificación de sus componentes

activos son importantes para comprender su valor nutricional, muchos de los compuestos
presentes en los alimentos tienen propiedades funcionales, sustancias con actividad
antioxidante los cuales han recibido mucha atención porque ellos protegen el cuerpo humano
del estrés oxidativo previniendo numerosos desordenes degenerativos crónicos (Souza et al.
2012).

2.2.1. Vitamina C.

La vitamina C o acido L-ascórbico compuesto a fin a los carbohidratos tiene propiedades

acidas y reductoras debidas al resto 2,3-enediol. En la Figura 1 se aprecia las formas
isoméricas del ácido L- ascórbico (los ácidos L-ascórbico y L-dehidroascórbico, ambos
poseen actividad vitamínica); este acido existe naturalmente en frutas y hortalizas, está
presente casi exclusivamente en la forma reducida del ácido L- ascórbico, es un compuesto
muy polar y por tal muy soluble en soluciones acuosas (Fennema 2010). Actúa como un

6
agente reductor y es necesario para la síntesis de la fibra de colágeno a través del proceso de
hidroxilación de la prolina y de la lisina (Valdés 2006).

Figura 1: Estructuras isoméricas del ácido ascórbico.

Fuente Fennema (2010)

La vitamina C es considerada como el principal nutriente natural y antioxidante en nuestra

dieta diaria y su efecto es anti carcinogénico (Becerra 2011). Esta vitamina desempeña
importantes funciones para la nutrición humana, como formación de tejido conjuntivo,
producción de hormonas y anticuerpos, biosíntesis de aminoácidos y actividad antioxidante
(Medeiros 2013).

Los mecanismos bioquímicos de la vitamina C que participan en el proceso antioxidante que

ayudan a prevenir enfermedades como el cáncer están relacionadas con la incorporación del
ácido ascórbico en el sistema inhibidor de la hialuronidasa, evitando la diseminación
metastasica de los tumores al mantener intacto el tejido peritumoral, potenciando el sistema
inmune con el aumento en la producción de linfocitos, en la prevención de la formación de
nitrosaminas en el tracto gastrointestinal y en la inhibición del potencial de carcinógenos
químicos aumentando la actividad detoxificante del sistema citocromo P450. Esta vitamina
es un potente reductor, porque pierde fácilmente átomos de hidrogeno para transformarse en
ácido dehidroascorbico que también posee actividad de vitamina C (Valdés 2006).

7
2.2.2 Compuestos iridoides

Son una serie de monoterpenos biciclicos (C10) los que derivan biosinteticamente del
monoterpeno geraniol, el cual presenta como estructura básica común un ciclopentanopirano
denominado iridano, por haberse detectado por primera vez en unas hormigas pertenecientes
al género Iridomyrmex. Estos compuestos pueden encontrarse como estructuras abiertas
(secoiridoides) o cerradas (iridoides) generalmente en forma heterosidica, como glucósidos,
tal como se muestra en la Figura 2 (Bentes et al. 2014). Por contener este tipo de compuestos
una serie de plantas son empleadas farmacológicamente como las de la familia Apocynaceae,
Loganiaceae, Scrophulariaceae, Verbenaceae (Alves 2017 y Rubiaceae (Dussossoy et al.
2011). Un amplio rango de actividades biológicas ha sido asociado con los iridoides como
su actividad neuro protectora, cardiovascular, antibacteriana y sedativa (Faria 2019), esto
compuestos también pueden usarse como marcadores quimio taxonómicos para la
clasificación de plantas (Bentes et al. 2014).

Figura 2: Estructura básica de los iridoides: (A) simple; (B) glicosilado; (C)
secoiridoide.

Fuente: Bentes et al. (2014).

Genipa americana L. se caracteriza por presentar tres iridoides como: genipina, geniposido
y ácido geniposidico, tanto en el mesocarpio como en el endocarpio (Figura 3); la Figura 4
muestra las estructuras correspondientes de los respectivos compuestos (Náthia-Neves et al.
2018).

8
 Figura 3:Vista de las partes internas del fruto de Huito (imagen propia)

Figura 4: Iridoides presentes en Genipa americana L.: (A) genipina, (B) geniposido y
(C) ácido geniposidico

Fuente: Náthia-Neves et al. (2018)

Bentes et al. (2014) realizaron un estudio comparativo entre frutos inmaduros y maduros de
Genipa americana L., y encontró que en frutos maduros el iridoide de mayor proporción fue
la genipin gentibioside el cual estaba alrededor del 38%, además menciona que durante la
maduración el contenido de iridoides tienen una disminución en más del 90% lo que
explicaría la ausencia del color azul en los frutos maduros; esta genipina posee un amplio
espectro de efectos sobre la salud como antiinflamatorio, neuroprotector antidiabético
(inhibiendo el estrés oxidativo hepático) y antitrombotico (Neri-Numa et al. 2018). Los otros
compuestos detectados en los frutos maduros fueron: ácido geniposidico (con actividad

9
purgativa), gardenosidos como genipina 1-β-D-gentibiosido con propiedades antipromotora
de tumores (Ono et al. 2005, mencionado por Faria 2019); geniposido, ácido
cafeoylgeniposido, acido p-coumaroilgeniposido, feruloil gardosido, p-coumaroilgenipina
gentiobiosido, feruloilgenipina gentibiosido. Estos compuestos son considerados
antimicrobianos como el ácido genipico o genipinico. En general estos iridoides presentan
función neuroprotectoras, cardiovasculares, antibacterianas, sedativas, entre otros, dichas
propiedades hacen que este fruto tenga importancia para la industria alimentaria y
farmacéutica (Faria 2019). Las plantas con presencia de glucosidos iridoides presentan
propiedades anti-inflamatorias, antioxidantes y hepatoprotectoras (Noiarsa et al. 2008).

Con respecto a la toxicidad de estos iridoides, como el caso de la genipina que ha sido
estudiada ampliamente, Lima et al. (2009) mencionan que depende de la dosis y el tiempo,
al probarse in vitro, determinó una dosis letal de 2200µM, una dosis no letal de 220 µM y
una dosis óptima de 22 µM.

2.2.3 Compuestos polifenólicos

Estos compuestos presentes en las plantas, tienen en su estructura química un anillo

aromático con uno o más grupos hidroxilo, pudiendo así variar de una simple molécula
fenólica a un polímero complejo de alto peso molecular (Medeiros 2013). Se conocen cerca
de 8000 compuestos fenólicos identificados y estos pueden dividirse en grupos de acuerdo a
su estructura química como ácidos fenólicos, estilbenos, cumarinas, lignanos y flavonoides
(Becerra et al. 2011). En la naturaleza la síntesis de un núcleo aromático la realizan solo los
vegetales y microorganismos; los organismos animales lo reciben en su alimentación para
elaborar otros metabolitos que le son indispensables como las vitaminas, aminoácidos, etc.
(Bruneton 2001).

2.2.3.1 Clasificación de los compuestos fenólicos

Los ácidos fenólicos de formula C6-C1 derivados hidroxilados del ácido benzoico son muy
frecuentes tanto libres como combinados al estado de esteres o de heterósidos, algunos de
sus usos y aplicaciones son por sus propiedades antisépticas, antiinflamatorias, algunos
heterósidos son considerados compuestos antibacterianos y anti fúngicos frente a
organismos Fito patógenos.

10
Las cumarinas deben su denominación a la palabra “coumarou” nombre de la especie de la
que fueron extraidas (Dipteryx odorata Will.), dentro de sus aplicaciones están como
protector vascular, algunas se utilizan contra la soriasis porque tienen la propiedad de ser
fotosensibles. Algunas otras se utilizan contra canceres avanzados.

Los lignanos son aquellos compuestos cuyo esqueleto resulta del establecimiento de una
unión entre los carbones β de las cadenas laterales de dos unidades derivadas del 1-
fenilpropano. Dentro de las aplicaciones para este tipo de compuestos se le ha determinado
propiedades antibacterianas y antifúngicas.

Los flavonoides son los pigmentos casi universales y más importantes en la actualidad.
Responsables de la coloración de las flores, frutos y a veces hojas. Todas estas moléculas
poseen un mismo origen biosintético común, y por tal un mismo elemento estructural básico
puede dar origen a una docena de clases según el grado de oxidación del núcleo piránico
central. La principal actividad atribuida a estos compuestos es la de ser “venoactivos” son
capaces de disminuir la permiabilidad de los capilares sanguíneos y aumentar su resistencia.

Otra de las funciones importantes de los flavonoides según Escamilla et al. (2009), son sus
funciones antioxidantes que resulta de una combinación de sus propiedades quelantes de
hierro y secuestradoras de radicales libres, además de la inhibición de las enzimas oxidasas,
lipooxigenasa, ciclooxigenasa, mieloperoxidasa y la xantina oxidasa evitando así la
formación de especies reactivas de oxígeno y de hidroperóxidos orgánicos.

2.3. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE

Los radicales libres son átomos, moléculas o iones altamente inestables debido a su
estructura atómica o molecular, a medida que posean electrones desapareados, estos tipos de
compuestos presentan grandes tendencias para capturar un electrón de otra especie química
para recuperar su estabilidad (Avello et al. 2006). En este proceso una molécula vecina se
vuelve un radical libre, provocando una reacción en cadena que en este caso de no ser
interrumpida puede provocar alteraciones celulares asociadas a patologías (Rodríguez 2011),
como el cáncer, artritis reumatoidea, los procesos degenerativos asociados con el
envejecimiento incluyendo las enfermedades del Parkinson y Alzheimer. La vida media
biológica del radical libre es de microsegundos, pero tiene la capacidad de reaccionar con
todo lo que este a su alrededor provocando un gran daño a moléculas, membranas celulares

11
y tejidos (Avello et al. 2006). Un radical libre puede afectar a un millón de moléculas durante
la reacción en cadena.

Durante el metabolismo humano se liberan radicales libres y nuestro organismo tiene la

capacidad de contrarrestar la producción de estos radicales para mantener el equilibrio
homeostático (Coronado et al. 2015), pero también se producen radicales libres por los
contaminantes ambientales (radiación ultravioleta, atmosféricos, de suelos, etc.), el
problema para la salud se produce cuando nuestro organismo tiene que soportar un exceso
de radicales libres durante años, y cuando sobrepasa las defensas antioxidantes de las células
se produce el estrés oxidativo (Avello et al. 2006).

Muchos estudios epidemiológicos sugieren que el consumo de antioxidantes naturales como

los alimentos ricos en polifenoles, frutas frescas y vegetales tienen efectos protectores y su
protección se ha atribuido en parte debido a la presencia de varios componentes como las
vitaminas, flavonoides, antocianinas y otros compuestos polifenolicos incluyendo los
minerales (Becerra et al. 2011). Por tanto, se puede definir un antioxidante como una
sustancia capaz de neutralizar la acción oxidante de los radicales libres mediante la
liberación de electrones en nuestra sangre, los que son captados por los radicales libres
(Avello et al. 2006).

2.3.1 Mecanismos de reacción de los antioxidantes

Según Arias y Rueda (2016), clasifican a los antioxidantes por su mecanismo de acción en:

A. Antioxidantes primarios

Son radicales libres que limitan o inhiben la fase inicial y en el mejor de los casos
interrumpen la etapa de propagación de la autooxidación, ocurre cuando las moléculas de
hidrógenos son separados de una molécula, para formar un radical (R.).

RH R. + H.

El radical R. reacciona con el oxígeno rápidamente, formando un radical peróxido en una

reacción de propagación:

R. + O2 ROO. + H.

12
Durante este proceso, los radicales peróxidos reaccionan con otra molécula para formar un
hidroperóxido y un nuevo radical inestable y este nuevo radical reaccionara con el oxígeno
produciendo otro radical peróxido, resultando así un mecanismo de oxidación localizado
cíclico dado por la reacción siguiente:

ROO. + RH ROOH + R.
R. + O2 ROO. + H.

Estos hidroperóxidos son inestables y se descomponen produciendo radicales y aceleran la

reacción de propagación. La acción de los antioxidantes primarios es donar un átomo de
hidrogeno de su molécula a los radicales peróxidos y oxido, generando así un radical
antioxidante más estable y menos reactivo, el que se estabiliza al unirse a los radicales
peróxidos, óxidos y antioxidantes que presentan un radical libre.

ROO. + AH ROOH + A.
RO. + AH ROH + A.
R. + AH RH + A.
ROO. + A. ROOA
RO. + A. ROA
A. + A. AA

B. Antioxidantes secundarios
Reducen la velocidad de oxidación sin generar la estabilidad de los radicales, pueden
quelar metales prooxidantes y desactivarlos, reponer hidrógenos de los antioxidantes
primarios, descomponer hidroperóxidos a radicales, desactivar el radical oxígeno y
absorber radiación UV. Podemos nombrar a:

- Quelatos: como los metales pesados y de transición que promueven la oxidación

actuando como catalizadores, estos cambian su estado de oxidación para interactuar con
hidroperóxidos o con lípidos insaturados generando radicales libres según:

M (n-1)+ + RH Mn+ + H+ + R.
M (n+1)+ + ROOH M+ + H+ + ROO.
M n+ + ROOH M(n+1)+ + OH- + RO.

13
 Estos quelatos interactúan con los metales y los oxidan, estabilizándolos y reduciendo de
esta manera su potencial oxidativo.

- Eliminadores de oxígenos y agentes reductores: la producción de moléculas de

oxígenos reactivos, durante el proceso de crecimiento celular, como los radicales aniónico
superóxido (O2-) y el radical hidroxilo (OH-), moléculas que no son radicales libres como
el peróxido de hidrogeno y oxígenos singletes(1O2), este tipo de moléculas son oxidadas
y estabilizadas por la acción de los antioxidantes como el ácido L- ascórbico, como se
aprecia en la figura 5.

Figura 5. Representación de la reacción de estabilización de un radical por un

antioxidante
Fuente: Arias y Rueda (2016).

2.3.2. Métodos

La Capacidad antioxidante de las frutas varía dependiendo del contenido de vitamina C,

vitamina E, carotenoides, flavonoides y otros polifenoles (Contreras-Calderón et al. 2011).
Existen muchos métodos para medir la capacidad de neutralización de estos radicales libres,
como los que se definen a continuación.

Método del DPPH: Este método involucra los mecanismos de transferencia de electrones y
de átomos de hidrogeno; este método se fundamenta en la capacidad de los antioxidantes en
reducir al 1,1-difenil-2-picril-hidrazil (DPPH), de color violeta a amarillo; el grado de
reducción del radical es medido espectrofotométricamente a una longitud de onda de 517
nm (Medeiros 2013). Esta actividad antioxidante es expresada como EC 50, cantidad de
antioxidante necesaria para reducir al 50% la concentración inicial del DPPH (Rezende

14
2010). Este método es considerado uno de los más simples, precisos y reproducibles, muy
utilizados para frutas, extractos de plantas y sustancias puras (Medeiros 2013).

Método ABTS: o también llamado capacidad antioxidante para Trolox (TEAC), involucra
el mismo mecanismo de reacción que el de DPPH, y consiste en la capacidad de los
antioxidantes en eliminar el radical ABTS+ que tienen su absorbancia reducida a medida que
reacciona con los antioxidantes. Este método puede ser aplicado para liposolubles e
hidrosolubles, sobre una forma de compuestos puros o muestras de alimentos. A pesar de
que el radical ABTS+ no es tan estable comparado al radical DPPH, la simplicidad y rapidez
del método tiene mucho interés entre los investigadores (Medeiros 2013).

Método FRAP: o capacidad de reducción del ion férrico, se basa en el mecanismo de

transferencia de electrones y evalúa la capacidad de los antioxidantes en reducir el complejo
ferritripiridiltriazina (Fe3+- TPTZ) (2,4,6 – tri (2-piridil) - 1,3,5 - triazina) a ferroso –
tripiridiltriazina (Fe2+-TPTZ), en pH acido. El complejo Fe2+-TPTZ tiene un color azul
intenso y puede ser monitoreado por espectrofotómetro a 595 nm. Este método es
económico, el procedimiento es directo no requiere de equipamientos especializados y los
resultados son reproducibles (Medeiros 2013).

Método ORAC: este método evalúa la capacidad de absorción de radical oxígeno, el cual
consiste en el mecanismo de transferencia de radicales hidrogeno. Inicialmente los radicales
piróxilos son formados a partir de diclorato de 2,2-´azobis (2-amidinopropano) (AAPH) y en
seguida esos radicales interactúan con la fluorescencia formando un producto no
fluorescente, que puede ser determinado por espectrofotometría. Sin embargo, las sustancias
antioxidantes pueden reaccionar con los radicales piróxilos por la transferencia de
hidrogeno, retardando la perdida de fluorescencia. La capacidad antioxidante de una
sustancia es medida por la disminución de la fluorescencia. Los resultados del método
ORAC posee una mayor relevancia para sistemas biológicos por el hecho de que el radical
piróxilo es comúnmente encontrado en estos sistemas. Este método es indicado para
antioxidantes hidrofilicos y lipofilicos (Medeiros 2013).

15
2.3.3 Factores que influyen sobre los antioxidantes

Los compuestos antioxidantes al ser muy sensibles sufren degradaciones muy fácilmente
como: en el caso de la vitamina C, considerado un potente reductor, pierde con facilidad
átomos de hidrogeno y se transforma en ácido dehidroascorbico, que también posee
actividad vitamínica, sin embargo se pierde cuando el anillo lactónico del ácido
dehidroascorbico se hidroliza para dar acido 2,3-dicetogulonico que posteriormente puede
degradarse por descarboxilacion, ni el ácido formado ni sus derivados de la degradación
tienen acción vitamínica. Este ácido también es muy sensible a la oxidación, cuando ésta es
catalizada por iones metálicos, como el cobre y hierro, así como también frente a la luz y el
calor que aceleran el proceso; se tiene otros factores como el pH, la concentración de oxígeno
y la actividad del agua (Fennema et al. 2010).

Reyes (2014) menciona que los polifenoles son compuestos ácidos debido a la naturaleza
del grupo fenólico y del grupo carboxílico, la mayor estabilidad de los polifenoles está a un
pH menor a 5. Con respecto a la temperatura las de refrigeración los mantienen más estables
que las ambientales ya que siempre habrá reacciones entre proteínas y polifenoles, sin
embargo a bajas temperaturas las moléculas poseen movimientos más lentos por lo que estas
reacciones tardaran más en suceder, debido a este comportamiento se asume que la mayor
pérdida de polifenoles se da con la unión de estos con las proteínas, las que pueden precipitar
debido a cambios de pH de la solución, reduciendo así el grupo OH de los polifenoles.

El pardeamiento de frutas y vegetales según Busso (2016), está asociado a la reacción de

oxidación de los compuestos fenólicos hacia la formación de quinonas responsables de
pigmentos amarillos y marrones, catalizadas por la enzima polifenol – oxidasa produciendo
pardeamiento enzimático. Menciona además que la estabilidad de los polifenoles totales
podría asociarse a la formación de compuestos de condensación o polímeros formados que
contribuyen al contenido total de polifenoles y la capacidad antioxidante por lo que el nivel
residual de estos parámetros suele ser relativamente alto lo que produciría que el reactivo de
Folin siga detectándolos, este fenómeno podría explicar la estabilización de los polifenoles
totales durante el almacenamiento.

Los tratamientos térmicos como la pasteurización los que involucran temperaturas inferiores
a 100°C para productos de naturaleza acida (Busso 2016), estas temperaturas provocan un

16
aumento de la velocidad de degradación de los compuestos bioactivo, sin embargo, los
polifenoles totales presentan estabilidad durante los procesos térmicos.

2.4 ZUMO DE FRUTAS

2.4.1 Definición
Según el CODEX (2005), define zumo de frutas o jugo al líquido sin fermentar, pero
fermentable, que se obtiene de la parte comestible de frutas en buen estado, debidamente
maduras y frescas o frutas que se han mantenido en buen estado por procedimientos
adecuados, inclusive por tratamientos de superficie aplicados después de la cosecha de
conformidad con las disposiciones pertinentes de la Comisión del Codex Alimentarius.
También textualmente menciona: “…Los zumos (jugos) se preparan mediante
procedimientos adecuados que mantienen las características físicas, químicas,
organolépticas y nutricionales esenciales de los zumos (jugos) de la fruta de que proceden...y
exprimido directamente por procedimientos de extracción mecánica”

2.4.2 características físico y químicas para la obtención de zumos de fruta

Dentro de las características físicas y químicas que deberían cumplir los zumos de frutas,
según el CODEX (2005), son los siguientes:

- En cuanto a su composición: el valor de ºBrix (solidos solubles) deberá ser la misma al

de la fruta de la cual se está obteniendo el zumo.
- Características organolépticas: los zumos (jugos) y néctares de frutas deberán tener el
color, aroma y sabor característicos del zumo (jugo) del mismo tipo de fruta de la que
proceden. La fruta no deberá retener más agua como resultado de su lavado, tratamiento
con vapor u otras operaciones preparatorias que la que sea tecnológicamente inevitable.
- En cuanto a su autenticidad: es el mantenimiento en el producto de las características
físicas, químicas, organolépticas y nutricionales esenciales de la fruta o frutas de que
proceden.

2.5 PASTEURIZACIÓN

La conservación de los alimentos a través de la inactivación bacteriana data de hace miles

de años, existen métodos que con el paso del tiempo se han ido comprendiendo y

17
perfeccionado, y fue así que desde el siglo pasado lograron controlar todas las variables que
influyen en la inactivación microbiana y se puede garantizar la inocuidad de los alimentos
procesados desde la perspectiva científica.

En el caso de la elaboración de bebidas Villareal et al. (2013) menciona que el principal

desafío es preservar sus nutrientes y hacerlo atractivo desde el punto de vista sensorial y para
lograrlo están los tratamientos térmicos que son los métodos más utilizados para estabilizar
productos porque tienen la capacidad de destruir microorganismos e inactivar enzimas y
dentro de estos tratamientos el más utilizado es la pasteurización.

Según Elías et al. (2014), la pasteurización es un tratamiento térmico aplicado a alimentos

líquidos, con el objetivo de reducir y en algunos casos destruir (Villareal et al. 2013), a los
microorganismos patógenos vegetativos (no esporulados) para que este sea inocuo y alargue
su vida útil, de manera adicional se conseguirá inactivar enzimas evitando así las reacciones
de pardeamiento y otras reacciones de deterioro. Así mismo menciona que la pasteurización
tiene objetivos diferentes dependiendo del alimento al que se le aplique:

- En alimentos poco ácidos; cuando el pH>4,6 cuando se requiere bajar la carga microbiana
y la destrucción de patógenos, manteniendo las características organolépticas, en el caso
de la leche.
- En alimentos ácidos: pH<4,6 aplicado especialmente a zumos de frutos, el objetivo está
enfocado en mantener sus cualidades organolépticas. Los alimentos ácidos están
protegidos por su propia acidez por lo que no son necesarias temperaturas mayores ya
que no es posible bacterias esporuladas.

Para alimentos ácidos no se requiere la aplicación de tratamientos de pasteurización muy

severos, salvo algunas excepciones. La elección del tiempo y temperatura del tratamiento
térmico está condicionada a la preservación de la composición inicial del alimento, como en
el caso de los zumos de frutas impedir la destrucción de las vitaminas, evitando los sabores
a cocidos. Generalmente se puede elegir entre dos grandes sistemas de pasteurización como:

a) Pasteurización a baja temperatura y largo tiempo, para lograr la inactivación del bacilo
de Koch como en el caso de la leche.

18
b) Pasteurización a alta temperatura y corto tiempo, aplicado en zumos de frutas que
aproximadamente estaría dentro de los 77 a 92 °C por un tiempo de 15 a 60 s, lográndose
que las propiedades de los productos se vean poco afectados por el tiempo corto de
permanencia, aunque las temperaturas sean altas.

2.6 SORBATO DE POTASIO

Otra forma de conservación de alimentos es el uso de aditivos como los conservadores

químicos donde su función principal es de inhibir la reproducción, el crecimiento y, por lo
tanto, la actividad de los microorganismos (Schmidt-Hebbel 1990).

Los sorbatos se utilizan muy ampliamente, en una concentración menor del 0.03 % en peso
para inhibir el crecimiento de hongos y levaduras en los alimentos , pero también es utilizado
en derivados cárnicos y quesos, bebidas refrescantes, mermeladas, zumos de frutas y otros
productos. El pH debe ser inferior a 6,5 aumentando la efectividad a medida que el pH
disminuye (Bautista 2013). Para alimentos de pH mayores a 4,5 se le agrega ácidos orgánicos
para bajar el pH, permitiendo la esterilización en condiciones térmicas menos intensas,
evitando así el crecimiento de microorganismos patógenos (Fennema et al. 2010). La
toxicidad de los sorbatos es baja, porque se metaboliza como el resto de ácidos grasos y la
ventaja es que no proporciona olores ni sabores extraños a los alimentos, su solubilidad es
baja (0.16 g/100 mL a 20° C) es mejor utilizar sus sales que son más solubles, su estructura
se muestra en la Figura 5. El sorbato de potasio, es el más usado porque en diferentes
alimentos y en distintas condiciones, demostrándose que controla el crecimiento de
Salmonella, Staphylococcus aureus, Vibrio parahaemoliticus, Clostridium botulinun y otros
a excepción de las bacterias lácticas (Aroca 2010).

Figura 6: Estructura del sorbato de potasio

19
 III.MATERIALES Y MÉTODOS

3.1. LUGAR DE EJECUCIÓN

La investigación se realizó en el Laboratorio de Pulpa y Papel del Área de Transformación

Química de la Madera de la Facultad de Ciencias Forestales y en la Planta Piloto de
Alimentos de la Facultad de Industrias Alimentarias.

3.2. OBTENCION DE LA MATERIA PRIMA

Los frutos de huito se colectaron en el Fundo Caña Brava. Caserío Leoncio Prado distrito de
Yarinacocha, ciudad de Pucallpa. Se obtuvo aproximadamente 200 kilos de fruto maduro.
Los que fueron empacados en cajas de madera para evitar daños físicos y luego se
transportaron hasta la ciudad de Lima.

3.3. MATERIALES UTILIZADOS

- Olla de acero inoxidable de 10 L

- cuchillo
- paños absorbentes para limpieza
- baldes de 20 L
- bolsas plásticas grandes
- cucharones de madera
- jarras de 1L de acero inoxidable
- Termômetro escala de 0 – 120°C marca ISOLAB 76 mm
- Cronometro
- Utensílios (tinas, tazones, etc.).
- Frascos de vidrio con tapa rosca de 300 y 500 mL
- Tabla para picar
- Bandejas de acero inoxidable

20
- Pipeteador automático

3.4. EQUIPOS

- Refinadora con tornillo sin fin Marca Brown, motor con motoreductor 2HP. USA.
- Triturador marca Rietz. Modelo RP-8 115 serial N° RP-710073. Motor 7.5 HP. Santa
Rosa, California. West Chester, Pennsylvania.
- Balanza de 30 Kg (0.01g de precisión) marca ERICSON TCS-A2
- Agitador magnético
- Plancha de arena s/m
- Equipo de Digestión y destilación micro Kjeldahl
- Espectrofotómetro marca γ-gamma
- Refrigeradora marca Myray MRF-200
- Estufa de 0 a 105 °C marca Heraerus modelo KT-500
- Balanza analítica electrónica (precisión 0,1 mg) marca OHAUS, modelo AP-210-0
- pHmeter. Marca Hanna modelo H10798
- Selladora al vacío marca Sinbo
- Colorímetro Lobibond LC 100
- Rota vapor marca Buchi R-3000
- Refractómetro Hand-Held marca ATAGO N-20E, escala de 0-20 %
- Vernier digital marca Vogel
- Penetrometro marca Force Gauge PCE-FM200 com pistom de 7mm.
- Cromatógrafo UHPLC- DAD system, Thermo Fisher Scientific Dionex Ultimate 3000
- Equipo Espectrofotómetro de Emisión atómica acoplado Inductivamente (ICP)

3.5. MÉTODOS DE ANÁLISIS

Se muestreó aproximadamente 50 kilos de frutos para su caracterización en base a las

siguientes evaluaciones:

3.5.1 Fisicoquímicos

a) Peso de los frutos: Se siguieron las recomendaciones de Málaga et al. (2013). A los frutos
muestreados se los peso en una balanza analítica de precisión para registrar el peso de cada
uno de ellos.

21
b) Diámetro y longitud Para la medida se usó un vernier digital y para el procedimiento se
siguieron las recomendaciones de Neta (2014).
c) Color del fruto: Se evaluó la coloración del fruto externo e interno con el uso de un
colorímetro marca Lobibond; siguiendo las recomendaciones de Neta (2014).
d) Humedad: Siguiendo el método N° 934.06 (AOAC 2005).
e) pH: Según el método N° 981.12 (AOAC 2005)
f) ºBrix: De acuerdo al método N° 931.12 (AOAC 2005).
g) Proteína: se siguió la metodología N° 930.52 (AOAC 2005)
h) Grasa: se siguió metodología N° 930.09 (AOAC 2005)
i) Fibra: se siguió metodología N° 962.09 (AOAC 2005)
j) Carbohidratos: por diferencia de los otros compuestos determinados: Recomendado por
Muñoz (2009).
%carbohidratos= 100 - (%proteínas+%grasa+%fibra +%cenizas+%humedad)
k) Cenizas: según metodología N° 940.26 (AOAC 2005)
l) Acidez (%): se siguió la metodología N° 942.15, valoración potenciométrica como
acidez total (AOAC 2005).
m) Vitamina C (mg/100g): según método yodométrico usado por Hernández (2003) y Ruiz
(2011). Anexo 1 (A).
n) Polifenoles totales: Según metodología utilizada por Romero (2014). Descripción del
fundamento y procedimiento en el Anexo 1 (B).
o) Capacidad antioxidante (µmol/g). método ABTS, método descrito por Rojas (2013).
p) Determinación del contenido de Genipina y ácido Geniposidico: por cromatografía de
alta resolución, usada por Chen et al. (2008). Detalle del procedimiento en el Anexo 2.
q) Determinación azúcares reductores: mediante el método de Lane y Eynon (Pearson
1976) Anexo 1 (C).
r) Determinación de minerales: EPA. Method 200.7. 1994. Inductively Coupled Plasma
Atomic Emission Spectrometric Method for trace Element Analysis of water and wastes.

3.5.2. Microbiológicos: se siguió el método la International Commission on

Microbiological Specifications for Foods (2000), para realizar los siguientes
controles:
- Numeración de aerobios termófilos
- Recuento de mohos y levaduras
- Recuento de coliformes totales

22
 - Recuento de coliformes fecales
- Aerobios mesófilos viables

3.5.3. Análisis estadístico

La prueba utilizada para la presente investigación fue la Prueba Controlada Aleatorizada

(RCT) con el fin de evaluar el efecto del proceso y/o tratamiento sobre el grupo de muestras
que lo recibió respecto al que no lo recibió. Para ello se utilizó el programa R v.3.5.2. (R Core
Team 2018. R: A Language and Environment for Statistical Computing. R. Foundation for
Statistical Computing, Vienna, Austria. URL https://www.R-project.org/). Se trabajo con
un nivel de significancia del 5 por ciento, realizándose cinco repeticiones en cada una de los
grupos de ensayos, determinando los promedios y su desviación estándar. Para los efectos
de los tratamientos (conservante y pasteurización) sobre los compuestos bioactivos y su
interacción de realizo análisis de varianza (ANOVA); las diferencias significativas
encontradas fueron analizadas con la prueba de rango múltiple de Tukey, el cual permitió
obtener datos de probabilidad de aceptación o rechazo de la hipótesis, basado en las
recomendaciones de Tarozzi (s/f).

3.6. METODOLOGÍA EXPERIMENTAL

A. Flujo de operaciones

En la Figura 6 se muestra el flujo de operaciones seguido para la obtención del zumo de

huito (Genipa americana L.), el cual se describe a continuación:

23
Figura 7: Flujo de operaciones para la obtención del zumo de huito

24
 Descripción de las operaciones:

- Cosecha, empacado y transporte: el fruto de huito fue cosechado teniendo en cuenta el

color, como indicativo de su madurez subjetiva, cuando este llega a amarillo amarronado,
es indicativo que llegó a su madurez de consumo, entonces fueron cosechados y
acondicionados en cajas de madera de 20 kg de capacidad aproximadamente, siendo
transportados desde la ciudad de Pucallpa a Lima.
- Recepción, selección y clasificación: los frutos fueron recibidos en el laboratorio donde
se controló los pesos y se realizó una inspección general a fin de verificar el estado físico
en que llegaron, luego se seleccionaron separando los frutos con daño físico y clasificados
por su estado de madurez, trabajando con los que reportaron en promedio 16 de ºBrix.
- Lavado: Los frutos se lavaron manualmente con agua potable con el fin de eliminar
residuos sólidos y otras impurezas.
- Desinfectado: los frutos lavados se sumergieron en una solución de hipoclorito de sodio
de 100 ppm de Cloro Libre Residual (CLR) por aproximadamente 5 minutos con la
finalidad de reducir la carga microbiana.
- Pelado: posteriormente los frutos fueron pelados manualmente con el uso de un cuchillo
de acero inoxidable.
- Trozado: Luego fueron cortados en trozos de un centímetro aproximadamente en una
tabla de picar, con el fin de facilitar el prensado. Cabe mencionar que todos los utensilios
utilizados y equipos fueron desinfectados con solución de hipoclorito de sodio de
concentración 100 ppm.
- Prensado: Se procedió a extraer el zumo del fruto picado en una prensa continua de acero
inoxidable marca Brown, el cual está provisto de un tornillo sin fin el que se encarga de
llenar la cámara de compresión con el fin de estrujar al fruto y se libere el zumo.
- Filtrado: Se realizo con una tela de algodón para eliminar impurezas y partículas que se
generaron durante el proceso de prensado.
- Pasteurización: esta operación se realizó en una olla de acero inoxidable, colocándose
el zumo a pasteurizar hasta su temperatura de ebullición y se mantuvo a esa temperatura
por 30s, el objetivo fue inactivar carga microbiana y asegurar la conservación del
producto.
- Envasado: Posteriormente el zumo pasteurizado se envaso en botellas de vidrio de 300
mL, luego fueron enfriados inmediatamente sumergiéndolos en agua fría para lograr un

25
 sellado al vacío; el objetivo es aislar al producto de medio ambiente para evitar su re
contaminación.
- Almacenado: el producto obtenido se rotulo y almaceno a temperatura ambiente (20 °C),
en un espacio limpio y seco, hasta su análisis y evaluación.

B. Esquema experimental.

A continuación, se describen las evaluaciones que se han realizado en cada una de las etapas
del procesamiento del zumo y en la Figura 7 se muestra el esquema experimental para su
obtención.

B.1 Evaluaciones realizadas en materia prima.

- Análisis físicos. El fruto de huito fue sometido a los siguientes análisis: peso de fruto (g),
ancho (cm) y largo (cm), firmeza (Kg), color (L, a* y b*).
- Análisis físico químicos: Humedad, grasa, proteína, contenido mineral, carbohidratos,
ºBrix, acidez (g/100g) expresada como ácido cítrico y pH.
-Compuestos bioactivos: Vitamina C, polifenolicos totales, contenido de genipina y ácido
geniposidico.
- Capacidad antioxidante

B.2 Evaluaciones en zumo extraído

- Balance de masa. Se realizó con la finalidad de determinar el rendimiento, para ello se
consideró al fruto entero como cien por ciento y en cada operación unitaria se fue
descontando al rendimiento las pérdidas que se generaban en el procesamiento. Las
evaluaciones realizadas fueron:
- Compuestos bioactivos: vitamina C, polifenoles totales, contenido de genipina y ácido
geniposidico.
- Capacidad antioxidante (método ABTS)

B.3 Acondicionamiento y pasteurización.

El zumo de huito fue sometido a 4 tratamientos:

1. Sin conservador químico y sin pasteurizar.

2. Con conservador químico y sin pasteuriza.

26
3. Sin conservador químico y pasteurizado.
4. Con conservador químico y pasteurizado.

La finalidad fue determinar el efecto barrera del calor y del conservador químico en la
inactivación de la carga microbiana, por un lado, y por otro determinar si los componentes
del huito inactivan carga microbiana, sin necesidad de someterlo a las barrearas antes
indicadas. Para tal efecto se almacenaron las muestras de zumo a temperatura ambiente
(20°C), realizando un control microbiológico al inicio (tiempo cero), 15 y 30 días; se
evaluaron: mohos, levaduras, coliformes totales, microorganismos aerobios mesófilos
viables. expresados como UFC/mL; en los cuatro tratamientos.

B4. evaluación de los compuestos bioactivos y capacidad antioxidante.

A cada tratamiento se le evaluó en: vitamina C, polifenoles totales, capacidad antioxidante
(ABTS), contenido de genipina y ácido geniposidico, cuyo objetivo fue determinar el efecto
del proceso en la estabilidad de estos componentes.

B.5 Almacenamiento.
La mejor muestra seleccionada en el punto B3 fue almacenada por 90 días, con la finalidad
de determinar su estabilidad del zumo en el tiempo. Se realizó un control microbiológico a
los 75 y 90 días de almacenamiento, de aerobios termófilos, mohos y levaduras, coliformes
totales, coliformes fecales y microorganismos aerobios mesófilos viables.

B.6 Caracterización del producto final

Concluido el almacenaje, el zumo obtenido fue evaluado en su composición química, pH,

acidez titulable, Brix, contenido mineral (calcio, fosforo, hierro, magnesio, potasio, sodio,
zinc, boro y oxido de silicio), vitamina C, polifenoles totales, capacidad antioxidante
(ABTS), genipina y ácido geniposidico.

27
 Materia prima
selección - Clasificación Acondicionamiento y Almacenamiento 90 días
Extracción del zumo Caracterización
Lavado - Desinfectado Pasteurización Temperatura ambiente
pelado y trozado del fruto
Sin Pasteurización
sin conservante
Pasteurizado
Fruto de huito

Sin pasteurización
con conservante

Pasteurizado

Variables
controles

Análisis biométrico
Firmeza Recuento total
Color (externo e interno) Mohos y levaduras
Composición químico proximal Control microbiológico: Recuento de Coliformes Composición químico
pH Mohos y levaduras totales y aerobios proximal
Acidez titulable Rendimiento (%) Recuento de Coliformes totales mesófilos viables °Brix
°Brix y aerobios mesófilos viables Acidez titulable
Compuestos bioactivos: Compuestos bioactivos: pH
Compuestos bioactivos: Vitamina C
Compuestos bioactivos: Vitamina C Vitamina C Polifenoles totales
Vitamina C Polifenoles totales Vitamina C Polifenoles totales Capacidad
Polifenoles totales Capacidad antioxidante Polifenoles totales Capacidad antioxidante antioxidante (ABTS)
Capacidad antioxidante (ABTS) (ABTS) Capacidad antioxidante (ABTS) (ABTS) Genipina
Genipina Genipina Genipina Genipina Ac. Geniposidico
Ácido Geniposidico Ácido geniposidico Ácido geniposidico Ácido geniposidico Contenido mineral
Figura 8: Esquema experimental para obtener el zumo de huito (Genipa americana L.)

28
 IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

4.1 CARACTERIZACIÓN DEL FRUTO DE HUITO

En la Figura 8 se observa que los frutos de huito tienen diferentes formas, ovaladas,
globulares o redondas. En esta investigación se trabajó con todas ellas, tal como se muestra
en la Figura 8c. Al respecto Souza (2007), menciona que el fruto adopta diferentes
características físicas externas debido a las condiciones edafoclimáticas y genética de cada
planta. En el Cuadro 3 se presenta los resultados obtenidos de las características físicas del
fruto.

Figura 9: Frutos de huito: (A) y (B) frutos de Bahía- Brasil (Souza, 2007); (C) Frutos
en estudio, origen Pucallpa – Perú.
 Cuadro 3:Características físicas del fruto in natura de huito.
Fruto
Parámetro
in natura
Peso fruto (g) 249,38±31,56
Ancho (cm) 7,62±3,77
Largo (cm) 9,28±5,69
Firmeza (Kg) 4,17±0,48
Color de la cascara (cielab):
L 41,56±3,35
a* 14,48±2,23
b* 26,20±4,74

Se determino un peso promedio de 249,38 gramos, valor menor al reportado por Hamacek
(2013), pero mayor al encontrado por Lárez et al (2014) y Bentes (2014). Las dimensiones
promedio halladas fueron 7,62 y 9,28 cm para el ancho y largo respectivamente, resultados
cercanos a los descritos por Bentes et al. (2014) y Souza (2007). Navarro et al. (2018)
manifiestan que el tamaño del fruto varía acorde con los diferentes hábitats e influenciado
por las condiciones climáticas.

El color de la cascara del fruto de huito, de acuerdo al método cielab es predominantemente

amarillo opaco, valores similares fueron medidos por Neri-Numa et al. (2019) y Bentes et
al. (2014).

En el Cuadro 4 se muestra la composición química de la pulpa del fruto, observamos de

acuerdo a las coordenadas de color es amarillo grisáceo. Su humedad no es alta, ubicándose
como alimento de humedad baja en comparación a otras frutas y hortalizas (Fennema et al.
2010), el fruto es turgente lo que coincide con la proporción elevada de la pulpa; tiene un
considerable valor en carbohidratos de 13,49; proteínas 4,08 y ceniza de 4,22 por ciento. Es
ácida con un pH de 3,33; una acidez titulable de 1,58 g/100g expresado como ácido cítrico
y un significante contenido de sólidos solubles 16.10%; en general los valores difieren a los
reportados por otros autores; entre ellos Souza et al. (2012) y Morton (1987) que presentan
contenidos de 0,21 y 5,2 por ciento de proteína; Granados (2013), Hamacek et al. (2013),
Souza et al. (2012) y Pacheco et al. (2014) indican 0,5; 0,74; 0,39 y 3,6 por ciento de cenizas,
respectivamente.

30
 Cuadro 4: Composición química proximal de la pulpa de huito

Parámetro Cantidad

Partes del fruto:

Cascara (%) 13,93±0,75
Pulpa (%) 59,08±3,86
Semillas (%) 25,85±3,76
Color de la pulpa (cielab):
L 62,90±3,57
a* 5,34±1,16
b* 25,80±3,20
Características:
pH 3,33 ± 0,58
Brix 16,10 ± 1,67
Acidez (g/100g) (como Ac. Cítrico) 1,58 ± 0,41
Humedad (%) 76,45 ± 0,47
Grasa (%) 0,37± 0,03
Proteína (%) 3,74 ± 0,15
Cenizas (%) 3,62 ± 0,01
Fibra (%) 1,33 ± 0,19
Carbohidratos (%) 13,49 ±0,64
Elaboración propia

El contenido de nutrientes de un fruto depende de la especie, labores culturales y labores

ambientales (Pantástico 1975), asimismo Coronado et al. (2015) indican que el contenido de
nutrientes que presenta un fruto está en función de los aspectos físicos, químicos y biológicos
como la especie, estado de madurez, pre cosecha y post cosecha.

4.2 OBTENCIÓN DEL ZUMO

En la Figura 9 se presenta el balance de masa de la obtención del zumo de huito. Se obtuvo

65,11 por ciento de rendimiento, atribuido a que la pulpa fue trozada y prensada con semillas,
este valor está por encima de los rendimientos obtenidos para naranja 54 por ciento,
mandarina 45 por ciento y pomelo 41 por ciento (Rojas et al. 2009).

31
Figura10: Balance de materia del zumo de huito.

32
4.3 SELECCIÓN DEL MEJOR ZUMO OBTENIDO DESPUÉS DEL
ACONDICIONAMIENTO Y PASTEURIZACIÓN.

En el Cuadro 5 se presentan los resultados de la evaluación microbiológica del zumo

pasteurizado y sin pasteurizar, con y sin adición de conservador químico, a los 0, 15 y 30
días de almacenaje. Las muestras con conservador químico y pasteurizadas no presentaron
crecimiento de coliformes totales, aerobios mesófilos viables, mohos y levaduras; sin
embargo, las muestras no pasteurizadas y sin conservador químico, presentaron desarrollo
de levaduras. Al respecto MINSA/DIGESA (2008) en la norma 071-MINSA-DIGESA V01
establece los criterios microbiológicos de calidad sanitaria e inocuidad para los alimentos y
bebidas de consumo humano para su comercialización, indica que como máximo debe
contener 10 UFC/mL para mohos y levaduras, para coliformes totales no indica un valor
especifico y para aerobios mesófilos 10 UFC/mL como máximo (Anexo 3). Escobar et al.
(2014) menciona que la pasteurización junto con la adición de conservante es un tratamiento
combinado para formar una barrera sinérgica con el objetivo de alargar la vida útil de un
alimento. Amaya (2017) indica que el sorbato de potasio es muy utilizado en bebidas y
zumos de fruta para protegerlos contra la oxidación producida por los microorganismos
siendo su grupo carboxilo altamente reactivo, comportándose como un antioxidante.

El Cuadro 6, se muestran los resultados de las evaluaciones realizadas a los cuatro

tratamientos en capacidad antioxidante y compuestos bioactivos. El análisis estadístico
(anexo 4) determinó que la adición del conservante no tuvo influencia significativa en el
contenido de vitamina C, Polifenoles, Genipina y ácido Geniposidico. Sin embargo, sobre la
medida de la capacidad antioxidante indicó que existe diferencia significativa entre los
grupos tratados con conservante y sin conservante; García (2005) menciona que los agentes
oxidantes atacan al sorbato de potasio en los enlaces olefínicos dando peróxidos, seguido de
su degradación y polimerización, esta sería la razón por la que los valores de la capacidad
antioxidante aumentan ligeramente de un zumo a otro. Kuskosky et al. (2005) menciona que
la capacidad antioxidante está dada por la suma de las capacidades de cada uno de los
componentes presente en el alimento; al añadir el sorbato de potasio contribuyo en la medida
de la capacidad antioxidante de los zumos con respecto a los que no se les añadió. Con
respecto al tratamiento de pasteurización el análisis estadístico, indicó que si existe
diferencia significativa entre los grupos de zumo pasteurizados con los que no fueron
pasteurizados, demostrándose mediante prueba de rango múltiple de Tukey su significancia.

33
 Cuadro 5. Cuadro comparativo del análisis microbiológico de los diferentes tratamientos de los zumos de huito

Sin adición de conservante Con adición de Sorbato de potasio al 0,03%

Control
microbiológico
Zumo sin pasteurización
Zumo sin pasteurización (SPSC) Zumo pasteurizado (PSC) Zumo pasteurizado (PCC)
(SPCC)

Días de
0 días 15 días 30 días 0 días 15 días 30 días 0 días 15 días 30 días 0 días 15 días 30 días
evaluación

Mohos y Negativo Positivo Negativo Negativo Negativo Negativo Positivo Negativo Negativo Negativo
No No
levaduras
evaluado evaluado
(UFC/mL) <1 17x103 <1 <1 <10 <1 11x103 <1 <1 <10

Aerobios Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo
mesófilos viables
(UFC/mL) <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <3

Coliformes Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo
totales*
(UFC/mL) <3 <3 <3 <3 <3 <3 <3 <3 <3 <3 <3 <3

Nota: Los valores <3 y <10 indica ausencia de microorganismos, según MINSA /DIGESA (2008) (anexo 3). *La medida de coliformes totales fue
con el objetivo de verificar el empleo de las buenas prácticas de manufactura en la obtención del zumo de huito. SPSC: sin pasteurizar sin
conservante; PSC: pasteurizado sin conservante; SPCC: sin pasteurizar con conservante y PCC: pasteurizada con conservante.

34
 Cuadro 6:Capacidad antioxidante y Compuestos bioactivos de zumo huito en los cuatro tratamientos

Parámetro de control SPSC PSC SPCC PCC

Vitamina C (g/100 mL) 0,84±0,18ab 0,47±0,02ac 0,87±0,094ab 0,53±0,14ac

Poli fenoles totales (mgEAG/100g de jugo) 130,46±8,09ab 116,20±0,94ac 132,80±1,66ab 115,42±7,26ac

Genipina (mg/100g) 1,91±0,09ab 0,45±0,04ac 1.93±0,04ab 0,41±0,02ac

Ac. Geniposidico (mg/100g) 1,95± 0,05ab 1,68±0,12ac 1,95±0,06ab 1,66±0,14 ac

Capacidad antioxidante (µmol TE/100g) 1997,50±0,07bc 2010,40±0,64bd 1999,30±0,48ac 2013,40±0,07ad

SPSC= sin pasteurización y sin conservador químico, PSC: pasteurizado sin conservante; SPCC: sin pasteurizar con conservante y PCC:
pasteurizada con conservante.

Nota: letras iguales significa que no existe diferencia significativa; letras rojas indica la significancia por el conservante y letras azules indica la
significancia por la pasteurización.

35
Teniendo en cuenta lo antes indicado, de los cuatro tratamientos se seleccionó la muestra
con adición de sorbato de potasio como conservador químico y pasteurizado a temperatura
de ebullición por un tiempo de 30 segundos (PCC), a pesar que el zumo PSC no presento
desarrollo de microorganismos, pero comparando ambos zumos estadísticamente no hay
diferencia significativa entre sus compuestos bioactivos y de acuerdo con lo recomendado
por Villareal et al. (2013) y Elías et al. (2013) la combinación de la pasteurización y
conservante son una buena barrera que alarga la vida útil del producto.

4.4 EFECTO DEL PROCESAMIENTO Y ESTABILIDAD EN LA CAPACIDAD

ANTIOXIDANTE Y COMPUESTOS BIOACTIVOS.

a) CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
En el Cuadro 7 se presenta los resultados de la capacidad antioxidante en cada una de las
tres etapas del procesamiento del zumo de huito.

Cuadro 7: Efecto del procesamiento sobre la Capacidad antioxidante

Proceso Fruto zumo después de la Zumo después de
Parámetro de control in natura extracción la pasteurización

Capacidad antioxidante
(µmol TE/100g) 1782,60±0,05c 1997,50±0,07a 2013,40±0,07b

Nota: letras iguales indica que no existe diferencia significativa.

En la Figura 10, se presenta la variación de la capacidad antioxidante durante el

procesamiento; se aprecia que va aumentando en la extracción y en la pasteurización. El
análisis estadístico ANOVA (anexo 4) indicó la significancia entre los valores hallados para
la materia prima, zumo extraído y zumo pasteurizado; el test de Tukey confirmo que eran
altamente significativos, al respecto Pérez – Jiménez et al. (2007) mencionan que la
capacidad antioxidante de un alimento viene determinada por las interacciones sinérgicas
entre sus diferentes compuestos antioxidantes (polifenoles, vitaminas, carotenoides)
presentes en el, así como el modo de acción concreto de cada uno de ellos; bajo esta premisa
significaría que al encontrarse en un ambiente de estrés como es la ruptura de los tejidos
producidos por el pelado y picado del fruto, inducen a cambios fisiológicos (Pradas – Baena
2015) como aumento de la frecuencia respiratoria, estimulando así otras vías metabólicas en

36
respuesta al daño ejercido para evitar o contrarrestar la oxidación producida por la
exposición al oxigeno del medio y la radiación en forma de luz; como la producción de
polifenoles que se incrementa cuando aumenta el daño o herida y estos entrarían en acción,
sugiere que estos compuestos son los principales contribuyentes a la acción antioxidante,
por eso es que se observa un aumento de la capacidad antioxidante de fruto a zumo extraído.
Lo que sucede durante el procesado es aún muy complejo, porque no solo existe la acción
de las moléculas conocidas si no también están las enzimas como el superóxido dismutasa,
catalasa, entre otras que están presentes dentro de las células, que por efecto del daño por
corte estas se liberan dando como resultado el aumento de la capacidad antioxidante
(Venereo 2002).

Con respecto a la siguiente etapa de la pasteurización donde el zumo está expuesto al calor
(temperatura de ebullición). Faria (2019) hace hincapié que además de la vitamina C, los
polifenoles y los carotenos (no evaluados en esta investigación) no son los únicos
componentes que presentan acción antioxidante. Durante la pasteurización se producen
nuevos compuestos, por acción del calor, resultado de la reacción de Maillard (condensación
de azucares con aminoácidos libres, péptidos o proteínas) lo que permite la formación de
una amplia variedad de compuestos como quinonas, polímeros tipo II, que son los que dan
productos coloreados de alto peso molecular conocidas como melanoidinas, además de
compuestos furanosicos, que dan el color caramelo, entre otros (Yanagimoto et al. 2002 y
Yilmaz et al. 2005); considerados antioxidantes no nutrientes lo que finalmente contribuirá
o contrarrestará la perdida de los componentes antioxidantes principales e importantes
(Nicoli et al.1997). Similares resultados obtuvieron Cano et al. (2004), en zumo de naranja
y percibió que durante la pasteurización se liberaban componentes que acentuaban las
propiedades antioxidantes del producto. Miranda et al. (2007) mencionan que a medida que
aumenten la concentración de los productos de Maillard la capacidad antioxidante
aumentara.

37
 2050
1997.5±0,07
2000
2013.4±0,07
1950

1900

1850

1800

1750 1782.6±0,05
1700

1650
FRUTO ZUMO EXTRAIDO ZUMO PASTEURIZADO

Figura 11: Variación de la Capacidad Antioxidante (µmolTE/100g)

b. Compuestos bioactivos
En el Cuadro 8 se presenta los resultados de la variación de los compuestos bioactivos en
cada una de las tres etapas del procesamiento del zumo de huito.

Cuadro 8: Efecto del procesamiento sobre los Compuestos Bioactivos.

Proceso Fruto zumo después de la Zumo después de
Parámetro de control in natura extracción la pasteurización

Vitamina C (g/100 mL) 1,34±0,05a 0,84±0,18b 0,53±0,14c

Poli fenoles totales 219,18±23,60a 130,46±8,09b 115,42±7,26b

(mgEAG/100g de jugo)
Genipina (mg/100g) 0,72±0,05b 1,91±0,09a 0,41±0,02c

Ac.Geniposidico 1,64 ±0,25b 1,95 ± 0,05a 1,66 ±0,14b

(mg/100g)

Nota: letras iguales indica que no existe diferencia significativa.

b.1. Vitamina C
El contenido de vitamina C en la materia prima es muy bajo, y es afectado por el
procesamiento, ocasionando una pérdida considerable; la evaluación estadística (anexo 4)
con un F de 48,82 (p-valor= 1,71x10-6), ratifica la diferencia significativa por efecto del proceso
y el test de Tukey confirma la significancia; en la Figura 11 se aprecia una clara reducción

38
después de la extracción, debido probablemente a la exposición del jugo al oxigeno del
ambiente durante la extracción lo que provocaría su perdida por oxidación (Avalo et al. 2009
y Xammar et al. 2006); la pasteurización, a pesar que fue por corto tiempo (30s) afectó el
contenido de vitamina C disminuyendo notablemente con respecto al contenido inicial (de
la fruta in natura), Villareal et al. (2013) menciona que la retención del ácido ascórbico es
mayor cuanto menor es el tratamiento térmico, ya sea en tiempo y temperatura. Así mismo,
Cardero et al. (2009) menciona que la vitamina C es poco estable y muy sensible a la
temperatura y al almacenamiento, por lo indicado, se considera un parámetro tecnológico
medido durante el procesado de alimentos (Melo et al. 2018).

1.6
1.4
1.34±0,05
1.2
1
0.8 0.84±0,18
0.6
0.53±0,14
0.4
0.2
0
FRUTO ZUMO EXTRAIDO ZUMO PASTEURIZADO

Figura 12: Variación del contenido de Vitamina C (g/100 mL)

b.2. Polifenoles totales

En la Figura 12 se aprecia el efecto del procesamiento sobre el contenido de polifenoles, los
que variaron en 40 por ciento por efecto de la extracción y 12 por ciento por efecto del
tratamiento térmico. Estadísticamente (anexo 4) se encontró que el proceso de extracción
afecta la concentración de polifenoles totales en el fruto y en el zumo con tratamiento
térmico, pero no influye entre la extracción y pasteurización ya que estadísticamente no hay
diferencia significativa a pesar de que numéricamente se note un contenido menor después
del tratamiento térmico y el test de Tukey ratifica lo antes indicado. Al respecto Coronado
et al. (2015), mencionan que el pelado y cortado son procedimientos que incrementan la
actividad metabólica del producto, afectando principalmente sobre los compuestos
fitoquímicos presentes y consecuentemente la alteración de sus propiedades. Kumar et al.
(2017) indican que la degradación o pérdida de estos compuestos polifenólicos como los

39
flavonoides, puede deberse a los diferentes grados de sensibilidad al tratamiento térmico, el
cual estaría en función de su estructura, a la presencia o ausencia de oxígeno, por lo tanto,
cuando el fruto se expuso al oxígeno en el momento del picado y de la extracción, estos
compuestos posiblemente se vean afectados. Neta (2014) afirma que los polifenoles se
degradan por calentamiento; los procesos térmicos tienen una gran influencia sobre la
disponibilidad de los polifenoles presentes en alimentos y está directamente relacionado por
la magnitud y duración de la exposición al calor como ocurre en la pasteurización, en esta
investigación el tiempo de pasteurización fue de 30 segundos, y uno de los efectos fue el
oscurecimiento que presenta el zumo producido posiblemente por la degradación de los
fenoles por la acción de la enzima polifenol oxidasa (Coronado et al. 2015).

250
219.18±23,60

200

150

100 130.46±8,09
115.42±7,26

50

0
FRUTO ZUMO EXTRAIDO ZUMO PASTEURIZADO

Figura 13: Variación del contenido de Polifenoles totales (mg EAG/100g)

b.3. Genipina y ácido Geniposidico

En el Figura 13, se muestran las concentraciones de genipina y ácido geniposido; Los
resultados obtenidos en cada una de las etapas del procesamiento muestran una reducción
del contenido de genipina. La evaluación estadística (anexo 4) confirma la significancia.

Comparando el contenido de genipina en el fruto in natura con el zumo recién extraído se

observa que aumenta, posiblemente debido a la extrusión que es sometido el fruto rompiendo
los tejidos favoreciendo así la liberación de este metabolito, ya que la acción mecánica por
presión produce la rotura celular y la extracción del zumo (CEUPE s/f) y además se ve
favorecida por la energía mecánica que es convertida en calor, debido a la fricción entre el
producto cuando es transportada dentro de la cámara con gran esfuerzo cortante que produce

40
el tornillo (Salas 2003) . En la pasteurización, el calor ocasiona la pérdida o degradación de
este metabolito en un 43 por ciento; Jiménez - Quesada et al. (2017) indican que este
compuesto se degrada cuando son extraídos y al tratamiento térmico empleado. Faria (2019)
indica que estos compuestos tienen baja estabilidad al calor, siendo muy susceptibles a
degradaciones por oxidaciones cuando son sometidos a procesos térmicos.

El valor encontrado de 0,72 mg/100mg para el fruto in natura de genipina, es muy bajo
comparado con 5.03mg/g, reportados por Neri-Numa et al. (2019), la variación posiblemente
se debe a las diferentes condiciones climáticas y geográficas donde se desarrolla el fruto
(Navarro et al. 2018). El valor obtenido en zumo aumenta en la extracción, posiblemente
debido a que cuando el fruto es sometido a una extrusión donde se rompen los tejidos
provocando una liberación de estos metabolitos. Neri – Numa et al. (2019) indican que la
genipina se concentra en el endocarpio, zona de las semillas, del fruto inmaduro y que
durante la maduración disminuye considerablemente, al glicosilarse. Teniendo en cuenta, las
recomendaciones de los investigadores antes indicados, se optó por procesar el fruto con
endocarpio y mesocarpio juntos, a fin de obtener la mayor concentración de genipina en el
zumo.

2.5 Genipina

1,95±0,05 Ac. Geniposido

2

1,91±0,09
1.5 1,66±0,14
1,64±0,25

0.5 0,72±0,05
0,41±0,02
0
FRUTO ZUMO EXTRAIDO ZUMO PASTEURIZADO

Figura 14: Variación del Contenido de Genipina (azul) y Ac. Geniposido (verde)
(mg/100g)

Con respecto al ácido geniposidico, el ANOVA y el test de Tukey (anexo 4), indican que al
comparar materia prima (fruto), con el zumo extraído, determinó diferencia significativa con

41
respecto al zumo recién extraído, sin embargo, entre el fruto y el zumo pasteurizado no existe
diferencia estadística significativa.

Neri – Numa et al. (2019) indican que este acido se concentra en el endocarpio (parte gomosa
que envuelve a las semillas), que aumenta conforme el fruto va madurando dado que la
genipina presente en concentraciones altas en fruto verde se glicosila y se va transformando
en ácido geniposido y en geniposido. Los valores obtenidos difieren de los encontrados 25,04
mg/g de ácido geniposido por Neri – Nume et al. (2020), en fruto maduro. Faria (2019)
reporta una pérdida de ácido geniposidico del 77% por efecto de la temperatura (100°C) en
muestras de extracto secadas por spray dryer.

4.5 ALMACENAMIENTO DEL ZUMO A TEMPERATURA AMBIENTE

En el Cuadro 9 se muestran los resultados de la evaluación microbiológica de la muestra de

huito que obtuvo mejores resultados en la estabilización y pasteurización y que fuera
almacenada por 90 días.

Cuadro 9: Control microbiológico del zumo de huito hasta los 90 días de

almacenamiento a temperatura ambiente.

Días de almacenamiento
Control microbiológico
0 30 75 90

Aerobios termófilos (UFC/mL) <10 <10 <10 <10

Mohos y levaduras (UFC/mL) <10 <10 <10 <10

Coliformes totales (UFC/mL) <3 <3 <3 <3

Coliformes fecales (UFC/mL) <3 <3 <3 <3

Aerobios mesófilos viables (UFC/mL) <10 <10 <10 <10

Nota: Los valores <3 y <10 indican ausencia de microorganismos en ensayo

Elaboración propia

De acuerdo a los resultados observados, el zumo es estable en el tiempo, debido a que los
tratamientos previos utilizados en su obtención fueron llevados adecuadamente, aplicando
las buenas prácticas de manufactura. La combinación del conservador químico y la

42
pasteurización además de su pH acido, hicieron una barrera perfecta de conservación, para
que no desarrolle microorganismos y no se altere la calidad del zumo (Guevara et al. 2008).
Respecto al sorbato de potasio, este conservador químico actúa mejor a pH ácidos (2,3 – 3,7)
y no generara compuestos tóxicos durante el almacenamiento (Aguilar 2012).

4.6 CARACTERIZACIÓN DEL PRODUCTO FINAL DESPUÉS DEL

ALMACENAJE

En el Cuadro 10 se muestran los resultados de la composición química del zumo de Genipa

americana L, después de transcurrir 90 días de almacenaje. Se observa que el zumo es alto
en acidez, mantiene el inicial ºBrix y su bajo en pH, propiedades que contribuyen como
barreras en su conservación, evitando el crecimiento microbiano; con respecto al contenido
de azucares reductores es característico el elevado porcentaje en frutos carnosos (Souza 2007
y Hamacek et. al. 2013). Tiene un elevado contenido de Polifenoles Totales (mgEAG/100g
de jugo) y Capacidad antioxidante (µmol TE/100g) los que le dan la propiedad de neutralizar
a los radicales libres, características que lo ubican como un producto nutracéutico,
recomendado como antioxidante natural (Faria, et al. 2019).

Así mismo contiene Genipina (mg/100mL) y Ácido Geniposidico (mg/100mL)

pertenecientes al grupo de los iridoides que poseen características funcionales como
analgésico, antigonorreico, contra el asma (Faria, 2019); poseen actividad antipromotora de
tumores, antiinflamatorio, mejora la capacidad de retención de la memoria de corto plazo, al
respecto Yamazaki y Chiba (2007) sugieren que genipina induce neuritogénesis, es decir,
genera neuronas nuevas a partir de células madre. (Bentes et al. 2014) mencionan que
genipina tiene propiedades analgésicas, con actividad fibrolitica, neuroprotectora,
cardiovascular, antibacteriana, antiviral y actividad hipoglucémica (Moura 2016, Silva 2019
y Alves 2017). El ácido geniposidico presenta una propiedad purgativa se utiliza en el
tratamiento de enfermedades hepáticas (Nathia – Neves et al. 2018), la genipina ofrece una
hepatoproteccion contra el daño provocado por la acción antioxidante y antiapoptoticas de
los lipopolisacáridos y D-galactosamina (Kim et al. 2010). Según Drohse y Molgaard (2000),
indican que el interés en los iridoides es por la presencia de su centro quiral en su molécula
los que son precursores potenciales en la elaboración de medicamentos contra el HIV y el
cáncer.

43
 Cuadro 10:Composición físico química del zumo de Genipa americana L.

Parámetro Cantidad

Humedad (%) 82,80

Grasa (%) 2,78±0,78
Proteína (%) 0,187±0,02
Cenizas (%) 0,603±0,08
Fibra (%) 0,00
Carbohidratos (%) 8,56
Acidez (g/100mL) (como Ac. Cítrico) 1,64±0,36
Brix (%) 16,24
pH 3,30
Componentes bioactivos:
Vitamina C (g/100 mL) 0,52±0,14
Azucares reductores (%) 6,94±0,24
Polifenoles Totales (mg EAG/100g de jugo) 115,24±7,20
Capacidad antioxidante (µmol TE/100g) 2013,70±0,07
Genipina (mg/100 mL) 0,43±0,02
Ácido Geniposidico (mg/100 mL) 1,67±0,15
Elaboración propia

En el Cuadro 11 se muestra el resultado del análisis mineral del zumo obtenido, presentando
siete de los 9 minerales esenciales asignados en las referencias de ingesta dietética (Fennema
et al. 2008) a saber: calcio, fosforo, magnesio, hierro, zinc, yodo, cobre, manganeso y cromo;
llamados así debido a su importancia ya que intervienen en ciertas reacciones enzimáticas
que ocurren durante el metabolismo humano. Como vemos el huito presenta contenidos altos
en calcio, fosforo, hierro, magnesio y potasio comparado con los reportados por Souza
(2007), Souza et al. (2012) y Muñoz et al. (2009). De acuerdo a los requerimientos diarios
de minerales fijados por la OMS1, el zumo de huito cumple con los minerales boro y potasio
al beber una botella de 300 mL. Si bien las cantidades de los otros minerales no alcanzan a
las necesidades diarias estos se complementarían con una dieta variada en frutas y verduras.

44
 Cuadro 11:Composición mineral del zumo de Genipa americana L.
Souza (2007) Souza Muñoz (2009) Requerimientos
Elementos Cantidad
(mg/Kg) (2012) (mg/Kg) según la OMS1
minerales (mg/Kg)
(mg/Kg) mg/día
Calcio 96,37 56,73 13,23 - 1300-1000
Fosforo 216,14 17,12 0,59 - 800-1000
Hierro 4,18 0,35 0,22 0,56 5-30
Magnesio 260,61 38,55 8,17 17,98 150-350
Potasio 3674,00 235,27 92,55 - 750-2000
Sodio 25,57 - - - 2000
Zinc 0,68 0,05 - - 15
Oxido de silicio 9,91 - - - 15-30
Boro 6,66 - - - 2-6
Fuente: Souza (2007); Souza (2012); Muñoz (2009)

La OMS1, destaca la importancia bajar el consumo de sodio en niños, porque puede elevarles
la tensión arterial, pero debe aumentarse la cantidad de potasio que es el regulador de la
tensión arterial y así reducir el riesgo de enfermedades cardiovasculares en adultos, en estos
casos el zumo es una buena opción, así como para controlar la ictericia y anemia por el
contenido de hierro presente (Faria 2019).

En general el consumo de minerales es importante para mantener el equilibrio de nuestro

cuerpo, como el calcio que constituye nuestra estructura ósea, otros contribuyen con la
formación de cartílagos y su posterior calcificación como el silicio y boro (Calomme et al.
1998 y Sosa- Baldivia et al. 2016), la importancia del boro es su participación en la síntesis
de la vitamina D, el fosforo contribuye entre otras funciones a mantener el pH tampón de
nuestro cuerpo (Primo 1997). El magnesio es necesario para la funcionalidad de muchas
enzimas; el zinc es un cofactor de muchas enzimas y es regulador de la expresión genética;
el hierro participa en el transporte de oxígeno y forma parte de la molécula de la hemo y
mioglobina participando en el metabolismo respiratorio energético (Primo 1997).

De acuerdo a la caracterización final del zumo de huito queda claro que puede ser
considerado un alimento nutraceútico por la presencia de sus componentes bioactivos y su
aporte en minerales presentes en el.

1
OMS: https://www.who.int/elena/nutrient/es/

45
 V.
W.
X.
V. CONCLUSIONES

- Se caracterizó física y químicamente al fruto de huito, encontrándose diferentes tamaños

y formas (ovaladas y globulares), resultado de esto se obtuvo una variabilidad en sus
pesos, la pulpa representa el mayor porcentaje siendo esta de color amarillo grisáceo
con alto contenido en solidos disueltos.; mientras que la cascara tiene un color amarillo
opaco.
- El procesamiento tuvo una influencia negativa sobre la vitamina C, representando una
pérdida del 40 por ciento aproximadamente durante las etapas de obtención del zumo,
estos resultados confirmarían la sensibilidad de esta vitamina durante la preparación de
la materia prima antes, durante y después de la extracción del zumo.
- Los compuestos polifenólicos también presentaron una alta sensibilidad al
procesamiento evidenciándose una perdida considerable, durante la preparación de la
materia prima lo que incrementaron su actividad metabólica provocando su
degradación.
- Los iridoides como la genipina y ácido geniposidico evaluados, fueron sensibles al
proceso de pasteurización confirmándose que estos compuestos tienen baja estabilidad
al calor.
- La capacidad antioxidante, sin embargo, tuvo un incremento durante el procesamiento
observándose un efecto positivo, la acción mecánica de corte y picado del fruto ha
liberado muchos otros compuestos con acción antioxidante y el proceso de
pasteurización genero otros productos que contribuyen a su capacidad antioxidante.
- La adición de sorbato de potasio como conservante, no tuvo influencia significativa
sobre los componentes bioactivos, pero junto con la pasteurización ejercieron una
potente barrera en la estabilidad del zumo durante el tiempo de almacenamiento.
- Finalmente, el zumo de huito obtenido y seleccionado fue caracterizado, cumpliendo así
los requerimientos del CODEX; este producto cuenta con alto valor en su capacidad
antioxidante, presenta buen contenido mineral es rico en potasio, fosforo y magnesio,
de acuerdo a estas características podría ser considerado un alimento nutraceútico y
funcional.

46
 VI. RECOMENDACIONES

- Realizar investigaciones sobre almacenamiento del zumo de huito a diferentes

temperaturas.
- Determinar el tiempo de vida útil del zumo.
- Investigar las propiedades del residuo obtenido después de la extracción.
- Elaboración de mezclas con zumos de otras frutas para la mejora del sabor
conjuntamente con una evaluación sensorial.
- Evaluar el efecto de la concentración del zumo en las propiedades de conservación
del producto.
- Profundizar en el estudio de otros metabolitos presentes en el fruto de huito.

47
 VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Aguilar M.J. 2012. Métodos de conservación de alimentos. Red del tercer milenio. Primera
edición. MX. Recuperado de:
http://www.aliat.org.mx/BibliotecasDigitales/economico_administrativo/Metodos_de_cons
ervacion_de_alimentos.pdfg

Álvarez, O.G. 2013. Extracción, Caracterización y valoración de genipina a partir del fruto
de Genipa americana. (tesis de pregrado). Universidad ICESI. Cali. CO. Recuperado de:
https://repository.icesi.edu.co/biblioteca_digital/bitstream/10906/76708/1/extraccion_carac
terizacion_valoracion.pdf

Alves, J.S.F., Medeiros L.A. de, Fernándes - Pedrosa M. de F., Araújo R. M. y Zucolotto
S.M. 2017. Iridoids from leaf extract of Genipa americana. Short communication. Revista
Brasileira de Farmacognosia. Volume 27, Issue 5, September–October. Pages 641-644.
https://doi.org/10.1016/j.bjp.2017.03.006

Amaya, A.J.L. 2017. Antimicrobianos Quimicos en la Industria Alimentaria. (tesis de

pregrado). Universidad Nacional de Trujillo. Recuperado de:
http://dspace.unitru.edu.pe/bitstream/handle/UNITRU/10014/Amaya%20Arana%20Jackiel
ine%20Lorena.pdf?sequence=1&isAllowed=y

AOAC. Association of Offical Analytical Chemistry. 2005. Official Methods of Analysis.

Patricia Cunniff. Virginia. USA.

Arias, V.A.J., y Rueda, L.G. 2016. Cinética de la reacción de los radicales libres con
antioxidantes naturales, fenoles. Trabajo de aplicación. Universidad Industrial de Santander.
Co. Recuperado de: DOI: 10.13140/RG.2.2.13622.09283

48
Aroca, P.E.S. 2010. Estudio del sorbato de potasio en la vida útil de mermelada de
zanahoria (Daucus carota) con adición de coco (Cocos nucifera). (tesis de pregrado).
Universidad Técnica de Ambato. Recuperado de:
http://repositorio.uta.edu.ec/jspui/handle/123456789/863

Avalo, B., Pérez, S. y Tovar, M. 2009. Caracterización preliminar del proceso de

concentración del jugo natural de naranja en un evaporador de tres efectos. Revista
Interciencia. INCI. V.34, n.11. Caracas. Recuperado de:
http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0378-18442009001100007

Avello, M. y Suwalsky M. 2006, Ap. 02. Radicales Libres, antioxidantes naturales y

mecanismos de protección. Revista Atenea. N°494. Recuperado de:
http://dx.doi.org/10.4067/S0718-04622006000200010 .

Bautista, H.K.M. 2013. Elaboración de una bebida nutritiva utilizando: spirulina (Spirulina
platensis), y mora (Morus nigra), con tres concentraciones y dos tipos de conservantes
(benzoato de sodio y sorbato de potasio). Universidad Técnica de Cotopaxi. EC. (Tesis de
pregrado). Recuperado de: http://repositorio.utc.edu.ec/bitstream/27000/2669/1/T-UTC-
00205.pdf

Bentes, de S.A. y Marcadante Z.A. 2014, nov. 05. Influence of the stage of ripeness on the
composition of iridoids and phenolic compounds in Genipap (Genipa americana L.).
Journal Agricultural and Food Chemistry. Recuperado de:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25323434

Beserra, A.M.M., Machado de S.P.H., Campos A.A.M., Matias do P.G., Carvalho M. do

C.E., Arraes M.G. y Gomes L.T.L. 2011, ago. 07. Bioactive compounds and antioxidant
activity of fresh exotic fruit from northeastern Brazil. Food Research International. Pages
2155-2159. Recuperado de: https://doi.org/10.1016/j.foodres.2011.03.051

Bruneton, J. 2001. Farmacognosia. Fitoquímica. Plantas medicinales. Segunda Edición. Ed.

Acribia S.A. Zaragoza. ES.1099 págs.

49
Busso, C.C.I. 2016. Estabilidad de polifenoles y Caracterización físico-química y sensorial
en pulpas de frutos rojos en relación a los procesos tecnológicos para la obtención de
alimentos e ingredientes alimenticios. Recuperado de:
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgrauba/index/assoc/HWA_1425.dir/1425.
PDF. DOI:10.1021/jf503378k

Calomme M.R., Cos P., Vingerhoets R., Van Hoorebeke C. y Vanden Berghe D.A. 1998
Sociedad Americana para la nutrición parenteral y enteral.Recuperado de:
http://biosilecuador.com/PDF/Estudio_Clinico_Biosil_4_Estudio_Comparativo_de_BioDis
ponibilidad.pdf

Cano, A. y Arnao, M.B. 2004. Actividad antioxidante hidrofilica y lipofilica y contenido en

vitamina C de zumos de naranja comerciales; relación con sus características organolépticas.
Revista de Ciencia Tecnología Alimentaria. Pág. 185-189. Recuperado de:
https://doi.org/10.1080/11358120409487759

Cardero, R.Y., Sarmiento, G.R. y Selva, C.A. 2009. Importancia del consumo de hierro y
vitamina C para la prevención de anemia ferropénica. MEDISAN. v.13 n.6. Artículo de
Revisión. Recuperado de: http://bvs.sld.cu/revistas/san/vol13_6_09/san14609.pdf

CATIE. 1999. Genipa americana Linnaeus. Nota técnica sobre manejo de semillas forestales
N°72. Proyecto PROSEFOR. Centro Agronómico de Investigación y Enseñanza, Costa Rica.
2p.

CEUPE. Centro Europeo de Postgrado. ¿Qué es la separación mecánica de los alimentos?

Blog. ES. Recuperado de: https://www.ceupe.com/blog/que-es-la-separacion-mecanica-de-
los-alimentos.html

Chen Ch.; Han F.; Zhang Y.; Lu J. y Shi Y. 2008. Simultaneous determination of geniposide
and its metabolites genipin and genipinine in culture of Aspergillus niger by HPLC.
Biomedical chromatography: BMC. 22. 753-7. Recuperado de: DOI: 10.1002/bmc.993.

CODEX. 2005. Norma General del CODEX para zumos (jugos) y néctares de frutas (CODEX
STAN 247-2005). Recuperado de: http://www.fao.org/fao-who-codexalimentarius/sh-

50
proxy/en/?lnk=1&url=https%253A%252F%252Fworkspace.fao.org%252Fsites%252Fcod
ex%252FStandards%252FCODEX%2BSTAN%2B247-2005%252FCXS_247s.pdf

Contreras – Calderón, J., Calderon-Jaimes, L., Guerra- Hernández, E. y García- Villanova

B. 2011 de ago. Antioxidant capacity, phenolic content and vitamin C in pulp, peel and seed
from 24 exotic fruits from Colombia. Food Research International. Pages 2047-2053.
Recuperado de: https://doi.org/10.1016/j.foodres.2010.11.003

Coronado, M.H., Vega y Leon, S., Gutiérrez, T.R., Vázquez, F.M. y Radilla, V.C. 2015,
junio. Antioxidantes: Perspectiva actual para la salud humana. Revista chilena de Nutrición.
Recuperado de: https://scielo.conicyt.cl/pdf/rchnut/v42n2/art14.pdf

Drohse, H.B. y Molgaard P. 2000. HPLC analysis of the seasonal and diurnal variation of
iridoids in cultivars of Antirrhinum majus. Biochemical Systematics and Ecology. 28:949-
962. Recuperado de: https://doi.org/10.1016/S0305-1978(00)00045-4

Dussossoy, E., Brat P., Bony, E., Boudard, F., Poucheret, P., Mertz, C., Giaimis, J. y Michel,
A. 2011, Ene. 07. Characterization, anti-oxidative and anti- inflammatory effects of Costa
Rica noni juice (Morinda citrifolia L.). Journal of Ethnopharmacology. Recuperado de: doi:
10.1016/j.jep.2010.08.063

Elías, P.C., García T.S.M. y Morales S.E. 2013. Manual de tratamiento térmico de
alimentos. Fondo Editorial de la UNALM.

Escamilla, J.C.I, Cuevas, M.E.Y. y Guevara, F.J. 2009. Flavonoides y sus acciones
antioxidantes. (en línea). Revista Facultad de medicina de la UNAM. Recuperado de:
http://www.ejournal.unam.mx/rfm/no52-2/RFM052000207.pdf

Escobar, H.A., Márquez C.C.J., Restrepo F.C. E. y Pérez C.L.J. 2014. Aplicación de
Tecnología de Barreras para la Conservación de Mezclas de Vegetales Mínimamente
Procesados. Revista Facultad Nacional de Agronomía. Medellín 67(1): 7237-7245. Doi:
http://dx.doi.org/10.15446/rfnam.v67n1.42652

51
Faria, dos S.T. 2019. Avaliação do efeito do proceso de secagem do extrato de jenipapo
(Genipa americana L.). (tesis de pregrado). Universidad Federal de Uberlandia. BR.
Recuperado de:
http://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/24514/5/Avalia%C3%A7%C3%A3oEfeitoPr
ocesso.pdf

Faria, dos S.T., Schmidt, R.C.V, Reis, M.H.M. y Cardoso, L.V. 2019. Avaliação da extração
de compostos fenólicos da polpa e casca do jenipapo (Genipa americana L.). Editorial
Atena. Capítulo 11. Doi: 10.2253. Recuperado de: Atenaeditora.com.br/post-artigo/12164.

Fennema, R.O; Damodaran, S. y Parkin, K.L. (2010). Química de los alimentos. Eds. S
Damodaran; KL Parkin; Fennema RO. 3 ed. Zaragoza. ES. ACRIBIA S.A. 1154p.

Granados, M.J.F. 2013. Determinación de parámetros técnicos para elaborar Genipa

ameircana L. (huito) en almibar. (tesis de pregrado). Universidad Nacional de la Amazonia
Peruana. Iquitos – PE. Recuperado de:
http://repositorio.unapiquitos.edu.pe/handle/UNAP/2448

García, M.E., Fernández, S.I. y Fuentes, L.A. s/f. Determinación de polifenoles totales por
el método Folin- Ciocalteu. Departamento de Tecnología de Alimentos. Universidad
Politécnica de Valencia. Recuperado de:
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/52056/Garcia%20Mart%C3%ADnez%20et%
20al.pdf?sequence=1#:~:text=El%20ensayo%20Folin%2DCiocalteu%20se,determinada%
20espectrofotom%C3%A9tricamente%20a%20765%20nm.

García, G.R.M. 2005. Agentes bactericidas/bacteriostáticos a partir de sorbato de potasio,

carvacrol y timol. (tesis maestría). Universidad de las Américas Puebla. MX. Recuperado
de: http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/mca/garcia_g_rm/

Guevara P.A. y Cancino Ch.K. 2008. Métodos apropiados para inactivar o controlar el
deterioro microbiológico en alimentos. Recuperado de:
http://www.lamolina.edu.pe/postgrado/pmdas/cursos/dpactl/lecturas/Separata%20Metodos

52
%20apropiados%20para%20evitar%20el%20deterioro%20microbiologico%20en%20alim
entos.pdf

Hamacek, F.R; Moreira, A.V.B; Martino, D.H.S; Ribeiro, R.S.M. y Pinheiro-Sant’an, H.M.
2013. Valor nutricional, caracterização física e Físico-química de jenipapo (genipa
americana l.) Do Cerrado de Minas Gerais. Brazilian Journal Food Nutrição Araraquara.
Recuperado de: http://serv-
bib.fcfar.unesp.br/seer/index.php/alimentos/article/viewFile/73/2004

Hernández, V.R.M. y Pineda, C.R.C. 2003. Estudio comparativo de la cuantificación del

ácido ascórbico (vitamina C) en jugo de naranja utilizando el método de titulación
yodometrica a micro escala y yodimetrica a macro escala. (tesis de pregrado). Universidad
de El Salvador. SV. Recuperado de: http://ri.ues.edu.sv/5680/1/10126089.pdf

Jiménez-Quesada, K. y Garro-Monge, G. 2017 enero - marzo. Establecimiento de

callogénesis somática en Plantago major e Identificación de compuestos con actividad
biológica. Tecnología en Marcha. Recuperado de:
https://www.scielo.sa.cr/pdf/tem/v30n1/0379-3982-tem-30-01-00038.pdf

Kim SJ, Kim JK, Lee DU, Kwak JH, Lee SM. 2010. Genipin protects lipopolysaccharide-
induced apoptotic liver damage in D-galactosamine-sensitized mice. Eur J Pharmacol.
2010;635(1-3):188-193. Recuperado de: doi: 10.1016/j.ejphar.2010.03.007

Kumar, R, Vijayalakshmi, S. y Nadanasabapathi, S. 2017. Health Benefits of Quercetin.

Defense Life Science Journal. Pag. 142-147. Recuperado de:
http://publications.drdo.gov.in/ojs/index.php/dlsj/article/view/11359/5869

Kuskoski, EM; Asuero, AG; Troncoso, A.M.; Mancini-Filho, J. y Fett, R. 2005. Aplicación
de diversos métodos químicos para determinar actividad antioxidante en pulpa de frutos.
Ciência y Tecnologia de Alimentos. Campinas 25(4): 726-732. Recuperado de:
http://www.scielo.br/pdf/cta/v25n4/27642.pdf

53
Larez, C.V; Rivas, A. y Santos, O.I. 2014. Obtención de Genipina a partir de frutos de caruto
(Genipa americana L.) del llano venezolano. Revista avances en química. Recuperado de:
www.saber.ula.ve/avancesenquimica.

Lima, E. G., Tan, A. R., Tai, T., Marra, K. G., Defail, A., Ateshian, G. A. y Hung, C. T.
2009. Genipin enhances the mechanical properties of tissue-engineered cartilage and
protects against inflammatory degradation when used as a medium supplement. Journal of
Biomedical Materials Research Part A, 91A (3), 692–700. Doi:10.1002/jbm.a.32305

Málaga, B.R y Guevara, P.A. 2013. Efecto del procesamiento del puré de aguaymanto sobre
la vitamina C, compuesta fenólicos totales, carotenoides y capacidad antioxidante. Revista
de la Sociedad Química del Perú. 79(2):162-174. Recuperado de:
http://www.scielo.org.pe/pdf/rsqp/v79n2/a09v79n2.pdf

Medeiros, A.A. 2013. Caracterizaçao fisica e quimica, compostos bioativos e capacidade

antioxidante de frutas nativas do Cerrado. (tesi de maestri). Universidade Federal de Goiás.
Recuperado en:
https://ppgcta.agro.ufg.br/up/71/o/DISSERTA%C3%87%C3%83O_Aline_Medeiros_Alve
s_2013.pdf

Melo, E.A.P., Freitas, J.M.D., Santos, D.C.O., Silva, J.A., Sousa, J.S. y Freit, J.D. mayo del
2018. Efeito da desidratação foam mat na retenção de ácido ascórbico na polpa do jenipapo.
6° Simposio de Segurança Alimentar. Gramado RS-BR. Recuperado de:
https://docplayer.com.br/115161018-Efeito-da-desidratacao-foam-mat-na-retencao-de-
acido-ascorbico-na-polpa-do-jenipapo.html

MINSA/DIGESA. 2008. Norma Técnica 071 V 01. Criterios Microbiológicos de Calidad

Sanitaria e Inocuidad Para los Alimentos y Bebidas de Consumo Humano Para su
Comercialización. Recuperado de:
https://www.saludarequipa.gob.pe/desa/archivos/Normas_Legales/alimentos/RM591MINS
ANORMA.pdf

Ministerio de Agricultura y Riego (MINAGRI). 2015. Fichas técnicas. PE. Recuperado de:
http://minagri.gob.pe/portal/datero/32-sector-agrario/frutas

54
Miranda, I.G., Ventura, H.J., Suarez, C.S. y Fuertes, R.C. 2007. Actividad citotóxica y
antioxidante de los productos de la reacción de Maillard de los sistemas modelo D-glucosa–
glicina y D-glucosa- L-lisina. Revista de la Sociedad Química del Perú. V.73, n.4(215-225).
Recuperado de: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1810-
634X2007000400005&script=sci_abstract

Morton, J. 1987. Genipap. Genipa Americana L. p. 441–443. In: Fruits of warm climates.
Miami, US. Recuperado de: https://hort.purdue.edu/newcrop/morton/genipap.html

Moura, S.M.S., Sousa, de S.R.S y Junior, C.M.A. 2016. Genipa americana L.: Prospecção
tecnológica. Journal inderdisciplinar de Biociências. V.1, n.2:31-35. Recuperado de:
https://doi.galoa.com.br/doi/10.17648/jibi-2448-0002-1-2-5174

Muñoz, J.A.M.; Ramos – Escudero F. y Alvarado O.U.C. 2009. Evaluación del contenido
nutricional de algunos alimentos consumidos por los pobladores de la región Selva. Revista
Horizonte Medico. V.9. N°2. Pp. 75-80. Diciembre. PE. Recuperado de:
https://www.redalyc.org/pdf/3716/371639765009.pdf

Náthia - Neves, G. y Meireles, A.M.A. 2018. Genipap: A New perspective on natural

colorants for the food industry. Food and public Health. 8(1):21-33. Recuperado de:
DOI: 10.5923/j.fph.20180801.04

Navarro, H.A., Guzmán, L. D., Gonzales, M.E. 2018. Influencia de las zonas de crecimiento
en la composición fisicoquímica del fruto de Solanum betaceum Cav. Revista de la Sociedad
Química del Perú. 84(1):68-75 pág. Recuperado de:
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1810-
634X2018000100007&script=sci_abstract&tlng=es

Neta, L.G.S. 2014. Caracterização y avaliação do potencial de bioactivos e atividade

antioxidantes de genipa americana L. deshidratado. (tesis de maestria). Universidade
Federal da Bahia. Recuperado de:
http://www.pgalimentos.far.ufba.br/sites/pgalimentos.far.ufba.br/files/dissertacao_lindanor
_gomes_neta.pdf

55
Nicoli, M.C., Anese, M., Parpinel, M.T., Franceschi, S., Lerici, C.R. 1997. Loss and/or
formation of antioxidants during food processing and storage. Elsevier Science Ireland.
Cancer letters. 114(1997) 71-74. Recuperado de:
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304383597046284?via%3Dihub

Noiarsa, P., Ruchirawat, S., Otsuka, H. y Kanchanapoom, T. 2008. Chemical constituents

from Oldenlandia corymbosa L. of Thai origin. Revista Journal Natural Medicine. 62:249-
250 pág. Recuperado de: https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs11418-007-0212-1

Neri-Numa, I.A., Pessoa, G.M., Paulino, B.N. y Pastore, GM. 2018. Avaliação das
propriedades funcionais dos iridoides obtidos do jenipapo (Genipa americana L.). (tese
doctoral). Universidade Estadual de Campinas. Recuperado de:
http://scholar.google.com.pe/scholar_url?url=http://repositorio.unicamp.br/bitstream/REP
OSIP/335001/1/Numa_IramaiaAngelicaNeri_D.pdf%23page%3D56&hl=es&sa=X&d=14
507590828758770678&scisig=AAGBfm0l7JgJn-
zUbdNFGHiHWsMStg415w&nossl=1&oi=scholaralrt&hist=hfo1dDMAAAAJ:84019363
15478410826:AAGBfm14QaR5rbO25OUfx8gJMnCBkGrCAQ

Neri-Numa I.A., Pessoa M.G., Arruda H.S., Pereira G.A, Paulino B.N., Angolini C.F.F.,
Ruiz T.G.A.L. y Pastore G.M. 2019. Genipap (Genipa americana L.) fruit extract as a source
of antioxidant and antiproliferative iridoids. Food Research International. Volume
134, August. Recuperado de: https://doi.org/10.1016/j.foodres.2020.109252

Pantastico, E.B. 1975. Postharvest physiology, handling and utilization of tropical and
subtropical fruits and vegetables. The AVI publishing Company Inc. USA.

Pacheco, P., Gonçalves, P.J., Oliveira, S.C. y Benedetti, P.G. 2014. Composição centesimal,
compostos bioativos e Parâmetros físico-químicos do jenipapo (genipa Americana L.) In
natura. BR. Demetra: alimentação, nutrição & saúde; 9(4); 1041-1054. Recuperado de:
http://dx.doi.org/10.12957/demetra.2014.11310

Pearson, D. 1976. Técnicas de Laboratorio para el Análisis de Alimentos. Editorial Acribia.

Zaragoza. ES. 331 págs.

56
Pereira, A. 1982. Ensaios em viveiro florestal e fructificação de algumas espécies
amazónicas. Pp. 1135-1138 In: Anais do Congresso Nacional sobre essências nativas.
Silvicultura em S. Paulo. Revista do Instituto Florestal, Coordenadoria da pesquisa de
recursos naturais. Secretaria de agricultura e abastecimiento. Vol. 16A, Parte 2. São Paulo.
BR.

Pérez – Jiménez, J. y Saura – Calixto, F. 2007. Metodología para la evaluación de capacidad

antioxidante en frutas y hortalizas. Articulo presentado en el V Congreso Iberoamericano de
Tecnología postcosecha y agroexportaciones. Recuperado de:
https://www.researchgate.net/publication/268003196_METODOLOGIA_PARA_LA_EV
ALUACION_DE_CAPACIDAD_ANTIOXIDANTE_EN_FRUTAS_Y_HORTALIZAS

Porto, CLGR; Cardoso, SVB; Barros AV; Cunha, FME; Araújo, MMA y Moreira – Araújo
SR. 2014. Chemical Composition and antioxidant activity of Genipa Americana L.
(Jenipapo) of the Brazilian Cerrado. Journal of Agriculture and Environmental Sciencies.
Recuperado de: DOI: 10.15640/jaes. v3n4a4.

Pradas-Baena, I.; Moreno-Rojas, J.M. y Luque de Castro, M.D. 2015. Chapter 1 - Effect of
Processing on Active Compounds in Fresh-Cut Vegetables. Processing and Impact on Active
Components in Food. Preedy V. (Ed.). Pages 3-10. Cordoba. ES. Academic Press.
Recuperado de: https://doi.org/10.1016/B978-0-12-404699-3.00001-9.

Primo, Y.E. 1997. Química de los Alimentos. Editorial Síntesis S.A. Impreso en España.
ISBN- 8477384517. 461 págs.

Reynel, C., Penningto, T.D., Pennington, R.T., Flores, C. y Daza, A. 2003. Arboles útiles de
la Amazonia peruana y sus usos. Un manual con apuntes de identificación, ecología y
propagación de las especies. Lima. PE. 536 pp.

Reynel, C., Pennington, T.D. y Pennington, R.T. 2016. Arboles del Perú. Lima. PE. 1047
p.

57
Rezende, L.C. de. 2010. Avaliação da atividade antioxidante e composição química de seis
frutas tropicais consumidas na Bahia. (tese doutorado). Universidad Federal da Bahia. BR.
Recuperado de: www.repositorio.ufba.br:8080/ri/handle/ri/10639

Rodrigues, J.A. 2011. Determinação da actividade antioxidante e composição fenólica de

vinos portugueses e correlação com parámetros de cor. (tesis de pregrado). Universidade
Nova de Lisboa. Recuperado de:
https://run.unl.pt/bitstream/10362/7040/1/Rodrigues_2011.pdf

Reyes, A.L.S. 2014. Efecto de procesamiento sobre la estabilidad de polifenoles en extracto

de mango (Mangifera indica L.). (tesis de pregrado). Escuela Agrícola Panamericana.
Recuperado de: https://bdigital.zamorano.edu/bitstream/11036/3374/1/AGI-2014-T038.pdf

Rojas, B.S. 2013. Efecto de la estandarización y tratamiento térmico en el contenido de

compuestos bioactivos y capacidad antioxidante en néctar de tomate de árbol (sacha
tomate) Solanum betaceum Cau. (tesis de pregrado) Universidad Nacional Agraria la Molina
Lima. PE.

Rojas, Ll.J.P.; Perea, V.A. y Stashenko, E.E. 2009. Obtención de aceites esenciales y
pectinas a partir de subproductos de jugos cítricos. VITAE. Revista de la Facultad de
Química y Farmacéutica. CO. 110-115. http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S0121-
40042009000100013&script=sci_abstract&tlng=es

Romero, P.S., Domínguez, T.G. y Guzmán, L.D. 2014. Cuantificación de polifenoles en

hojas de un clon de Uncaria tomentosa (Will. Ex Shult) D.C., proveniente de tres localidades
de la región Ucayali. Revista de la Sociedad Química del Perú. 80(3): 174-182.
http://www.scielo.org.pe/pdf/rsqp/v80n3/a04v80n3.pdf

Ruiz, H.J. 2011. Determinación experimental del contenido de ácido ascórbico (vitamina C)
en zumo de naranja. Revistas digital Innovación y experiencias Educativas. Granada. ES.
No 43. Recuperado de: http://docplayer.es/8211112-Determinacion-experimental-del-
contenido-de-acido-ascorbico-vitamina-c-en-un-zumo-de-naranja.html

58
Salas, CH.W.A. 2003. Aplicación del sistema HACCP en el proceso de elaboración de
alimentos de reconstitución instantánea a base de alimentos extruidos. (tesis de pregrado).
Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima. PE. Recuperado de:
https://sisbib.unmsm.edu.pe/bibvirtualdata/tesis/ingenie/salas_cw/salas_chw.pdf

Schmidt-Hebbel, H. 1990. Avances en Aditivos alimentarios y la reglamentación de los

alimentos. Editorial Universitaria. Santiago - CH. Libro. 156 págs. Recuperado de:
http://repositorio.uchile.cl/bitstream/handle/2250/121409/schmidth04.pdf

Silva, da A.D., Costa,G.R, Borges, L.L. y Alves, F.S. 2019. Preparação e caracterização
físico-quimica do extrato hidroalcoólico de Genipa americana Linnaeus. Revista
Electrónica de farmacia. DOI:10.5216/ref. v16.47461

Sosa-Baldivia, A., Ruiz-Ibarra, G., Sosa-Ruiz, C., Etchevers-Barra, J. y Padilla-Cuevas J.

2016. Porque no ha sido posible probar la esencialidad del boro en el hombre: una hipótesis.
En XLI Congreso Nacional de la Ciencia del suelo. México. Recuperado de:
https://scholar.google.es/scholar?hl=es&as_sdt=0%2C5&q=porque+no+ha+sido+posible+
probar+la+esencialidad+del+boro+en+el+hombre&btnG=

Souza, N.C. 2007. Características físicas, físico-químicas e químicas de três tipos de

jenipapos (Genipa americana L.). (tesis de maestría). Universidade Estadual de Santa Cruz.
Ilhéus- Bahia. BR. Recuperado de:
http://nbcgib.uesc.br/ppgpv/painel/paginas/uploads/09b94cf10075ef7c9b0e1a3303c56334.
pdf

Souza, de V.R., Pereira, P.P.A., Queiroz, F., Borges, V.S. y Carneiro, S.D.J. 2012.
Determination of bioactive compounds, antioxidant activity and chemical composition of
Cerrado Brazilian fruits. Food Chemistry Vol.134: 381-386. Recuperado de:
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0308814612004062

Tarozzi, A. s/f. Applied Econometrics Lecture Notes on Causal Estimation. Profesor

asociado de la Universidad de Pompeu Fabra. Editor asociado de Journal of Development
Economics. ES.

59
Valdés, F. 2006. Vitamina C. Artículo de revisión. Actas Dermosifiliograficas. 97(9): 557-
565 ES. Recuperado de: www.actasdermo.org/es/vitamina-c/articulo/13095269

Venereo G.J.R. 2002. Daño oxidativo, radicales libres y antioxidantes. Revista Cubana
Medicina Militar. Vol. 31(2):126-33. abr-jun. Recuperado de:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0138-
65572002000200009&lng=es&tlng=es

Villareal, D.Y., Mejía, E.D.F., Osorio, M.O. y Cerón, C.A.F. Julio a diciembre 2013. Efecto
de la pasteurización sobre características sensoriales y contenido de vitamina C en jugos de
fruta. Biotecnología en el sector Agropecuario y Agroindustrial. 11(2):66-75. Recuperado
de:
https://www.researchgate.net/publication/275642599_EFECTO_DE_PASTEURIZACION
_SOBRE_CARACTERISTICAS_SENSORIALES_Y_CONTENIDO_DE_VITAMINA_C
_EN_JUGOS_DE_FRUTAS_EFFECT_OF_PASTEURIZATION_ON_SENSORY_CHA
RACTERISTICS_AND_CONTENT_OF_VITAMIN_C_IN_FRUIT_JUICES_EFE

Xammar, O.J. de y Donnamaria, M.C. 2006. Acción Farmacológica, Biofisicoquímica y

Estructura Dinámica de la Vitamina C. Acta Farm. Bonaerense. 25 (1): 145-54. Recuperado
de: http://www.latamjpharm.org/trabajos/25/1/LAJOP_25_1_6_1_508R9MF3CR.pdf

Yamazaki, M. y Chiba, K. 2008. Genipin exhibits neurotrophic effects through a common

signaling pathway in nitric oxide synthase- expressing cells. European Journal of
Pharmacology. V.581:255-261 págs. Recuperado de:
https://doi.org/10.1016/j.ejphar.2007.12.001

Yanagimoto, K; Lee, K; Ochi, H. y Shibamoto, T. 2002. Antioxidant activity of heterocyclic

compounds formed in Maillard reaction products. International Congress Series 1245 (2002)
335 – 340. Recuperado de: https://doi.org/10.1016/S0531-5131(02)01007-5

Yilmaz, Y., & Toledo, R. 2005. Antioxidant activity of water-soluble Maillard reaction
products. Food Chemistry, 93(2), 273–278. doi: 10.1016/j.foodchem.2004.09.043

60
VIII. ANEXOS

61
 Anexo 1

Métodos Analíticos

A) Determinación de vitamina C por el método Yodimétrico a macro

escala

Preparación de Reactivos

Solución de Yodo 0.1 N.- P.M. = 126.90g (12.96 en 100 L).

- Disolver aproximadamente 14 g de yodo en una solución de 36 g de Yoduro de potasio
en 100 mL de agua, adicionar 3 gotas de ácido clorhídrico, diluir con agua hasta 1000 ml,
y estandarizar con la solución de tiosulfato de sodio 0.1N.
- Transferir 25 mL de solución de yodo a un erlenmeyer de 250 mL, diluir con agua a 100
mL y titular con tiosulfato de sodio 0.1 N vs hasta que la solución tenga un color amarillo
pálido; adicionar 2 mL de almidón TS y continuar titulando hasta que la solución sea
incolora.
- Calcular la normalidad.
- Preservar en contenedores color ámbar con tapón de vidrio.

Solución de Tiosulfato de Sodio 0.1 N

- Disolver aproximadamente 26 g de tiosulfato de sodio y 200 mg de Carbonato de sodio
en 1000 mL de agua libre de dióxido de carbono.
- Estandarizar la solución como sigue:
Pesar exactamente de 210 mg de estándar primario de dicromato de potasio previamente
pulverizado y secado a 120°C por 4 horas,
- Disolver en 100 mL de agua en un erlenmeyer de 500 mL con tapón esmerilado.
- Agitar para disolver el sólido, retirar el tapón y agregar rápidamente 3 g de yoduro de
potasio, 2 g de bicarbonato de sodio y 5 mL de ácido clorhídrico.
- Tapar el erlenmeyer nuevamente, agitar para homogenizar y dejar reposando en la
oscuridad por 10 minutos.
- Enjuagar el tapón y las paredes internas del erlenmeyer con agua destilada y titular el
yodo liberado con la solución de tiosulfato de sodio hasta que la solución se torne amarillo
verdoso.
- Adicionar 3 mL de solución de almidón TS y continuar la titulación hasta la desaparición
de color azul de la solución.

62
- Calcular la normalidad.
- Reestandarizar la solución frecuentemente.

Procedimiento

Parte 1: Valoración de la disolución de tiosulfato de sodio

- Llena la bureta con la disolución de Na2S2O3 aprox. 0.1 mol L-1.
- Coloca 25.00 mL de la disolución de KIO3 en un matraz Erlenmeyer.
- Añade 10 mL de disolución de H2SO4 0.5 mol L
- Añadir todo el contenido de uno de los viales con 1 g de KI sólido y agita la mezcla hasta
su disolución.
- Adicionar disolución de tiosulfato de sodio hasta que la disolución del matraz Erlenmeyer
quede de color amarillo pálido.
- Añadir aprox. 2 mL del indicador de almidón.
- Siga adicionando disolución de tiosulfato de sodio hasta que se mantenga la desaparición
del color azul al menos durante 15 segundos.
- Calcular la concentración (mol L-1) de la disolución de tiosulfato de sodio

Parte 2: Determinación del contenido de vitamina C en la muestra

- Colocar 25.00 mL de la muestra en un matraz Erlenmeyer.
- Añadir 10 mL de disolución de H2SO4 0.5 mol L-1
- Añadir todo el contenido de uno de los viales con 1 g de KI sólido y agitar la mezcla hasta
su disolución.
- Colocar 25.00 mL de la disolución de KIO3 en el matraz Erlenmeyer.
- Adicionar desde la bureta 5 mL de disolución de tiosulfato de sodio.
- Añadir aprox. 2 mL del indicador de almidón.
- Seguir adicionando disolución de tiosulfato de sodio hasta que se mantenga la desaparición
del color azul al menos durante 15 segundos.
- Anotar el volumen de disolución de tiosulfato de sodio consumido.
- Calcula la concentración (mg/100 mL) de vitamina C (Masa molar 176.12 g mol-1) en el
zumo.

63
B) Determinación de Polifenoles totales con el reactivo de Folin Ciocalteu (Romero,
2014)
Fundamento del método: los compuestos fenólicos de una muestra vegetal reaccionan
con el reactivo de Folin-Ciocalteu, a pH básico, dando lugar a una coloración azul
susceptible de ser determinada espectrofotométricamente a 765 nm. Este reactivo
contiene una mezcla de wolframato sódico y molibdato sódico en ácido fosfórico y
reacciona con los compuestos fenólicos presentes en la muestra. El ácido
fosfomolibdotúngstico (formado por las dos sales en el medio ácido), de color amarillo,
al ser reducido por los grupos fenólicos da lugar a un complejo de color azul intenso,
cuya intensidad es la que medimos para evaluar el contenido en polifenoles; es un
método preciso y sensible, que puede padecer numerosas variaciones,
fundamentalmente en lo relativo a los volúmenes utilizados de la muestra a analizar,
concentración de reactivos y tiempo de reacción (García, et al. s/f).

Mecanismo de acción del reactivo de Folin-Ciocalteu.

Fuente: García, et al. s/f

Procedimiento:

- Pesar 1,2 mg de ácido gálico en 1,2 mL de agua destilada, se toma 1mL y se lleva a
volumen final de 10 mL para tener una concentración de 100 ppm (solución stock). A
cada una de las soluciones se agrega cada uno de los reactivos y se lleva a un volumen
final de 10 mL en el siguiente orden:

64
 Solución Agua Rvo. Folin Carbonato de
Stock destilada 1N sodio 20%
0,2 mL 8,8 mL 0,2 mL 0,8 mL
0,4 mL 8,6 mL 0,2 mL 0,8 mL
0,6 mL 8,4 mL 0,2 mL 0,8 mL
0,8 mL 8,2 mL 0,2 mL 0,8 mL
1,0 mL 8,0 mL 0,2 mL 0,8 mL
1,2 mL 7,8 mL 0,2 mL 0,8 mL

- A cada una de las soluciones agitar

- Dejar reposar por 30 min, en oscuridad
- Proceder a leer a 750 nm en celda de cuarzo
Para trabajar con la muestra:
- Pesara 0,02g de extracto seco de muestra disolver en 5 mL solvente Me: H 2O (1:1)
- De esta solución tomar 0,5 mL y adicionar 4,5 mL de agua destilada
- Agitar y adicionarle 0,2 mL del Reactivo de Folin 1N, 0,8 mL de carbonato de sodio
al 20%, volumen final 6 mL.
- Dejar reposar 30 min.
- Leer a 765 nm
- Calcular la concentración de polifenoles totales como (mgEAG/100g de muestra)

Curva estándar para el Análisis de Polifenoles

65
C) Determinación de azucares reductores por el método de Lane y Eynon (Pearson,
1976)

Consiste en determinar el volumen de disolución de azúcar que se necesita para reducir 10

o 25 mL de disolución de Fehling en presencia de azul de metileno como indicador interno.
El aire se elimina de la mezcla reaccionante manteniendo el líquido hirviendo durante la
valoración.

Equipo: se emplea una bureta de 50 mL un matraz de 250 mL una cocinilla o mechero

bunsen.

Disolución de Fehling: se prepara de la siguiente manera:

- Pesar 69,278 g de sulfato de cobre (CuSO4.5H2O) por litro de agua, se filtra

- Pesar 346 g de sal de Rochelle (KNaC4H4O6.4H2O) agregarle 100 g de hidróxido de
sodio por litro de agua. Se filtra.
- Azul de metileno: preparar una solución al 1%

Procedimiento:
- Se pipetean 10 mL (o 25 mL) de la mezcla de Fehling en un matraz de 250 mL y se
añade la disolución de azúcar en la bureta. Se agita el líquido moviendo en redondeo
el matraz, se calienta en la cocinilla y después de que el líquido haya hervido
moderadamente durante 1 ½ a 2 minutos se añaden 4 gotas de azul de metileno. Se
añade disolución de azúcar a razón de 0,25 mL cada 15 segundos y se termina la
valoración dentro de los tres minutos desde el comienzo de la ebullición.

Notas:

(a) La ebullición se debe mantener durante toda la valoración

(b) Si el sulfato de cobre se reduce totalmente, lo cual se comprueba por la desaparición
del color azul, se repite la valoración con una disolución más diluida de la muestra o
se utilizan 25 mL de disolución de Fehling en lugar de 10 mL.

Normalización de la disolución de Fehling:

En un vaso de 300 mL se disuelven 2,375 g de sacarosa (desecada a 100°C) en unos 130

mL de agua, se añaden 15 mL de ácido clorhídrico 1N y se hierve la mezcla durante 2
minutos. Se enfria, se añaden 2 gotas de disolución de fenolftaleína, se neutraliza
exactamente con hidróxido de sodio al 10%, se pasa cuidadosamente a un matraz aforado
de 500 mL y se enrasa con agua. La disolución se valora según el método antes descrito,
empleando 10 mL de disolución de Fehling.

1 mL de disolución patrón de azúcar invertido = 0,00475 g de sacarosa =0,005 g de

azúcar invertido.

10 mL de disolución de Fehling = 10,5 mL de disolución patrón de azúcar invertido.

66
Cálculo del contenido de azúcar:

𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟𝑥 10
Azúcar (mg)/100 mL de disolución =
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 (𝑚𝐿)

Además, la sacarosa puede convertirse en azúcar invertido antes de la valoración, y

entonces:

Concentración de sacarosa = azúcar invertido x 0,95

67
 Anexo 2

Análisis de Genipina y Acido Geniposidico por cromatografía de UHPLC

Tratamiento de Muestra

Fruto: se cortó en dos partes, se retiró las semillas y se cortó en láminas delgadas. Se tomó
5 g y se molió en agua (100 mL) hasta obtener un puré, se extrajo con 4 x 25 mL de acetato
de etilo; se reunieron los extractos de acetato de etilo y se secó sobre sulfato de sodio anhidro,
se filtró y concentró a sequedad, se disolvió en 2 mL de metanol, se filtró sobre 0.45 μm.

Extractos: se tomó un volumen de 25 mL y se extrajo con 4 x 25 mL de acetato de etilo, se

reunieron los extractos de acetato de etilo y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró
y concentró a sequedad, se disolvió en 5 mL de metanol, se filtró sobre 0.45 μm.

Análisis por UHPLC – DAD – 3000RS

Método: Se utilizó el método según Chen et al. (2008) (Simultaneous determination of

geniposide and its metabolites genipin and genipinin in culture of Aspergillus niger by
HPLC. Biomed. Chromatogr., 22: 753-757).
Estándares: soluciones de cada estándar (genipina y ácido geniposidico) entre 0.2 y 100
μg/mL en metanol.
Columna HPLC: Luna C18, 150 x 4.6 mm, 5 μm
Temperatura de trabajo: 28 °C se mantuvo temperatura constante.
Fases móviles: A: 1% de ácido fórmico en acetonitrilo, v/v.
B: 1% de ácido fórmico en agua, v/v.
Gradiente: 0 – 10 min, 4 a 70% de A; 10 – 15 min, 70 a 90% de A; 15 – 20 min, 90% de B,
20 – 35 min. 90 a 4% A; 35 – 40 min, 4% de B
Flujo: 1.0 mL/min
Longitud de onda: 238 nm.
La muestra fue filtrada en un filtro membrana de 0,45 µm

68
Desarrollo del método: Los efectos del ácido fórmico sobre la columna da resultados
satisfactorios, ya que este acido no daña la columna empleada y no dan picos interferentes.

Cromatogramas de Genipina y ácido Geniposidico

a) Cromatograma del estándar de Genipina y Ac. Geniposidico

b) Cromatogramas de Genipina y ácido Geniposido en las muestras:

b.1. Del Fruto in natura

69
 b.2 Del extracto sin pasteurizar (recién extraido)

b.3. Del extracto pasteurizado

70
 Anexo 3

…///….

…//…

71
 Anexo 4

A. Análisis estadístico de los compuestos bioactivos en los tratamientos

1. Modelo lineal general: Vitamina C vs. tratamiento 1; tratamiento 2

Método

Codificación de factores (-1; 0; +1)

Información del factor

Factor Tipo Niveles Valores

tratamiento 1 Fijo 2 c/c; s/c
tratamiento 2 Fijo 2 p; s/p

Análisis de Varianza

Fuente GL SC Ajust. MC Ajust. Valor F Valor p

tratamiento 1 1 0.011907 0.011907 0.76 0.395
tratamiento 2 1 0.652327 0.652327 41.87 0.000
tratamiento 1*tratamiento 2 1 0.001656 0.001656 0.11 0.749
Error 16 0.249265 0.015579
Total 19 0.915156

Resumen del modelo

R-cuad. R-cuad.
S R-cuad. (ajustado) (pred)
0.124816 72.76% 67.66% 57.44%

Coeficientes

EE del
Término Coef coef. Valor T Valor p VIF
Constante 0.6791 0.0279 24.33 0.000
tratamiento 1
c/c 0.0244 0.0279 0.87 0.395 1.00
tratamiento 2
p -0.1806 0.0279 -6.47 0.000 1.00
tratamiento 1*tratamiento 2
c/c p 0.0091 0.0279 0.33 0.749 1.00

Ecuación de regresión

vitamina C = 0.6791 + 0.0244 tratamiento 1_c/c - 0.0244 tratamiento 1_s/c

- 0.1806 tratamiento 2_p + 0.1806 tratamiento 2_s/p
+ 0.0091 tratamiento 1*tratamiento 2_c/c p
- 0.0091 tratamiento 1*tratamiento 2_c/c s/p
- 0.0091 tratamiento 1*tratamiento 2_s/c p
+ 0.0091 tratamiento 1*tratamiento 2_s/c s/p

Ajustes y diagnósticos para observaciones poco comunes

Resid
Obs vitamina C Ajuste Resid est.
1 0.5400 0.8444 -0.3044 -2.73 R
17 0.7670 0.5320 0.2350 2.10 R

72
Residuo grande R

Gráficas de residuos para vitamina C

Prueba de varianzas iguales: RESID vs. tratamiento 1; tratamiento 2

Método

Hipótesis nula Todas las varianzas son iguales

Hipótesis alterna Por lo menos una varianza es diferente
Nivel de significancia α = 0.05

Se utiliza el método de Bartlett. Este método es exacto sólo para datos normales.

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para desviaciones estándar

tratamiento 1 tratamiento 2 N Desv.Est. IC

c/c p 5 0.143734 (0.0758788; 0.596318)
c/c s/p 5 0.094340 (0.0498030; 0.391393)
s/c p 5 0.017847 (0.0094214; 0.074041)
s/c s/p 5 0.180106 (0.0950801; 0.747217)

73
Nivel de confianza individual = 98.75%
Pruebas

Estadística
Método de prueba Valor p
Bartlett 12.44 0.006

Prueba de varianzas iguales: RESID vs. tratamiento 1; tratamiento 2

tratamiento 1 tratamiento 2

Prueba de Bartlett
Valor p 0.006
c/c p

s/p

s/c p

s/p

0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para Desv.Est.

Comparaciones por parejas de Tukey: Respuesta = vitamina C, Término =

tratamiento 1

Agrupar información utilizando el método de Tukey y una confianza de 95%

tratamiento 1 N Media Agrupación

c/c 10 0.7035 A
s/c 10 0.6547 A

Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.

74
Comparaciones por parejas de Tukey: Respuesta = vitamina C, Término =
tratamiento 2

Agrupar información utilizando el método de Tukey y una confianza de 95%

tratamiento 2 N Media Agrupación

s/p 10 0.8597 A
p 10 0.4985 B

Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.

ICs simultáneos de 95% de Tukey

Comparaciones por parejas de Tukey: Respuesta = vitamina C, Término =

tratamiento 1*tratamien

Agrupar información utilizando el método de Tukey y una confianza de 95%

tratamiento
1*tratamiento 2 N Media Agrupación
c/c s/p 5 0.8750 A
s/c s/p 5 0.8444 A
c/c p 5 0.5320 B
s/c p 5 0.4650 B

Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.

75
ICs simultáneos de 95% de Tukey

2. Modelo lineal general: Polifenoles vs. tratamiento 1; tratamiento 2

Método

Codificación de factores (-1; 0; +1)

Información del factor

Factor Tipo Niveles Valores

tratamiento 1 Fijo 2 c/c; s/c
tratamiento 2 Fijo 2 p; s/p

Análisis de Varianza

Fuente GL SC Ajust. MC Ajust. Valor F Valor p

tratamiento 1 1 3.76 3.76 0.12 0.729
tratamiento 2 1 1266.12 1266.12 41.90 0.000
tratamiento 1*tratamiento 2 1 13.60 13.60 0.45 0.512
Error 16 483.53 30.22
Total 19 1767.00

Resumen del modelo

R-cuad. R-cuad.
S R-cuad. (ajustado) (pred)
5.49734 72.64% 67.50% 57.24%

Coeficientes

EE del
Término Coef coef. Valor T Valor p VIF
Constante 123.77 1.23 100.68 0.000
tratamiento 1
c/c 0.43 1.23 0.35 0.729 1.00

76
tratamiento 2
p -7.96 1.23 -6.47 0.000 1.00
tratamiento 1*tratamiento 2
c/c p -0.82 1.23 -0.67 0.512 1.00

Ecuación de regresión

polifenoles = 123.77 + 0.43 tratamiento 1_c/c - 0.43 tratamiento 1_s/c

- 7.96 tratamiento 2_p
+ 7.96 tratamiento 2_s/p - 0.82 tratamiento 1*tratamiento 2_c/c p
+ 0.82 tratamiento 1*tratamiento 2_c/c s/p
+ 0.82 tratamiento 1*tratamiento 2_s/c p
- 0.82 tratamiento 1*tratamiento 2_s/c
s/p

Ajustes y diagnósticos para observaciones poco comunes

Resid
Obs polifenoles Ajuste Resid est.
1 116.29 130.46 -14.17 -2.88 R
18 127.22 115.42 11.80 2.40 R

Residuo grande R

Gráficas de residuos para polifenoles

77
Gráfica de probabilidad de RESID

Prueba de varianzas iguales: RESID vs. tratamiento 1; tratamiento 2

Método

Hipótesis nula Todas las varianzas son iguales

Hipótesis alterna Por lo menos una varianza es diferente
Nivel de significancia α = 0.05

Se utiliza el método de Bartlett. Este método es exacto sólo para datos normales.

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para desviaciones estándar

tratamiento 1 tratamiento 2 N Desv.Est. IC

c/c p 5 7.26454 (3.83503; 30.1388)
c/c s/p 5 1.28725 (0.67955; 5.3405)
s/c p 5 0.93808 (0.49522; 3.8919)
s/c s/p 5 8.09768 (4.27486; 33.5953)

Nivel de confianza individual = 98.75%

Pruebas

Estadística
Método de prueba Valor p
Bartlett 18.50 0.000

78
 Prueba de varianzas iguales: RESID vs. tratamiento 1; tratamiento 2
tratamiento 1 tratamiento 2

Prueba de Bartlett
Valor p 0.000
c/c p

s/p

s/c p

s/p

0 5 10 15 20 25 30 35
Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para Desv.Est.

Comparaciones para polifenoles

Comparaciones por parejas de Tukey: Respuesta = polifenoles, Término =

tratamiento 1

Agrupar información utilizando el método de Tukey y una confianza de 95%

tratamiento 1 N Media Agrupación

c/c 10 124.199 A
s/c 10 123.332 A

Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.

ICs simultáneos de 95% de Tukey

79
Comparaciones por parejas de Tukey: Respuesta = polifenoles, Término =
tratamiento 2

Agrupar información utilizando el método de Tukey y una confianza de 95%

tratamiento 2 N Media Agrupación

s/p 10 131.722 A
p 10 115.809 B

Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.

ICs simultáneos de 95% de Tukey

Comparaciones por parejas de Tukey: Respuesta = polifenoles, Término =

tratamiento 1*tratamiento 2

Agrupar información utilizando el método de Tukey y una confianza de 95%

tratamiento
1*tratamiento 2 N Media Agrupación
c/c s/p 5 132.980 A
s/c s/p 5 130.464 A
s/c p 5 116.200 B
c/c p 5 115.418 B

Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.

80
ICs simultáneos de 95% de Tukey

3. Modelo lineal general: Capacidad Antioxidante vs. tratamiento 1;

tratamiento 2

Método

Codificación de factores (-1; 0; +1)

Información del factor

Factor Tipo Niveles Valores

tratamiento 1 Fijo 2 c/c; s/c
tratamiento 2 Fijo 2 p; s/p

Análisis de Varianza

Fuente GL SC Ajust. MC Ajust. Valor F Valor p

tratamiento 1 1 22.324 22.324 98.03 0.000
tratamiento 2 1 861.591 861.591 3783.30 0.000
tratamiento 1*tratamiento 2 1 2.775 2.775 12.19 0.003
Error 16 3.644 0.228
Total 19 890.333

Resumen del modelo

R-cuad. R-cuad.
S R-cuad. (ajustado) (pred)
0.477216 99.59% 99.51% 99.36%

Coeficientes

EE del
Término Coef coef. Valor T Valor p VIF
Constante 2005.23 0.11 18791.60 0.000
tratamiento 1
c/c 1.056 0.107 9.90 0.000 1.00
tratamiento 2
p 6.564 0.107 61.51 0.000 1.00

81
tratamiento 1*tratamiento 2
c/c p 0.373 0.107 3.49 0.003 1.00

Ecuación de regresión

cap.Antiox. = 2005.23 + 1.056 tratamiento 1_c/c - 1.056 tratamiento 1_s/c

+ 6.564 tratamiento 2_p - 6.564 tratamiento 2_s/p
+ 0.373 tratamiento 1*tratamiento 2_c/c p
- 0.373 tratamiento 1*tratamiento 2_c/c s/p
- 0.373 tratamiento 1*tratamiento 2_s/c p
+ 0.373 tratamiento 1*tratamiento 2_s/c s/p

Ajustes y diagnósticos para observaciones poco comunes

Resid
Obs cap.Antiox. Ajuste Resid est.
11 2009.30 2010.36 -1.06 -2.49 R

Residuo grande R

Gráficas de residuos para cap.Antiox.

Para la normalidad del error

82
 Para la homogeneidad de las varianzas

Método

Hipótesis nula Todas las varianzas son iguales

Hipótesis alterna Por lo menos una varianza es diferente
Nivel de significancia α = 0.05

Se utiliza el método de Bartlett. Este método es exacto sólo para datos normales.

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para desviaciones estándar

tratamiento 1 tratamiento 2 N Desv.Est. IC

c/c p 5 0.139104 (0.073435; 0.57711)
c/c s/p 5 0.479708 (0.253243; 1.99019)
s/c p 5 0.639898 (0.337809; 2.65478)
s/c s/p 5 0.501996 (0.265009; 2.08266)

Nivel de confianza individual = 98.75%

Pruebas

Estadística
Método de prueba Valor p
Bartlett 6.40 0.094

83
 Prueba de varianzas iguales: RESID vs. tratamiento 1; tratamiento 2
tratamiento 1 tratamiento 2

Prueba de Bartlett
Valor p 0.094
c/c p

s/p

s/c p

s/p

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para Desv.Est.

Al haberse rechazado la hipótesis nula se realiza la prueba de comparaciones múltiples de Tukey

para ver la significancia.

Comparaciones para cap.Antiox.

Comparaciones por parejas de Tukey: Respuesta = cap.Antiox., Término =

tratamiento 1

Agrupar información utilizando el método de Tukey y una confianza de 95%

tratamiento 1 N Media Agrupación

c/c 10 2006.28 A
s/c 10 2004.17 B

Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.

ICs simultáneos de 95% de Tukey

84
Comparaciones para cap.Antiox.

Comparaciones por parejas de Tukey: Respuesta = cap.Antiox., Término =

tratamiento 2

Agrupar información utilizando el método de Tukey y una confianza de 95%

tratamiento 2 N Media Agrupación

p 10 2011.79 A
s/p 10 1998.66 B

Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.

ICs simultáneos de 95% de Tukey

4. Modelo lineal general: Genipina vs. tratamiento 1; tratamiento 2

Método

Codificación de factores (-1; 0; +1)

Información del factor

Factor Tipo Niveles Valores

tratamiento 1 Fijo 2 c/c; s/c
tratamiento 2 Fijo 2 p; s/p

Análisis de Varianza

Fuente GL SC Ajust. MC Ajust. Valor F Valor p

tratamiento 1 1 0.0002 0.0002 0.05 0.827
tratamiento 2 1 11.1602 11.1602 3045.07 0.000
tratamiento 1*tratamiento 2 1 0.0065 0.0065 1.77 0.202
Error 16 0.0586 0.0037
Total 19 11.2255

85
Resumen del modelo

R-cuad. R-cuad.
S R-cuad. (ajustado) (pred)
0.0605392 99.48% 99.38% 99.18%

Coeficientes

EE del
Término Coef coef. Valor T Valor p VIF
Constante 1.1760 0.0135 86.87 0.000
tratamiento 1
c/c -0.0030 0.0135 -0.22 0.827 1.00
tratamiento 2
p -0.7470 0.0135 -55.18 0.000 1.00
tratamiento 1*tratamiento 2
c/c p -0.0180 0.0135 -1.33 0.202 1.00

Ecuación de regresión

genipina = 1.1760 - 0.0030 tratamiento 1_c/c + 0.0030 tratamiento 1_s/c

- 0.7470 tratamiento 2_p + 0.7470 tratamiento 2_s/p
- 0.0180 tratamiento 1*tratamiento 2_c/c p
+ 0.0180 tratamiento 1*tratamiento 2_c/c s/p
+ 0.0180 tratamiento 1*tratamiento 2_s/c p
- 0.0180 tratamiento 1*tratamiento 2_s/c s/p

Ajustes y diagnósticos para observaciones poco comunes

Resid
Obs genipina Ajuste Resid est.
4 2.0800 1.9080 0.1720 3.18 R

Residuo grande R

Gráficas de residuos para genipina

86
 Para la normalidad de los errores

Para la homogeneidad de las varianzas

Prueba de varianzas iguales: RESID vs. tratamiento 1; tratamiento 2

Método

Hipótesis nula Todas las varianzas son iguales

Hipótesis alterna Por lo menos una varianza es diferente
Nivel de significancia α = 0.05

Se utiliza el método de Bartlett. Este método es exacto sólo para datos normales.

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para desviaciones estándar

tratamiento 1 tratamiento 2 N Desv.Est. IC

c/c p 5 0.023875 (0.0126037; 0.099050)
c/c s/p 5 0.037014 (0.0195398; 0.153560)
s/c p 5 0.041833 (0.0220841; 0.173555)
s/c s/p 5 0.104738 (0.0552922; 0.434531)

Nivel de confianza individual = 98.75%

Pruebas

Estadística
Método de prueba Valor p
Bartlett 9.01 0.029

87
 Prueba de varianzas iguales: RESID vs. tratamiento 1; tratamiento 2
tratamiento 1 tratamiento 2

Prueba de Bartlett
Valor p 0.029
c/c p

s/p

s/c p

s/p

0.0 0.1 0.2 0.3 0.4

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para Desv.Est.

Interacciones con el cuadro de arriba

Comparaciones para genipina

Al salir el pvalor menor a 0,05 se realiza el test de comparaciones múltiples de Tukey para
el tratamiento 1 y tratamiento 2

Comparaciones por parejas de Tukey: Respuesta = genipina, Término =

tratamiento 1

Agrupar información utilizando el método de Tukey y una confianza de 95%

tratamiento 1 N Media Agrupación

s/c 10 1.179 A
c/c 10 1.173 A

Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.

ICs simultáneos de 95% de Tukey

Comparaciones por parejas de Tukey: Respuesta = genipina, Término =

tratamiento 2

Agrupar información utilizando el método de Tukey y una confianza de 95%

tratamiento 2 N Media Agrupación

s/p 10 1.923 A
p 10 0.429 B

Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.

88
ICs simultáneos de 95% de Tukey

5. Modelo lineal general: ac geniposidico vs. tratamiento 1; tratamiento 2

Método

Codificación de factores (-1; 0; +1)

Información del factor

Factor Tipo Niveles Valores

tratamiento 1 Fijo 2 c/c; s/c
tratamiento 2 Fijo 2 p; s/p

Análisis de Varianza

Fuente GL SC Ajust. MC Ajust. Valor F Valor p

tratamiento 1 1 0.000180 0.000180 0.01 0.911
tratamiento 2 1 0.392000 0.392000 27.94 0.000
tratamiento 1*tratamiento 2 1 0.001280 0.001280 0.09 0.767
Error 16 0.224520 0.014033
Total 19 0.617980

Resumen del modelo

R-cuad. R-cuad.
S R-cuad. (ajustado) (pred)
0.118459 63.67% 56.86% 43.23%

Coeficientes

EE del
Término Coef coef. Valor T Valor p VIF
Constante 1.8110 0.0265 68.37 0.000
tratamiento 1
c/c -0.0030 0.0265 -0.11 0.911 1.00
tratamiento 2
p -0.1400 0.0265 -5.29 0.000 1.00
tratamiento 1*tratamiento 2
c/c p -0.0080 0.0265 -0.30 0.767 1.00

Ecuación de regresión

ac geniposidico = 1.8110 - 0.0030 tratamiento 1_c/c + 0.0030 tratamiento 1_s/c

- 0.1400 tratamiento 2_p + 0.1400 tratamiento 2_s/p
- 0.0080 tratamiento 1*tratamiento 2_c/c p
+ 0.0080 tratamiento 1*tratamiento 2_c/c s/p
+ 0.0080 tratamiento 1*tratamiento 2_s/c p
- 0.0080 tratamiento 1*tratamiento 2_s/c s/p

Ajustes y diagnósticos para observaciones poco comunes

ac Resid
Obs geniposidico Ajuste Resid est.
20 1.9800 1.6600 0.3200 3.02 R

Residuo grande R

89
Gráficas de residuos para ac geniposidico

Para la normalidad del error

Prueba de varianzas iguales: RESID vs. tratamiento 1; tratamiento 2

Método

Hipótesis nula Todas las varianzas son iguales

Hipótesis alterna Por lo menos una varianza es diferente
Nivel de significancia α = 0.05

Se utiliza el método de Bartlett. Este método es exacto sólo para datos normales.

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para desviaciones estándar

90
tratamiento 1 tratamiento 2 N Desv.Est. IC
c/c p 5 0.190919 (0.100788; 0.792076)
c/c s/p 5 0.055498 (0.029298; 0.230247)
s/c p 5 0.118828 (0.062730; 0.492987)
s/c s/p 5 0.049800 (0.026290; 0.206606)

Nivel de confianza individual = 98.75%

Pruebas

Estadística
Método de prueba Valor p
Bartlett 8.29 0.040

Prueba de varianzas iguales: RESID vs. tratamiento 1; tratamiento 2

tratamiento 1 tratamiento 2

Prueba de Bartlett
Valor p 0.040
c/c p

s/p

s/c p

s/p

0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para Desv.Est.

Para la interacción

Comparaciones por parejas de Tukey: Respuesta = ac geniposidico, Término

= tratamiento 1

Agrupar información utilizando el método de Tukey y una confianza de 95%

tratamiento 1 N Media Agrupación

s/c 10 1.814 A
c/c 10 1.808 A

Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.

91
ICs simultáneos de 95% de Tukey

Comparaciones por parejas de Tukey: Respuesta = ac geniposidico, Término

= tratamiento 2

Agrupar información utilizando el método de Tukey y una confianza de 95%

tratamiento 2 N Media Agrupación

s/p 10 1.951 A
p 10 1.671 B

Las medias que no comparten una letra son significativamente diferentes.

ICs simultáneos de 95% de Tukey

92
B. Análisis estadístico del efecto del procesamiento sobre la Capacidad Antioxidante y
los Compuestos bioactivos

Capacidad antioxidante
Hipótesis
𝐻0 : 𝜇𝐹𝑟𝑢𝑡𝑜 = 𝜇𝐸𝑥𝑡.𝑠.𝑝 = 𝜇𝐸𝑥𝑡.𝑐.𝑝
𝐻1 : 𝐴𝑙 𝑚𝑒𝑛𝑜𝑠 𝑢𝑛 𝜇𝑖 𝑒𝑠 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑖𝑛𝑡𝑜

Estadístico de prueba
F, a través de prueba ANOVA

ANOVA
Supuestos
Normalidad del error
Shapiro-Wilk normality test

data: ri
W = 0.90871, p-value = 0.1294

Homocedasticidad
Non-constant Variance Score Test
Variance formula: ~ fitted.values
Chisquare = 0.5435327, Df = 1, p = 0.46097

ANOVA
Analysis of Variance Table

Response: cap_antioxid
Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F)
PASTEURIZACION 2 166277 83138 18795402 < 2.2e-16 ***
Residuals 12 0 0
---
Signif. codes: 0 ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ 1

Conclusión
Con F de 18795402 (p-valor = 2.2 x 10-16) se rechaza la hipótesis nula. Es decir al menos un
𝜇𝑖 es distinto, por lo que es necesario hacer un test de Tukey.

93
Test de Tukey
Study: Capacidad Antioxidante en umol TEL-1 C
Determinada con o sin preservante y en fruto

HSD Test for Capacidad antioxidante

Mean Square Error: 0.03106333

PASTEURIZACION, means

Capacidad antioxidante std r Min Max

c_p 6.946 0.23922792 5 6.71 7.28
FRUTO 6.334 0.16395121 5 6.08 6.50
s_p 8.144 0.09528903 5 8.02 8.24

Alpha: 0.05 ; DF Error: 12

Critical Value of Studentized Range: 3.772929

Minimun Significant Difference: 0.297384

Treatments with the same letter are not significantly different.

Capacidad antioxidante groups

s_p 8.144 a
c_p 6.946 b
FRUTO 6.334 c

Nota: s_p: zumo sin pasteurización; c_p: zumo con pasteurización

94
 Vitamina C

Hipótesis
𝐻0 : 𝜇𝐹𝑟𝑢𝑡𝑜 = 𝜇𝐸𝑥𝑡.𝑠.𝑝 = 𝜇𝐸𝑥𝑡.𝑐.𝑝
𝐻1 : 𝐴𝑙 𝑚𝑒𝑛𝑜𝑠 𝑢𝑛 𝜇𝑖 𝑒𝑠 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑖𝑛𝑡𝑜

Estadístico de prueba
F, a través de prueba ANOVA

ANOVA
Supuestos
Normalidad del error
Shapiro-Wilk normality test

data: ri
W = 0.88239, p-value = 0.05151

Homocedasticidad
Non-constant Variance Score Test
Variance formula: ~ fitted.values
Chisquare = 2.325793, Df = 1, p = 0.12725

ANOVA
Analysis of Variance Table

Response: vit_c
Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F)
PASTEURIZACION 2 1.69874 0.84937 48.822 1.719e-06 ***
Residuals 12 0.20877 0.01740
---
Signif. codes: 0 ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ 1

Conclusión
Con F de 48.82 (p-valor = 1.71 x 10-6) se rechaza la hipótesis nula. Es decir, al menos un
𝜇𝑖 es distinto, por lo que es necesario hacer un test de Tukey.

95
Test de Tukey
Study: % de vitamina C
Determinada con o sin pasteurización y en fruto

HSD Test for vit_c

Mean Square Error: 0.01739727

PASTEURIZACION, means

vit_c std r Min Max

c_p 0.5320 0.1437341 5 0.380 0.767
FRUTO 1.3490 0.0000000 5 1.349 1.349
s_p 0.8456 0.1775734 5 0.546 1.022

Alpha: 0.05; DF Error: 12

Critical Value of Studentized Range: 3.772929

Minimun Significant Difference: 0.2225534

Treatments with the same letter are not significantly different.

vit_c groups
FRUTO 1.3490 a
s_p 0.8456 b
c_p 0.5320 c

Nota: s_p: zumo sin pasteurización; c_p: zumo con pasteurización

96
 Polifenoles
Hipótesis
𝐻0 : 𝜇𝐹𝑟𝑢𝑡𝑜 = 𝜇𝐸𝑥𝑡.𝑠.𝑝 = 𝜇𝐸𝑥𝑡.𝑐.𝑝
𝐻1 : 𝐴𝑙 𝑚𝑒𝑛𝑜𝑠 𝑢𝑛 𝜇𝑖 𝑒𝑠 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑖𝑛𝑡𝑜

Estadístico de prueba
F, a través de prueba ANOVA

Gráfica

ANOVA
Supuestos
Normalidad del error
Se cumple el supuesto de normalidad del error.

Shapiro-Wilk normality test

data: ri
W = 0.97081, p-value = 0.8698

Homocedasticidad
No se cumple el supuesto de homocedasticidad. Por lo tanto, se buscará hacer una
transformación para cumplir con dicho supuesto.

Non-constant Variance Score Test

Variance formula: ~ fitted.values
Chisquare = 8.053483, Df = 1, p = 0.0045416

97
Box y Cox
Según se observa, se sugiere que la variable respuesta se eleve a la -1.

Los supuestos quedan de la siguiente manera:

Normalidad del error

Shapiro-Wilk normality test

data: ri
W = 0.96469, p-value = 0.7732

Homocedasticidad
Non-constant Variance Score Test
Variance formula: ~ fitted.values
Chisquare = 0.003179302, Df = 1, p = 0.95503

ANOVA
En este caso la variable respuesta es el logaritmo del porcentaje de polifenoles.

Analysis of Variance Table

Response: (polifenoles^-1)
Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F)
PASTEURIZACION 2 4.5323e-05 2.2661e-05 85.314 8.048e-08 ***
Residuals 12 3.1870e-06 2.6560e-07
---
Signif. codes: 0 ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ 1

98
Conclusión
Con F de 85.314 (p-valor = 8.04 x 10-8) se rechaza la hipótesis nula. Es decir, al menos un
𝜇𝑖 es distinto, por lo que es necesario hacer un test de Tukey.

Test de Tukey
De la prueba de Tukey, se observa que los valores de polifenoles en fruto son
significativamente superiores al del extracto con y sin preservante. Así mismo, se debe
agregar que el extracto con o sin preservantes no presentaron diferencias significativas para
un nivel de confianza de 95%.

Study: % de polifenoles C
Determinada con o sin preservante y en fruto

HSD Test for polifenoles

Mean Square Error: 225.1617

PASTEURIZACION, means

polifenoles std r Min Max

C/P 115.418 7.264535 5 109.34 127.22
FRUTO 219.178 23.603795 5 189.32 247.03
S/P 130.464 8.097681 5 116.29 136.54

Alpha: 0.05 ; DF Error: 12

Critical Value of Studentized Range: 3.772929

Minimun Significant Difference: 25.31867

Treatments with the same letter are not significantly different.

polifenoles groups
FRUTO 219.178 a
S/P 130.464 b
C/P 115.418 b

99
 Genipina

Se tienen las siguientes hipótesis:

𝐻0 : 𝜇𝐹𝑟𝑢𝑡𝑜 = 𝜇𝑀1 = 𝜇𝑀2

𝐻1 : 𝐴𝑙 𝑚𝑒𝑛𝑜𝑠 𝑢𝑛 𝜇𝑖 𝑒𝑠 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑖𝑛𝑡𝑜

Se empleó un nivel α = 0.05.

ANOVA
Se realizó el ANOVA previo cumplimiento de los supuestos de normalidad y
homocedasticidad.

Analysis of Variance Table

Response: Genipin
Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F)
Trat 2 6.2229 3.11145 4991.6 < 2.2e-16 ***
Residuals 12 0.0075 0.00062
---
Signif. codes: 0 ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ 1

Tukey
En vista que la prueba ANOVA mostró que no todas las medias son iguales, se realizó la
prueba de Tukey para realizar comparaciones múltiples. Dicha prueba se realizó utilizando
el paquete Agricolae (Mendiburu, 2020). El contenido de Genipin en M1 (extracto sin
pasteurizar) es significativamente mayor en el Fruto y en M2 (extracto pasteurizado) con un
nivel de confianza de 95%. Así mismo, que el contenido de Genipin del fruto es
significativamente mayor al de M2 (extracto pasteurizado).

Genipin groups

M1 (Ext. s/past). 1.91 a

FRUTO 0.72 b
M2 (Ext.past.) 0.41 c

100
 Ácido Geniposidico

Se tienen las siguientes hipótesis:

𝐻0 : 𝜇𝐹𝑟𝑢𝑡𝑜 = 𝜇𝑀1 = 𝜇𝑀2

𝐻1 : 𝐴𝑙 𝑚𝑒𝑛𝑜𝑠 𝑢𝑛 𝜇𝑖 𝑒𝑠 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑖𝑛𝑡𝑜

Se empleó un nivel α = 0.05.

ANOVA

Se realizó el ANOVA previo cumplimiento de los supuestos de normalidad y

homocedasticidad.

Analysis of Variance Table

Response: Gen.acid
Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F)
Trat 2 0.29089 0.145447 5.173 0.02398 *
Residuals 12 0.33740 0.028117
---
Signif. codes: 0 ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ 1

Tukey
En vista que la prueba ANOVA mostró que no todas las medias son iguales, se realizó la
prueba de Tukey para realizar comparaciones múltiples. Dicha prueba se realizó utilizando
el paquete Agricolae (Mendiburu, 2020). El contenido de Gen. Acid en M1 (extracto sin
pasteurizar) es significativamente mayor en el Fruto y en M2 (extracto pasteurizado) con un
nivel de confianza de 95%. Así mismo, el contenido de Genipin del fruto no difiere al de M2
(extracto pasteurizado).

Gen.acid groups

M1(Ext. s/past). 1.95 a

M2 ((Ext.past.) 1.66 b
FRUTO 1.64 b

101
 Anexo 5

Análisis de minerales en el zumo de Huito

102
103