ENZIMAS

INTRODUCCION
Las enzimas, o catalizadores biológicos, son sustancias fabricadas por los seres vivos, la mayoría de ellas de
naturaleza proteica, indispensables para mantener la vida.
LLamamos catalizador a toda aquella sustancia que cuando se incorpora al medio en el que ocurre una reacción
química logra aumentar la velocidad de la misma, sin consumirse. Las enzimas aumentan la velocidad de las
reacciones que ocurren en las células y el espacio extracelular.
¿ Por qué es tan importante esta función? ¿Cuál es la relación entre el desarrollo de las reacciones químicas y
la vida?
Recordemos que las células que forman parte de los organismos que viven en este planeta están constituídas
fundamentalmente por moléculas orgánicas que se sintetizan y se recambian a través de reacciones químicas,
así como también, es en parte a través de ellas que se obtiene la energía para los distintos procesos celulares.
Las reacciones químicas resultan indispensables para el funcionamiento de los seres vivos y también de la
sociedad moderna, por ejemplo cuando se efectúan en células vegetales al captar la energía lumínica, en el
cerebro al formar nuevos recuerdos o en el motor del auto al consumir combustible.
¿ A qué se denomina reacción química?
Es el proceso por el cual una sustancia (o sustancias) cambia para formar una o más sustancias nuevas; implica
la ruptura y formación de enlaces químicos, lo que origina que los átomos se reacomoden para formar otras
especies químicas, las cuales tienen propiedades distintas de las del material original.
Se representa utilizando lo que se denomina una ecuación química.
Tomando sólo a modo de ejemplo la transformación de glucosa en glucosa 6P que ocurre inmediatamente
luego del ingreso de la hexosa a las células, la ecuación sería:
glucosa + ATP glucosa 6P + ADP
donde ATP es: adenosíntrifosfato; glucosa 6P (una molécula de glucosa con un fosfato agregado en el carbono
6 por unión éster); ADP: adenosíndifosfato
Esta expresión simbólica se puede leer: una molécula de glucosa reacciona con una de ATP para producir una
molécula de glucosa 6P y otra de ADP. Se considera que la reacción procede de izquierda a derecha. Las
sustancias iniciales son los reactivos (en este caso glucosa y ATP ) y las sustancias formadas en la reacción son
los productos (glucosa 6P y ADP):
reactivos productos
En este caso se trata de una reacción irreversible.
Reacciones reversibles y Constante de equilibrio (Keq)
Además de las irreversibles existen también las reacciones reversibles, como por ejemplo la formación de ácido
carbónico a partir de CO2 y H2O, como hemos visto en el capítulo de pH y buffers.
CO2 + H2O H2CO3 Esta reacción está catalizada por la Enzima anhidrasa carbónica
Nótese que las reacciones reversibles ocurren en ambos sentidos. Inicialmente las moléculas de dióxido de
carbono y agua se combinan para formar moléculas de ácido carbónico y con el tiempo algunas de éstas se
disocian para regenerar dióxido de carbono y agua. Las velocidades de ambas reacciones (directa e inversa)
guardan una curiosa relación: conforme avanza la reacción, la velocidad de la reacción directa (hacia la
derecha) va disminuyendo, mientras que la de la reacción inversa (hacia la izquierda) va aumentando, hasta
llegar a igualarse. Allí es cuando se ha alcanzado el equilibrio, situación que no implica la detención de las
transformaciones, sino que se ha alcanzado la misma velocidad en ambos sentidos. Tampoco es cierto que al
llegar al equilibrio las concentraciones de reactivos y productos serán iguales.
La ley de acción de masas propuesta en 1864 establece que “para una reacción reversible en equilibrio y a una
temperatura constante, la relación entre las concentraciones de reactivos y productos tiene un valor constante
llamado Keq (constante de equilibrio). Obsérvese que aunque las concentraciones pueden variar, el valor de
Keq para una reacción determinada permanece constante, siempre y cuando la reacción esté en equilibrio y la
temperatura no cambie. En consecuencia la Keq se define por un cociente, cuyo numerador se obtiene
multiplicando las concentraciones en equilibrio de los productos y cuyo denominador se obtiene multiplicando
las concentraciones de los reactivos. La magnitud de la Keq indica si una reacción es favorable a los productos
(valor mucho mayor que 1) o favorable a los reactivos (valor mucho menor que 1).
[H2CO3]
Para nuestro ejemplo Keq =
[H2O] [CO2]
A pesar de que el uso de los términos reactivos y productos puede resultar confuso porque una sustancia que
es un reactivo en la reacción directa es también un producto en la inversa, esta terminología es consecuente
con la convención de que las sustancias escritas a la izquierda de la flecha de equilibrio se consideran como
“reactivos” y las que están al lado derecho como “productos”.
Antes de ingresar en el estudio de la velocidad de las transformaciones químicas, analizaremos una de las
teorías que explican cómo se producen, para luego entender cuáles son los factores que pueden modificar su
velocidad.
¿ Cuáles son los requisitos necesarios para que se lleve a cabo una reacción química?
Uno de los modelos que explica cómo tiene lugar una reacción química es el de la TEORÍA DE LAS COLISIONES,
desarrollada por Lewis y otros químicos en la década de 1920. Según esta teoría, para que ocurra una reacción
química, es preciso que los átomos, las moléculas o los iones de los reactivos entren en contacto entre sí, es
decir, que choquen o colisionen.

Si colocamos dos reactivos, A y B, por ejemplo glucosa y ATP, en un recipiente con

un solvente, por ejemplo agua, y asumiendo que en cualquier experimento
estarán involucradas decenas o cientos de miles de billones de moléculas de
ambos tipos, no todas ellas se moverán en la misma dirección ni a la misma
velocidad. Algunas se moverán con lentitud, otras a velocidades moderadas y
otras con extrema rapidez de modo que algunos choques o colisiones pueden ser
simples roces y otros moderados e incluso violentos. Todo depende de la
velocidad con que ambas partículas se muevan antes del impacto.

¿Por qué los reactivos deben chocar para que se produzca la reacción? recordemos que los átomos presentan
electrones en sus orbitales, partículas con carga negativa, y que para que dos moléculas reaccionen entre sí,
deben acercar sus capas de electrones a pesar del impedimento de la repulsión eléctrica.
Cada choque tiene una energía de colisión particular, y sus valores variarán de muy bajos a muy altos. Se
espera que por debajo de un valor determinado de energía, que depende de la reacción específica de la que se
trate, no se producirá ningún cambio químico, y por arriba de ese valor los choques darán buenos resultados,
es decir, aparecerá el producto.
A este valor mínimo de energía de colisión se lo conoce como ENERGÍA DE ACTIVACIÓN. Es la mínima cantidad
de energía que se requiere para iniciar una reacción química. Representa la barrera energética que hay que
sortear para que ocurra la reacción. De lo dicho anteriormente se entiende por qué las transformaciones
químicas que tienen baja energía de activación ocurren más fácilmente que las que la tienen más alta.
Un ejemplo cotidiano es el encendido de un fósforo. La cabeza del mismo sería el combustible, el aire que lo
rodea el comburente (encargado de oxidar el combustible favoreciendo la combustión) y el gesto de rasparlo
contra la lija aportaría la energía de activación necesaria en forma de calor para que se active la reacción de
combustión.
“Para cada reacción determinada hay una energía de activación determinada”.
Vale la pena aclarar que para que se produzca la reacción no sólo es necesario que los reactivos tengan cierta
energía de choque sino que la orientación de los mismos en el momento de la colisión sea la indicada.
¿ Cómo se clasifican las reacciones químicas según el intercambio energético que ocurre durante su
transcurso?
Los seres vivos son sistemas abiertos, esto significa que intercambian materia y energía con el ambiente en el
que viven. ¿Para qué necesitan energía los seres vivos? Podemos simplificar este concepto diciendo que
básicamente para tres funciones:
 Movimiento; síntesis de sustancias complejas a partir de sencillas (reacciones anabólicas) y
transporte activo a través de las membranas
Estos tres tipos de procesos entonces necesitan de un aporte de energía externo, por lo tanto el estado inicial
del sistema tiene menor energía que el final, a estos procesos se los conoce como “endergónicos”. Si se trata
de una reacción química o vía metabólica, entonces los productos tendrán más energía que los reactivos.
Ahora bien, en un sistema biológico, de dónde se obtiene dicha energía? Uno de los orígenes es la energía
liberada en los llamados procesos exergónicos, en los cuales el estado final tiene menor energía que el inicial.
Si se trata de una reacción química o vía metabólica exergónica, entonces los productos tendrán menor energía
que los reactivos.
En este curso de Introducción a la Biología celular y molecular estudiaremos como ejemplo de vía endergónica
a la fotosíntesis y de exergónica a la respiración celular.
Es importante remarcar que en los seres vivos se llevan a cabo permanentemente procesos de los dos tipos, y
que están relacionados o acoplados, es decir, un proceso endergónico no puede ocurrir si simultáneamente no
se lleva a cabo uno exergónico.
Llamaremos energía libre de Gibbs a la energía útil involucrada en los distintos procesos y la representaremos
con la letra G. El cambio de energía libre que ocurre en los mismos se definirá como la G final – G inicial:
G: delta G.
Si la energía final del proceso es mayor que la inicial el G será (+) y el proceso no será espontáneo, no
ocurrirá en ese sentido a menos que se provea energía desde el medio. Si la energía final del proceso es menor
que la inicial el G será (-) y el proceso será espontáneo, ocurrirá en ese sentido sin la necesidad de aportarle
energía, salvo la de activación.
Si se trata de una reacción química, independientemente de qué tipo de reacción se trate, endergónica o
exergónica, siempre será necesario sortear la barrera energética (energía de activación) para que aparezcan los
productos.

LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES QUIMICAS

Cuando se analiza una ecuación que representa una reacción química se tiende a pensar que esta última es
inmediata, que se desarrolla independientemente del tiempo. Esto es falso. Existen algunas reacciones muy
rápidas, pero en la mayoría de los casos, toman cierto tiempo y en ocasiones son muy lentas.
Algunos factores que afectan las velocidades de reacción pueden ser controlados fácilmente por los
científicos, como son la concentración de reactivos (al aumentar la cantidad de reactivos aumenta la
probabilidad de que se produzcan choques en todas las orientaciones), y la temperatura, al aumentarla se
logra que las moléculas se muevan con mayor rapidez, aumentando la frecuencia y la energía de los choques.
Un aumento de 10°C de temperatura duplicará o triplicará la velocidad de la reacción. Sin embargo estos
factores no siempre son suficientes o factibles de usar, debemos tener en cuenta que el calor no es un factor
que pueda aplicarse en las reacciones químicas celulares debido al peligro que ocasionaría la desnaturalización
de las proteínas. De modo que generalmente se trata de facilitar las reacciones disminuyendo la energía de
activación de la reacción.
¿ Cómo se puede entonces lograr disminuir la energía de activación y aumentar así la velocidad de la
reacción?
La industria y los seres vivos han resuelto este inconveniente al utilizar un grupo muy heterogéneo de
sustancias llamadas catalizadores.
Como dijéramos al principio del capítulo son las sustancias cuya adición a una mezcla de compuestos capaces
de reaccionar entre sí hacen más rápida a la reacción. Por ejemplo, la sacarosa, en solución acuosa y en
caliente, no es hidrolizada espontáneamente pero, si se le agrega una pequeña cantidad de ácido clorhídrico,
es rápidamente desdoblada en fructosa y glucosa. El ácido clorhídrico funciona allí como catalizador.
En realidad, sin un catalizador muchas reacciones no podrían ocurrir. Se necesitan para la producción de
materiales plásticos, fármacos, tinturas, combustibles sintéticos, etc.
La mayor parte de los agentes catalíticos utilizados en la industria son de naturaleza mineral, algunos son
solubles, como el ácido clorhídrico y otros insolubles como el Platino (Pt) o el oro (Au).
La mayoría de las reacciones químicas importantes en los procesos biológicos tiene una energía de activación
tan elevada que su ocurrencia “in vitro” (literalmente: en el vidrio, en el tubo de ensayos del laboratorio,
investigado y manipulado fuera del organismo vivo) no puede ser observada.

Propiedades de los catalizadores

 son sustancias que disminuyen la energía de activación de las reacciones químicas
 y logran que ocurran más rápidamente
 actúan en cantidades relativamente pequeñas
 no se consumen ni se alteran de forma permanente (en una reacción catalizada el agente catalítico se
usa en uno de los pasos y más tarde se regenera en un paso subsiguiente)
 según el tipo de catalizador varía el mecanismo por el cual aumenta la velocidad de la reacción; por
ejemplo algunos metales brindan una superficie sobre la cual los reactivos se desestabilizan de modo
que la ruptura y formación de nuevos enlaces resulta más fácil
 no son reactivos ni productos
 no modifican la constante de equilibrio de la reacción: aumentan en la misma proporción la velocidad
de la reacción directa e inversa, no se modifica el equilibrio final pero éste se alcanza mucho más
rápido.
 No modifican el G de la reacción
La vida tampoco podría concebirse sin la participación de miles de catalizadores que actúan en las reacciones
químicas que se llevan a cabo en las células de los seres vivos e incluso en el medio extracelular que las
rodea.
A estos catalizadores biológicos se los conoce como ENZIMAS.
La importancia de las enzimas es evidente: todas las biomoléculas pertenecientes a los seres vivos, son
sintetizadas y degradadas en forma permanente por reacciones químicas de las cuales casi todas son
catalizadas por enzimas. Hay al menos una enzima diferente por reacción catalizada, lo que representa miles de
enzimas para cada organismo. La diversidad de enzimas es tal que el universo de sustratos es amplísimo: desde
sustancias inorgánicas sencillas hasta biopolímeros de alta complejidad. Las reacciones que se producen sin la
intervención de una enzima en un ser vivo se denominan “reacciones no enzimáticas”. Constituyen una
excepción.
¿ Cuáles son las diferencias entre las enzimas o catalizadores biológicos y los catalizadores inorgánicos que se
usan en la industria?
 logran mayores velocidades de reacción, en general se multiplican por 106 y 1012 veces con respecto a
las reacciones no catalizadas
  funcionan bajo condiciones relativamente atemperadas, esto es, temperaturas inferiores a 100ºC,
presión atmosférica y pH casi neutro. Por el contrario la catálisis química suele requerir temperaturas y
presiones elevadas además de pH extremos
 tienen un grado de especificidad muy superior al de los inorgánicos, en general reconocen a un solo
reactivo
 sus actividades están reguladas en las células por distintos mecanismos que estudiaremos en este
capítulo
 son termolábiles, esto significa que las afectan las variaciones de temperatura. Por el contrario los
inorgánicos son termorresistentes.
 la actividad catalítica de las enzimas es muchísimo mayor que la de los catalizadores inorgánicos
SABIAS QUE ?

 1 mol de la enzima Alcohol deshidrogenasa transforma por segundo a 25°C 720 moles de alcohol en
ácido acético; mientras que a 200°C, los catalizadores industriales (Pt, platino) transforman sólo 0.1 a 1
mol de alcohol por mol de catalizador por segundo.
 A 0°C la enzima catalasa descompone 200 000 moles de H202 por mol de enzima y por segundo, en tanto
que el inorgánico más activo (Pt, platino) descompone a 20°C, 10-80 moles de H202 por mol de
catalizador por segundo.

EL MECANISMO DE ACCION DE LAS ENZIMAS

Vamos a analizar dicho mecanismo aplicándolo en dos ejemplos:
a) Respiración: Una vía metabólica exergónica
La siguiente ecuación química representa a una vía metabólica exergónica, la “respiración”, en la que los
reactivos o “sustratos”, glucosa (C6H12O6) y oxígeno (O2) se transforman en dos productos, dióxido de carbono
(CO2) y agua (H2O):
C6H12O6 + O2 CO2 + H2O + Energía
A continuación se muestra el gráfico que representa la variación de energía libre que ocurre durante la
reacción y las diferencias de las curvas en ausencia y presencia de enzimas.

Obsérvese que los sustratos (en este caso glucosa y

oxígeno) deben llegar a un estado de mayor energía,
que corresponde al momento del choque entre los
mismos, también denominado “estado de
transición”. Como vimos anteriormente la energía
libre necesaria para alcanzar el estado de transición
es la energía de activación de la reacción (Ea). Su
valor es la diferencia entre la energía del estado de
transición y la energía basal de los reactivos. Las
enzimas actúan reduciendo la energía de
activación, incrementando de este modo la
velocidad de la reacción.
Nótese que la longitud del segmento que representa
a la Ea de la reacción catalizada es menor que la del
segmento que representa a la no catalizada.
 b) Fotosíntesis: una vía metabólica endergónica
Los reactivos, dióxido de carbono (CO2) y agua (H2O) se transforman en los productos glucosa y oxígeno.
CO2 + H2O + Energía C6H12O6 + O2

La curva dada muestra la variación de energía libre en

ausencia de enzimas. Obsérvese que la energía libre de
la glucosa es mayor que la de los reactivos, CO2 y H2O.

Ejercicio a resolver: represente en el mismo gráfico la

curva que se obtendría en presencia de enzimas

LEER CON ATENCIÓN:

Mecanismo de acción de las enzimas: disminuyen la energía de activación de las reacciones que catalizan.

SABIAS QUE ?

2 H2O2 ⇄ H2O + O2
La descomposición del agua oxigenada tiene una energía de activación de 18 kcal/mol. Sin embargo, con el
agregado de platino coloidal, un catalizador inorgánico, disminuye a 11.7 kcal/mol y la enzima “catalasa” la
lleva a menos de 2 kcal/mol.

¿Cómo se logra la interacción entre la enzima y el reactivo a transformar?

En primer lugar aclararemos que en enzimología se utiliza el término “sustrato” en lugar de reactivo para
definir a aquella molécula que es reconocida y transformada por la enzima, significa “sustancia sobre la que se
ejerce la acción”.
La función enzimática está íntimamente relacionada con la estructura de la enzima. La mayoría de las enzimas
identificadas hasta el momento son proteínas, que como habíamos visto en clases anteriores presentan una
estructura tridimensional que puede adoptar dos formas, fibrosa y globular.
Las enzimas proteicas son todas globulares y pueden alcanzar estructura terciaria o cuaternaria. Son
biomoléculas en las que es característica la presencia de vueltas y dobleces de la cadena polipeptídica que
generan ciertos espacios con forma de bolsas o hendiduras y que representan los lugares en los que la
macromolécula reconoce a sus ligandos (moléculas que interaccionan específicamente con la proteína).
En el caso de las enzimas, a esos espacios que reconocen al sustrato en forma específica, se los conoce como
sitios activos.
Los aminoácidos que forman parte del sitio activo no están forzosamente ubicados unos junto a otros sobre
una misma secuencia de la cadena polipeptídica. En efecto, el plegamiento de ésta al formar las estructuras
secundaria y terciaria, puede perfectamente aproximar aminoácidos situados a gran distancia en la estructura
primaria o incluso que pertenezcan a cadenas polipeptídicas diferentes.
La interacción entre la enzima y el sustrato se da por complementariedad de formas y de cargas eléctricas, de
modo que los aminoácidos que forman parte del sitio activo se disponen para interactuar de manera específica
con el sustrato por atracción. Las fuerzas involucradas en esta unión son no covalentes, como por ejemplo:
puentes de hidrógeno, hidrofóbicas, electrostáticas y de Van der Waals.
Las moléculas que difieren en la forma o la distribución de los grupos funcionales con el sustrato, no pueden
unirse a la enzima en forma productiva; esto es, no pueden llevar a la formación de productos.
Debemos diferenciar lo que se conoce como sitio activo del sitio catalítico, formado por un número restringido
de aminoácidos, incluso puede ser uno solo, cuyos restos laterales participan directamente en intercambios de
electrones o radicales con el sustrato, es decir, lo transforman en otra sustancia, lo que constituye el
fundamento del fenómeno catalítico. Dicho sitio puede estar incluído o no en el sitio activo.
Entonces las enzimas ejercen su acción al lograr aumentar la concentración local de las moléculas de sustrato
en el sitio catalítico transformándolas luego en producto.
La especificidad de la enzima en relación a sus sustratos puede ser:
Absoluta: cuando la enzima se une a un solo sustrato y no a otro, aunque entre ellos haya una mínima
diferencia.
Ej. la enzima glucoquinasa, enzima hepática, que transforma a la molécula de glucosa en glucosa 6 fosfato,
impidiendo así que la molécula pueda escapar de la célula del hígado, sólo reconoce y transforma a la glucosa y
no a la galactosa que es parecida a la anterior por ejemplo.
Relativa o de grupo: la presentan aquellas enzimas que pueden catalizar la transformación de
una familia de sustratos relacionados estructuralmente. Esto se debe a que presentan cierta
flexibilidad en su conformación que les permite adaptarse a distintos ligandos.
Ej. La enzima hexoquinasa, presente en varios órganos incluído el hígado, cataliza la fosforilación de varias
hexosas como la glucosa, galactosa y manosa.

NOMENCLATURA DE LAS ENZIMAS

Existen varias formas mediante las que se puede asignar un nombre a una enzima:

1- nombres triviales o vulgares: las primeras enzimas aisladas recibieron nombres triviales, en general
vinculados a su procedencia anatómica, tal el caso de la ptialina, presente en la saliva; pepsina,
encontrada en el estómago; tripsina en el páncreas, etc…
2- nombres sistemáticos: al ir aumentando el número de enzimas conocidas, se les fueron asignando
nombres basados en el tipo de sustrato sobre el que actúan y/o en el tipo de reacción catalizada, con el
agregado del sufijo “asa”. Así, por ejemplo, el nombre de ureasa deriva de su acción sobre la molécula
de urea (uno de los productos del metabolismo de los aminoácidos). Otro ejemplo sería la glucosa
fosfato isomerasa que cataliza una reacción reversible, la isomerización de la glucosa-6-fosfato en
fructosa-6-fosfato.
3- En el caso de las reacciones reversibles es la misma enzima la que cataliza tanto la reacción directa
como la inversa. Cuando la acción que ejerce la enzima es la hidrólisis del sustrato (ruptura en
presencia de agua), el segundo componente del nombre se omite, entonces por ejemplo, la lactosa
hidrolasa se llama simplemente lactasa.
4- código de la Comisión de Enzimas: en 1961, la Unión Internacional de Bioquímica adoptó el sistema de
clasificación y nomenclatura propuesto por la Comisión de Enzimas, basado en el tipo de reacción
química catalizada. De acuerdo con este sistema, las enzimas se agrupan en seis clases principales, cada
una de ellas es dividida en subclases (se muestra sólo a título informativo).
 CLASES FUNCION
Oxidorreductasas Catalizan reacciones en las que una molécula se oxida y otra se reduce.
Pertenecen a esta clase las oxidasas, reductasas y deshidrogenasas
Transferasas Transfieren grupos funcionales entre dadores y aceptores. Ej:
aminotransferasas; quinasas (transfieren grupos fosfatos desde el ATP
a la molécula aceptora)
Hidrolasas Catalizan la ruptura de enlaces covalentes en presencia de agua. Ej:
proteasas o peptidasas, nucleasas, lipasas, fosfatasas.
Liasas Añaden o eliminan unidades de agua, amoníaco o dióxido de carbono.
Ej: descarboxilasas
Isomerasas Catalizan isomerizaciones de distintos tipos. Ej: epimerasas, mutasas.
Ligasas Catalizan la unión de dos moléculas a expensas de enlaces fosfato de
alta energía. Ej: aminoacil ARNt sintetasa.

NATURALEZA QUIMICA DE LAS ENZIMAS: si bien se han reconocido hasta la fecha algunas de naturaleza
nucleotídica, la gran mayoría son proteínas, por lo que están constituídas por aminoácidos. No obstante,
podemos hacer la siguiente distinción:
 Enzimas simples: su hidrólisis total genera únicamente aminoácidos. No necesitan sustancias
auxiliares para cumplir su función. Ejemplos: pepsina, tripsina, ureasa, alfa amilasa, etc..
 Enzimas conjugadas: para ejercer su acción, requieren de una parte No proteica asociada
generalmente en forma débil que se denomina COFACTOR. El cofactor puede tener naturaleza
inorgánica (ión, ej: Fe, Cu, Mg, etc) u orgánica, en este último caso se le denomina: COENZIMA.
Muchas vitaminas proporcionan coenzimas cruciales para el funcionamiento de las células
humanas. Si el cofactor o la coenzima se asocian en forma covalente a la enzima se denominan
“grupos prostéticos”.

Al conjunto de la parte proteica + la no proteica

se lo conoce con el nombre de HOLOENZIMA,
que es la forma activa de la enzima. La
apoenzima sola es inactiva, ya que si no está
presente el cofactor no puede actuar.

Ejemplos de enzimas que requieren cofactores y de

vitaminas que aportan coenzimas: VITAMINA COENZIMA TIPO DE
REACCION
Acido Coenzima A Transferencia de
COFACTOR ENZIMA pantoténico acilo
Zn2+ Anhidrasa carbónica Niacina Nicotinamida Oxido-reducción
2 (ácido adenina dinucleótido
Ni + Ureasa
nicotínico) (NAD)
Se Glutatión peroxidasa
Piridoxina Fosfato de piridoxal Transferencia de
K+; Mg2+ Piruvato quinasa (B6) grupos amino

Fe2+; Cu2+ Citocromo oxidasa Riboflavina Flavina adenina Oxido-reducción

dinucleótido (FAD)
Ejemplos de vitaminas que aportan coenzimas:

Analizaremos el caso especial de las coenzimas de óxido-reducción , NAD y FAD, por participar
en procesos que estudiaremos en este curso:

NAD+ + 2H+ + 2e- NADH + H+ FAD + 2H+ + 2e- FADH2

Las coenzimas en el estado oxidado (NAD+ y

FAD) tienden a captar electrones desde el
sustrato de la enzima transformándose en
coenzimas reducidas (NADH y FADH2) y en el
caso de cederle electrones al sustrato, como
se muestra en la figura ellas se oxidan.
Cuando el sustrato se oxida la coenzima se
reduce y viceversa.

LA MEDICION DE LA VELOCIDAD y LAS ENZIMAS MICHAELIANAS

La velocidad de las reacciones enzimáticas depende de los siguientes factores:
a) concentración de sustrato y de enzima
b) pH
c) temperatura
d) activadores
e) inhibidores
Analizaremos en primer término la concentración de sustrato:
los estudios sistemáticos del efecto de la concentración inicial del sustrato sobre la actividad enzimática
comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo enzima-
sustrato como intermediario del proceso de catálisis enzimática. En 1913, Leonor Michaelis y Maud Menten
(foto de la derecha) desarrollaron esta teoría y en base a una experiencia en la que trabajaron con una enzima
que tiene un sólo sitio activo y reconoce a un sólo sustrato, propusieron una ecuación de velocidad que explica
el comportamiento cinético de las enzimas. Propusieron que la formación reversible de un complejo enzima-
sustrato sería el paso intermedio necesario para obtener los productos:
Obsérvese que según este mecanismo, las moléculas de enzima quedan libres e intactas luego de la catálisis.
Esto les permite interaccionar con sucesivas moléculas de sustrato hasta agotarlo. Es decir que es muy poca la
cantidad de enzima necesaria para la catálisis independientemente de la cantidad de sustrato utilizada. Por eso
se dice que las enzimas son EFICIENTES.
Michaelis y Menten realizaron una experiencia utilizando la enzima “invertasa” la cual desdobla a la molécula
de sacarosa (sustrato) en sus monosacáridos constituyentes, glucosa y fructosa (productos). Trabajaron con
concentraciones constantes de enzima, concentraciones crecientes de sustrato y midieron la velocidad de la
reacción para cada concentración de sustrato.

La velocidad de una reacción puede medirse de dos maneras, como la cantidad de producto/os formado en la
unidad de tiempo o cantidad de sustrato/os consumido en la unidad de tiempo.

El resultado de la experiencia indicó que existe una relación matemática entre la velocidad de la reacción
química y la concentración de sustrato que puede representarse con la siguiente ecuación o fórmula
algebraica:

 V= velocidad de la reacción;
 Vmax= velocidad máxima;
 [S]= concentración de sustrato;
 Km= constante de Michaelis
(Km y Vmax son constantes en las condiciones de la
experiencia )
 V y [S] son las variables

¿Qué son las funciones?

Se denomina “función” a la relación entre dos conjuntos de elementos que varían, cambian, se modifican, en
forma conjunta. A los elementos que varían se los llama “variables”. Siempre hay una relación de
dependencia entre las dos variables que intervienen en una función, la que se puede representar con una
explicación con palabras, una tabla acompañada de una explicación, una fórmula algebraica o con un gráfico
cartesiano.
El plano cartesiano está formado por dos rectas numéricas, una horizontal y
otra vertical que se cortan en un punto llamado origen (0). La recta horizontal
es llamada eje de las abscisas o de las equis (x), y la vertical, eje de las
ordenadas o de las yes, (y). El plano cartesiano tiene como finalidad describir
la posición de puntos, los cuales se representan por sus coordenadas o pares
ordenados. Las coordenadas se forman asociando un valor del eje de las "X" y
uno de las "Y", respectivamente. En el eje de las (x), se ubica la variable
independiente, que es aquella que se conoce al inicio de un experimento o
proceso y que es controlada por el investigador. La variable dependiente es la
que aparece como resultado del experimento, se relaciona directamente con
la primera y es la que se representa en el eje de las (y).

La representación de la función obtenida en los ejes cartesianos según la experiencia es una hipérbola, por eso
se dice que estas enzimas tienen “cinética hiperbólica” y se las caracteriza como “enzimas michaelianas”:
 La Km, es la concentración de sustrato que corresponde a
la mitad de la velocidad máxima, y es una medida de la
afinidad de la enzima por el sustrato. A mayor afinidad,
menor Km (porque hace falta una MENOR concentración
de sustrato para alcanzar la mitad del punto de saturación
de la enzima). Se expresa en unidades de concentración,
por ejemplo moles/litro.

[Escriba una cita del documento o el

resumen de un punto interesante. Puede
Interpretación del de
situar el cuadro gráfico:
texto enen el eje x selugar
cualquier representan las distintas concentraciones de sustrato utilizadas en el
experimento (variable
del documento. Use independiente); a medida que avanzamos hacia la derecha las mismas van aumentando.
la ficha Herramientas
Ende el dibujo
eje y se
para cambiar el formato del velocidades de reacción obtenidas (variable dependiente) según la
representan las distintas
cantidad de sustrato agregado. Obsérvese que la velocidad de reacción va aumentando proporcionalmente a
cuadro de texto de la cita.]
medida que aumenta la concentración de sustrato (al principio de la curva), y llega un momento en el que la
pendiente empieza a disminuir hasta el punto en que la velocidad se hace constante. Ése es el punto de
saturación: Por más que siga aumentando la concentración de sustrato, las enzimas no pueden catalizar las
reacciones a una velocidad mayor.
En ese punto las enzimas alcanzaron su velocidad máxima (todos los sitios activos de todas las enzimas se
encuentran ocupados y las enzimas están catalizando la reacción a su máxima velocidad). Esto no significa que
la catálisis se detuvo sino que continúa a la misma velocidad, se siguen transformando los sustratos en
productos hasta que se agotan.
A modo de ejemplo:

Nótese que la concentración de sustrato [S] utilizada en la

experiencia aumenta desde el tubo de ensayo n⁰1 al n⁰8.
La velocidad (V) aumenta a medida que aumenta la [S] en
las condiciones iniciales.
Por ejemplo para una [S] de 2 mmol/litro la V obtenida es
40 umoles por segundo; para 4 mmol/litro de sustrato la V
obtenida es de 60 umoles por segundo; para 6 mmol/litro
de sustrato la V obtenida es de aproximadamente 70
umoles por segundo, etc..
Si suponemos según el gráfico que 80 umoles/seg es la
Vmax de esta reacción alcanzada con aproximadamente 10
mmol/litro de sustrato en las condiciones de la experiencia,
podemos aseverar que esa será la velocidad cuando la [S]
sea mayor de 10 mmol/litro independientemente de su
valor.

INHIBICION ENZIMATICA

Desde los inicios de la Enzimología se sabía de la existencia de sustancias que disminuían la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas “envenenando” o dificultando la actuación de éstas.
Un inhibidor es una sustancia que disminuye la actividad enzimática a través de la interacción con el sitio activo
u otros sitios específicos de la enzima. Esta definición no incluye a aquellos agentes que inactivan a la enzima a
través de su desnaturalización.
Los inhibidores son sustancias exógenas, esto significa que no son propias de la célula, no son fabricados por
ellas, llegan a las mismas desde el exterior del organismo. Se emplean como fármacos, insecticidas y armas
químicas.
Existen dos tipos de inhibidores para las enzimas:
Irreversibles: Se unen de forma covalente a la enzima e inhiben su actividad de forma permanente y definitiva.
Un ejemplo lo constituyen los insecticidas organofosforados utilizados entre otras cosas para el control de las
plagas agrícolas. La acetilcolina es un importante neurotransmisor químico, el cual se libera en la sinapsis
preganglionares autonómicas, sinapsis postganglionares parasimpáticas y unión neuromuscular del músculo
esquelético. En la unión sináptica es hidrolizada a través de la enzima acetilcolinesterasa generando los
productos ácido acético y colina. Los organofosforados (inhibidores irreversibles) fosforilan a dicha enzima en
las terminaciones nerviosas inactivándola, lo que provoca un aumento excesivo de acetilcolina en los
receptores muscarínicos, nicotínicos y sistema nervioso central, con la consecuente interrupción de la
transmisión del impulso nervioso y muerte del insecto.

Reversibles: Se unen a través de uniones débiles reversibles (de tipo intermolecular). Por eso es que son
reversibles: el inhibidor se une, y luego puede separarse.

Podemos diferenciar 2 tipos de inhibidores reversibles:

Competitivos: poseen una estructura química similar a la del sustrato, por eso
se unen al SITIO ACTIVO impidiendo la unión del sustrato.
En el gráfico se observa que aumenta la Km (o sea, es como si disminuyera la
afinidad de la enzima por el sustrato) dado que parte de los sitios activos están
“ocupados” por el inhibidor.
Aún así, la velocidad máxima se mantiene constante: si aumenta mucho la
concentración de sustrato (a la derecha en el eje x) , llega un punto en el que
la cantidad de inhibidor es muy pequeña con respecto a la cantidad de
sustrato. El efecto se revierte porque ambos, sustrato e inhibidor, compiten
por el mismo sitio de unión. Ejemplo: algunos fármacos utilizados en el
tratamiento del HIV, como los inhibidores de la proteasa del virus, cuya
estructura química es similar a los péptidos que funcionan como sustratos de
la enzima.

No Competitivos: En éste caso el inhibidor se une a un sitio diferente del sitio

activo, modificando ligeramente la estructura de la enzima e impidiendo que
ésta catalice la reacción.
La afinidad de la enzima por el sustrato no cambia (Km constante), dado que la
inhibición no impide la unión entre ambos.
Sí se modifica la velocidad máxima: en todo momento siempre va a existir un
número determinado de enzimas que no puedan catalizar la reacción porque
se encuentran inhibidas. (Las enzimas ¨libres¨ del inhibidor siguen teniendo la
misma afinidad por el sustrato.)
Dado que no existe una competencia por el sitio de unión, el aumento de la
concentración de sustrato NO REVIERTE los efectos del inhibidor. Ejemplo: el
fármaco Foscarnet (phosphonoformate), se utiliza en el tratamiento del
Herpes Virus por ser un inhibidor no competitivo de la ADN polimerasa viral.
 INHIBIDOR COMPETITIVO INHIBIDOR NO COMPETITIVO
Inhibidor y Sustrato son estructuras químicas semejantes I y S estructuras químicas distintas
Unión del Inhibidor al sitio activo Unión a otro sitio distinto del activo
La inhibición se revierte con el aumento de S No se revierte con el aumento de S
V. Máx no se altera V. Máx disminuye
Km aumenta Km constante

LAS ENZIMAS REGULADORAS : Enzimas Alostéricas

Existe otro tipo de enzimas diferente a las de cinética hiperbólica o michaeliana, que presentan en su mayoría
estructura cuaternaria y pueden ser reguladas en su actividad. Se las conoce como Enzimas Alostéricas.
Son globulares y se caracterizan por poseer más de una subunidad (protómero), cada una con un sitio activo
(vale lo mismo que para el sitio activo de las enzimas michaelianas) y por tener sitios diferentes de los activos
llamados “sitios alostéricos”. A estos últimos se unen distintos moduladores cuya función es modificar la
actividad de la enzima según las necesidades de la célula.

Características del Gráfico “Velocidad en función de la concentración de Sustrato”:

En el caso de las enzimas alostéricas, no se define Km, dado que la afinidad

por el sustrato no es constante.
Estas enzimas poseen más de un sitio activo. A medida que estos van siendo
ocupados, se producen cambios conformacionales en la estructura globular de
la proteína que ¨expone¨ al resto de los sitios activos facilitando la unión con
el siguiente sustrato. Entonces, a medida que se van uniendo los sustratos a
los sitios activos, la afinidad de la enzima por el sustrato aumenta. Esto se
conoce con el nombre de Efecto Cooperativo, y es responsable de la forma
sigmoidea que presentan las curvas de cinética de estas enzimas. A bajas
concentraciones de sustrato la enzima presenta menor actividad que a altas
concentraciones, dado que su afinidad por el sustrato es menor (compárenlo
con el gráfico se michaelianas, si los superponen se van a dar cuenta que a
bajas [S] la enzima alostérica actúa a menor velocidad que la michaeliana).

Moduladores alostéricos:

La diferencia entre un inhibidor y un modulador alostérico es que éste último es una molécula endógena (que
se encuentra normalmente en la célula) y que puede tanto aumentar como disminuir la actividad de las
enzimas (modulador positivo y negativo respectivamente).
La modulación alostérica es una de las estrategias utilizadas para regular la actividad de las enzimas y, como
consecuencia, la concentración de distintos sustratos y productos del metabolismo celular, el consumo de
energía y la homeostasis.

Esta enzima alostérica posee dos subunidades

catalíticas con las que transforma a los
sustratos en productos y dos subunidades
reguladoras en las que interaccionan los
moduladores. Obsérvese cómo la interacción
de los moduladores alostéricos negativos en
sus sitios específicos impiden la interacción de
los sustratos en los sitios activos con la
consiguiente falta de aparición de productos.
Los moduladores alostéricos positivos o negativos se unen en los sitios alostéricos de la enzima regulando su
actividad, modificando su afinidad por el sustrato y/o su velocidad máxima:

El gráfico cambiaría de la siguiente manera:

El modulador negativo disminuye la afinidad de la

enzima por el sustrato de manera que hace falta más
cantidad de sustrato para alcanzar la misma velocidad
que se alcanzaba sin modulador. Al mismo tiempo,
disminuye la velocidad máxima de la enzima.
Lo contrario ocurre con el modulador positivo. A bajas
concentraciones de sustrato se alcanza mayor velocidad
que sin el modulador, y la Velocidad máxima de catálisis
aumenta.

Las enzimas alostéricas suelen encontrarse al principio de vías metabólicas (que son reacciones enzimáticas
“encadenadas” en las cuales el producto de una reacción es el sustrato de la siguiente reacción):
Al regularse la actividad de la primera enzima de la vía (o una de las primeras), se regulan TODAS las reacciones
de la vía (las enzimas que catalizan las siguientes reacciones tendrán una mayor o menor concentración de
sustrato disponible para reaccionar).

Ejemplificamos dos mecanismos de regulación de la actividad:

Feed-Back negativo (o inhibición por producto final o retroalimentación negativa):

Cuando se acumula uno de los últimos productos de la vía metabólica, por ejemplo (D), actúa como un
modulador negativo sobre la enzima alostérica 1 (E1), disminuyendo su actividad. De ésta forma, cuando se
acumula “D”en la célula, éste actúa disminuyendo la velocidad de su propia síntesis.

Activación por Precursor:

En este caso, el primer sustrato actúa como modulador positivo de la enzima 1 (E1). Entonces, cuando se
acumula dicho sustrato en la célula, se une al sitio alostérico de E1 aumentando su actividad (aumenta la
velocidad en que A se consume para formar B en la reacción catalizada por la enzima 1).

Regulando la actividad de las enzimas de esta manera, puede inhibirse la síntesis de moléculas que se
encuentran en mucha cantidad, utilizarse el sustrato de dicha vía metabólica para sintetizar otra molécula
diferente que sí sea necesaria.
Supongamos que hay mucha cantidad de Glucosa en la célula. Esta inicialmente se degradará en la vía
metabólica de la Respiración Celular, cuyo objetivo es obtener ATP (energía).
Si se acumula mucho ATP (producto final de la vía), este actúa como modulador alostérico negativo de la
primera enzima alostérica de la Respiración, inhibiendo su actividad a través de un Feed-back negativo.
De esta manera, la Glucosa puede ser utilizada en otra vía metabólica, la síntesis de un polisacárido de reserva
como el Glucógeno: la Glucosa actúa como modulador alostérico positivo de la primera enzima de dicha vía,
aumentando su actividad y favoreciendo la síntesis de Glucógeno.

ESTRATEGIAS PARA REGULAR LA ACTIVIDAD ENZIMATICA EN LAS CELULAS:

 Moduladores alostéricos: Mecanismos de Feed-Back y Activación por Precursor mencionados

anteriormente. Se usan como estrategia para mantener la homeostasis en la célula y poder derivar los
sustratos a distintas vías metabólicas según sean necesarios.

 Modificaciones covalentes: Por medio de la unión COVALENTE de ciertos grupos (por ejemplo el grupo
fosfato) se puede activar o desactivar una enzima. Entonces, cuando la célula necesita que una enzima
determinada actúe la puede activar (ya sea adicionándole o quitándole el grupo fosfato, según la
enzima) y viceversa. Dichas modificaciones involucran la formación o ruptura de enlaces covalentes,
por lo tanto son reacciones químicas que están catalizadas por otras enzimas.

 Regulación por zimógeno ó Proteólisis: Muchas veces, las enzimas son sintetizadas en una célula pero
tienen que cumplir su función en otro compartimiento fisiológico (ejemplo: enzimas pancreáticas son
sintetizadas por células del páncreas pero actúan en el intestino). Entonces, se sintetizan en una forma
inactiva llamada zimógeno. En los zimógenos, a la estructura primaria de la proteína le “sobra” una
porción, un péptido. Cuando el zimógeno llega al lugar donde debe actuar, hay enzimas que “cortan”
esa porción sobrante de la cadena polipeptídica permitiendo que la misma adopte la forma
tridimensional necesaria para reconocer al sustrato, así el zimógeno se transforma en enzima activa, de
menor peso molecular que aquel.

 Regulación o control genético: es un mecanismo a largo plazo que regula la actividad enzimática por
inducción o represión de su síntesis. Esto se logra a nivel genético: las proteínas son sintetizadas gracias
a que el ADN “copia” a ARN una porción de la información que lleva almacenada. Luego, el ARN “lleva”
dicha información desde el núcleo hasta el citoplasma, y ésa información es traducida por los
ribosomas, que sintetizan la proteína.
La “inducción” o la “represión” acelera o inhibe este proceso en el núcleo, induciendo o reprimiendo el
copiado de la información.
En definitiva, lo que se está regulando es la cantidad de enzimas presentes en la célula, a diferencia de
los mecanismos anteriormente mencionados donde se regula la actividad de las enzimas que ya están
presentes en la célula.

EFECTOS DEL PH Y DE LA TEMPERATURA

Los efectos del pH y de la temperatura sobre la actividad enzimática son válidos para ambos tipos de enzimas.

Temperatura:
Se observa que la actividad aumenta a medida que aumenta la temperatura, porque la velocidad de la mayoría
de las reacciones químicas aumenta con la temperatura: como se mencionó previamente, si aumenta la
energía de los sustratos, es menor el ¨salto energético¨ que tienen que dar para que se produzca la reacción.
En el caso de las reacciones enzimáticas, esto ocurre hasta que se llega la temperatura óptima de la enzima
(aproximadamente 37 grados para las enzimas que actúan a nivel fisiológico en animales de sangre caliente).
Ésta es la temperatura a la cual la enzima alcanza su máxima actividad.
A temperaturas mayores, la enzima, como cualquier proteína, comienza a sufrir los efectos de la temperatura:
se rompen las uniones débiles que mantienen las estructuras cuaternaria, terciaria y secundaria
(desnaturalización), perdiéndose por ende su actividad biológica, o sea su capacidad de catalizar reacciones
químicas específicas.

NOTA: Existen enzimas que son capaces de actuar, sin desnaturalizarse, a grandes temperaturas. Se conocen
como enzimas termorresistentes, y su temperatura óptima puede ser tan alta como de 60ºC.
Asimismo, también existen enzimas llamadas enzimas termolábiles, cuya temperatura óptima es muy baja
(5ºC) y a temperaturas mayores sufren los efectos de la desnaturalización.

pH:
Dadas las características de las proteínas y de los aminoácidos, el pH puede o no afectar a la estructura de las
mismas. Esto dependerá de las características acido/básicas de sus aminoácidos constituyentes.
Si la proteína presenta en su estructura aminoácidos ácidos y básicos, las variaciones de pH pueden modificar
las cargas positivas o negativas de los mismos y romper una de las interacciones responsables de la estructura
globular terciaria o cuaternaria de la proteína: los ¨puentes salinos¨. Si la estructura globular se altera
(desnaturalización) se pierde la actividad biológica de la enzima.
Por eso es que existen proteínas cuyo pH óptimo es neutro, otras con pH óptimo ácido y otras con pH óptimo
alcalino, así como otras que no son sensibles a los cambios de pH, depende cada proteína y de su secuencia de
aminoácidos. En el ejemplo dado se observa que el pH óptimo de la enzima pepsina es ácido, correspondiente
al del jugo estomacal, órgano en el que actúa y el de la tripsina es alcalino como lo es el pH del jugo intestinal.