Informe de laboratorio

Nombre y Apellido: Abril Crespo

Tema: medios de cultivos

Fecha de entrega: 19/4/19

Profesoras: Gilda Bordón y María Girón

 Introducción: En este informe desarrollaremos como hacer un
medio de cultivo en los cuales se puede lograr el crecimiento de
microorganismos, este debe reunir una serie de condiciones, y es
uno de los sistemas más importantes para la identificación de los
microorganismos. Nos basaremos en dos medios específicos el de
agar sangre y macconkey.
 Marco teórico: Un medio de cultivo es un sustrato o una
solución de nutrientes que permite el desarrollo de
microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar
un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las
muestras en las que los microorganismos van a crecer y
multiplicarse para dar colonias. Los microorganismos son los seres
más abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones
extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando
una amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los
requerimientos más importantes para su desarrollo están el
carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno.
Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de
factores de crecimiento específicos en forma de suero, sangre y
extracto de levadura entre otros. Con respecto al medio de cultivo
agar sangre es un medio de cultivo sólido enriquecido, diferencial
pero no selectivo. Es utilizado para la recuperación y crecimiento
de una gran variedad de microorganismos provenientes de
muestras clínicas o para subcultivos. se compone básicamente de
un agar base enriquecido y 5% de sangre. La base de agar puede
variar de acuerdo a las necesidades, pero principalmente estará
compuesto por peptonas, aminoácidos, vitaminas, extracto de
carne, cloruro de sodio, agar, entre otros. En cuanto a la sangre,
normalmente se requiere tener contacto con un bioterio para la
obtención de sangre de animales, tales como carnero, conejo o
caballo. A diferencia de este, el agar macconkey es un medio de
cultivo sólido que permite el aislamiento exclusivo de bacilos
 Gram negativos. Por esta razón es un medio selectivo y además
permite distinguir entre bacilos fermentadores y no
fermentadores de la lactosa, lo que lo hace un medio diferencial.
Es uno de los medios de cultivo más utilizado en un laboratorio de
microbiología. Este medio se usa principalmente para el
aislamiento de bacilos Gram negativos pertenecientes a la familia
Enterobacteriaceae, incluyendo las especies oportunistas y las
enteropatógenas.
 Problema: como alumnas del establecimiento agropecuario de
sarmiento Chubut, surge como problema si, ¿nos saldrán bien los
medios de cultivo? ¿crecerá alguna colonia de microorganismo?,
estos medios de cultivos los vamos hacer en el laboratorio de esta
institución
Objetivo: las alumnas de 7mo año de la escuela 725 tenemos
como objetivo que no crezca ningún microorganismo en ninguno
de los dos medios de cultivos.
 Hipótesis: los medios de cultivo realizados por las alumnas de
7mo año el día 12 de abril del 2019 en el laboratorio de la
institución mencionada, van a resultar totalmente bien y no
crecerá ninguna colonia de microorganismos.
Material utilizado:
Agar base:
Autoclave
Balanza
Matraz Erlenmeyer
Gasa.
Para la extracción de sangre:
Alcohol
Algodón
Jeringa
Aguja
Goma Elástica
 Para el Desfibrado de la sangre:
Mechero
Matraz Erlenmeyer
Perlas
Gasas
Guantes
Para mezclar el agar con la sangre:
Mechero
Matraz Erlenmeyer
Jeringa
Guantes –Barbijo
Para el emplacado:
Mechero
Placas
Guantes
Barbijo
 Procedimiento: para la preparación del agar base:
a. Se pesan 15 g del polvo de agar base sangre.
b. Se mezcla el polvo en un matraz con 500 ml de agua destilada.
c. Se lo deja reposar durante cinco minutos.
d. Se lo lleva a ebullición durante dos minutos.
e. Se realiza un tapón con algodón y gasa, y se lo envuelve en
papel madera.
f. Se lo esteriliza en autoclave a una temperatura de 118° - 121°
durante 15 minutos.
Calculo para agar base:
15gr--------1000 Mililitros de agua destilada
3,75 gr X----- 250 mililitros de agua destilada
Calculo para agar macconkey:
51,5gr---------1000 Mililitros
2,57gr X--------- 50 mililitros de agua destilada

Epígrafe 1: medición del polvo agar Epígrafe 2: polvo agar base y agar
macconkey macconkey y probeta con agua
destilada

Epígrafe 3: mezcla del polvo con Epígrafe 4: ebullición durante dos

el agua destilada en un matraz minutos agar base
 Epígrafe 5: ebullición
durante dos minutos Epígrafe 6: agar base Epígrafe 7: agar
agar macconkey con tapón de gasa y macconkey con tapón
papel madera de gasa y papel
madera

Epígrafe 8:
esterilización

Procedimiento para la extracción de sangre:

a. Se desinfecta el lugar de donde se va a extraer sangre.
b. Luego se localiza la vena.
c. Se extrae con una jeringa estéril.
d. El volumen de extracción de sangre no debe ser mayor a 10 % del
volumen total de sangre.
 Epígrafe 9: extracción
de sangre ovina

 Procedimiento de desfibrinado de sangre: todo el

procedimiento se realiza al abrigo del mechero
a. Se utiliza un frasco con perlas estériles.
b. Se coloca la sangre en frasco estéril con perlas de vidrio.
c. Luego se agita despacio de forma circular por tres minutos o hasta
que las perlas dejen de hacer ruido.
d. Por último se coloca una gasa estéril en la boca del frasco para filtrar
la sangre de las perlas, recolectando y midiendo el volumen en un
recipiente estéril.
 Epígrafe 11: Agitación en Epígrafe 12: colocación
Epígrafe 10:
forma circular de gasa estéril en la
colocación de sangre
en el frasco con perlas boca del frasco

Procedimiento para mezclar la sangre con el agar:

a. En este paso calculamos la cantidad de sangre desfibrinada a agregar
para una proporción al 6%.
b. Luego cerca del mechero se abre el matraz que contiene el agar base
(entre 50 y 56°C) y se le agrega de inmediato la sangre con una jeringa
agitando suavemente para homogenizar el medio
Epígrafe 13: colocación de
la sangre en agar base

Procedimiento para el emplacado

a. Se trabaja cerca del mechero, se vuelca el agar mezclado ya con la
sangre en una placa de Petri estéril, se tapa y se deja solidificar.
b. Se las debe enumerar a cada una de las mismas con la fecha en la que
se realizó.
c. Se realizará un control de esterilidad en estufa de cultivo a 38 °C de
temperatura a las 24 y 48 horas para observar si hay alguna placa
contaminada (en este caso se descarta).
 Epígrafe 15: Se
Epígrafe 14: se vuelca enumera y se manda a
el agar mezclado en la la estufa
placa de Petri

 Resultados: nuestros controles de esterilidad en medios de

cultivos han salidos exitosos, tras 48hs de control en estufa a 38C°
todas las placas resultaron negativas al crecimiento de colonias
 Discusión de resultados: según lo analizado los medios de
cultivos nos salieron bien y fue el resultado esperado, leyendo y
comparando con otros resultados de distintos investigadores
nuestro resultado fue correcto.
 Conclusión: en conclusión, nuestra hipótesis planteada fue
acertada, y los resultados fueron los que esperábamos, están en
perfecto estado las placas.
 Observaciones: fue una experiencia linda, si bien lo habíamos
hecho el año pasado por causa de una feria de ciencias, esta fue
una experiencia única.
Bibliografía:
https://www.lifeder.com/agar-macconkey/
https://www.lifeder.com/agar-sangre/
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf
ITEM Excelente Bueno Regular Insuficien Ponder
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resultados resultados los ninguna
obtenidos obtenidos resultados conclusió
con la con la obtenidos n.
hipótesis hipótesis con la
planteada, planteada, hipótesis
de manera de planteada ni
coherente manera justifica la
y coherente pertinencia
justificand pero no o no de la
o la justifica la misma.
pertinenci pertinenci
a o no de a o no de
la misma. la misma.
Bibliogra Respeta Respeta No respeta
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toda cita citas y referencias.
bibliogra
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NOTA FINAL